桑葉化學(xué)成分研究

趙金梅，孟凡林，王 楠，張貴會*

（1.通遼市科爾沁左翼中旗門達(dá)中心校，內(nèi)蒙古通遼 029100；2.扎魯特旗市場檢驗(yàn)檢測中心，內(nèi)蒙古通遼 029100）

隨著生活水平的提升，人們的保健意識越來越強(qiáng)，西藥由于自身的理論局限性，很難從整體上滿足人們快節(jié)奏的生活需求。而中醫(yī)藥中存在著大量高效低毒的先導(dǎo)化合物，對其化學(xué)成分進(jìn)行研究具有重要的意義。桑葉屬于藥食同源類物質(zhì)，味苦、甘、性寒、歸肺、肝經(jīng)[1-2]，具有疏風(fēng)清熱、涼血明目、清肺潤燥的功效[3-4]。本課題組前期對桑葉中的主要活性物質(zhì)黃酮、生物堿、多糖的提取工藝、含量測定、結(jié)構(gòu)鑒定等進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)其中一些化合物具有較強(qiáng)的生物活性[5-7]。本實(shí)驗(yàn)對桑葉乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，分離鑒定出10個化合物，分別為紫云英苷（1）、槲皮素-3-O-洋槐糖苷（2）、山奈酚（3）、槲皮素-3-O-β-D-木糖苷（4）、山奈酚-3-O-蕓香糖苷（5）、山柰酚7-O-β-D-葡萄糖苷（6）、熊果酸（7）、矢車菊素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷（8）、香橙素（9）、沒食子酸（10）。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

Thermo TSQ Quantum三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀（美國賽默飛世爾有限公司）；2767 waters制備液相色譜（美國waters公司）；e2695高效液相色譜儀（沃特世科技有限公司）；C-605中壓柱色譜系統(tǒng)（瑞士步琪有限公司）；RE-5299旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；MS105DU電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；AV 800超導(dǎo)脈沖傅立葉變換核磁共振波譜儀（德國Bruker公司）；DEF-6020真空干燥箱（上海鴻都電子科技有限公司）；超純水機(jī)（成都超純科技有限公司）。

1.2 材料與試劑

葡聚糖凝膠填料SephadexLH-20瑞典pharmacia公司；反相ODS色譜美國waters公司；制備型液相色譜柱（300 mm×21 mm，10 μm），美國Waters公司；液相色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），美國Waters公司；柱色譜硅膠80～100目、薄層層析用聚酰胺,青島海洋化工有限公司；甲醇、乙腈色譜純；其他化學(xué)試劑均為市售分析純，。

桑葉于2021年8月采集，采自新疆維吾爾族自治區(qū)和田地區(qū)，經(jīng)扎魯特旗市場檢驗(yàn)檢測中心孟凡林中藥師鑒定為Morus nigraL.。桑葉粉碎過100目篩備用。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

取過100目篩的桑葉粉末3.2 kg，用95%乙醇滲漉提取，滲漉得到的藥液經(jīng)60 ℃水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，直至無醇味后得浸膏450.98 g，加入熱水溶解混懸，用乙酸乙酯劇烈振搖萃取4次，每次用量為1.5 L。合并萃取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，減壓濃縮得到乙酸乙酯浸膏122.36 g。取部分浸膏用甲醇溶解后加入硅膠攪拌均勻，進(jìn)行干法上樣。

用甲醇-乙酸乙酯（80∶20→50∶50→20 ∶80，體積比）梯度洗脫，經(jīng)TLC薄層HPLC檢測后合并相似組分，得到5個活性段（Fi.1～Fi.5）。其中，F(xiàn)i.2經(jīng)C18中壓色譜柱，用30%～40%甲醇梯度洗脫，得到Fi.2-1和Fi.2-2組分；Fi.2-1和Fi.2-2經(jīng)高壓制備色譜，以30%～40%甲醇水梯度洗脫，得到化合物1（6.2 mg）和化合物8（8.9 mg）。Fi.4經(jīng)C18中壓柱色譜，用20%～30%甲醇梯度洗脫，得到化合物4（16.7 mg）。Fi.1反復(fù)多次上樣于Sephadex LH-20凝膠柱色譜，以甲醇洗脫、純化，得到化合物2（10.4 mg）。Fi.3經(jīng)C18中壓色譜柱，用10%～30%甲醇梯度洗脫，得到Fi.3-1和Fi.3-2組分，F(xiàn)i.3-1重結(jié)晶得到化合物3（9.8 mg）；將Fi.3-2經(jīng)高壓制備色譜，分別用10%～30%的甲醇梯度洗脫，得到化合物5（6.3 mg）。Fi.5經(jīng)C18中壓色譜柱，用20%～40%甲醇梯度洗脫，得到Fi.5-1和Fi.5-2組分，F(xiàn)i.5-2經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，以甲醇洗脫，經(jīng)高壓制備色譜得化合物7（18.5 mg）。Fi.5-1進(jìn)行硅膠柱色譜分離，以乙酸乙酯-甲醇（80∶20→50∶50→20 ∶80）梯度洗脫，得到3個組分Fi.5-1-1～Fi.5-1-3，F(xiàn)i.5-1-1進(jìn)行硅膠柱色譜分離，以乙酸乙酯-甲醇（60∶40）洗脫，得化合物10（25.7 mg）；Fi.5-1-2經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，以甲醇洗脫，得到化合物6（24.5 mg）；Fi.5-1-3經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，以甲醇水洗脫，經(jīng)高壓制備色譜得化合物9（8.8 mg）。

2 結(jié)果與分析

化合物1為淡黃色粉末，C21H20O11，電噴霧電離質(zhì)譜m/z：447.44[M-H]-；1H-NMR（DMSO-d6，800 MHz）δ：8.04.（2H，d，J=8.9 Hz，H-2＇,-6＇），6.87（2H，d，J=8.9 Hz，H-3＇,-5＇），12.66（1H，s，5-OH），6.08（1H，d，J=2.2 Hz，H-6），6.50（1H，d，J=2.2 Hz，H-8），5.59（1H，d，J=7.8 Hz，Glc-H-1），3.10～3.55（6H，m，Glc-H）；13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：177.55（C-4），161.88（C-5），164.12（C-7），160.25（C-4＇），156.87（C-8a），156.52（C-2），133.08（C-3），130.84（C-2＇,6＇），121.03（C-1＇），115.47（C-3＇,5＇），104.64（C-4a），101.35（C-1″），98.08（C-6），94.33（C-8），77.92（C-3″），76.39（C-5″），73.29（C-2″），69.68（C-4″），60.28（C-6″）。該數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]中的化合物進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)基本一致。故鑒定為紫云英苷。

化合物2為黃色粉末（甲醇），C27H30O16，電噴霧電離質(zhì)譜m/z：611.52[M+H]+；1H-NMR（CD3OD，800 MHz）δ：7.87（1H，s，H-2＇），7.49（1H，d，J=7.8 Hz，H-6＇），6.88（1H，d，J=7.7 Hz，H-5＇），6.28（1H，brs，H-8），6.39（1H，brs，H-6），5.15（1H，d，J=7.8 Hz，H-1″），4.22（1H，brs，H-1＇＇＇），3.81（1H，m，H-2″），3.82（1H，m，H-4″），3.84（1H，m，H-6″b），3.55（1H，m，H-5″），3.66（1H，m，H-2＇＇＇），3.75（1H，m，H-3″），3.52（1H，m，H-5＇＇＇），3.54（1H，m，H-3＇＇＇），3.45（1H，m，H-6″a），3.26（1H，m，H-4＇＇＇），1.25（3H，d，J=6.0 Hz，H-6＇＇＇）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：158.8（C-2），135.9（C-3），179.6（C-4），163.3（C-5），100.5（C-6），167.1（C-7），95.2（C-8），158.9（C-9），106.3（C-10），122.4（C-1＇），118.8（C-2＇），145.8（C-3＇），150.2（C-4＇）,116.5（C-5＇），123.4（C-6＇），105.6（C-1″），74.5（C-2″），75.3（C-3″），70.9（C-4″），75.4（C-5″），67.7（C-6″），102.1（C-1＇＇＇），72.3（C-2＇＇＇），72.5（C-3＇＇＇），73.6（C-4＇＇＇），69.9（C-5＇＇＇），18.8（C-6＇＇＇）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[9]，故鑒定為槲皮素-3-O-洋槐糖苷。

化合物3為淡黃色粉末，C15H10O6噴霧電離質(zhì)譜m/z：287.52[M+H]+；1H-NMR（DMSO-d6，800 MHz）δ：12.54（1H，s，5-OH），10.87（1H，s，7-OH），10.66（1H，s，3＇-OH），9.45（1H，s，3-OH），8.00（2H，d，J=8.7 Hz，H-2＇，6＇），6.95（2H，d，J=8.8，Hz，H-3＇,5＇），6.54（1H，d，J=8.7 Hz，H-8），6.20（1H，d，J=2.3 Hz，H-6）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：176.55（C-4），164.88（C-7），161.12（C-4＇），159.25（C-9），156.65（C-5），147.52（C-2），136.08（C-3），130.84（C-2＇,6＇），122.03（C-1＇），115.97（C-3＇,5＇），103.64（C-10），99.08（C-6），93.33（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[10]，故鑒定為山奈酚。

化合物4為黃色粉末，C20H18O11噴霧電離質(zhì)譜m/z：435.52[M+H]+；1H-NMR（DMSO-d6，800 MHz）δ：12.64（1H，s，5-OH），10.90（1H，s，7-OH），9.76（1H，s，4＇-OH），9.35（1H，s，3＇-OH），7.50（1H，d，J=2.7 Hz，H-2＇），7.55（1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6＇），6.84（1H，d，J=8.4 Hz，H-5＇），6.40（1H，d，J=2.3 Hz，H-8），6.15（1H，s，H-6），5.45（1H，d，J=7.8 Hz，H-1″）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：177.85（C-4），164.78（C-7），161.12（C-5），156.75（C-2），156.87（C-9），149.52（C-4＇），145.08（C-3＇），133.84（C-3），121.93（C-6＇），121.47（C-1＇），116.64（C-5＇），115.35（C-2＇），104.08（C-10），102.33（C-1″），99.22（C-6），94.39（C-8），76.29（C-3″），74.68（C-2″），69.28（C-4″），66.58（C-5″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[11]，故鑒定為槲皮素-3-O-β-D-木糖苷。

化合物5為白色粉末，C27H30O15，電噴霧電離質(zhì)譜m/z：595.59[M+H]+；1H-NMR（CD3OD，800 MHz）δ：8.17（2H，d，J=9.0 Hz，H-2＇/H-6＇），6.79（2H，d，J=9.0 Hz，H-3＇/H-5＇），6.45（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.23（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.22（1H，d，J=7.2 Hz，H-1glc），4.50（1H，s,H-1rha）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：158.47（C-2），135.46（C-3），179.56（C-4），105.18（C-4a），163.22（C-5），100.11（C-6），166.25（C-7），95.21（C-8），159.63（C-8a），122.90（C-1＇），132.55（C-2＇/C-6＇），116.34（C-3＇/C-5＇），161.47（C-4＇），3-O-Glc，102.61（C-1glc），75.91（C-2glc），78.34（C-3glc），71.61（C-4glc），77.32（C-5glc），68.17（C-6glc），rha，102.16（C-1rha），72.22（C-2rha），72.54（C-3rha），74.50（C-4rha），69.89（C-5rha），18.10（C-6rha）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[12]，故鑒定為山奈酚-3-O-蕓香糖苷。

化合物6為黃色粉末，C21H20O11，電噴霧電離質(zhì)譜m/z：595.59[M+H]+；1H-NMR（DMSO-d6，800 MHz）δ：7.9（2H，d，J=8.3 Hz，H-2＇,6＇），6.96（2H，d，J=8.2 Hz，H-3＇,5＇），6.48（1H，brs，H-8），6.25（1H，brs，H-6），5.52（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：147.28（C-2），136.26（C-3），177.23（C-4），161.22（C-5），98.00（C-6），162.13（C-7），93.19（C-8），156.15（C-9），104.21（C-10），121.25（C-1＇），131.41（C-2＇,6＇），115.13（C-3＇,5＇），160.33（C-4＇），101.33（C-1″），74.24（C-2″），76.65（C-3″），70.24（C-4″），75.17（C-5″），62.15（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[13]，故鑒定為山柰酚7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物7為白色粉末，C30H48O3，電噴霧電離質(zhì)譜m/z：457.68[M+H]+；1H-NMR（DMSO-d6，800 MHz）δ：11.81（1H，s，COOH），5.14（1H，t，J=3.7 Hz，H-12），3.55（1H，m，H-3），2.15（1H，d，J=11.3 Hz，H-18），1.15（3H，s，24-CH3），0.95（3H，s，26-CH3），0.91（3H，s，25-CH3），0.87（3H，s，23-CH3），0.88（3H，d，J=6.4 Hz，30-CH3），0.86（3H，s，27-CH3），0.68（3H，d，J=6.0 Hz，29-CH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：38.19（C-1），27.14（C-2），77.23C-3），38.91（C-4），55.22（C-5），18.15（C-6），33.22（C-7），40.24（C-8），47.23（C-9），36.18（C-10），23.275（C-11），125.40（C-12），138.16（C-13），42.11（C-14），28.27（C-15），124.31（C-16），47.15（C-17），52.18（C-18），39.10（C-19），38.17（C-20），30.26（C-21），37.10（C-22），28.10（C-23），16.36（C-24），5.72（C-25），17.14（C-26），23.31（C-27），178.28（C-28），17.25（C-29），21.36（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[14]，故鑒定為熊果酸。

化合物8為紫黑色粉末，C21H21O11，電噴霧電離質(zhì)譜m/z：449.25[M]+；1H-NMR（CD3OD，800 MHz）δ：8.95（1H，s，H-4），8.26（1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6＇），7.18（1H，d，J=2.0 Hz，H-2＇），6.83（1H，d，J=8.0 Hz，H-5＇），6.84（1H，brs，H-8），6.67（1H，brs，H-6），5.26（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：64.60（C-2），145.18（C-3），137.22（C-4），159.12（C-5），102.22（C-6），170.15（C-7），94.58（C-8），157.82（C-9），113.25（C-10），121.23（C-1＇），117.115（C-2＇），147.24（C-3＇），158.19（C-4＇），115.32（C-5＇），128.23（C-6＇），104.90（C-Gal-1），72.23（C-Gal-2），74.26（C-Gal-3），70.23（C-Gal-4），77.22（C-Gal-5），62.78（C-Gal-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[15]，鑒定為矢車菊素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷。

化合物9為黃色針晶，C15H12O6，電噴霧電離質(zhì)譜m/z：311.40[M+Na]+；1H-NMR（CD3OD，800 MHz）δ：7.46（2H，d，J=7.8 Hz，H-2＇,6＇），6.82（2H，d，J=7.8 Hz，H-3＇,5＇），6.52（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），5.66（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），4.95（1H，d，J=12.6 Hz，H-2），4.56（1H，d，J=126 Hz，H-3）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：84.25（C-2），72.10（C-3），203.16（C-4），152.17（C-5），93.15（C-6），170.14（C-7），101.15（C-8），159.28（C-9），99.57（C-10），115.3（C-1＇），128.11（C-2＇），109.58（C-3＇），161.22（C-4＇），109.64（C-5＇），128.16（C-6＇）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道對照基本一致[16]，故鑒定為香橙素。

化合物10為針狀結(jié)晶，C7H6O5，電噴霧電離質(zhì)譜m/z：171.10[M+H]+；1H-NMR（CD3OD，800 MHz）δ：7.05（2H，s，H-2，H-6）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：120.54（C-1），108.25（C-2,6），14.88（C-3,5），138.65（C-4），170.14（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道對照基本一致[17]，故鑒定為沒食子酸。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)從桑葉中分離得到10個化合物，其中黃酮類化合物8個，三萜類化合物1個，有機(jī)酸類化合物1個，其中化合物1、2、4、5和6為首次從該植物中分離得到。為了拓展人們對桑屬植物物質(zhì)基礎(chǔ)的認(rèn)識，有必要對其化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定，從而為該屬植物的開發(fā)與利用提供理論依據(jù)，為合成藥物、新藥研發(fā)、人類的健康不斷提供活性的先導(dǎo)化合物。