正交試驗法優(yōu)選麩炒山藥炮制工藝

胡 雨，張麗君，高 波，郭志俊

（1.華潤三九現(xiàn)代中藥制藥有限公司，廣東 惠州 516000；2.安徽華潤金蟾藥業(yè)有限公司，安徽 淮北 235000）

山藥為薯蕷科植物薯蕷（Dioscorea oppositaThunb.）的干燥根莖，是常見藥食兩用的補益類中藥。山藥的炮制方法主要有清炒、麩炒、土炒、米炒、蜜麩炒等［1，2］，其藥用成分主要有多糖、尿囊素、甘露聚糖、山藥堿、糖蛋白等［3-5］。其中，尿囊素作為山藥的有效成分，具有生肌作用，能修復(fù)上皮組織，促進(jìn)皮膚潰瘍和傷口愈合，用于治療胃及十二指腸潰瘍［6］。因此，本研究以尿囊素含量［7，8］為主要指標(biāo)，結(jié)合麩炒山藥外觀性狀評價，運用正交試驗設(shè)計優(yōu)選麩炒山藥炮制工藝［9-11］，以期對麩炒山藥的規(guī)?；a(chǎn)提供一定的技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗儀器、藥品和材料

Thermo U3000 型高效液相色譜儀［賽默飛世爾科技（中國）有限公司］；KQ-800 DE 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；XPE 26 型、MS204S 型電子天平（Mettler Toledo 公司）；中藥炒藥機（溫州頂歷醫(yī)療器械有限公司）。

尿囊素對照品（批號：111501-200202，純度100%）購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純；水為娃哈哈純凈水；其他試劑均為分析純。山藥飲片（批號：2208001），購自河南省某公司，經(jīng)鑒定是薯蕷科植物薯蕷的干燥根莖。

1.2 方法

1.2.1 尿囊素含量測定

1）色譜條件：色譜柱為ChromCore NH2（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流動相為乙腈-水（90∶10，體積比）；柱溫為25 ℃；流速為1.0 mL/min；檢測波長為224 nm；進(jìn)樣量為10 μL。

2）對照品溶液的制備。精密稱取尿囊素對照品適量，加甲醇制成每1 mL 含尿囊素80 μg 的溶液，得到對照品溶液。

3）供試品溶液的制備。精密稱定山藥飲片粉末（過三號篩）1.0 g，置于具塞錐形瓶中，加入稀乙醇25 mL，稱定重量，超聲提取30 min，放至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足損失的重量，濾過，即得。

1.2.2 線性范圍考察 精密稱定尿囊素對照品適量，加甲醇制成每1 mL 中含尿囊素1.279 4 mg 的對照品母液，精密吸取母液5 mL 加甲醇定容至10 mL，依次等比稀釋，得到7 份系列濃度的對照品溶液，進(jìn)樣測定并記錄相應(yīng)峰面積。

1.2.3 精密度試驗 對同一份供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6 次，測定尿囊素峰面積，并計算尿囊素含量的RSD。1.2.4 重復(fù)性試驗 精密稱定同一批樣品6 份，按供試品制備方法處理并進(jìn)樣測定，根據(jù)尿囊素峰面積，計算供試品質(zhì)量分?jǐn)?shù)和其RSD。

1.2.5 穩(wěn)定性試驗 對同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12、16、20、24 h 進(jìn)樣測定，記錄不同時間的尿囊素峰面積，并計算尿囊素含量的RSD。

1.2.6 加樣回收率試驗 對同一批已知含量的樣品6 份（未扣水分含量，尿囊素的含量為7.93 mg/g）精密稱定，每份0.5 g，另用甲醇配制成每1 mL 中含尿囊素0.387 5 mg 的對照品溶液，精密加入10 mL 該對照品溶液至每份供試品樣品中，再按“1.2.1”中供試品溶液的制備方法處理樣品，進(jìn)行測定，計算回收率。

1.3 正交試驗

1.3.1 麩炒山藥炮制工藝正交試驗設(shè)計 在麩炒山藥前期預(yù)試驗及文獻(xiàn)［9，10］檢索的基礎(chǔ)上，擬選用L9（34）正交試驗（表1）安排試驗，考察麥麩用量（A）、炒制時間（B）、炒制溫度（C）等因素，以麩炒山藥炒制性狀及尿囊素含量作為雙評價指標(biāo)，對麩炒山藥的炮制工藝進(jìn)行優(yōu)選。

表1 正交試驗因素和水平

1.3.2 麩炒山藥飲片性狀評分標(biāo)準(zhǔn) 《中華人民共和國藥典》（2020 年版）［1］中關(guān)于麩炒山藥的性狀描述為切面黃白色或微黃色，偶見焦斑，略有焦香氣；《全國中藥炮制規(guī)范》［12］（1988 年版）描述為表面淡黃色，偶有焦斑，略具焦香氣。本研究根據(jù)正交試驗加工制備的麩炒山藥炮制品，依照《中華人民共和國藥典》（2020 年版）及《全國中藥炮制規(guī)范》（1988 年版）對其進(jìn)行性狀評分。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試溶液的色譜

對照品溶液和供試品溶液的色譜見圖1。由圖1 可知，供試品麩炒山藥的高效液相色譜中，尿囊素的出峰時間為10.963 min，與尿囊素對照品的出峰時間10.990 min 相當(dāng)，表明麩炒山藥中含有尿囊素。

圖1 麩炒山藥對照品溶液和供試品溶液的色譜

2.2 線性范圍考察結(jié)果

將峰面積作為縱坐標(biāo)（Y），將對照品進(jìn)樣質(zhì)量作為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸分析，得到回歸方程為Y=3.258 5X+0.260 8，r=0.999 9；線性范圍為0.199 9～12.794 0 μg，表明線性關(guān)系良好。

2.3 供試品精密度試驗結(jié)果

供試品精密度試驗結(jié)果表明，尿囊素峰面積的RSD為0.21%，說明該方法儀器精密度良好。

2.4 重復(fù)性試驗結(jié)果

根據(jù)尿囊素峰面積計算樣品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7.93 mg/g，RSD為0.67%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明，尿囊素含量的RSD為0.43%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)（樣品盤25 ℃）穩(wěn)定，可以滿足測定需要。

2.6 加樣回收率試驗結(jié)果

加樣回收率試驗結(jié)果表明，尿囊素的加樣回收率為96.78%（n=6），該方法回收率良好。

2.7 麩炒山藥正交試驗綜合評分標(biāo)準(zhǔn)

為客觀評價麩炒山藥炮制品的質(zhì)量，本研究以有效成分尿囊素含量及麩炒山藥炮制品的外觀性狀為評價指標(biāo)，采用綜合評分法進(jìn)行評定。擬定尿囊素含量指標(biāo)權(quán)重系數(shù)為0.7，而飲片外觀性狀作為中藥飲片的傳統(tǒng)質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)，是評價炮制飲片質(zhì)量優(yōu)劣的關(guān)鍵因素，故將其作為評價指標(biāo)，擬定權(quán)重系數(shù)為0.3。綜合評分=尿囊素含量評分+飲片外觀性狀評分［13］。正交試驗及直觀分析結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表2 麩炒山藥工藝正交試驗及直觀分析結(jié)果（n=3）

表3 綜合評分方差分析

由直觀分析結(jié)果可知，各因素對麩炒山藥炮制工藝的影響從大到小順序依次為C、B、A；方差分析結(jié)果表明，炒制溫度（C）對麩炒山藥炮制工藝具有顯著影響，麥麩用量（A）、炒制時間（B）對麩炒山藥炮制工藝則無顯著影響。故從直觀分析及方差分析結(jié)果可知，麩炒山藥的最佳炮制工藝為A3B1C1，即取山藥片量15.0%的麥麩撒入180 ℃的炒藥設(shè)備中，待麥麩冒煙時，向炒藥機內(nèi)投入300 g 山藥片，炒制10 min，取出晾涼，篩去麩皮即可。

2.8 驗證性試驗

取山藥片樣品適量，按照上述優(yōu)選的麩炒山藥最佳炮制工藝，平行制備3 份樣品（S1、S2、S3），觀察記錄麩炒山藥飲片的性狀，并對制備樣品中的尿囊素含量進(jìn)行測定，結(jié)果見表4。

表4 麩炒山藥驗證試驗結(jié)果

由表4 結(jié)果可知，采用上述優(yōu)選出的麩炒山藥炮制工藝，所制備的樣品性狀及尿囊素含量均較穩(wěn)定，表明該麩炒山藥炮制工藝穩(wěn)定可行。即確定麩炒山藥最佳炮制工藝為取山藥飲片量15.0%的麥麩撒入180 ℃的炒藥設(shè)備中，待麥麩冒煙時，向炒藥機內(nèi)投入300 g 山藥飲片，炒制10 min，取出晾涼，篩去麩皮即可。

3 討論

本研究設(shè)計以麥麩用量、炒制時間和炒制溫度為正交試驗考察因素。中藥飲片的外觀性狀則是傳統(tǒng)評價指標(biāo)，也是較為關(guān)鍵的飲片質(zhì)量評價指標(biāo)，其與山藥有效化學(xué)成分尿囊素含量指標(biāo)相結(jié)合，共同評價麩炒山藥飲片質(zhì)量，更具科學(xué)性和客觀性。故本研究以尿囊素含量和麩炒山藥飲片外觀性狀2 個指標(biāo)作為正交試驗的評價標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)選麩炒山藥炮制工藝，選擇指標(biāo)與文獻(xiàn)［10，14］評價指標(biāo)一致。

研究結(jié)果顯示，炒制溫度對麩炒山藥尿囊素含量及飲片外觀性狀影響較大，而麥麩用量、炒制時間2 個因素則對麩炒山藥飲片質(zhì)量無顯著影響。繼而對正交試驗優(yōu)選出的麩炒山藥炮制工藝進(jìn)行驗證，所制備出的3 批飲片質(zhì)量穩(wěn)定，表明該工藝穩(wěn)定可行，重現(xiàn)性良好，可為麩炒山藥的工業(yè)化生產(chǎn)提供一定的技術(shù)參考。