基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和藥效實(shí)驗(yàn)探究一粒金經(jīng)鼻給藥治療偏頭痛的機(jī)制*

趙仕博，趙永烈，鄧碩秋，張平安，林婧婧，郭 叢，劉 安，劉曉謙，易 紅，

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，北京 100029；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700）

偏頭痛是一種以單側(cè)或雙側(cè)搏動(dòng)性頭痛為典型特征的慢性神經(jīng)血管功能紊亂性疾病[1]，可反復(fù)發(fā)作，遷延不愈。2021年公布的世界范圍疾病負(fù)擔(dān)統(tǒng)計(jì)表明，偏頭痛屬于全世界第六大常見疾病，位列全球致殘性疾病第2位，在中國(guó)排第5位[2]，是年齡低于50歲人群致殘的首要因素，給社會(huì)造成了沉重的負(fù)擔(dān)[3]。偏頭痛的病因病機(jī)復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明[4-5]。目前認(rèn)可度較高的學(xué)說(shuō)有三叉神經(jīng)血管反射學(xué)說(shuō)[6]、皮質(zhì)擴(kuò)展性抑制學(xué)說(shuō)[7]等。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為偏頭痛屬于“頭痛”“頭風(fēng)”“偏頭風(fēng)”等范疇，病程較長(zhǎng)，纏綿難愈。各種致病因素均可導(dǎo)致脈絡(luò)阻滯不通，不通則痛。研究表明，瞬時(shí)受體電位香草酸亞型1（TRPV1）、谷氨酸受體5（mGluR5）及血管活性物質(zhì)[如5-羥色胺（5-HT）、內(nèi)皮素-1（ET-1）、降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（iNOS）等]在偏頭痛發(fā)作過(guò)程中扮演著重要的角色[8]。

偏頭痛治療以口服藥為主，但近年來(lái)鼻內(nèi)療法更受青睞，展現(xiàn)出良好前景[9]。鼻內(nèi)療法多使用塞、滴、搐、嗅等法使藥物經(jīng)鼻腔吸收以治療疾病[10]?，F(xiàn)代解剖學(xué)研究顯示藥物經(jīng)鼻入腦主要通過(guò)嗅覺(jué)通路、三叉神經(jīng)通路起效[11]，具有起效快、避免肝臟首過(guò)效應(yīng)、快速穿過(guò)血腦屏障、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，非常適于急救、自救及疾病發(fā)作時(shí)的中止性治療。鼻內(nèi)療法可通過(guò)調(diào)節(jié)血管舒縮、調(diào)控痛覺(jué)通路、減少氧化應(yīng)激等改善偏頭痛癥狀[12]，國(guó)際頭痛學(xué)會(huì)建議使用鼻內(nèi)制劑治療偏頭痛急性發(fā)作[13]。

“一粒金”最早出自朱丹溪《丹溪心法》，是朱丹溪唯一明確提出用于治療偏頭痛的方劑。明代醫(yī)家萬(wàn)表將原方中的青黛去掉，在《萬(wàn)氏濟(jì)世良方》中記為一粒金搐鼻方。組成為蓽茇、藁本、延胡索、白芷、川芎。同時(shí)萬(wàn)表提出以“出涎為度”的臨床用藥心得[14]。目前缺乏該方活性成分及作用機(jī)制的系統(tǒng)研究。而網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)具有系統(tǒng)性、相關(guān)性和預(yù)測(cè)性的特點(diǎn)，與中藥方劑組分復(fù)雜性相吻合，因此本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究一粒金（YLJ）經(jīng)鼻給藥對(duì)大鼠偏頭痛模型的作用，旨在為臨床應(yīng)用及新藥開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

1.1.1 一粒金活性成分及作用 通過(guò)中醫(yī)藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP，http：//tcmspw.com/tcmsp.php)檢索川芎、蓽茇、白芷、藁本、延胡索的化學(xué)成分，以口服生物利用度（oral bioavailability,OB）≥30%和類藥性（drug-likeness,DL）≥0.18作為篩選指標(biāo)，篩選出一粒金包含的活性成分。通過(guò)TCMSP及成分靶點(diǎn)預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)（Swiss Target Prediction，http：//www.swisstargetprediction.ch/）檢索和預(yù)測(cè)潛在作用靶點(diǎn)，借助數(shù)據(jù)庫(kù)將蛋白質(zhì)靶點(diǎn)名稱轉(zhuǎn)化為基因名。

1.1.2 偏頭痛相關(guān)靶點(diǎn)篩選 以“migraine”“migraine headache”為關(guān)鍵詞，從基因名片數(shù)據(jù)庫(kù)（Gene Cards，https：//www.genecards.org）、OMIM 數(shù) 據(jù) 庫(kù)（https://www.omim.org/）、UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.uniprot.org/）、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)（http://db.idrblab.net/ttd/）進(jìn)行靶點(diǎn)檢索。將所有篩選結(jié)果進(jìn)行匯總、去重，得到偏頭痛相關(guān)靶點(diǎn)。

1.1.3 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶點(diǎn)篩選 將“1.1.1”中活性成分的作用靶點(diǎn)與偏頭痛相關(guān)靶點(diǎn)取交集，繪制韋恩圖。將藥物-疾病交集靶點(diǎn)輸入STRING平臺(tái)（https：//string-db.org），設(shè)置物種為“Homo sapiens”，最小互相作用閾值設(shè)置為Medium confidence（0.4），構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)。將PPI網(wǎng)絡(luò)結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0軟件中，計(jì)算度值（DC）、介數(shù)中心性（BC）、接近中心性（CC），以上述拓?fù)鋮?shù)的中位數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)篩選核心靶點(diǎn)。

1.1.4 基因本體（GO）富集分析與京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析 利用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集分析與KEGG通路富集分析，篩選條件為P＜0.05，對(duì)富集結(jié)果進(jìn)行可視化分析。

1.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 8周齡SPF級(jí)健康雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量（200±20）g，購(gòu)于維通利華（北京）有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（京）2021-0011。所有動(dòng)物飼養(yǎng)于中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所動(dòng)物室，普通飲食、飲水，溫度（22±1）℃，濕度（65±5）%，12 h晝夜循環(huán)光環(huán)境，適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d。本實(shí)驗(yàn)已通過(guò)中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，倫理批件號(hào)：2022B182。

1.2.2 藥物與試劑 川芎（批號(hào)：2101056）、延胡索（批號(hào)：2012001）、藁本（批號(hào)：2101007）均購(gòu)于北京市雙橋燕京中藥飲片廠；蓽茇（批號(hào)：22012703）、白芷（批號(hào)：20112207）均購(gòu)于北京人衛(wèi)中藥飲片有限公司。中藥由易紅研究員鑒定均為正品。佐米曲普坦（1 mL∶5 mg，山東京衛(wèi)制藥有限公司，批號(hào)：20100192）；硝酸甘油注射液（廣州白云山明興制藥有限公司，批號(hào)：H44020569）。

降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）ELISA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20230222）、一氧化氮（NO）ELISA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20230222）、一氧化氮合酶（iNOS）ELISA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20230222）、內(nèi)皮素1（ET-1）ELISA檢測(cè)試劑盒（20230222）、5-羥色胺（5-HT）ELISA檢測(cè)試劑盒（20230222）、瞬時(shí)受體電位香草酸亞型1（TRPV1）ELISA檢測(cè)試劑盒（20230222）均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。第一代逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液RT-Mix（兩步法）（批號(hào)：GPL001N）購(gòu)于北京金普來(lái)生物科技有限公司；Hieff UNICONUniversal Blue qPCR SYBR Green Master Mix（批號(hào)：H6201090）購(gòu)于翌圣生物科技（上海）股份有限公司；實(shí)驗(yàn)所用引物均購(gòu)自上海生工生物工程有限公司。

1.2.3 主要儀器 YLS-12A型鼠尾光照測(cè)痛儀（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司）；KZ-II型高速組織研磨儀（上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司）；Spectramax i3x型多功能酶標(biāo)（Molecular Devices）；Tadvanced型PCR儀（AnalytikjenaBiometra）；qTowel-3G型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Analytikjena）；HeraeusFresco 21R型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（Thermo Fisher）。

1.2.4 滴鼻液制備 中藥飲片加水煎煮2次，取藥液濃縮干燥，即得提取物，依據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和課題組前期研究結(jié)果確定給藥劑量，臨用前配置生藥質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、2.0 g/mL的一粒金滴鼻液。佐米曲普坦鼻噴霧劑臨用前依據(jù)臨床等效劑量換算公式，使用注射用生理鹽水稀釋10倍（0.5 mg/mL）。

1.2.5 動(dòng)物分組 60只大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后，借助鼠尾光熱測(cè)痛儀測(cè)定基線。根據(jù)痛閾基線隨機(jī)分為6組，即對(duì)照（NC）組、模型（Model）組、一粒金低劑量（YLJ低劑量）組、一粒金中劑量（YLJ中劑量）組、一粒金高劑量（YLJ高劑量）組、佐米曲普坦（Zol）組，每組10只。

1.2.6 動(dòng)物偏頭痛模型建立及給藥 除NC組外，其余各組大鼠參照文獻(xiàn)[15]建立慢性偏頭痛模型，即于第1、3、5、7、9天，頸背部皮下注射硝酸甘油（10 mg/kg）。模型成功標(biāo)準(zhǔn)：大鼠出現(xiàn)持續(xù)至少30 min的雙耳發(fā)紅、煩躁不安、爬籠次數(shù)增多、四肢頻繁撓頭等現(xiàn)象，活動(dòng)減少、蜷臥。NC組頸部皮下注射等量生理鹽水。

除NC組外，佐米曲普坦組（0.225 mg/kg，臨床等效劑量）、YLJ低劑量組（0.5 g/mL）、YLJ中劑量組（1.0 g/mL）、YLJ高劑量組（2.0 g/mL）大鼠頸背部皮下注射等量硝酸甘油后立刻滴鼻相應(yīng)藥物，給藥量均為50 μL。NC組、Model組鼻腔滴注等量生理鹽水。

1.2.7 標(biāo)本采集 第11天腹主動(dòng)脈取血后心尖灌流預(yù)冷的生理鹽水，灌流后取腦組織并分離大腦皮層、延髓。

1.2.8 觀察指標(biāo)

1.2.8.1 大腦皮層NO、iNOS、5-HT、ET-1、CGRP、TRPV1含量 第11天采用1%戊巴比妥鈉（100 mg/kg）對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉，麻醉后于心尖灌流預(yù)冷的生理鹽水，取腦組織，分離大腦皮層組織，制10%勻漿，收集上清液。嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說(shuō)明書操作檢測(cè)大腦皮層中NO、iNOS、5-HT、ET-1、CGRP、TRPV1水平。

1.2.8.2 TRPV1mRNA、mGluR5 mRNA表達(dá)水平 使用TRIzol分別提取大腦皮層、延髓部位的總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)，檢測(cè)TRPV1 mRNA、mGluR5 mRNA表達(dá)水平，以GAPDH作為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法，計(jì)算得到目標(biāo)mRNA相對(duì)表達(dá)量。所用引物序列見表1。

表1 PCR 引物序列

1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 26.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料符合正態(tài)分布以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果

2.1.1 一粒金靶點(diǎn)和偏頭痛疾病相關(guān)靶點(diǎn)的收集 分別獲得川芎活性成分7個(gè)，靶點(diǎn)1 371個(gè)；蓽茇活性成分15個(gè)，靶點(diǎn)671個(gè)；延胡索活性成分49個(gè)，靶點(diǎn)1 549個(gè)；白芷活性成分22個(gè)，靶點(diǎn)1 408個(gè)；藁本活性成分1個(gè)，靶點(diǎn)662個(gè)。（見表2）去重后一粒金活性成分的靶點(diǎn)基因共計(jì)372個(gè)。

表2 部分中藥活性成分

2.1.2 一粒金治療偏頭痛靶點(diǎn)關(guān)系互作分析 檢索獲得偏頭痛疾病靶點(diǎn)共2 346個(gè)。一粒金活性成分與偏頭痛疾病靶點(diǎn)共有195個(gè)共有靶點(diǎn)，即重要靶點(diǎn)。（見圖1）

圖1 一粒金與偏頭痛交集靶點(diǎn)韋恩圖

將195個(gè)重要靶點(diǎn)的基因ID導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行PPI分析，使用Cytoscape 3.9可視化，獲得177個(gè)節(jié)點(diǎn)，1 418個(gè)節(jié)點(diǎn)邊。節(jié)點(diǎn)的顏色和大小反映度值，節(jié)點(diǎn)越大，度值越大，邊緣的顏色和線條粗細(xì)與度值相關(guān)。計(jì)算3個(gè)拓?fù)渲笜?biāo)的中值，得到69個(gè)核心目標(biāo)。（見圖2）AKT1、IL-18、VEGFA、TRPV1等即為關(guān)鍵靶點(diǎn)。

圖2 一粒金治療偏頭痛靶點(diǎn)關(guān)系互作分析

2.1.3 一粒金治療偏頭痛關(guān)鍵靶點(diǎn)GO分析 利用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)69個(gè)核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO分析，獲得一粒金治療偏頭痛相關(guān)生物學(xué)注釋以及相關(guān)通路。共收集了34種生物過(guò)程（biological process，BP）、43種細(xì)胞組分（cellular component，CC）和70種分子功能（molecular function，MF）（P＜0.05）。（見圖3）一粒金在腫瘤壞死因子產(chǎn)生的正向調(diào)控、外周神經(jīng)系統(tǒng)開發(fā)、炎癥反應(yīng)中細(xì)胞因子產(chǎn)生的正向調(diào)節(jié)等方面有良好作用。

圖3 一粒金治療偏頭痛關(guān)鍵靶點(diǎn)GO 分析

2.1.4 關(guān)鍵靶點(diǎn)KEGG分析 通過(guò)DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)核心靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG富集分析。共得到155條路徑（P＜0.05）。一粒金治療偏頭痛的KEGG通路包括癌癥通路、PI3K/AKT通路、AGE-RAGE信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、IL-17通路、HIF1通路、MAPK通路等。（見圖4）

圖4 一粒金治療偏頭痛關(guān)鍵靶點(diǎn)KEGG 分析

2.1.5 一粒金-偏頭痛-關(guān)鍵靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將相關(guān)數(shù)據(jù)傳入Cytoscape 3.9軟件，生成一粒金組方中藥-關(guān)鍵靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖，進(jìn)一步篩選度值＞7的關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行作圖。（見圖5）其中綠色菱形節(jié)點(diǎn)為一粒金組成中藥，黃色圓形節(jié)點(diǎn)為度值＞7的關(guān)鍵靶點(diǎn)，藍(lán)色三角形節(jié)點(diǎn)為由關(guān)鍵靶點(diǎn)富集得到的通路。該網(wǎng)絡(luò)由131個(gè)節(jié)點(diǎn)和2 622條邊組成，節(jié)點(diǎn)越大度值越大。川芎、延胡索度值最大，靶點(diǎn)中度值最大的為PTGS2、MAPK1、ABCB1、AKT、BCL2、BDNF、CASP3、CCL2、EGFR、ICAM1、IL1B，重要通路包括Toll樣受體通路、HIF1通路、IL-17通路、JAK-STAT通路、TNF通路、MAPK通路等。

圖5 一粒金-偏頭痛-關(guān)鍵靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 各組大鼠大腦皮層NO、iNOS、ET-1、5-HT水平比較Model組大鼠大腦皮層NO、iNOS、ET-1水平高于NC組（P＜0.01），5-HT水平低于NC組（P＜0.01）；YLJ低劑量組、YLJ中劑量組、YLJ高劑量組、Zol組大鼠大腦皮層iNOS、ET-1水平均低于Model組（P＜0.01）；YLJ低劑量組大鼠大腦皮層NO、5-HT水平與Model組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；YLJ中劑量組、YLJ高劑量組、Zol組大鼠大腦皮層NO水平均低于Model組，5-HT水平均高于Model組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。（見圖6）

2.2.2 各組大鼠大腦皮層CGRP、TRPV1水平比較 Model組大鼠大腦皮層CGRP、TRPV1水平高于NC組（P＜0.01）；YLJ低、中劑量組大鼠大腦皮層CGRP、TRPV1水平與Model組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；YLJ高劑量組、Zol組大鼠大腦皮層CGRP、TRPV1水平均低于Model組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（見圖7）

圖7 各組大鼠大腦皮層CGRP、TRPV1 水平比較（±s，n=10）

2.2.3 各組大鼠大腦皮層和延髓中mGluR5 mRNA、TRPV1 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較 Model組大鼠大腦皮層和延髓中mGluR5 mRNA、TRPV1 mRNA相對(duì)表達(dá)量高于NC組（P＜0.05或P＜0.01）；YLJ低劑量組大鼠大腦皮層和延髓中mGluR5 mRNA、TRPV1 mRNA相對(duì)表達(dá)量與Model組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；YLJ中劑量組、YLJ高劑量組、Zol組大鼠大腦皮層和延髓中mGluR5 mRNA、TRPV1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均低于Model組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。（見圖8～9）

圖8 各組大鼠大腦皮層中mGluR5 mRNA、TRPV1 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較 （±s，n=10）

圖9 各組大鼠延髓中mGluR5 mRNA、TRPV1 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較 （±s，n=10）

3 討 論

偏頭痛可由視覺(jué)、嗅覺(jué)等因素誘發(fā)，多起病急，發(fā)作快[16]，與中醫(yī)理論風(fēng)邪致病情況一致。風(fēng)善行而數(shù)動(dòng)，易襲陽(yáng)位。偏頭痛主要致病因素為風(fēng)邪。后世眾多醫(yī)家對(duì)一粒金進(jìn)行實(shí)踐運(yùn)用并加以改良，最終確定以川芎、蓽茇、白芷、延胡索、藁本為組方。方中君藥蓽茇為大辛大熱之品，是治療頭痛、鼻淵、牙痛要藥[17]。川芎上走頭目且通絡(luò)止痛，可治諸經(jīng)頭痛[18]。白芷散風(fēng)除濕，藁本祛風(fēng)散寒，延胡索活血散瘀。三藥共為佐藥。諸藥合用，共奏活血行氣止痛之功?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)白芷、延胡索不僅具有調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)、抗炎等作用，還具有不良反應(yīng)少、無(wú)成癮、鎮(zhèn)痛持久等優(yōu)點(diǎn)[19]。白芷水煎液可降低大鼠血清和腦組織中5-HT含量，提示白芷可能通過(guò)神經(jīng)活性配體-受體和5-HT能突觸通路，下調(diào)5-HT的含量，從而改善偏頭痛癥狀[20]。藁本具有抗炎、解熱、鎮(zhèn)痛、中樞抑制、抗血栓等藥理作用,可明顯延長(zhǎng)小鼠常壓狀態(tài)下耐缺氧時(shí)間，起到擴(kuò)張血管、改善腦部微循環(huán)、抗心肌缺血、缺氧的作用[21]。一粒金給藥方式為鼻竅給藥。《丹溪心法》中記載“搐嚏流涎”，為排濁之法，可使?jié)彡幜鞒?，清?yáng)之氣通行，快速治療疼痛[22]。

本研究首先借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)一粒金治療偏頭痛的藥效和機(jī)制進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)一粒金可通過(guò)多靶點(diǎn)、多通路對(duì)偏頭痛發(fā)揮治療作用，涉及的關(guān)鍵靶點(diǎn)包括TRPV1、AKT1、VEGFA等，相關(guān)通路有TNF信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路等。結(jié)果表明其機(jī)制可能與血管反應(yīng)和炎癥過(guò)程相關(guān)。結(jié)合文獻(xiàn)調(diào)研，本研究后續(xù)實(shí)驗(yàn)針對(duì)TRPV1及其相關(guān)因子展開研究。

一粒金可通過(guò)調(diào)節(jié)血清ET-1、NO、iNOS及5-HT水平來(lái)抑制腦血管異常擴(kuò)張，進(jìn)而抑制神經(jīng)源性炎癥來(lái)減輕偏頭疼癥狀。TRPV1、mGluR5為關(guān)鍵因子之一，與臨床偏頭痛生物標(biāo)志物NO、CGRP均相關(guān)。一粒金可能通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥、減輕凋亡等途徑發(fā)揮作用。TRPV1可被NO等內(nèi)源性或外源性刺激激活，引起Ca2+內(nèi)流。TRPV1上調(diào)會(huì)增加機(jī)械性痛覺(jué)和熱痛覺(jué)亢進(jìn)[22]，進(jìn)而導(dǎo)致三叉神經(jīng)感覺(jué)纖維末梢釋放CGRP等神經(jīng)遞質(zhì)[23]，引起神經(jīng)源性炎癥，繼而產(chǎn)生偏頭痛。mGluR5和TRPV1已被證明在中樞神經(jīng)系統(tǒng)皮膚痛覺(jué)的轉(zhuǎn)導(dǎo)和調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用[24-25]。在mGlu5受體激活期間，TRPV1通道介導(dǎo)的膜電流增強(qiáng)[26]。本研究結(jié)果表明一粒金可以抑制偏頭痛模型大鼠大腦皮層、延髓CGRP、TRPV1mRNA、mGluR5 mRNA表達(dá)水平從而治療偏頭痛。

綜上所述，一粒金能降低偏頭痛模型大鼠腦組織ET-1、NO、iNOS、CGRP、TRPV1等偏頭痛生物標(biāo)志物表達(dá)水平，升高腦組織5-HT水平，降低大腦皮層、延髓TRPV1 mRNA、mGluR5 mRNA表達(dá)水平，從而治療偏頭痛。鼻內(nèi)給藥起效快，可快速穿過(guò)血腦屏障，操作簡(jiǎn)便，受試對(duì)象適從性好。后續(xù)實(shí)驗(yàn)可進(jìn)一步從血管收縮舒張功能或炎癥水平方面研究一粒金對(duì)偏頭痛模型動(dòng)物的改善作用，利用質(zhì)譜組學(xué)等技術(shù)研究一粒金的主要成分和藥理作用物質(zhì)基礎(chǔ)，并基于體外實(shí)驗(yàn)和基因編輯技術(shù)對(duì)TRPV1等關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證，從而為鼻腔滴注一粒金治療偏頭痛的臨床推廣提供依據(jù)。