基于氣相/液相-三重四極桿質(zhì)譜法的20種生物農(nóng)藥中化學(xué)農(nóng)藥成分篩查

吳霜　陳磊　羅云米　褚能明　余鷹

摘 要 為明確農(nóng)作物病蟲害防治用市售生物農(nóng)藥中是否含有化學(xué)農(nóng)藥成分，綜合運(yùn)用QuEChERS凈化法和GC-MS/MS、UPLC-MS/MS技術(shù)，對市場購買的20個(gè)生物農(nóng)藥（蘇云金桿菌、苦參堿、蛇床子素、小檗堿、大蒜油、乙蒜素、香芹酚、桉油精、金龜子綠僵菌1#、金龜子綠僵菌2#、球孢白僵菌、枯草芽孢桿菌1#、枯草芽孢桿菌2#、短穩(wěn)桿菌、多殺霉素、春雷霉素、多抗霉素、中生菌素、多粘類芽孢桿菌和D-檸檬烯）進(jìn)行了化學(xué)農(nóng)藥成分篩查。結(jié)果表明，購買的20個(gè)生物農(nóng)藥樣品中共檢出21種化學(xué)農(nóng)藥成分，檢出化學(xué)農(nóng)藥成分的生物農(nóng)藥產(chǎn)品占比為45%。該結(jié)果不僅驗(yàn)證了前期建立的72種禁限用和高頻檢出化學(xué)農(nóng)藥質(zhì)譜檢測方法的可行性，而且為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)，以及規(guī)范生物農(nóng)藥生產(chǎn)、生物農(nóng)藥產(chǎn)品檢驗(yàn)和質(zhì)量控制等提供了參考。

關(guān)鍵詞 生物農(nóng)藥；化學(xué)農(nóng)藥成分；氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；三重四極桿質(zhì)譜

中圖分類號：S482 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2023.15.007

隨著中國經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，人民生活水平不斷提高，人們對美好生活的向往更加強(qiáng)烈，對生態(tài)環(huán)境、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)安全等問題高度關(guān)注。農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中長期大量使用化學(xué)農(nóng)藥帶來的負(fù)面影響日益凸顯，迫使科研工作者積極研究和開發(fā)各種新型生物農(nóng)藥。生物農(nóng)藥是以自然界生物來源物質(zhì)作為有效成分的有害生物防治產(chǎn)品，如微生物源、植物源和動物源農(nóng)藥等，具有高效、安全、對環(huán)境友好等特點(diǎn)。近年來，生物農(nóng)藥的研發(fā)與應(yīng)用得到了各方大力支持，但與此同時(shí)，許多生產(chǎn)者為了提高藥效，爭奪市場，在產(chǎn)品上弄虛作假，生物農(nóng)藥產(chǎn)品的質(zhì)量問題也被頻頻報(bào)道，包括有效成分含量不足或缺失、違規(guī)添加隱性成分等。其中，在生物農(nóng)藥中添加隱性成分的情況尤為突出[1-4]。因此，抓好生物農(nóng)藥檢測檢驗(yàn)是保障農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)安全和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的重要基礎(chǔ)。

目前，化學(xué)農(nóng)藥的定性定量檢測方法主要有比色法、液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法?；诒粶y樣品理化性質(zhì)的不同，樣品處理方法也有所差異[5-9]。本研究采用前期建立的QuEChERS凈化法和氣相/液相-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法[10-14]，對20個(gè)市售生物農(nóng)藥進(jìn)行了化學(xué)農(nóng)藥成分篩查，以期為生物農(nóng)藥產(chǎn)品的質(zhì)量檢驗(yàn)提供參考。

1? 材料與方法

1.1? 儀器與試劑

三重四極桿型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀GCMS-TQ8050 NX（日本島津公司）；Waters Xevo-TQ-XS高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國Waters公司）；WH-600超聲波清洗機(jī)（濟(jì)寧萬和超聲電子設(shè)備有限公司）；臺式高速冷凍離心機(jī)H1850R（湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；Elix5超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）；T18-B-S25勻漿儀（德國IKA公司）；SK-1快速混勻器（浙江省金壇市科析儀器有限公司）；TTL-DCII型多功能氮吹儀（北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司）；TP-402天平（美國Denver公司）；微量加樣器（德國Eppendorf公司）。

72種化學(xué)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、氯氰菊酯、甲氰菊酯、五氯硝基苯、腐霉利、氟胺氰菊酯、醚菊酯、甲拌磷、甲拌磷亞砜、甲拌磷砜、氟蟲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈硫醚、氰戊菊酯、聯(lián)苯菊酯、氟氰戊菊酯、三唑酮、乙烯菌核利、氯氟氰菊酯、三氯殺螨醇、溴氰菊酯、氯菊酯、異菌脲、百菌清、二甲戊靈、氟氯氰菊酯、水胺硫磷、三唑磷、馬拉硫磷、甲霜靈、對硫磷、甲基異柳磷、氧樂果、殺螟硫磷、二嗪磷、嘧霉胺、毒死蜱、敵敵畏、丙溴磷、伏殺硫磷、溴蟲腈、氟甲腈、涕滅威、涕滅威亞砜、涕滅威砜、辛硫磷、霜霉威、蟲酰肼、甲萘威、吡蟲啉、阿維菌素、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、噻蟲嗪、氯吡脲、除蟲脲、啶蟲脒、氟啶脲、嘧菌酯、多效唑、吡唑醚菌酯、克百威、3-羥基克百威、滅多威、滅幼脲、噠螨靈、多菌靈、烯酰嗎啉、氯蟲苯甲酰胺、咪酰胺等農(nóng)藥標(biāo)樣購自農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心（天津），濃度為1 000 mg·L-1。

乙腈、甲醇：色譜純；水：超純水；氯化鈉：分析純；針式過濾器（含150 mg MgSO4和50 mg PSA），天津阿爾塔科技有限公司。

樣品均為市售生物農(nóng)藥。

1.2? 測定方法

市售生物農(nóng)藥中72種化學(xué)農(nóng)藥的檢測參照NY/T 761—2008[15]、GB/T 20769—2008[16]、GB 23200.113—2018[17]，以及實(shí)驗(yàn)室前期建立的方法[10-14]進(jìn)行樣品前處理及儀器分析。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 檢測方法的驗(yàn)證

加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果顯示，72種化學(xué)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的平均回收率為70%～120%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在20%以內(nèi)，定量限在0.01～0.05 mg·kg-1之間，符合農(nóng)藥殘留檢測要求[18]。

2.2? 質(zhì)譜檢測條件的確定

通過對檢測條件的優(yōu)化，確定72種化學(xué)農(nóng)藥的質(zhì)譜檢測參數(shù)（45種化學(xué)農(nóng)藥的GC-MS/MS檢測參數(shù)，27種化學(xué)農(nóng)藥的UPLC-MS/MS檢測參數(shù)），各化學(xué)農(nóng)藥的保留時(shí)間、定量離子對等參數(shù)詳見表1、表2。

2.3? 實(shí)際樣品的檢測

選取市售植物源和微生物源殺蟲殺菌劑共20個(gè)樣品，對其化學(xué)農(nóng)藥成分分別進(jìn)行GC-MS/MS和UPLC-MS/MS檢測。結(jié)果顯示，市售生物農(nóng)藥中未檢出靶標(biāo)化學(xué)農(nóng)藥的有蘇云金桿菌、小檗堿、大蒜油、乙蒜素、桉油精、金龜子綠僵菌1#、金龜子綠僵菌2#、枯草芽孢桿菌1#、枯草芽孢桿菌2#、短穩(wěn)桿菌和春雷霉素。檢出化學(xué)農(nóng)藥成分的生物農(nóng)藥產(chǎn)品占比為45%，各產(chǎn)品含化學(xué)農(nóng)藥成分種類數(shù)量分別為苦參堿9種、蛇床子素3種、香芹酚1種、球孢白僵菌4種、多殺霉素4種、多抗霉素2種、中生菌素4種、多粘類芽孢桿菌6種、D-檸檬烯1種。并且，其中檢測出克百威、氰戊菊酯等禁限用化學(xué)農(nóng)藥，各成分含量見表3。

3? 結(jié)論

本研究綜合運(yùn)用QuEChERS凈化法和氣相/液相-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法，對20個(gè)市售生物農(nóng)藥樣品進(jìn)行了化學(xué)農(nóng)藥成分篩查，結(jié)果表明，購買的20個(gè)生物農(nóng)藥樣品中共檢出21種化學(xué)農(nóng)藥成分，檢出化學(xué)農(nóng)藥成分的生物農(nóng)藥產(chǎn)品占比為45%。這不僅驗(yàn)證了前期建立的72種禁限用和高頻檢出化學(xué)農(nóng)藥質(zhì)譜檢測方法的可行性，而且為農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)環(huán)境安全評價(jià)、農(nóng)產(chǎn)品安全認(rèn)證等級劃分、農(nóng)作物農(nóng)藥藥害分析鑒定、病蟲害抗藥性分析，以及為進(jìn)一步規(guī)范生物農(nóng)藥生產(chǎn)和生物農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)提供參考。

參考文獻(xiàn)：

[1]? 袁善奎，劉亮，王以燕，等.農(nóng)藥非法添加隱性成分及其風(fēng)險(xiǎn)分析[J].農(nóng)藥，2016，55（7）：480-482，490.

[2]? 董記萍，付鑫羽，白孟卿，等.近3年我國農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量情況分析[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2019，40（7）：13-21.

[3]? 關(guān)于農(nóng)藥隱性成分，你需要知道的幾點(diǎn)[J].營銷界（農(nóng)資與市場），2018（17）：75-80.

[4]? 徐火照，徐永，壽林飛，等.農(nóng)藥隱性成分監(jiān)督抽查案例分析[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2015，36（6）：15-18.

[5]? 于峰，國明，賈科玲，等.建立HPLC-DAD-MS/MS指紋圖譜快速分析農(nóng)藥隱性成分的方法[J].農(nóng)藥，2018，57（1）：39-41，45.

[6]? 蒼濤，汪志威，王新全，等.九種農(nóng)藥制劑和一種葉面肥中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類隱性成分的快速檢測[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2016，18（2）：227-231.

[7]? 喬成奎，黃玉南，羅靜，等.HPLC-MS/MS法檢測農(nóng)藥產(chǎn)品中30種隱性成分[J].農(nóng)藥，2015，54（5）：340-342，345.

[8]? 陳建波，馬琳，黃蘭淇.超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜法快速篩查農(nóng)業(yè)投入品中違規(guī)添加的氨基甲酸酯類農(nóng)藥[J].現(xiàn)代農(nóng)藥，2016，15（3）：25-28.

[9]? 羅少輝，路鋒，周愛英，等.一種低成本檢測25種高頻非法添加農(nóng)藥方法[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2019，40（10）：27-31.

[10] 褚能明，孟霞，康月瓊，等.分散固相萃取-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定茉莉花茶中86種農(nóng)藥殘留[J].食品科學(xué)，2016，37（24）：239-246.

[11] 褚能明，楊俊英，柴勇，等.QuEChERS-GC-MS/MS法同時(shí)測定竹筍中49種農(nóng)藥殘留量[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2015，28（3）：1288-1294.

[12] 褚能明，舒曉，張雪梅，等.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定干制藤椒中43種殘留農(nóng)藥[J].食品工業(yè)，2018，39（12）：282-287.

[13] 龔久平，楊曉霞，褚能明，等.重慶產(chǎn)地蔬菜農(nóng)藥殘留調(diào)查及健康風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)[J].南方農(nóng)業(yè)，2018，12（31）：5-10.

[14] 向嘉，柴勇，褚能明，等.五種加工方式對黃瓜中10種農(nóng)藥殘留的去除效果[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2019，21（3）：345-351.

[15] 中國人民共和國農(nóng)業(yè)部.蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定：NY/T 761—2008[S].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2008.

[16] 國家標(biāo)準(zhǔn)委農(nóng)業(yè)食品部.水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品參量的制定：GB/T 20769—2008[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[17] 中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會，中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部，國家市場監(jiān)督管理總局.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法：GB 23200.113—2018[S].北京：中國質(zhì)檢出版社，2018.

[18] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部.農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則：NY/T 788—2018[S].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2018.

（責(zé)任編輯：敬廷桃）