加味歸芪片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王娟弟,李 敏,劉 蕊,郭曉霞,李 欣,李冬華,馬 瀟*,郭朝暉

(1.甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院,甘肅蘭州 730070;2.國(guó)家藥品監(jiān)督管理局中藥材及飲片質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,甘肅蘭州 730070)

加味歸芪片收載于1992年出版的衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》第六冊(cè)(WS3-B-1118-92),具有補(bǔ)氣、養(yǎng)血之功效,用于氣血兩虧、氣虛體弱、肢體勞倦之癥[1],該制劑療效明確、適用人群廣、副作用小;其處方中的3味藥材當(dāng)歸、黃芪、黨參均屬于甘肅省道地藥材。當(dāng)歸是傘形科植物當(dāng)歸[Angelicasinensis(Oliv.)Diels]的干燥根,具有補(bǔ)血活血等功效,主要分布在甘肅、四川及云南等地,甘肅岷縣被譽(yù)為“千年藥鄉(xiāng)”,其產(chǎn)當(dāng)歸品質(zhì)優(yōu)良,又被稱(chēng)為岷歸;其主要含有揮發(fā)油、有機(jī)酸、多糖和黃酮等成分[2-8]。2020年版《中國(guó)藥典》[9]以阿魏酸作為評(píng)價(jià)當(dāng)歸藥材和飲片質(zhì)量的指標(biāo)性成分之一。黃芪是豆科植物蒙古黃芪[AstragalusmembranaceusBge.var.mongholicus(Bge.) Hsiao]和膜莢黃芪[A.membranaceus(Fisch.) Bge.]的根,具有補(bǔ)氣固表、利尿脫毒、排膿、斂瘡生肌的功效,主要分布在甘肅、內(nèi)蒙古和山西等地;其主要含有多糖類(lèi)、皂苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、生物堿類(lèi)等成分[10-15]。2020年版《中國(guó)藥典》[9]以黃芪甲苷作為評(píng)價(jià)黃芪藥材和飲片質(zhì)量的指標(biāo)性成分之一。

加味歸芪片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容簡(jiǎn)單,僅有性狀、顯微鑒別、片劑通則項(xiàng),不能有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。為此,該研究擬對(duì)加味歸芪片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提升,提高產(chǎn)品質(zhì)量,從而更加有效控制加味歸芪片的質(zhì)量,確保加味歸芪片的療效,為臨床用藥提供質(zhì)量保證。

1 儀器與材料

1.1 儀器高效液相色譜儀(日立,型號(hào)Chromaste);電子天平(瑞士梅特勒公司,型號(hào)ME204、MS205DU);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士BUCHI公司,型號(hào)Rotavapor R-300);離心機(jī)(艾本德公司,型號(hào)5810R);薄層色譜點(diǎn)樣儀(瑞士卡瑪公司,型號(hào)ATS4)。

1.2 試藥與樣品當(dāng)歸(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)120927-201617);阿魏酸(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)110773-201614);黃芪甲苷(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)120974-21813);甲醇、乙腈均為色譜級(jí);水為屈臣氏水;其余試劑均為分析純。加味歸芪片(批號(hào)180501、181101、190101、190701、191201、191202、191203、191204、200101、200102、200103、200104)來(lái)源于佛仁制藥有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 當(dāng)歸成分的薄層色譜鑒別取本品適量,去包衣,粉碎,精密稱(chēng)定粉末5 g,加乙醚20 mL,超聲處理10 min,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖? mL溶解,作為供試品溶液。另取當(dāng)歸陰性藥材5 g、當(dāng)歸藥材(原料)0.5 g、當(dāng)歸對(duì)照藥材0.5 g,同法制成當(dāng)歸陰性對(duì)照溶液、當(dāng)歸藥材(原料)和當(dāng)歸對(duì)照藥材溶液。按照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn),吸取上述3種溶液各10 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-乙酸乙酯(4∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干。置紫外光燈(365 nm)下檢視,結(jié)果見(jiàn)圖1。

注:1～12為樣品,批號(hào)依次為180501、181101、190101、190701、191201、191202、191203、191204、200101、200102、200103、200104;13為當(dāng)歸藥材(原料);14為當(dāng)歸陰性樣品;15為當(dāng)歸對(duì)照藥材。Note:1-12 are samples, with batch numbers 180501, 181101, 190101, 190701, 191201, 191202, 191203, 191204, 200101, 200102, 200103, and 200104 in sequence; 13 is Angelica sinensis medicinal material (raw material); 14 is a negative sample of Angelica sinensis; 15 is the reference medicinal material of Angelica sinensis.圖1 加味歸芪片中當(dāng)歸對(duì)照藥材薄層鑒別Fig.1 Thin layer identification of Angelica sinensis reference medicinal material in Jiawei Guiqi tablets

取本品適量,去包衣,粉碎,精密稱(chēng)定粉末5 g,加1%碳酸氫鈉溶液50 mL,超聲處理10 min,6 000 r/min離心5 min,取上清液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2～3;用乙醚振搖提取2次,每次20 mL,合并乙醚液,揮干,殘?jiān)蛹状? mL溶解,搖勻,作為供試品溶液。另取當(dāng)歸陰性藥材5 g、當(dāng)歸藥材(原料)0.5 g,同法制成當(dāng)歸陰性和當(dāng)歸藥材(原料)對(duì)照溶液。另取阿魏酸對(duì)照品,加甲醇制成1 mg/mL溶液,作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn),吸取上述3種溶液各10 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-乙酸乙酯-二氯甲烷-甲酸(4∶1∶1∶0.1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視,結(jié)果見(jiàn)圖2。

注:1～12為樣品,批號(hào)依次為180501、181101、190101、190701、191201、191202、191203、191204、200101、200102、200103、200104;13為當(dāng)歸藥材(原料);14為當(dāng)歸陰性樣品;15為阿魏酸對(duì)照品;16為當(dāng)歸對(duì)照藥材。Note:1-12 are samples, with batch numbers 180501, 181101, 190101, 190701, 191201, 191202, 191203, 191204, 200101, 200102, 200103, and 200104 in sequence; 13 is Angelica sinensis medicinal material (raw material); 14 is a negative sample of Angelica sinensis; 15 is the reference substance for ferulic acid; 16 is the reference medicinal material of Angelica sinensis.圖2 加味歸芪片中阿魏酸對(duì)照品薄層鑒別Fig.2 Thin layer identification of ferulic acid reference substance in Jiawei Guiqi tablets

加味歸芪片樣品、當(dāng)歸對(duì)照藥材以及阿魏酸對(duì)照品均有相應(yīng)的斑點(diǎn),斑點(diǎn)清晰,分離條件好,并且加味歸芪片當(dāng)歸陰性無(wú)干擾,因此對(duì)當(dāng)歸對(duì)照藥材和阿魏酸對(duì)照品進(jìn)行定性鑒別。

2.2 黃芪成分的薄層色譜鑒別取本品適量,去包衣,粉碎,精密稱(chēng)定粉末5 g,置錐形瓶中,加甲醇30 mL,超聲處理30 min,放冷,過(guò)濾,收集濾液,蒸干,殘?jiān)芙庥?0 mL 10%(V/V)氨水溶液中,待溶解完全,將溶液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,用水飽和的正丁醇萃取3次(15、10、10 mL)。合并提取液,蒸干,殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,即得。取黃芪對(duì)照藥材1 g、黃芪藥材(原料)1 g、黃芪陰性樣品5 g,同法制備對(duì)照藥材和黃芪藥材(原料)溶液及陰性對(duì)照溶液。取黃芪甲苷對(duì)照品,加甲醇制成1 mg/mL溶液,即得對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn),吸取上述溶液5 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶4∶2∶1)的下層溶液作為展開(kāi)劑,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇,105 ℃干燥之顯色,置紫外光(365 nm)下檢視,結(jié)果見(jiàn)圖3。

注:1～6為樣品,批號(hào)依次為180501、181101、190101、190701、191201、191202;7為黃芪甲苷對(duì)照品;8為黃芪對(duì)照藥材;9為黃芪藥材(原料);10為陰性對(duì)照;11～16為樣品,批號(hào)依次為191203、191204、200101、200102、200103、200104。Note:1-6 are samples, with batch numbers 180501, 181101, 190101, 190701, 191201, 191202 in sequence; 7 is the reference substance for astragaloside IV; 8 is the reference medicinal material of Astragalus membranaceus; 9 is Astragalus membranaceus medicinal material (raw material); 10 is a negative control; 11-16 are samples, with batch numbers 191203, 191204, 200101, 200102, 200103, and 200104 in sequence.圖3 加味歸芪片中黃芪甲苷對(duì)照品薄層鑒別Fig.3 Thin layer identification of astragaloside IV reference substance in Jiawei Guiqi tablets

加味歸芪片樣品與黃芪甲苷對(duì)照品有相應(yīng)的斑點(diǎn),斑點(diǎn)清晰,分離條件好,且黃芪陰性無(wú)干擾。加味歸芪片樣品與黃芪對(duì)照藥材有相應(yīng)的斑點(diǎn),斑點(diǎn)清晰,但黃芪陰性有干擾。因此對(duì)黃芪甲苷對(duì)照品進(jìn)行定性鑒別。

2.3 阿魏酸含量測(cè)定

2.3.1色譜條件。色譜柱為Agilent Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);以乙腈-0.085%磷酸溶液(17∶83)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為316 nm;柱溫35 ℃。

2.3.2對(duì)照品溶液的制備。取阿魏酸對(duì)照品11.44 mg,精密稱(chēng)定,置50 mL棕色量瓶中,加70%甲醇制成0.228 8 mg/mL的溶液,作為儲(chǔ)備液。

2.3.3供試品溶液的制備。取本品20片,除去包衣,研細(xì)(過(guò)三號(hào)篩),取約2 g,精密稱(chēng)定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇25 mL,密塞,稱(chēng)定重量,加熱回流1 h,放冷,再稱(chēng)定重量,用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,靜置,取上清液濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

2.3.4方法學(xué)考察。

2.3.4.1線性曲線的繪制。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液,分別制成2.265、4.530、6.795、9.060、18.121、22.651 μg/mL對(duì)照品溶液,以峰面積為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制線性曲線,其線性方程為y=5E+07x-2 062.5(R2=0.999 9),表明阿魏酸在2.265～22.651 μg/mL線性關(guān)系良好。

2.3.4.2精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)。取“2.3.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液,按“2.3.1”色譜條件,連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積并計(jì)算其含量,得出阿魏酸含量的RSD為 0.4%,表明測(cè)定儀器精密度良好。取同一供試品溶液(批號(hào)190701),按照“2.3.1”色譜條件,分別于0、4、8、12、16、24 h進(jìn)行測(cè)定,記錄峰面積,計(jì)算得到阿魏酸含量的RSD為2.0%,說(shuō)明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。取同一批樣品(批號(hào)190701)粉末2 g,精密稱(chēng)定,共稱(chēng)取6份,按“2.3.3”方法制備供試品溶液,并按“2.3.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄各樣品的峰面積,計(jì)算得出阿魏酸含量的RSD為3.3%,表明該分析方法穩(wěn)定,重復(fù)性良好。

2.3.4.3加樣回收試驗(yàn)。取已知含量的樣品(批號(hào)190701)粉末約1 g,精密稱(chēng)定,共稱(chēng)取6份,置具塞錐形瓶中,分別加入阿魏酸對(duì)照品溶液(0.018 12 mg/mL)4.0 mL,按“2.3.3”方法制備供試品溶液,并按“2.3.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積,計(jì)算得到阿魏酸回收率在95.66%～99.75%,平均回收率為97.38%,RSD為1.93%(表1),表明提取和檢測(cè)方法準(zhǔn)確可行。

表1 阿魏酸加樣回收率(n=6)

2.3.4.4不同儀器、不同品牌色譜柱考察。

(1)沃特斯液相色譜不同色譜柱比較。取樣品(批號(hào)190701)2 g,精密稱(chēng)定,按“2.3.3”方法制備供試品溶液,按“2.3.1”色譜條件,以La Chrom C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)、Agilent Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)、Xbridge C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)為色譜柱,進(jìn)樣測(cè)定,測(cè)得阿魏酸的含量分別為32.8、33.1、32.7 μg/片。因此不同品牌的色譜柱對(duì)阿魏酸的含量影響不明顯。

(2)日立液相色譜不同色譜柱比較。取樣品(批號(hào)190701)2 g,精密稱(chēng)定,按“2.3.3”方法制備供試品溶液,按“2.3.1”色譜條件,以La Chrom C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)、Agilent Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)、Xbridge C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)為色譜柱,進(jìn)樣測(cè)定,測(cè)得阿魏酸的含量分別為32.9、33.0、32.8 μg/片。因此不同品牌的色譜柱對(duì)阿魏酸的含量影響不明顯。

2.3.4.5當(dāng)歸原料藥材考察。取當(dāng)歸原料粉末2 g,精密稱(chēng)定,按“2.3.3”方法制備供試品溶液,精密吸取供試品溶液10 μL,按“2.3.1”色譜條件注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定,測(cè)得當(dāng)歸原料藥中阿魏酸含量為0.67 mg/g,其轉(zhuǎn)移率為33.7%。

2.3.4.6提取時(shí)間的考察。取本品20片(批號(hào)191204),除去包衣,研細(xì)(過(guò)三號(hào)篩),取約2 g,精密稱(chēng)定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇25 mL,密塞,稱(chēng)定重量,分別采用加熱回流1、2、3 h時(shí),放冷,再稱(chēng)定重量,用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,靜置,取上清液濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。測(cè)得阿魏酸含量分別為33.72、34.05、32.76 μg/片,阿魏酸含量差異不明顯,因此為了考慮節(jié)省資源,選擇提取時(shí)間為1 h。

2.3.5樣品測(cè)定。分別取不同批號(hào)的加味歸芪片、當(dāng)歸陰性粉末約2 g,精密稱(chēng)定,按“2.3.3”方法制備供試品溶液,按“2.3.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,具體結(jié)果見(jiàn)圖4～5。從圖4可以看出,加味歸芪片中阿魏酸含量為29.6～34.0 mg/片,其中有一批阿魏酸(批號(hào)181101)的含量偏離。

圖4 加味歸芪片中阿魏酸含量散點(diǎn)圖Fig.4 Scatter plot of ferulic acid content in Jiawei Guiqi tablets

圖5 加味歸芪片中阿魏酸高效液相色譜圖Fig.5 High performance liquid chromatography of ferulic acid in Jiawei Guiqi tablets

2.4 黃芪甲苷含量測(cè)定

2.4.1色譜條件。色譜柱為Agilent Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);以乙腈-水(32∶68)為流動(dòng)相;用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)。

2.4.2對(duì)照品溶液的制備。取黃芪甲苷對(duì)照品10.12 mg,精密稱(chēng)定,置25 mL棕色量瓶中,加甲醇制成0.404 8 mg/mL的溶液,作為儲(chǔ)備液。

2.4.3供試品溶液的制備。取本品20片,除去包衣,研細(xì)(過(guò)三號(hào)篩),取約2 g,精密稱(chēng)定,加甲醇50 mL,密塞,超聲處理30 min,放冷,再搖勻,濾過(guò),洗濾紙數(shù)次,蒸干,殘?jiān)铀?0 mL溶解,用水飽和的正丁醇振搖提取3次,每次40 mL,合并正丁醇液,用氨試液洗滌2次,每次40 mL,棄去氨液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状既芙?并轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

2.4.4方法學(xué)考察。

2.4.4.1線性曲線的繪制。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液,分別制成70.65、141.30、211.95、282.60、353.25、423.90、494.55 μg/mL 的對(duì)照品溶液,以1g峰面積為縱坐標(biāo)、1g濃度為橫坐標(biāo)繪制線性曲線,其線性方程為y=1.782 7x+1.741 2(R2=0.999 8),表明黃芪甲苷在70.65～495.55 μg/mL線性關(guān)系良好。

2.4.4.2精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)。取“2.4.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液,按“2.4.1”色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)得峰面積,計(jì)算得出黃芪甲苷峰面積的RSD為0.1%,表明儀器精密度良好。精密吸取同一供試品溶液(批號(hào)190101),按“2.4.1”色譜條件分別于0、4、8、12、16、24 h進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積,計(jì)算得出黃芪甲苷峰面積的RSD為1.6%,表明該藥品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。取同一批樣品(批號(hào)190101)粉末2 g,精密稱(chēng)定,共稱(chēng)取6份,按“2.4.3”方法制備供試品溶液,并按“2.4.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄各樣品的峰面積,計(jì)算得出黃芪甲苷峰面積的RSD為2.3%,表明方法重復(fù)性良好。

2.4.4.3加樣回收試驗(yàn)。取已知含量的樣品(批號(hào)190101)粉末約1 g,精密稱(chēng)定,共稱(chēng)取6份,置具塞錐形瓶中,分別加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液(1.248 181 mg/mL)1.0 mL,按“2.4.3”方法制備供試品溶液,按“2.4.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積,計(jì)算得到黃芪甲苷回收率在91.23%～97.74%,平均回收率為93.92%,RSD為2.59%(表2),表明提取和檢測(cè)方法準(zhǔn)確可行。

表2 黃芪甲苷加標(biāo)回收率(n=6)

2.4.4.4不同品牌色譜柱考察。取樣品粉末2 g(批號(hào)190101),精密稱(chēng)定,按“2.4.3”方法制備供試品溶液,按“2.4.1”色譜條件,以La Chrom C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)、Agilent Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)、Xbridge C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)為色譜柱,進(jìn)樣測(cè)定,測(cè)得阿魏酸含量分別為0.408、0.410、0.420 mg/片。因此不同品牌的色譜柱對(duì)黃芪甲苷含量影響不明顯。

2.4.4.5黃芪原料藥材考察。取黃芪原料2 g,精密稱(chēng)定,按“2.4.3”方法制備供試品溶液,按“2.4.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,測(cè)得黃芪原料藥中黃芪甲苷含量為0.917 mg/g,其轉(zhuǎn)移率為79.7%。

2.4.4.6提取方法的考察。

(1)提取方法一。取3批樣品(180501、190101、200104),分別取20片,除去包衣,研細(xì)(過(guò)三號(hào)篩),取約2 g,精密稱(chēng)定,加甲醇50 mL,密塞,超聲處理30 min,放冷,再搖勻,濾過(guò),洗濾紙數(shù)次,蒸干,殘?jiān)铀?0 mL溶解,用水飽和的正丁醇振搖提取3次,每次40 mL,合并正丁醇液,用氨試液洗滌2次,每次40 mL,棄去氨液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)蛹状既芙?并轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得,測(cè)得3批樣品180501、190101、200104中黃芪甲苷含量分別為0.421、0.420、0.428 mg/片。

(2)提取方法二。取3批樣品(180501、190101、200104),分別取20片,除去包衣,研細(xì)(過(guò)三號(hào)篩),取約2 g,精密稱(chēng)定,置具塞錐形瓶中,精密加入含4%濃氨試液的80%甲醇溶液(取濃氨試液4 mL,加80%甲醇至100 mL,搖勻)50 mL,密塞,稱(chēng)定重量,加熱回流1 h,放冷,再稱(chēng)定重量,用含4%濃氨試液的80%甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),精密量取續(xù)濾液25 mL,蒸干,殘?jiān)?0%甲醇溶解,轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中,加80%甲醇至刻度,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得,測(cè)得3批樣品180501、190101、200104中黃芪甲苷含量分別為0.121、0.130、0.122 mg/片。

通過(guò)比較提取方法一和提取方法二可知,采用提取方法一測(cè)得黃芪甲苷含量明顯高于提取方法二,因此該試驗(yàn)選擇提取方法一。

2.4.5樣品測(cè)定。分別取不同批號(hào)的加味歸芪片、黃芪陰性粉末約2 g,精密稱(chēng)定,按“2.4.3”方法制備供試品,按“2.4.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,具體結(jié)果見(jiàn)圖6～7。從圖6可以看出,加味歸芪片中黃芪甲苷含量為0.383～0.449 mg/片,其中有一批黃芪甲苷(批號(hào)181101)的含量偏離。

圖6 加味歸芪片中黃芪甲苷含量散點(diǎn)圖Fig.6 Scatter plot of astragaloside IV content in Jiawei Guiqi tablets

圖7 加味歸芪片中黃芪甲苷對(duì)照品高效液相色譜圖Fig.7 High performance liquid chromatography of astragaloside IV reference substance in Jiawei Guiqi tablets

3 結(jié)論

加味歸芪片組方分別為當(dāng)歸、黃芪、黨參,該試驗(yàn)主要對(duì)該組方制劑中的當(dāng)歸、黃芪兩味君臣藥進(jìn)行了研究。采用薄層色譜法,在不同溫度不同濕度條件下考察了當(dāng)歸和黃芪的薄層色譜條件,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在不同條件下,當(dāng)歸對(duì)照藥材和阿魏酸對(duì)照品以及黃芪甲苷對(duì)照品在各自薄層條件下斑點(diǎn)清晰,分離效果明顯,陰性均無(wú)干擾。因此該薄層色譜條件能很好地對(duì)加味歸芪片中當(dāng)歸和黃芪進(jìn)行定性鑒別。

加味歸芪片中當(dāng)歸的含量考察采用阿魏酸指標(biāo)成分,采用的高效液相色譜方法系統(tǒng)適應(yīng)性符合要求,穩(wěn)定性、精密度、重復(fù)性、回收率等方法學(xué)考察均能達(dá)到要求;采用不同儀器、不同品牌色譜柱等考察,系統(tǒng)適應(yīng)性滿足試驗(yàn)要求;同時(shí)考察不同提取時(shí)間對(duì)阿魏酸含量的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)提取時(shí)間對(duì)阿魏酸含量影響不明顯,為了經(jīng)濟(jì)又節(jié)省時(shí)間,因此選擇提取時(shí)間為1 h。

加味歸芪片中黃芪的含量考察采用黃芪甲苷指標(biāo)成分,采用的高效液相色譜方法系統(tǒng)適應(yīng)性符合要求,穩(wěn)定性、精密度、重復(fù)性、回收率等方法學(xué)考察均能達(dá)到要求;考察不同品牌色譜柱,含量差異不明顯,系統(tǒng)適應(yīng)性滿足試驗(yàn)要求;考察不同提取方法對(duì)黃芪甲苷的影響,結(jié)果測(cè)得含量差異明顯,樣品采用甲醇提取之后,再用水飽和的正丁醇溶液和氨試液分別萃取,得到的黃芪甲苷含量較高,因此選擇該提取方法。

該研究建立的方法簡(jiǎn)單、方便、可行性和重復(fù)性良好,為加味歸芪片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供技術(shù)支撐,同時(shí)更加有效控制加味歸芪片的質(zhì)量,確保了加味歸芪片的療效,為臨床用藥提供質(zhì)量保證。