丹酚酸B對(duì)肝癌H22小鼠TLR4/MyD88/NF-κB通路及腸道細(xì)菌的影響＊

田 力，萬端靜，溫?fù)P敏＊＊

（1. 泉州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)部 泉州 362000；2. 泉州市中醫(yī)院 泉州 362000）

肝癌是世界最常見的惡性腫瘤之一，《2020 年世界癌癥報(bào)告》顯示，全球肝癌死亡人數(shù)超過83萬，在全球癌癥死亡人數(shù)中排名第三[1]。我國是肝癌高發(fā)區(qū)，2020 年有超過41 萬人新患肝癌，超過39 萬人死于肝癌，肝癌已成為導(dǎo)致全民死亡的第二大癌癥，不僅嚴(yán)重威脅我國居民的健康，也對(duì)家庭和社會(huì)造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[2]。隨著腫瘤的手術(shù)及放化療技術(shù)的進(jìn)步，雖然肝癌患者生存時(shí)間明顯延長，但腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移以及化療藥物所產(chǎn)生的副作用一直是肝癌治療的兩大難題，因此從植物中發(fā)現(xiàn)有效且副作用小的抗腫瘤天然產(chǎn)物是人類獲得藥物的重要途徑。

丹參（Salvia miltiorrhizaBge.）為唇形科植物丹參的干燥根及根莖，其性微寒、味苦，入心、肝經(jīng)，具有活血祛痕、通經(jīng)止痛、清心除煩、涼血消癰的功效，具有抗氧化、抗菌、抗炎、改善微循環(huán)、鎮(zhèn)痛、抗心腦血管疾病等藥理活性[3]。丹酚酸B（Salvianolic acid B，Sal B）由3 分子丹參素與1 分子咖啡酸聚合而成，是丹參水溶性有效成分丹酚酸中含量最高、活性最強(qiáng)的一種成分，是丹參的主要活性成分之一[4]。丹酚酸B對(duì)乳腺癌細(xì)胞、口腔鱗狀癌細(xì)胞、鼻咽癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞和肺癌細(xì)胞等具有體外生長抑制作用，但其抗腫瘤的分子機(jī)制尚不清楚[5]。研究顯示，丹酚酸B 能通過抑制TLR4/MyD88/NF-κB 信號(hào)通路減輕小鼠急性肝損傷的作用[6]，而TLR4/MyD88/NF-κB 信號(hào)通路是廣泛存在于各種細(xì)胞中參與炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵通路，是介導(dǎo)腫瘤發(fā)生的重要調(diào)控機(jī)制[7]。此外，研究發(fā)現(xiàn)腸道菌群作為人體微生態(tài)的重要組成部分，可通過腸與肝臟的交互循環(huán)形成肝-腸軸調(diào)控參與人體內(nèi)一系列重要的生理和病理過程[8]。腸道菌群失調(diào)可導(dǎo)致膽汁酸代謝異常、內(nèi)毒素釋放、腸道穩(wěn)態(tài)破壞、模式識(shí)別受體激活等直接或間接促進(jìn)肝癌的發(fā)展[9]。研究發(fā)現(xiàn)丹酚酸B 能影響腸道菌群的構(gòu)成，增加腸道有益菌的相對(duì)豐度，減少有害菌相對(duì)豐度，改善腸道環(huán)境[10]。因此，本研究探討丹酚酸B 對(duì)肝癌H22 小鼠TLR4/MyD88/NF-κB 通路及腸道菌群的影響，為闡明丹酚酸B 抗腫瘤的作用機(jī)制以及臨床合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與藥物

50只SPF級(jí)KM小鼠，體質(zhì)量（20±3）g，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物合格證編號(hào)：20210616Abzz0600000710。飼養(yǎng)于泉州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室（SYXK（閩）2016-0001），溫度控制在22-25℃，晝夜12 h自動(dòng)切換。丹酚酸B：購自成都麥德生科技有限公司，純度98%，批號(hào)：RP200120，丹參提取物，用于醫(yī)藥、化妝品;環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）：購自上海麥克林生化科技公司，純度98%。

1.2 H22肝癌細(xì)胞株

H22肝癌細(xì)胞株購自于北京天呈生物科技公司。

1.3 主要試劑

DMSO、RPMI-1640 培養(yǎng)基、小牛血清、胰蛋白酶消化液、細(xì)胞裂解液，賽默飛世爾科技公司；二甲苯、鹽酸、雙氧水、無水乙醇，西隴科學(xué)有限公司；RNA 提取試劑盒TransZolUp Plus RNA Kit、反轉(zhuǎn)錄試劑盒TransScript?One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix、6 × Protein Loading Buffer，北京全式金有限公司；PCR 試劑盒Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix、彩色預(yù)染蛋白marker、HRP 標(biāo)記羊抗兔IgG、HRP 標(biāo)記羊抗鼠IgG、髓樣分化因子（Myeloid differentiation factor 88，MyD88）抗體（兔來源）、核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB p65（Nuclear transcription factor-κB，NFκB p65）抗體（鼠來源）、Toll 樣受體4（toll-like receptor 4，TLR4）抗體（兔來源）、Actin 抗體（鼠來源）、Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix，武漢愛博泰克生物科技有限公司；RIPA 裂解液，SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒、PMSF 蛋白酶抑制劑，碧云天生物技術(shù)公司；PVDF膜，Millipore公司。

1.4 主要儀器

病理切片機(jī)（KD-2258）、攤片機(jī)（KD-P）、組織包埋機(jī)（KD-BM），金華科迪有限公司；電泳儀（1645050）、電泳槽（16580001）、小型轉(zhuǎn)印槽（1703930），美國伯樂公司；顯微鏡（OLYMPUS CK31），日本奧林巴斯；微量紫外-可見光分光光度計(jì)（NanoDrop One）、熒光定量PCR 儀（ABI QuantStudio 3）、全波長酶標(biāo)儀（SPECTRO Star），賽默飛世爾科技公司；熒光發(fā)光成像儀（6100），上海勤翔科學(xué)儀器有限公司。

1.5 小鼠H22肝癌移植瘤模型的建立

參照文獻(xiàn)方法[11]，用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，于5% CO2、37℃飽和濕度條件下，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)小鼠H22 肝癌細(xì)胞株。小鼠腹腔接種H22肝癌細(xì)胞，選擇腹腔接種6-8 天、生長良好荷瘤小鼠，處死并無菌抽取腹水，用生理鹽水稀釋制成1×107·mL-1肝癌細(xì)胞混懸液，每只小鼠皮下接種0.2 mL肝癌細(xì)胞混懸液。

1.6 小鼠的分組與給藥

將H22 肝癌移植瘤小鼠隨機(jī)分成4 組，每組10只，分別為模型組：每天灌胃等體積（0.2 mL）生理鹽水；CTX 陽性對(duì)照組：每天灌胃等體積（0.2 mL）的環(huán)磷酰胺（20 mg·kg-1）；丹酚酸B中、高劑量組：分別每天灌胃等體積（0.2 mL）50、100 mg·kg-1的丹酚酸B；此外，另設(shè)一組正常對(duì)照組：10只正常小鼠每天灌胃等體積（0.2 mL）生理鹽水，每天給藥1次，連續(xù)15天。末次給藥24 h 后，收集糞便，稱體質(zhì)量，處死小鼠，解剖瘤組織并稱重，計(jì)算抑制率。

腫瘤抑制率=（模型組平均瘤重-給藥組平均瘤重）/模型組平均瘤重×100%；

1.7 小鼠腫瘤組織病理變化觀察

取小鼠腫瘤組織，用10%甲醛固定，進(jìn)行石蠟切片和蘇木精-伊紅（Hematoxylin-eosin staining，HE）染色，觀察腫瘤組織病理變化。

1.8 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）法檢測腫瘤組織TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA表達(dá)

取腫瘤組織，加入液氮預(yù)冷的研缽，研磨組織至粉末狀，取約100 mg 樣品加到離心管中，再根據(jù)TransZol Up Plus RNA Kit 說明書提取總RNA。以RNA為模板，按TransScript? One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix 的說明書合成cDNA。反應(yīng)體系（20 uL）：Total RNA 1 μL，2 × TS Reaction Mix 10μL，TransScript?RT/RI Enzyme Mix 1 μL，gDNA Remover 1 μL，Olig (dT) Primer 1 μL，Random Primer 1 μL，ddH2O 6μL。42℃孵育15 min，85℃滅活5 s，得到cDNA，-20℃保存。

將稀釋5 倍的cDNA 作為qPCR 的模板，Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix 說明書配制qPCR 反應(yīng)液，總反應(yīng)體系20 μL：Template 2 μL，F(xiàn)orward Prime 0.4 μL，Reverse Primer 0.4 μL，Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix 10 μL，Dye（II) 0.4 μL，ddH2O 6.8 μL。反應(yīng)條件：95℃ 3 min，94℃ 35 s、60℃ 35 s、72℃ 50 s，共35 個(gè)循環(huán)，采用2-ΔΔCt法對(duì)基因的表達(dá)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)重復(fù)，引物序列見表1。

表1 引物序列

1.9 蛋白免疫印跡（Western Blot）法檢測腫瘤組織TLR4、MyD88、NF-κB的蛋白表達(dá)

取腫瘤組織剪碎后冰上研磨，按照每20 mg 腫瘤組織加入100 μL裂解液的比例加入裂解液，研磨至裂解液中組織塊消失，離心取上清，測定蛋白濃度，經(jīng)10%的SDS-PAGE 電泳分離后，電轉(zhuǎn)至0.45 μm 的PVDF 膜，放入5%BSA 室溫封閉2 h，分別加入一抗MyD88（1∶1000）、NF-κB p65（1∶1000）、TLR4（1∶1000）和Actin（1∶2500），4℃孵育過夜，加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗小鼠二抗（1∶2000）室溫孵育2 h后，TBST 洗膜15 min×5 次。加入化學(xué)發(fā)光檢測試劑反應(yīng)1 min，取出膜，甩去多余的液體，用保鮮膜包好PVDF膜，上機(jī)顯色，以Actin為內(nèi)參計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。

1.1 0 腸道菌分析

分別從正常組、模型組和丹酚酸B 高劑量組隨機(jī)選8 個(gè)樣品，按試劑盒說明書提取DNA，合格DNA 樣品送杭州聯(lián)川生物公司進(jìn)行16S rDNA 鑒定（16S ribosomal DNA identification），開展腸道菌群分析。首先通過篩選獲得高質(zhì)量的clean data。再構(gòu)建獨(dú)立細(xì)菌物種OUTs，基于OUTs 結(jié)果分析腸菌多樣性，評(píng)價(jià)對(duì)小鼠腸道細(xì)菌結(jié)構(gòu)。

2 數(shù)據(jù)處理

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 丹酚酸B 對(duì)H22 肝癌移植瘤小鼠腫瘤生長和抑瘤率的影響

CTX 為最常見的廣譜抗腫瘤藥物，具有廣泛的抗腫瘤活性，因此選擇CTX 作為抗腫瘤陽性藥物。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，模型組小鼠體質(zhì)量與正常對(duì)照組之間不存在顯著差異（P＞0.05）。與模型組比較，除陽性對(duì)照組小鼠體質(zhì)量顯著降低之外（P＜0.05），其它實(shí)驗(yàn)組小鼠體質(zhì)量均差異不顯著（P＞0.05）。陽性對(duì)照組和丹酚酸B不同劑量組小鼠腫瘤質(zhì)量均比模型組小鼠顯著降低（P＜0.05），顯示對(duì)H22 肝癌移植瘤小鼠腫瘤生長均具有抑制效果，其中陽性對(duì)照組小鼠抑瘤率達(dá)90.3%，丹酚酸B 中劑量組和高劑量組小鼠抑瘤率分別為37.4%和47.1%。見表2。

表2 丹酚酸B對(duì)小鼠體質(zhì)量及腫瘤生長的影響

3.2 小鼠腫瘤組織病理學(xué)改變

小鼠實(shí)體瘤細(xì)胞HE 染色后在顯微鏡下觀察結(jié)果見圖1，從圖1可知，模型組小鼠腫瘤細(xì)胞分布均勻、核大、深染、壞死細(xì)胞少，而陽性對(duì)照組和丹酚酸B 各劑量組小鼠腫瘤細(xì)胞可見大量壞死的腫瘤細(xì)胞，細(xì)胞核碎裂、消失。顯示丹酚酸B 對(duì)腫瘤細(xì)胞有明顯的殺傷作用。

圖1 小鼠實(shí)體瘤細(xì)胞形態(tài)HE染色結(jié)果

3.3 丹酚酸B 對(duì)TLR4、MyD88、NF-κB 的mRNA 表達(dá)的影響

TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路活化多發(fā)生于炎癥和免疫反應(yīng)。研究表明，CTX 具有免疫抑制等明顯的毒副作用，能通過激活TLR4 信號(hào)通路，上調(diào)炎癥因子、趨化因子及炎性介質(zhì)表達(dá)[12]。本研究結(jié)果與以上結(jié)論相似，CTX 陽性對(duì)照組腫瘤組織TLR4、MyD88 和NF-κB 的mRNA 表達(dá)量比模型組上調(diào)（圖2），其中MyD88 和NF-κB 的表達(dá)量差異顯著（P＜0.05）。與模型組比較，丹酚酸B 各劑量組小鼠腫瘤組織TLR4、MyD88和NF-κB的mRNA 表達(dá)量均下調(diào)，其中除丹酚酸B 中劑量組MyD88 的mRNA 表達(dá)量差異不顯著外（P＞0.05），其它實(shí)驗(yàn)組均存在顯著差異（P＜0.05）。與正常對(duì)照組比較，除丹酚酸B 高劑量組小鼠腫瘤組織TLR4的mRNA 表達(dá)差異不顯著之外（P＞0.05），其它實(shí)驗(yàn)組小鼠腫瘤組織MyD88、NF-κB 的mRNA 表達(dá)量均顯著上調(diào)（P＜0.05）。

圖2 丹酚酸B對(duì)TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA表達(dá)的影響

3.4 丹酚酸B 對(duì)TLR4、MyD88、NF-κB 的蛋白表達(dá)的影響

小鼠瘤組織TLR4、MyD88、NF-κB 的蛋白表達(dá)量見圖3。從圖3 可以看出，與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠腫瘤組織TLR4、MyD88、NF-κB 的蛋白表達(dá)量顯著增加（P＜0.05）。與模型組比較，丹酚酸B 中劑量組小鼠腫瘤組織TLR4、MyD88、NF-κB 的蛋白表達(dá)量有所下降，其中NF-κB 的表達(dá)量差異顯著（P＜0.05）。而丹酚酸B高劑量組小鼠腫瘤組織TLR4、MyD88、NF-κB的蛋白表達(dá)量均比模型組顯著下降（P＜0.05）。

圖3 丹酚酸B對(duì)腫瘤組織TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)的影響

3.5 丹酚酸B 對(duì)H22 肝癌移植瘤小鼠腸道細(xì)菌的影響

3.5.1 丹酚酸B對(duì)H22肝癌移植瘤小鼠腸道細(xì)菌多樣性的影響

Alpha 多樣性反映一個(gè)特定環(huán)境物種豐富度和均勻度。丹酚酸B 對(duì)H22 肝癌移植瘤小鼠腸道細(xì)菌Alpha多樣性指數(shù)影響見圖4A。從圖4A 可以看出，模型組小鼠Chao1、Shannon和Simpson等Alpha多樣性指數(shù)均比正常對(duì)照組降低，其中除Simpson 指數(shù)外，其它Alpha 多樣性指數(shù)均與正常對(duì)照組差異顯著（P＜0.05），顯示腫瘤小鼠細(xì)菌Alpha 多樣性降低。與模型組比較，丹酚酸B 高劑量組小鼠腸道細(xì)菌Alpha 多樣性指數(shù)均不存在顯著差異（P＞0.05），顯示丹酚酸B 對(duì)腫瘤小鼠腸道細(xì)菌Alpha多樣性無顯著影響。

圖4 腸道細(xì)菌Alpha多樣性指數(shù)和主成分分析

Beta 多樣性是指不同環(huán)境群落之間的物種差異性，PCA（Principal component analysis）圖中的距離越接近表明物種組成越相似。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（圖4B），與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠腸道細(xì)菌Beta 多樣性差異顯著（P=0.001，R=0.8661），顯示腫瘤能顯著影響腸道菌群組成結(jié)構(gòu)。與模型組比較，丹酚酸B 高劑量組小鼠腸道菌群Beta 多樣性差異顯著（P=0.001，R=0.4163），表明丹酚酸B 能改善腫瘤引起的腸道菌群改變。

3.5.2 丹酚酸B對(duì)H22肝癌移植瘤小鼠腸道細(xì)菌組成的影響

為分析不同樣本小鼠腸道細(xì)菌群落組成，對(duì)樣品門水平和科水平物種豐度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)（圖5）。在門水平，小鼠腸道細(xì)菌主要有擬桿菌門（Bacteroidetes）、厚壁菌門（Firmicutes）和變形菌門（Proteobacteria）等優(yōu)勢菌群組成（圖5A）。從圖5A 可以看出，模型組小鼠腸道細(xì)菌擬桿菌門和髕骨菌門（Patescibacteria）等相對(duì)豐度比正常對(duì)照組小鼠降低，其中擬桿菌門相對(duì)豐度差異顯著（P＜0.05）；而厚壁菌門、變形菌門和脫鐵桿菌門（Deferribacteres）等相對(duì)豐度比正常對(duì)照組小鼠增加，其中厚壁菌門和變形菌門相對(duì)豐度差異顯著（P＜0.05）。與模型組比較，丹酚酸B 高劑量組小鼠腸道細(xì)菌擬桿菌門相對(duì)豐度顯著增加（P＜0.05），而厚壁菌門相對(duì)豐度顯著降低（P＜0.05）。

圖5 門水平和科水平微生物種類分布圖

在科水平，3組樣品中共包括60個(gè)科，其中主要有Muribaculaceae 科、毛螺菌科（Lachnospiraceae）、瘤胃菌科（Ruminococcaceae）、理研菌科（Rikenellaceae）、乳桿菌科（Lactobacillaceae）等細(xì)菌組成（圖5B）。從圖5B 可以看出，模型組小鼠腸道Muribaculaceae 科細(xì)菌顯著增加（P＜0.05），而瘤胃菌科和毛螺菌科等細(xì)菌顯著減少（P＜0.05）。與模型組比較，丹酚酸B 高劑量組小鼠Muribaculaceae 科細(xì)菌顯著減少（P＜0.05），而瘤胃菌科和毛螺菌科等細(xì)菌顯著增加（P＜0.05）。結(jié)果顯示，丹酚酸B 使小鼠腸道菌群在門水平和科水平比例和分布更加接近于正常對(duì)照組，表明丹酚酸B 對(duì)腫瘤引起的小鼠腸道菌群紊亂具有一定的調(diào)節(jié)作用。

4 討論

肝細(xì)胞癌是最常見的惡性腫瘤之一，目前手術(shù)切除仍是肝癌治療的首選手段，但肝癌手術(shù)治療后5年生存率仍不理想，而且肝癌初診可切除率僅為20%-30%，化療是目前肝癌患者的主要治療方案[13]?；熕幬镌跉⑺滥[瘤細(xì)胞的同時(shí)損傷腫瘤患者機(jī)體免疫功能，顯著增大術(shù)后腫瘤病死率和復(fù)發(fā)率的風(fēng)險(xiǎn)。因此，改善患者的免疫功能狀態(tài)是降低術(shù)后病死率和復(fù)發(fā)率的關(guān)鍵[14]。丹酚酸B是丹參中的主要有效成分之一，可通過提高機(jī)體免疫力、調(diào)控細(xì)胞周期、抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等發(fā)揮抗腫瘤作用[15]。但目前關(guān)于丹酚酸B的抗肝癌研究主要集中在對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞的抑制作用[16-17]，而關(guān)于丹酚酸B 對(duì)肝癌動(dòng)物模型研究較少。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同劑量丹酚酸B 處理實(shí)驗(yàn)組小鼠腫瘤質(zhì)量均比模型組小鼠顯著下降（P＜0.05），丹酚酸B中劑量組和高劑量組小鼠抑瘤率分別為37.4%和47.1%。小鼠實(shí)體瘤細(xì)胞HE染色結(jié)果顯示不同劑量丹酚酸B 均對(duì)腫瘤細(xì)胞有明顯的殺傷作用。結(jié)果表明，丹酚酸B對(duì)H22肝癌小鼠具有明顯的抗腫瘤效果。

近年來研究表明，丹酚酸B 的抗腫瘤作用可能與調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力有關(guān)[18]。TLR4信號(hào)通路與惡性腫瘤細(xì)胞增殖和遷移有密切相關(guān)性，在腫瘤形成發(fā)揮重要作用[19]。研究表明，肝癌細(xì)胞中TLR4信號(hào)通路的激活將引起免疫抑制因子的增加，使肝癌細(xì)胞發(fā)生增殖和免疫逃逸，從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移[19]。汪紅等[20]研究顯示，丹酚酸B 可通過抑制TLR4/NF-κB 信號(hào)通信號(hào)通路，降低急性腦缺血小鼠炎癥因子IL-lβ 和TNF-α 的含量，發(fā)揮抗腦缺血的作用。張?jiān)频萚21]研究發(fā)現(xiàn)，丹酚酸B 通過抑制TLR4/NF-κB/TNFα 炎癥通路保護(hù)缺氧培養(yǎng)的體外心肌細(xì)胞炎癥損傷。推測丹酚酸B 可能通過調(diào)節(jié)TLR4信號(hào)通路提高肝癌小鼠免疫功能，從而達(dá)到抗腫瘤效果。因此，本實(shí)驗(yàn)建立H22肝癌實(shí)體瘤小鼠模型，以TLR4/MyD88/NF-κB 信號(hào)通路為切入點(diǎn)探究丹酚酸B的抗腫瘤作用機(jī)制。結(jié)果顯示，模型組小鼠腫瘤組織TLR4、MyD88、NF-κB 的mRNA和蛋白表達(dá)量均比正常對(duì)照組小鼠顯示顯著上調(diào)（P＜0.05）。而與模型組比較，不同劑量組丹酚酸B處理小鼠腫瘤組織TLR4、MyD88、NF-κB 的mRNA 和蛋白表達(dá)量均有所下調(diào)，其中丹酚酸B 高劑量組mRNA 和蛋白表達(dá)量均與模型組差異顯著（P＜0.05），其結(jié)果與既往研究結(jié)論一致，表明丹酚酸B 對(duì)H22 肝癌小鼠的抗腫瘤作用可能與抑制TLR4/MyD88/NFκB信號(hào)通路活化有關(guān)。

隨著對(duì)腸道菌群及其與疾病之間的相關(guān)性研究的逐步深入，腸道菌群在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮的重要作用越來越受到關(guān)注[22]。研究表明，腸道菌群作為肝-腸軸的重要組成部分，在腸道與肝臟的相互作用中發(fā)揮著關(guān)聯(lián)作用[23]。Jia等[24]從蛋白表達(dá)角度研究腸道菌群與肝臟疾病的發(fā)生關(guān)系，結(jié)果表明，清除小鼠腸道菌群1 周后，肝臟中有324 種蛋白表達(dá)出現(xiàn)差異，小鼠對(duì)肝損傷的敏感性降低。Chen 等[25]研究表明，腸道菌群合成的LPS 可通過調(diào)節(jié)TLR4等多種信號(hào)通路，誘導(dǎo)TNF-α 等免疫因子的釋放，影響肝臟微環(huán)境，導(dǎo)致肝癌的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常對(duì)照小鼠比較，腫瘤能引起小鼠腸道細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，而丹酚酸B能改善腫瘤引起的腸道菌群改變，使小鼠腸道細(xì)菌的群落結(jié)構(gòu)更加接近于正常對(duì)照組，表明丹酚酸B 能增加腸道有益菌的相對(duì)豐度，減少有害菌相對(duì)豐度，改善腸道環(huán)境。關(guān)于丹酚酸B 的抗腫瘤作用是否與影響腸道菌群有關(guān)，以及相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。