電針對(duì)老年大鼠關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨極化相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

黃夏榮 周君 孫光華 彭昕珂 廖源 劉靜 羅敷 鐘培瑞 彭婷 胡莉芝

南華大學(xué)衡陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院1康復(fù)醫(yī)學(xué)科、康復(fù)醫(yī)學(xué)中心、康復(fù)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，3肛腸科（湖南衡陽(yáng) 421001）；2廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第六醫(yī)院，清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院康復(fù)科（廣東清遠(yuǎn) 511500）

骨關(guān)節(jié)炎（OA）是一種伴有軟骨下骨病變的關(guān)節(jié)軟骨退行性疾病［1］。目前OA 的臨床治療以保守治療為主，西醫(yī)多采用藥物治療，中醫(yī)治療手段豐富，其中電針作為一種重要的中醫(yī)治療方法，其治療OA 的療效確切。臨床研究顯示［2］，電針能緩解膝骨關(guān)節(jié)炎患者疼痛，改善膝關(guān)節(jié)的功能。基礎(chǔ)研究顯示電針能抑制軟骨細(xì)胞降解［3］，緩解軟骨細(xì)胞退變［4］。近年來(lái)，巨噬細(xì)胞極化在OA 中的作用越來(lái)越受到關(guān)注，M1 型巨噬細(xì)胞是促炎性細(xì)胞，而M2 型巨噬細(xì)胞是抗炎性細(xì)胞，兩者維持動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)受到外界刺激時(shí)可互相轉(zhuǎn)化。有報(bào)道顯示［5］M1 和M2 型巨噬細(xì)胞動(dòng)態(tài)失衡時(shí)可反映OA 的嚴(yán)重程度，當(dāng)M1/M2 型巨噬細(xì)胞比例增大時(shí)，OA 病理?yè)p傷越嚴(yán)重。本研究通過(guò)電針干預(yù)老年大鼠，觀察電針治療對(duì)老年大鼠關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨極化相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16 只24 月齡SD 雄性大鼠，體質(zhì)量（709 ± 93）g ，8 只6 月齡SD 雄性大鼠，體質(zhì)量（501 ± 23）g，由長(zhǎng)沙天勤生物技術(shù)公司提供，合格證號(hào)CXK（湘）2019-0015，飼養(yǎng)于南華大學(xué)動(dòng)物部，自由飲食飲水。實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)南華大學(xué)衡陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)：202005110032）。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，遵循《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》等相關(guān)規(guī)定。

1.2 主要試劑及儀器血清Ⅱ型膠原C 端肽試劑盒（中國(guó)北京，康為世紀(jì)，批號(hào)C0681257875），Micro-CT（美國(guó)GE 公司，eX-plore Locus SP 型），臺(tái)式冷凍離心機(jī)（中國(guó)湖南湘儀，型號(hào)H1650R），熒光定量RCP 儀（美國(guó)Thermo，型號(hào)PIKOREAL96），熒光PCR 板（美國(guó)Thermo，型號(hào)SPL0960），電泳儀（中國(guó)北京六一，DYY-2C），水平瓊脂糖電泳槽（中國(guó)北京六一，型號(hào)DYCP-31DN），mRNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（中國(guó)北京康為世紀(jì)，批號(hào)CW2569），miRNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（中國(guó)北京康為世紀(jì)，批號(hào)CW2141），Trizol（美國(guó)Thermo，批號(hào)15596026），華佗牌電針儀（蘇州醫(yī)療用品有限公司，型號(hào)SDZ-V），華佗牌一次性無(wú)菌針（0.25 mm × 25 mm，蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）。

1.3 分組與造模24 月齡SD 雄性大鼠16 只，隨機(jī)分為老年組和電針組，每組8 只；8 只6 月齡SD雄性大鼠為青年組。通過(guò)自然衰老方式復(fù)制骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型［6］。

1.4 干預(yù)方法電針組接受電針干預(yù)，大鼠四肢固定于鼠板，參照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用穴位名稱與定位第2 部分：大鼠》［7］取穴：雙側(cè)“太溪”、“足三里”、“陽(yáng)陵泉”、“血海”。進(jìn)針深度約3～5 mm，電針參數(shù)：疏密波，疏波頻率3 Hz，密波15 Hz，電流強(qiáng)度1 mA，30 min/次，1 次/d，每周5 d，連續(xù)8 周。其余兩組不干預(yù)。

1.5 主要觀察指標(biāo)2%戊巴比妥鈉（80 mL/kg）腹腔注射進(jìn)行麻醉。本研究參照課題組前期研究［8］，摘除大鼠眼球，于眼眶取血用于ELISA 法檢測(cè)Ⅱ型膠原C 端肽（CTX-Ⅱ）；切取左側(cè)脛骨平臺(tái)2 cm 左右骨標(biāo)本，左脛骨多聚甲醛固定用于Micro-CT 檢測(cè)；番紅-固綠染色觀察左脛骨平臺(tái)軟骨組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)；右側(cè)脛骨平臺(tái)用于RT-qPCR、Western blot 檢測(cè)。

1.5.1 ELISA 檢測(cè)外周血CTX-Ⅱ 大鼠眼眶取血3 mL，2～8 ℃1 000 ×g離心外周血15 min，取上清，按ELISA 試劑盒說(shuō)明檢測(cè)CTX-Ⅱ水平。

1.5.2 Micro-CT 檢測(cè)左脛骨微結(jié)構(gòu)左脛骨多聚甲醛浸潤(rùn)24 h，冰箱保存。置于Micro-CT 下掃描，觀察各組大鼠骨密度（BMD），骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV），骨小梁厚度（Tb.Th），骨小梁數(shù)量（Tb.N），骨小梁間距（Tb.Sp）。

1.5.3 番紅-固綠染色Micro-CT 檢測(cè)后，左脛骨EDTA 脫鈣，脫水，石蠟包埋，常規(guī)切片。將石蠟切片依次放入二甲苯Ⅰ10 min，二甲苯Ⅱ10 min，無(wú)水乙醇5 min，95%酒精5 min，85%酒精5 min，蒸餾水沖洗10 min。將切片放入1%番紅染液染色2 h，蒸餾水沖洗，放入50%，70%，80%梯度酒精脫色各1 min。切片放入0.5%固綠染液中染色30～60 s。無(wú)水乙醇Ⅰ中脫色30 s，無(wú)水乙醇Ⅱ中脫色1 min。切片烤干后于二甲苯透明5 min，中性樹膠封片。

1.5.4 Mankin's 評(píng)分用改良Mankin＇s 評(píng)分量表［9］，評(píng)估左脛骨平臺(tái)軟骨組織形態(tài)結(jié)構(gòu)，包括軟骨結(jié)構(gòu)，軟骨細(xì)胞，染色情況，潮線4 個(gè)方面。具體評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)如下，軟骨結(jié)構(gòu)：軟骨表面正常0 分；表面不規(guī)則，有裂隙1 分；表面有裂隙，達(dá)移行層2 分；裂隙到輻射層3 分；裂隙達(dá)鈣化層4 分；軟骨脫落，無(wú)法分清結(jié)構(gòu)5 分。軟骨細(xì)胞：正常0 分，彌散增多1 分；出現(xiàn)大量細(xì)胞聚集2 分；細(xì)胞數(shù)量明顯減少3 分。染色情況：正常0 分，輕度減少1 分；中度減少2 分；重度減少3 分；染色消失4 分。潮線：正常0 分，多重潮線1 分，血管入侵潮線2 分。

1.5.5 RT-qPCR 法檢測(cè)大鼠右側(cè)脛骨平臺(tái)各指標(biāo)mRNA表達(dá)水平取組織約0.02 g，加入1 mL Trizol，按Trizol 法提取軟骨及軟骨下骨中總mRNA，以組織總mRNA 為模板，逆轉(zhuǎn)錄cDNA。檢測(cè)右側(cè)脛骨平臺(tái)基質(zhì)金屬蛋白酶-1（MMP-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶-3（MMP-3）、基質(zhì)金屬蛋白酶-13（MMP-13）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、巨噬細(xì)胞甘露糖受體（MMR）、精氨酸酶1（Arg1）mRNA 表達(dá)水平。運(yùn)用primer5 軟件設(shè)計(jì)引物，由北京擎科合成引物，引物序列見表1。

表1 引物信息Tab.1 Primer sequence

1.5.6 Western blot 檢測(cè)大鼠右側(cè)脛骨平臺(tái)各指標(biāo)蛋白的表達(dá)水平取關(guān)節(jié)軟骨組織約0.025 g，用PBS 清洗，加入300 μL RIPA 裂解液反復(fù)研磨，12 000 r/min 離心20 min 提取蛋白。配制10%的分離膠，4.8%濃縮膠制膠，開始電泳，電泳恒定電壓75 V，時(shí)間為130 min，300 mA 恒定電流轉(zhuǎn)膜。按比例稀釋一抗，二抗。一抗MMP1 以1∶1 000，MMP3、MMP13 以1∶5 000，TNF-α 以1∶1 000，IL-1β以1∶1 000，MMR 以1∶1 000，Arg1 以1∶5 000 比例稀釋。二抗HRP goat anti-mouse IgG 以1∶5 000 比例稀釋。封閉抗體孵育，ECL 發(fā)光液暗室曝片，顯影沖洗，用quantity oneV4.6.2 專業(yè)灰度分析軟件進(jìn)行分析。檢測(cè)右側(cè)脛骨平臺(tái)MMP-1、MMP-3、MMP-13、TNF-α、IL-1β、MMR、Arg1 蛋白表達(dá)水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 26.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布以表示，組間采用單因素方差分析，兩兩比較若方差齊性采用LSD 檢驗(yàn)，方差不齊則采用Dunnetts T3 檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CTX-Ⅱ含量比較青年組、老年組、電針組大鼠CTX-Ⅱ水平依次是（1.62 ± 0.271）、（4.24 ±0.558）、（2.74±0.414）ng/mL。與青年組相比，老年組大鼠外周血中CTX-Ⅱ含量增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與老年組大鼠相比，電針組大鼠外周血中CTX-Ⅱ水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 左膝關(guān)節(jié)軟骨下骨顯微CT 比較顯微CT 顯示，青年組大鼠骨小梁結(jié)構(gòu)完整，數(shù)量較多，排列緊密，骨小梁間距較小；與青年組相比，老年組大鼠骨小梁結(jié)構(gòu)異常，數(shù)量明顯減少，排列稀疏，骨小梁間距增大；與老年組相比，電針組大鼠骨小梁數(shù)量有增加，排列較緊密，間距減小，見圖1。

圖1 各組大鼠左膝關(guān)節(jié)軟骨下骨顯微CT 比較Fig.1 Comparison of micro-CT scan of subchondral bone of left knee joint in each group

2.3 左脛骨微結(jié)構(gòu)比較與青年組相比，老年組大鼠骨密度、骨體積分?jǐn)?shù)、骨小梁數(shù)量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），骨小梁厚度、骨小梁間距增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與老年組相比，電針組骨密度、骨體積分?jǐn)?shù)、骨小梁數(shù)量增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），骨小梁間距減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），骨小梁厚度有減小的趨勢(shì)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 各組大鼠軟骨下骨微結(jié)構(gòu)比較Tab.2 Comparison of subchondral bone microstructure of rats in each group ±s

注：與青年組比較，*P＜0.05；與老年組比較，#P＜0.05

組別青年組老年組電針組例數(shù)8 8 8 BMD（g/cm3）0.31 ± 0.303 0.19 ± 0.0285*0.26 ± 0.051#BV/TV（%）18.48 ± 2.359 8.46 ± 2.306*13.98 ± 4.913#Tb.Th（mm）0.09 ± 0.007 0.10 ± 0.005*0.10 ± 0.011 Tb.N（1/mm）2.10 ± 0.206 0.82 ± 0.236*1.38 ± 0.494#Tb.Sp（mm）0.33 ± 0.036 0.81 ± 0.121*0.63 ± 0.209#

2.4 軟骨組織番紅-固綠染色比較青年組大鼠軟骨表面平整，軟骨細(xì)胞數(shù)量正常，排列整齊有序，形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，染色均勻。老年組大鼠軟骨表明結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，軟骨與軟骨下骨分解不清，鈣化嚴(yán)重，出現(xiàn)多重潮線，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，出現(xiàn)裂層，細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)異常，染色不均。電針組軟骨表明稍平整，未見明顯裂層，軟骨細(xì)胞數(shù)量較老年組有所增加，染色較均勻。見圖2。

圖2 各組大鼠關(guān)節(jié)軟骨組織番紅O-固綠染色比較（× 200）Fig.2 Comparison of fuchsin O-fast green staining in articular cartilage of rats in each group（× 200）

2.5 Mankin's 評(píng)分比較青年組、老年組、電針組大鼠Mankin＇s 評(píng)分依次是（0.75 ± 0.463）、（10.63 ±1.847）、（5.75 ± 1.035）分。與青年組相比，老年組Mankin＇s 評(píng)分增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與老年組相比，電針組Mankin＇s 評(píng)分降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.6 MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA 和蛋白表達(dá)比較與青年組相比，老年組大鼠右側(cè)脛骨平臺(tái)MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA 和蛋白表達(dá)水平增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與老年組相比，電針組MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA 和蛋白表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3、4、圖3。

圖3 各組大鼠MMP-1、MMP-3、MMP-13蛋白表達(dá)水平比較Fig.3 Comparison of MMP-1，MMP-3，MMP-13 protein expression in different groups of rats

表3 各組大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶mRNA 表達(dá)比較Tab.3 Comparison of mRNA expression of matrix metalloproteinases in different groups ±s

表3 各組大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶mRNA 表達(dá)比較Tab.3 Comparison of mRNA expression of matrix metalloproteinases in different groups ±s

注：與青年組比較，*P＜0.05；與老年組比較，#P＜0.05

組別青年組老年組電針組例數(shù)5 5 5 MMP-1 0.994 ± 0.407 8.523 ± 1.748*4.631 ± 3.387#MMP-3 1.682 ± 0.498 21.534 ± 5.120*13.181 ± 2.343#MMP-13 1.280 ± 0.492 8.502 ± 1.519*5.538 ± 0.967#

表4 各組大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶的蛋白表達(dá)水平比較Tab.4 Comparison of protein expression level of matrix metalloproteinases in different groups ±s

表4 各組大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶的蛋白表達(dá)水平比較Tab.4 Comparison of protein expression level of matrix metalloproteinases in different groups ±s

注：與青年組比較，*P＜0.05；與老年組比較，#P＜0.05

組別青年組老年組電針組例數(shù)5 5 5 MMP-1 0.292 ± 0.010 0.584 ± 0.010*0.450 ± 0.087#MMP-3 0.172 ± 0.089 0.524 ± 0.107*0.296 ± 0.106#MMP-13 0.254 ± 0.040 0.484 ± 0.082*0.370 ± 0.070#

2.7 TNF-α、IL-1β、MMR、Arg1 mRNA 和蛋白表達(dá)比較與青年組相比，老年組大鼠右側(cè)脛骨平臺(tái)TNF-α、IL-1β mRNA 和蛋白表達(dá)升高，而MMR、Arg1 mRNA 和蛋白表達(dá)降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與老年組相比，電針組TNF-α、IL-1β mRNA 和蛋白表達(dá)降低，而MMR、Arg1 mRNA 和蛋白表達(dá)升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表5、6、圖4。

表5 TNF-α、IL-1β、MMR、Arg1mRNA 表達(dá)比較Tab.5 Comparison of the expression of TNF-α，IL-1β，MMR and Arg1mRNA ±s

表5 TNF-α、IL-1β、MMR、Arg1mRNA 表達(dá)比較Tab.5 Comparison of the expression of TNF-α，IL-1β，MMR and Arg1mRNA ±s

注：與青年組相比，*P＜0.05；與老年組相比，#P＜0.05

組別青年組老年組電針組例數(shù)5 5 5 TNF-α 0.942± 0.271 3.889± 0.729*2.358± 0.589#IL-1β 1.659± 0.849 15.283± 3.807*9.475± 2.547#MMR 0.927± 0.185 0.259± 0.074*0.719± 0.094#Arg1 1.032± 0.179 0.283± 0.107*0.726± 1.177#

表6 TNF-α、IL-1β、MMR、Arg1 蛋白表達(dá)比較Tab.6 Comparison of TNF- α，IL-1 β，MMR and Arg1 protein expression ±s

表6 TNF-α、IL-1β、MMR、Arg1 蛋白表達(dá)比較Tab.6 Comparison of TNF- α，IL-1 β，MMR and Arg1 protein expression ±s

注：與青年組比較，*P＜0.05；與老年組比較，#P＜0.05

組別青年組老年組電針組例數(shù)5 5 5 TNF-α 0.210± 0.112 0.660± 0.168*0.412± 0.113#IL-1β 0.114± 0.080 0.534± 0.113*0.348± 0.089#MMR 0.416± 0.088 0.126± 0.068*0.246± 0.098#Arg1 0.620± 0.078 0.318± 0.015*0.462± 0.043#

3 討論

中醫(yī)認(rèn)為，骨關(guān)節(jié)炎屬“骨痹”。本病的發(fā)生以腎精虧虛為本，還與外邪侵襲、勞損過(guò)度等有關(guān)。《靈樞·邪氣藏府病形篇》曰：“……筋急，陽(yáng)陵泉主之”。研究表明［10］火針刺激陽(yáng)陵泉，可緩解膝骨關(guān)節(jié)炎患者疼痛、僵硬及活動(dòng)障礙?！鹅`樞》指出“著痹不去，久寒不已，卒取其三里骨為干”。談倩等［11］研究顯示針刺結(jié)合艾灸刺激足三里能有效抑制大鼠炎癥因子的表達(dá)，緩解軟骨退變。血海是足太陰脾經(jīng)上的重要穴位，具有化血為氣，運(yùn)化脾血之功能；太溪為腎經(jīng)俞穴，可滋陰益腎，壯陽(yáng)強(qiáng)腰，故本研究采用以上穴位進(jìn)行刺激。

本研究中，大鼠左脛骨平臺(tái)軟骨組織番紅-固綠染色顯示，大鼠左脛骨軟骨組織結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，鈣化嚴(yán)重，出現(xiàn)多重潮線，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，表明骨關(guān)節(jié)炎模型復(fù)制成功。改良Mankin＇s 評(píng)分是學(xué)術(shù)界公認(rèn)評(píng)估骨關(guān)節(jié)炎軟骨退變程度的通用標(biāo)準(zhǔn)，共14分，得分越高，表明軟骨退變?cè)絿?yán)重。本研究中老年組大鼠改良Mankin＇s 評(píng)分10.625±1.847，說(shuō)明老年組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨退變嚴(yán)重。

CTX-Ⅱ是Ⅱ型膠原降解產(chǎn)物之一，因其不易被降解，具有較高的穩(wěn)定性和可靠性，因此CTX-Ⅱ常被當(dāng)作評(píng)估OA 軟骨降解的標(biāo)志物［12］。目前普遍認(rèn)為，CTX-Ⅱ的表達(dá)水平與OA 軟骨降解程度成顯著關(guān)系。當(dāng)軟骨降解時(shí)，CTX-Ⅱ表達(dá)升高；反之，當(dāng)降解被抑制時(shí)，CTX-Ⅱ表達(dá)降低。孫光華等［3］研究表明，電針刺激去卵巢大鼠，能顯著降低尿液中CTX-Ⅱ的含量。史曉偉等［13］研究也表明，電針能降低兔膝骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)液中CTX-Ⅱ的表達(dá)水平。在本研究中，老年組血液中CTX-Ⅱ較青年組CTX-Ⅱ升高，說(shuō)明老年組大鼠關(guān)節(jié)軟骨發(fā)生了降解。電針干預(yù)后，電針組CTX-Ⅱ降低，說(shuō)明電針干預(yù)能抑制大鼠關(guān)節(jié)軟骨的降解。這與上述研究結(jié)果［3，13］一致。

有研究表明［14］，OA 早期軟骨下骨局部可形成骨質(zhì)疏松。在一項(xiàng)電針治療骨質(zhì)疏松大鼠的研究中顯示［15］，電針可使大鼠骨密度升高，骨體積和骨小梁數(shù)量增加。鐘培瑞等［8］研究顯示，電針可提高老年骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度。本研究通過(guò)對(duì)大鼠左脛骨平臺(tái)Micro-CT 分析顯示，電針能使老年大鼠骨密度，骨體積分?jǐn)?shù)，骨小梁數(shù)量均增加，骨小梁間距降低。說(shuō)明電針干預(yù)能夠改善老年大鼠骨質(zhì)疏松。

關(guān)節(jié)軟骨主要由軟骨基質(zhì)和軟骨細(xì)胞組成，其中軟骨基質(zhì)占絕大部分。在正常情況下，軟骨基質(zhì)合成與降解維持動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)OA 發(fā)生時(shí)，平衡被打破?；|(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是一種基質(zhì)降解酶，由炎性細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等分泌而來(lái)，在軟骨基質(zhì)合成與分解過(guò)程中起到重要作用。MMPs 有多種亞型，所有亞型具有類似的結(jié)構(gòu)，均由10 個(gè)外顯子和9 個(gè)內(nèi)含子組成，且具有分解蛋白質(zhì)的能力。有研究顯示OA 發(fā)生后，MMPs 各亞型在體內(nèi)的表達(dá)都升高［16］。相關(guān)研究證實(shí)MMP-1、MMP-3、MMP-13 等與OA 的發(fā)生過(guò)程有著密切關(guān)系［17-18］。在本研究中，老年組大鼠MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA 和蛋白表達(dá)較青年組均升高，這表明老年組大鼠軟骨及軟骨下骨發(fā)生了降解；電針干預(yù)后，電針組大鼠MMP1、MMP3、MMP13 mRNA及蛋白的表達(dá)均降低，這表明電針干預(yù)能夠抑制老年大鼠軟骨及軟骨下骨降解，從而保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨。類似的結(jié)果在其他相關(guān)研究中也得到了證實(shí)［19-22］。

巨噬細(xì)胞是主要的免疫細(xì)胞，巨噬細(xì)胞極化與OA 有著密切關(guān)系［23］。巨噬細(xì)胞可分為經(jīng)典活化型巨噬細(xì)胞（M1 型）和替代活化型巨噬細(xì)胞（M2型）［24］，其中M1型巨噬細(xì)胞通過(guò)分泌IL-1β、TNF-α、NO 等細(xì)胞因子，發(fā)揮促炎癥反應(yīng)作用［25-26］；M2 型巨噬細(xì)胞通過(guò)分泌Arg1、MMR、類抵抗素a（Fizzl）、類幾丁質(zhì)酶（Ym1）等細(xì)胞因子，發(fā)揮抑制免疫反應(yīng)、促進(jìn)組織修復(fù)的作用［27-28］。有研究表明，巨噬細(xì)胞向M2 型表型極化，可減輕大鼠的疼痛和軟骨退化［29］；還可釋放某些因子，對(duì)組織愈合和成骨分化發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用［30-31］，而M1 型極化會(huì)導(dǎo)致組織損傷［32-33］。因此，促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2 型轉(zhuǎn)化，有助于改善OA 關(guān)節(jié)內(nèi)穩(wěn)態(tài)，促進(jìn)組織修復(fù)，抑制軟骨細(xì)胞退變。在本研究中，老年組大鼠TNF-α、IL-1β mRNA 和蛋白表達(dá)較青年組大鼠均升高，MMR、Arg1 mRNA 和蛋白表達(dá)降低，說(shuō)明老年組大鼠軟骨及軟骨下骨可能向M2 型極化減少；電針干預(yù)后，電針組大鼠TNF-α、IL-1β mRNA 和蛋白表達(dá)較老年組大鼠均降低，MMR、Arg1 mRNA 和蛋白表達(dá)升高，說(shuō)明電針干預(yù)能促進(jìn)軟骨及軟骨下骨向M2 型極化。

綜上所述，電針可能通過(guò)促進(jìn)老年大鼠OA 關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨M2 極化，緩解關(guān)節(jié)軟骨降解及抑制軟骨下骨骨質(zhì)疏松，從而達(dá)到保護(hù)關(guān)節(jié)的作用。需指出的是，電針的參數(shù)國(guó)內(nèi)尚未統(tǒng)一，本實(shí)驗(yàn)所用的參數(shù)參考了國(guó)內(nèi)既往相關(guān)研究，具有一定的局限性。