壯藥四方木皮化學(xué)成分及抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

陳柳燕，何翠萍，李 斌，藍(lán)婷婷，楊楚楚，譚小姚，宋亞軍，李永華,2*，汝 梅,2*

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，廣西 南寧530200；2.廣西高校中藥民族藥資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧530200）

四方木皮為豆科無憂花屬常綠喬木中國無憂花Saraca divesPierre 的干燥樹皮[1]，屬民族藥中的壯藥品種之一?！度珖胁菟巺R編》中記載[2]：“四方木皮藥性平，味苦澀，其既可水煎煮或浸酒服用，也可將其研磨成粉末，調(diào)酒炒熱外敷，可有效治療關(guān)節(jié)痛和風(fēng)濕骨痛、跌打腫痛等；新鮮葉子搗碎后外敷，可減輕傷口腫脹和疼痛”?？梢娝姆侥酒さ乃幱茂熜л^為顯著，但目前國內(nèi)有關(guān)中國無憂花的報(bào)道中，大多是關(guān)于其苗木的育苗栽培技術(shù)、栽培管理和引種試驗(yàn)等方面[3-6]，鮮有其化學(xué)成分及藥理藥效的相關(guān)研究報(bào)道，以至于不能很好的將其進(jìn)行開發(fā)利用和推廣。

印度無憂花Saraca asoca（Roxb.) Willd.在印度被稱之為“萬能藥”，其樹皮、花朵、葉子、種子都有很高的醫(yī)療價(jià)值[7-8]，且含有多種次生代謝產(chǎn)物，包括：生物堿類、萜類、黃酮類、酚酸類、鞣質(zhì)及皂苷類等成分[9-11]。印度無憂花和中國無憂花屬同屬植物，親緣關(guān)系極近，根據(jù)植物親緣學(xué)理論，親緣關(guān)系越接近，其化學(xué)成分越相似，藥理作用也就越相近，因此，探討四方木皮的化學(xué)成分及其抗炎、鎮(zhèn)痛作用具有積極意義。本研究采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（UPLCMS/MS）定性表征四方木皮的化學(xué)成分，并建立兩種炎癥動物模型和疼痛動物模型，探究四方木皮乙醇提取物的抗炎鎮(zhèn)痛作用，為進(jìn)一步研究其藥理作用和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥材與試劑

四方木皮購于廣西玉林藥市偏冷奇中草藥材店，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)李永華研究員鑒定為豆科無憂花屬中國無憂花Saraca divesPierre 的樹皮。阿司匹林泡騰片（規(guī)格：0.5 g/片，批號：1912134，阿斯利康制藥有限公司）；冰乙酸（批號：201807170L，成都市科隆化學(xué)品有限公司）；二甲苯（批號：20200528，天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；角叉菜膠（批號：RQ0990，上海瑞永生物科技有限公司）；0.9%氯化鈉注射液（批號：2019080116，回音必集團(tuán)江西東北制藥有限公司）；無水乙醇（批號：2020090102，成都市科隆化學(xué)品有限公司）。

1.2 儀器

TC10KB 型電子天平（常熟市雙杰測試儀器廠）；SB-5200D 型超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；ELGA 型純水儀（南寧市榮元生物科技有限公司）；RB-200 型智能熱板儀（成都泰盟科技有限公司）；SHIMADZU Nexera X2 型超高效液相色譜（蘇州雨澤儀器有限公司）；Applied Biosystems 4500 QTRAP 型串聯(lián)質(zhì)譜（四川仁康科技有限公司）；Scientz-100F 型冷凍機(jī)（寧波新芝凍干設(shè)備有限公司）；MM 400型研磨儀（上海土森視覺科技有限公司）。

1.3 動物

清潔級昆明系小鼠（KM 小鼠），由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供，動物許可證號：SCXK（湘）2019-0004，雌雄各半，體質(zhì)量18 ～ 22 g。在屏障環(huán)境的動物室內(nèi)飼養(yǎng)，并按照清潔級動物管理標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行管理，小鼠健康，無傷無畸形。實(shí)驗(yàn)前正常適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，自由飲水、攝食。

2 方法

2.1 四方木皮化學(xué)成分分析

2.1.1 四方木皮70%甲醇提取液制備 將四方木皮置于冷凍機(jī)中冷凍干燥，利用研磨儀將凍干后的樣品研磨（30 Hz，1.5 min）至粉末狀；稱取100 mg 粉末，溶解于1.2 mL 70%甲醇提取液中；每30 min 渦旋一次，每次持續(xù)30 s，共渦旋6 次，樣本置于4 ℃冰箱過夜；12 000 r/min 離心10 min 后，吸取上清，用0.22 μm 微孔濾膜過濾樣品，并保存于進(jìn)樣瓶中，用于UPLC-MS/MS 分析。

2.1.2 色譜條件 色譜柱：Agilent SB-C18超高效液相柱（1.8 μm，2.1 mm×100 mm）；流動相：A 相為0.1%甲酸-水，B 相為0.1%甲酸-乙腈；梯度洗脫：0 min，5%B；0 ～ 9 min，5%→95%B；9 ～ 10 min，95%B；10 ～ 11.1 min，95%→5%B；11.1 ～ 14 min，5%B；流速：0.35 mL/min；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：4 μL。

2.1.3 質(zhì)譜條件 渦輪噴霧離子源，源溫度為550℃；離子噴霧電壓（IS）為5500 V（正離子模式）/-4500 V（負(fù)離子模式）；離子源氣體I（GSI）、氣體II（GSII）和簾氣（CUR）分別設(shè)置為50、60和25.0 psi；碰撞誘導(dǎo)電離參數(shù)設(shè)置為高。在QQQ 和LIT 模式下分別用10 和100μmol/ L 聚丙二醇溶液進(jìn)行儀器調(diào)諧和質(zhì)量校準(zhǔn)。QQQ 掃描使用MRM 模式，并將碰撞氣體（氮?dú)猓┰O(shè)置為中等。

2.2 四方木皮化學(xué)成分與抗炎鎮(zhèn)痛作用的相關(guān)性

將“2.1”項(xiàng)鑒定得到的化學(xué)成分通過檢索TCMSP，在“Chemical name”詞條框中輸入“四方木皮的次生代謝物的名稱”，點(diǎn)擊“search”，獲取該成分的分子信息，包括分子名、相對分子質(zhì)量（MW）、油水分配系數(shù)（AlgP）、類藥性（DL）、口服生物利用度（OB，%）。本研究對各化學(xué)成分進(jìn)行篩選，以數(shù)據(jù)庫中可尋找到的化合物作為該藥的中藥化學(xué)成分獲取條件；以化合物的OB≥30%、DL≥0.18 作為篩選潛在的活性成分條件，對四方木皮化學(xué)成分進(jìn)行篩選。并將各個成分相關(guān)的靶蛋白和疾病下載，在Excel 表中篩選出與疾病“癌癥/腫瘤”“糖尿病”“高血壓”“動脈粥樣硬化”“血栓性疾病”“炎性反應(yīng)”和“疼痛”相關(guān)的抗病藥物成分。最后鑒定出試樣中相關(guān)的活性藥物成分[12]。

2.3 四方木皮抗炎鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)

2.3.1 四方木皮乙醇提取物的制備 取干燥四方木皮100 g 打粉，置于燒杯中，加入6 倍量的50%乙醇，拌勻，浸泡1 h，超聲波處理1 h，在電爐上煎煮1 h，稍稍冷卻后，用12 層紗布過濾，收集濾液，用同樣的方法再次提取藥粉，將兩次濾液合并，放在水浴中蒸干，加入蒸餾水溶解并完全轉(zhuǎn)移至50 mL 容量瓶中，并將體積固定至50 mL 得到高劑量溶液（相當(dāng)于2 g/mL 的生藥劑量），同理，稀釋該溶液至含1 g/mL 和0.5 g/mL 的生藥劑量為中、低劑量溶液。

2.3.2 提取物的質(zhì)控檢測 用同樣的制備方法對三批四方木皮總酚酸的含量進(jìn)行測定，測定總酚酸的含量分別為3.57%、3.49%、3.37%，平均含量為3.47%，標(biāo)準(zhǔn)差為1.0%，表明提取物的制備方法較為穩(wěn)定。

2.3.3 抗炎作用實(shí)驗(yàn) （1）二甲苯致小鼠耳腫脹法 參考GAN D L 等[13]的方法，將小鼠（雌雄均分）隨機(jī)分為5 組，每組8 只，空白組（生理鹽水）、陽性對照組（阿司匹林給藥劑量0.4 g/kg）、四方木皮乙醇提取物低劑量組（給藥劑量5.14 g/kg）、中劑量組（給藥劑量10.27 g/kg）、高劑量組（給藥劑量20.54 g/kg）。每天灌胃1 次，共7 d。最后一次給藥后30 min，將20 μL 二甲苯均勻地涂抹到每只小鼠右耳的前部和后部以引起炎癥[15]，左耳作為空白對照。炎癥后30 min，以脊椎脫臼法處死小鼠，沿耳廓基線完整剪下小鼠左右耳，將左右兩邊耳朵相對稱放置，在其重疊的相同部位用6 mm打孔器打下圓耳片，迅速用分析天平精密稱重，同一只小鼠左耳對照和致炎后右耳的質(zhì)量之差作為檢測指標(biāo)，腫脹度及其腫脹抑制率按下列公式計(jì)算。

（2）1%角叉菜膠致小鼠足趾腫脹法 參考魏江存等[14]的方法，將50 只小鼠（雌雄均分）隨機(jī)分為5 組，每組10 只，具體分組及給藥劑量同“2.3.3（1）”。實(shí)驗(yàn)前，用千分尺測量小鼠右后足的厚度，末次灌胃1 h 后，將1%角叉菜膠40 μL/只皮下注射到小鼠右后足跖中部，引起炎癥，炎癥后每間隔1 h 立即測量小鼠右后足厚度，共計(jì)4 h，測量后，將炎癥后的足厚度減去炎癥前的足厚度作為檢測指標(biāo)，足趾腫脹度及其足趾腫脹抑制率按下列公式計(jì)算。

2.3.4 鎮(zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn) （1）熱板致痛法 參考謝冬養(yǎng)等[15]的方法，選用雌性KM 小鼠，實(shí)驗(yàn)前測量小鼠痛閾時(shí)間預(yù)先篩選合格小鼠。打開智能熱板儀并調(diào)節(jié)溫度，以保持溫度恒定在（55±0.5）℃，記錄將小鼠放于熱板儀上至其出現(xiàn)舔后足所需的時(shí)間，共兩次，每次間隔5 min，求出平均值作為該小鼠給藥前的痛閾時(shí)間。若小鼠持續(xù)跳躍、痛反應(yīng)時(shí)間少于5 s 或大于30 s，表示該小鼠疼痛反應(yīng)過敏或遲鈍，則排除不用。將篩選合格的小鼠隨機(jī)分為5 組，每組10 只，共50 只，具體分組及給藥劑量同“2.3.3（1）”項(xiàng)。末次給藥后30、60、90、120 min，每只小鼠測定痛閾值1 次并記錄，對給藥后60 s 仍然沒有出現(xiàn)疼痛表現(xiàn)的小鼠，立即取出并不再刺激，痛閾值按60 s 計(jì)。

（2）醋酸扭體法 參考李聰聰?shù)萚16]的方法，將小鼠（雌雄均分）隨機(jī)分為5 組，每組10 只，共50 只，具體分組及給藥劑量同“2.3.3（1）”項(xiàng)。末次給藥后1 h，每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液（0.01 mL/g），觀察15 min 內(nèi)小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)（主要表現(xiàn)為腹部收縮成“S”形，腹前壁緊貼籠底，軀干與后腿伸張，臀部高起）并記錄，鎮(zhèn)痛率按下列公式計(jì)算。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 四方木皮化學(xué)成分分析

3.1.1 四方木皮的次生代謝總分析 采用UPLCMS/MS 技術(shù)對四方木皮醇提液進(jìn)行檢測分析，正、負(fù)離子模式下的總離子流圖（TIC 圖）見圖1。根據(jù)化合物質(zhì)譜裂解規(guī)律，結(jié)合數(shù)據(jù)庫共鑒定出541 個代謝化合物，其中包括275 個黃酮類、112 個酚酸類、39 個生物堿類、37 個木脂素和香豆素類、24 個鞣質(zhì)、18 個萜類以及36 個其他類。

圖1 四方木皮的UPLC-MS/MS 總離子流圖Fig.1 Total Ion current diagram of UPLC-MS/MS of Saracae Cortex

3.1.2 四方木皮化學(xué)成分鑒定 由于對四方木皮的次生代謝物的作用尚不清楚，因此在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺（TCMSP）中進(jìn)一步查詢，鑒定四方木皮的中藥化學(xué)成分及關(guān)鍵活性成分。結(jié)果表明，541 種次生代謝產(chǎn)物中有120 種是中藥化學(xué)成分（包括43 種黃酮類、34 種酚酸類、12 種生物堿類、11 種木脂素和香豆素類、6 種鞣質(zhì)、8 種萜類、7 種其他），黃酮類占比最大，酚酸類次之，說明四方木皮的主要的次生代謝物成分為黃酮和酚酸類。其中99 種成分對應(yīng)340 種靶蛋白及324 種疾病。在541 種次生代謝產(chǎn)物中，篩選出27 種關(guān)鍵活性成分，對應(yīng)219 種靶蛋白及268 種疾病，見表1。其中代謝物N-阿魏酰酪胺沒有對應(yīng)的靶蛋白和疾病，桑黃酮D 沒有對應(yīng)的疾病。在這些關(guān)鍵活性成分中，黃酮類代謝物占比例為70%，進(jìn)一步闡釋了四方木皮的主要成分為黃酮類，因此，可對這些物質(zhì)進(jìn)行深入研究，探索其藥用價(jià)值，以用新藥研發(fā)。

表1 27 種關(guān)鍵活性成分Tab.1 27 key active ingredients

3.1.3 主要疾病及抗炎鎮(zhèn)痛的物質(zhì)鑒定 分析發(fā)現(xiàn)，四方木皮共有54 種代謝物（包括20 種黃酮類、19 種酚酸類、5 種生物堿類、5 種木脂素和香豆素類、1 種鞣質(zhì)、1 種萜類、3 種其他類）。以上每種次生代謝物均對應(yīng)2 種以上疾病，其中，有8 個代謝物均對應(yīng)5 大疾病，包括白楊素、刺槐亭、桔皮素、桑黃酮S、白楊素-7-O-葡萄糖醛酸苷、5-羥甲基糠醛以及肉桂酸。還有多種代謝物對應(yīng)3 ～ 4 種疾病，見表2。其中數(shù)量較多的均是黃酮與酚酸類代謝物，表明這兩類物質(zhì)在四方木皮的中藥活性及對抗主要疾病能力中起重要作用。本研究檢測到的541 種次生代謝物中，52種物質(zhì)與抗炎鎮(zhèn)痛作用有顯著相關(guān)，包括20 種黃酮類、17 種酚酸類、5 種生物堿類、5 種木脂素和香豆素類、1 種鞣質(zhì)、1 種萜類以及3 種其他類，見表2。結(jié)合表1 可知，四方木皮27 種潛在的活性成分中，有4 種成分發(fā)揮抗炎作用（黃芩素、金魚草素、桑色素、二氫山柰素），有3 種發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用（黃芩素、異鼠李素、桑色素），而黃芩苷對這兩種病癥均有抗性。表明四方木皮發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用可能與這些成分有關(guān)。

表2 54 種抗5 大疾病及抗炎鎮(zhèn)痛代謝物Tab.2 54 anti five major diseases, anti-inflammatory and analgesic metabolites

3.2 抗炎作用

3.2.1 四方木皮乙醇提取物對二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹的影響 陽性對照組和四方木皮乙醇提取物低、中、高劑量組的腫脹抑制率分別為55.1%、40.2%、49.5%、60.0%，以上藥物組均可明顯抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹，且四方木皮乙醇提取物三個劑量藥物組與空白組相比腫脹度明顯降低（P＜ 0.01），見表3。表明四方木皮乙醇提取物對二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹具有明顯的抗炎作用。

表3 四方木皮乙醇提取物對二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹的影響（±s，n = 8）Tab.3 Effect of ethanol extract of Saracae Cortex on xylene induced ear swelling in mice （±s，n = 8）

注：與空白組比較，**P < 0.01。

組別劑量/（g/kg）腫脹度/%腫脹抑制率/%空白組—58.60±17.90—陽性對照組 0.4026.60±9.05** 55.10±12.90**四方木皮乙醇提取物低劑量組 5.1437.50±16.00** 40.20±20.60**四方木皮乙醇提取物中劑量組10.2731.40±10.5** 49.50±15.40**四方木皮乙醇提取物高劑量組20.5423.00±9.75** 60.00±17.10**F 9.08022.126 P 0.000 0.000

3.2.2 四方木皮乙醇提取物對1%角叉菜膠致小鼠足趾腫脹的影響 陽性對照組、四方木皮乙醇提取物各劑量組與空白組相比較，其能夠在1、2、3、4 h 時(shí)，明顯抑制小鼠足趾腫脹（P< 0.05 或P< 0.01），見表4。表明四方木皮乙醇提取物對1%角叉菜膠引起的小鼠足趾腫脹有明顯的抗炎作用。

表4 四方木皮乙醇提取物對角叉菜膠致小鼠足趾腫脹厚度的影響 （±s，n = 10）Tab.4 Effect of ethanol extract of Saracae Cortex on the thickness of carrageenan induced toe swelling in mice （±s，n = 10）

注：與空白組比較，*P < 0.05，**P < 0.01。

組別劑量/（g/kg）給藥前/mm給藥后/mm 1 h2 h3 h4 h空白組—1.88±0.150.84±0.170.63±0.160.56±0.220.48±0.19陽性對照組 0.402.00±0.140.52±0.14**0.38±0.15**0.23±0.14**0.09±0.09**四方木皮乙醇提取物低劑量組 5.142.03±0.130.42±0.20**0.43±0.21*0.35±0.21**0.12±0.09**四方木皮乙醇提取物中劑量組10.271.94±0.110.53±0.18**0.43±0.12*0.30±0.12**0.14±0.13**四方木皮乙醇提取物高劑量組20.541.93±0.070.42±0.20**0.34±0.20**0.29±0.15**0.13±0.13**F 2.2729.2234.3745.42115.040 P 0.0760.0000.0050.0010.000

3.3 鎮(zhèn)痛作用

3.3.1 四方木皮乙醇提取物對熱刺激致小鼠疼痛的影響 在觀察期2 h 內(nèi)，陽性對照組和四方木皮乙醇提取物三個劑量的藥物組對熱刺激的潛伏時(shí)間均未見明顯增加（P＞ 0.05），見表5。結(jié)果表明，阿司匹林和四方木皮乙醇提取物對熱刺激致小鼠疼痛效果均不明顯。

表5 四方木皮乙醇提取物對熱刺激致小鼠痛閾值的影響 （±s，n = 10）Tab.5 Effect of ethanol extract of Saracae Cortex on pain threshold induced by heat stimulation in mice （±s，n = 10）

表5 四方木皮乙醇提取物對熱刺激致小鼠痛閾值的影響 （±s，n = 10）Tab.5 Effect of ethanol extract of Saracae Cortex on pain threshold induced by heat stimulation in mice （±s，n = 10）

組別劑量/（g/kg）給藥前/s給藥后/s 30 min60 min90 min120 min空白組—17.21±3.4015.23±7.2315.45±4.2414.59±7.5316.05±7.42陽性對照組 0.4016.92±4.5919.21±6.9720.49±8.1119.52±8.4919.14±5.58四方木皮乙醇提取物低劑量組 5.1415.59±3.2317.46±7.5516.32±6.5017.68±6.6318.39±8.97四方木皮乙醇提取物中劑量組10.2719.55±2.4124.25±13.5322.98±12.8521.44±10.0219.91±11.63四方木皮乙醇提取物高劑量組20.5415.05±3.6720.90±7.8018.08±7.0918.92±7.8820.02±6.99 F 0.5942.2761.7702.1262.288 P 0.6690.0760.1520.0930.075

3.3.2 四方木皮乙醇提取物對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 陽性對照組、四方木皮乙醇提取物低、中、高劑量組對醋酸刺激所致小鼠扭體反應(yīng)的抑制率分別為90.8%、47.4%、67.3%和47.6%，見表6。與空白組相比，四方木皮乙醇提取物不同劑量的藥物組小鼠扭體次數(shù)均明顯減少（P＜ 0.05 或P＜0.01），其中，中劑量組抑制效果最好，表明四方木皮乙醇提取物對醋酸引起的疼痛有明顯的鎮(zhèn)痛作用。

表6 四方木皮乙醇提取物對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 （±s，n = 10）Tab.6 Effect of ethanol extract of Saracae Cortex on writhing reaction of mice induced by acetic acid （±s，n = 10）

表6 四方木皮乙醇提取物對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 （±s，n = 10）Tab.6 Effect of ethanol extract of Saracae Cortex on writhing reaction of mice induced by acetic acid （±s，n = 10）

注：與空白組比較，*P < 0.05，**P < 0.01。

組別劑量/（g/kg）扭體次數(shù)抑制率/%空白組—38±13.1—陽性對照組 0.403.9±4.5**90.8±12.8**四方木皮乙醇提取物低劑量組 5.1426.5±10.8*47.4±20.8**四方木皮乙醇提取物中劑量組10.2719.3±7.9**67.3±27.6**四方木皮乙醇提取物高劑量組20.5424.1±9.9**47.6±8.2**F 16.80840.042 P 0.000 0.000

4 討論

豆科植物中起抗炎鎮(zhèn)痛作用的物質(zhì)主要為黃酮類[17-18]、生物堿類[19]、酚酸類[20]等，本研究基于UPLC-MS/MS 技術(shù)定性鑒定出四方木皮中541 種化學(xué)成分，用生物網(wǎng)絡(luò)分析預(yù)測四方木皮抗炎、鎮(zhèn)痛的“成分-靶點(diǎn)”相互作用，結(jié)果顯示抗炎鎮(zhèn)痛物質(zhì)52 種，黃酮類與酚酸類代謝物質(zhì)占比較高，占比71.25%，表明四方木皮發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用可能與黃酮類與酚酸類物質(zhì)相關(guān)。

炎癥初期，局部血管擴(kuò)張，血流速度加快，導(dǎo)致血管的靜脈壓升高，血漿里蛋白質(zhì)和白細(xì)胞等物質(zhì)從毛細(xì)血管濾出，滲透到組織液中，形成局部水腫，同時(shí)使局部組織液中滲透壓增加，導(dǎo)致血漿中的液體進(jìn)一步外滲。因此，在炎癥初期，滲出和組織腫脹是重要的指標(biāo)[21]。角叉菜膠引起的水腫是由最初的1 h內(nèi)釋放組胺和5-羥色胺引起的，到2.5 h 為了維持血管通透性增加從而短時(shí)間內(nèi)釋放緩激肽，2.5 ～ 6 h與釋放前列腺素有關(guān)[22]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示四方木皮乙醇提取物對腫脹發(fā)生后1 ～ 4 h具有較好的抑制作用，推測其抗炎機(jī)制可能是通過抑制組胺、5-羥色胺、緩激肽和前列腺素的合成和釋放而起的作用。

炎癥往往是伴隨著疼痛產(chǎn)生，鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)采用物理刺激模型（熱板法）和化學(xué)刺激模型（醋酸扭體法)。在熱板法中，以熱刺激（55±0.5）℃小鼠出現(xiàn)舔后足的潛伏時(shí)間為檢測指標(biāo)，評價(jià)所測試藥物的中樞鎮(zhèn)痛作用，該實(shí)驗(yàn)方法只對通過中樞神經(jīng)系統(tǒng)而發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的藥物敏感，而非甾體抗炎藥（包括阿司匹林、吲哚美辛、地塞米松等）鎮(zhèn)痛作用主要在外周，因此在該實(shí)驗(yàn)方法中沒有明顯的鎮(zhèn)痛作用[23-24]。王泊寧等[25]通過對熱板致痛動物模型的觀察，與正常組相比，天南星-生姜水提物不能明顯延長小鼠熱板痛閾時(shí)間，提示該藥中樞鎮(zhèn)痛作用不明顯，這可能與外周抗炎作用有關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在熱板致痛模型中，四方木皮乙醇提取物各劑量組和阿司匹林組均未能提高動物的痛閾值，提示四方木皮的鎮(zhèn)痛作用可能與中樞環(huán)節(jié)的相關(guān)性不明顯。

5 結(jié)論

通過UPLC-MS/MS 技術(shù)檢測分析了四方木皮的化學(xué)成分，并通過耳腫脹法、足趾腫脹熱板法、扭體實(shí)驗(yàn)證明四方木皮具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用，且黃酮類和酚酸類物質(zhì)在四方木皮的中藥活性及抗炎鎮(zhèn)痛方面中起重要作用。四方木皮活性成分的靶標(biāo)定量及其抗炎鎮(zhèn)痛作用的機(jī)制有待下一步深入研究。