甘肅地區(qū)漢族ACS 患者ApoE及SLCO1B1 基因多態(tài)性分布研究

王博雯 謝 萍 李燕玲 閆恒瑜 高奮堂

（甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

近年來(lái)，急性冠脈綜合征（Acute Coronary Syndrome，ACS）發(fā)病率呈顯著上升趨勢(shì)，患病人數(shù)不斷攀升，有著高死亡率和高致殘率的特點(diǎn)，已成為我國(guó)不可忽視的重大公共健康衛(wèi)生問(wèn)題[1]。最新ACS 診治指南推薦應(yīng)盡早啟動(dòng)大劑量他汀類(lèi)藥物強(qiáng)化調(diào)脂治療，可顯著降低ACS 患者再發(fā)心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)[2]。但相關(guān)文獻(xiàn)指出，應(yīng)用高強(qiáng)度的他汀類(lèi)藥物治療會(huì)增加不良反應(yīng)的發(fā)生，如肝功能異常表現(xiàn)為轉(zhuǎn)氨酶升高，他汀類(lèi)相關(guān)肌肉不良反應(yīng)，包括肌痛、肌炎、橫紋肌溶解等癥狀[3]。相關(guān)臨床研究結(jié)果顯示，對(duì)于他汀藥物耐受性及反應(yīng)性不同人群的臨床表現(xiàn)存在差異，推測(cè)可能與參與藥物代謝的酶、受體等基因多態(tài)性有著密切關(guān)聯(lián)[4]。SLCO1B1 和ApoE基因作為影響他汀藥物藥代動(dòng)力學(xué)以及藥效動(dòng)力學(xué)的主要影響因素[5]，在對(duì)他汀降脂藥物使用安全性及有效性進(jìn)行評(píng)估時(shí)發(fā)揮重要作用。此次研究工作的開(kāi)展初步對(duì)甘肅地區(qū)漢族ACS 患者ApoE 及SLCO1B1 基因多態(tài)性分布特點(diǎn)進(jìn)行研究討論，同時(shí)探討其與血脂水平的相關(guān)性，以期初步了解該類(lèi)患者臨床應(yīng)用他汀類(lèi)藥物的安全性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入2016 年11 月至2017 年12 月期間在我院心內(nèi)科入住的243 例ACS 患者作為研究對(duì)象，男女比例為179：64，年齡35-81 歲。納入對(duì)象均為甘肅地區(qū)漢族人群，均無(wú)血緣關(guān)系和異族通婚史，并簽署知情同意書(shū)。本研究通過(guò)甘肅省人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審批（批件編號(hào)：2019-076）。ACS 診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《急性冠脈綜合征急診快速診治指南（2016）》，根據(jù)出院診斷分為不穩(wěn)定型心絞痛、急性ST 段抬高型心肌梗死、急性非ST 段抬高型心肌梗死。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均明確診斷為ACS 患者；（2）入院24 h 內(nèi)完成ApoE 及SLCO1B1 基因多態(tài)性檢測(cè)；（3）入院前2周內(nèi)未服用他汀類(lèi)降脂藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）肝、肺、腎等其他重要器官?lài)?yán)重功能不全者；（2）嚴(yán)重感染、惡性腫瘤以及合并其他自身免疫性疾病患者；（3）其他對(duì)血脂代謝有影響的疾病，如甲狀腺疾病、結(jié)核病等疾病史。

1.2 方 法

1.2.1 基因型檢測(cè) 選擇天根生化（北京，中國(guó)）基因組提取盒（TIANamp Blood DNA Kit，DP318）在外周靜脈血（4 mL）中提出基因組DNA，DNA 的A260/A280 在1.8-2.0，將其放置在-20℃的環(huán)境下保存。將空白對(duì)照、弱陽(yáng)性對(duì)照、待檢測(cè)的DNA 分別加入3 種PCR 反應(yīng)液管中作擴(kuò)增處理。SLCO1B1 基因依據(jù)服用他汀類(lèi)藥物后發(fā)生橫紋肌溶解的風(fēng)險(xiǎn)及服用藥物的劑量，可分為三種表型，分別為耐受較高型（*1b/*1b，*1a/*1b，*1a/*1a）、耐受中等型（*1a/*15，*1b/*15，*1a/*5）及耐受較低型（*5/*5，*15/*15，*5/*15）[6]。ApoE 基因依據(jù)發(fā)生冠心病、腦梗死、黃斑變性、老年癡呆等的風(fēng)險(xiǎn)以及服用他汀類(lèi)藥物降脂療效將其分為三種表型，分別為一般型（E2/E4、E3/E3）、有益型（E2/E2、E2/E3）和有害型（E3/E4、E4/E4）[7]。

1.2.2 血脂水平檢測(cè) 入院24 h 內(nèi)完成血脂水平檢測(cè)。所有243 例研究對(duì)象采集血標(biāo)本前1 d 禁止飲酒或進(jìn)食油膩食物，且禁食12 h 以上。次日清晨取靜脈血2 mL，經(jīng)3 000 r/min 離心10 min 后，應(yīng)用自動(dòng)生化分析儀處理離心靜脈血液，并對(duì)高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、總膽固醇（TC）及三酰甘油（TG）水平進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 肌痛發(fā)生情況收集 利用病案、HIS 系統(tǒng)收集患者服藥期間肌痛的發(fā)生情況，包括肌肉鈍痛、酸痛，四肢及遠(yuǎn)端壓痛，運(yùn)動(dòng)時(shí)或之后即刻痛性痙攣等不良反應(yīng)。其中他汀類(lèi)相關(guān)肌?。⊿AM）診斷標(biāo)準(zhǔn)為：（1）肌痛：肌組織疼痛或者無(wú)力，但CK 水平無(wú)明顯升高。（2）肌炎：肌組織有疼痛癥狀，CK 水平輕中度升高但小于正常值上限5 倍。（3）橫紋肌溶解：肌組織有明顯疼痛癥狀，CK 水平超過(guò)正常上限5 倍及以上、褐色尿及肌紅蛋白尿合并急性腎功能衰竭。

1.3 觀察指標(biāo)

收集患者一般資料，包括性別、年齡；實(shí)驗(yàn)室血脂指標(biāo)包括HDL-C、LDL-C、TC 及TG，以及ApoE基因型與SLCO1B1 基因型檢測(cè)結(jié)果，并關(guān)注患者肌痛發(fā)生情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。計(jì)數(shù)資料采用n（%）表示，兩組間比較用χ2檢驗(yàn)分析，計(jì)量資料采用秩和檢驗(yàn)。采用偏回歸性分析受試者的ApoE 及SLCO1B1 基因多態(tài)性與血脂水平的相關(guān)性。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 基因型分布

本研究243 例ACS 患者血液樣本分別檢測(cè)到6種ApoE 基因型與6 種SLCO1B1 基因型。SLCO1B1等位基因*1b、*1a、*15 占比分別為55.52% 、32.13%、12.35%，ApoE 等位基因E2、E3、E4 占比分別為6.7%、80.45%及12.85%。詳見(jiàn)表1、表2。

表1 甘肅地區(qū)漢族243 例ACS 患者SLCO1B1 基因分布情況

表2 甘肅地區(qū)漢族243 例ACS 患者ApoE 基因分布情況

2.2 SLCO1B1 三種基因表型組間一般資料及血脂水平比較

本研究中243 例ACS 患者SLCO1B1 三種基因表型占比為：耐受較高型*1b/*1b、*1a/*1b、*1a/*1a分別占比44.4%、35.4%、5.3%，耐受中等型*1a/*15、*1b/*15、*1a/*5 分別占比4.5%、9.9%、0.49%，耐受較低型只檢測(cè)出占比0.4%的*15/*15 基因型，未檢出*5/*5、*5/*15 型。其中耐受較低型患者肝臟攝取藥物能力較弱，發(fā)生橫紋肌溶解的風(fēng)險(xiǎn)較其他分型患者高，臨床上需要關(guān)注該類(lèi)患者，適當(dāng)減少他汀類(lèi)藥物使用劑量。SLOCO1B1 三組基因表型在血脂水平、性別及年齡分布上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表3。

表3 SLCO1B1 基因表型間一般資料及血脂水平比較

2.3 ApoE 三種基因表型組間一般資料及血脂水平比較

本研究中243 例ACS 患者ApoE 基因表型占比為：一般型E2/E4、E3/E3 占比分別為0.8%、77.00%，有害型[E3/E4（14.0%）、E4/E4（1.2%）]，有益型[E2/E2（0.4%）、E2/E3（6.6%）]。同樣，ApoE 基因表型與血脂水平均無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05），見(jiàn)表4。

表4 ApoE 三種基因表型間一般資料及血脂水平比較

2.4 ACS 患者SLCO1B1 和ApoE 基因多態(tài)性與血脂水平的相關(guān)性

偏相關(guān)性分析顯示:SLCO1B1 基因多態(tài)性與各血脂指標(biāo)水平均無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05），同樣，ApoE 基因多態(tài)性與各血脂指標(biāo)水平均無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05），見(jiàn)表5。

表5 243 例ACS 患者SLCO1B1 和ApoE 基因多態(tài)性與血脂水平的相關(guān)性（偏相關(guān)性分析）

3 討 論

ACS 是因冠狀動(dòng)脈內(nèi)不穩(wěn)定粥樣斑塊糜爛或破裂導(dǎo)致的急性血栓引發(fā)的心臟急性缺血綜合癥，有關(guān)研究結(jié)果表明，ACS 是受到遺傳環(huán)境等諸多因素共同作用而發(fā)病的多基因遺傳性疾病[8]，急性期除抗凝、抗血小板聚集及盡快開(kāi)通血運(yùn)重建外，相關(guān)危險(xiǎn)因素的管理至關(guān)重要，尤其需要重視血脂管理[9]。他汀類(lèi)藥物可競(jìng)爭(zhēng)性抑制3-羥基3-甲基二酰輔酶A 還原酶的活性，是目前公認(rèn)的安全有效的降脂藥物，但部分患者出現(xiàn)肌痛、肝酶升高及中樞神經(jīng)功能損傷等相關(guān)不良反應(yīng)癥狀。既往亦有文獻(xiàn)報(bào)道，長(zhǎng)期服用他汀類(lèi)降脂藥物易誘發(fā)輕度認(rèn)知功能障礙，嚴(yán)重者甚至可出現(xiàn)癡呆癥狀，且中途停用會(huì)顯著增加再發(fā)心血管疾病事件[10]。隨著分子生物科技的不斷進(jìn)展，SLCO1B1 和ApoE 基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)系已被多項(xiàng)研究報(bào)道[11]，但基因多態(tài)性分布存在地域差別，因此，首次從分子水平了解SLCO1B1 和ApoE 基因遺傳多態(tài)性在甘肅地區(qū)ACS 患者的分布情況，探討其與血脂水平的相關(guān)性，為他汀類(lèi)藥物的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

SLCO1B1 基因編碼有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽（OATP1B1）參與多種藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)，并決定藥物是否直接發(fā)揮藥效或代謝轉(zhuǎn)化為有活性的物質(zhì)[12]。SLCO1B1 基因具有遺傳多態(tài)性，其中521T>C、388A>G 是兩種最常見(jiàn)的單核苷酸多態(tài)性，可以形成 4 種單倍型 SLCO1B1*1a （388 A -521T）、SLCO1B1*5（388A-521C）、SLCO1B1*1b（388G-521T）和SLCO1B1*15（388G-521C）。SLCO1B1 基因突變能夠減弱編碼OATP1B1 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活力，降低肝臟攝取藥物能力，易導(dǎo)致他汀類(lèi)藥物血藥水平上升，明顯增加不良反應(yīng)的發(fā)生危險(xiǎn)[13-14]。本研究統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，耐受較高型*1b/*1b、*1a/*1b、*1a/*1a 分別占比44.4%、35.4%、5.3%，耐受中等型*1a/*15、*1b/*15、*1a/*5 分別占比4.5%、9.9%、0.49%，耐受較低型只檢測(cè)出占比0.4%的*15/*15 基因型，未檢出*5/*5、*5/*15 型。以上結(jié)果表明甘肅地區(qū)大多數(shù)ACS 患者為SLCO1B1 基因耐受較高型，臨床使用他汀類(lèi)藥物風(fēng)險(xiǎn)正常，高風(fēng)險(xiǎn)基因型極少，但對(duì)于基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)具有SLCO1B1 高度風(fēng)險(xiǎn)基因型的患者，應(yīng)高度關(guān)注肌病、橫紋肌溶解風(fēng)險(xiǎn)，可考慮使用低劑量的他汀類(lèi)藥物。

載脂蛋白E（ApoE）是影響機(jī)體血脂代謝的重要內(nèi)在因素，所編碼的載脂蛋白通過(guò)多種途徑參與機(jī)體的脂質(zhì)代謝，被認(rèn)為是高脂血癥和冠心病的候選易感基因。ApoE 基因同樣呈多態(tài)性，常見(jiàn)有6 種基因型，不同基因表型的血脂水平不同[15-16]。本研究243 例ACS 患者血液樣本中同樣檢測(cè)到6 種ApoE基因型。檢測(cè)到一般型（E2/E4、E3/E3）占比77.8%，有害型（E3/E4、E4/E4）占比15.2%，有益型（E2/E2、E2/E3）占比7.0%。有研究表明，ApoE 基因有害型占比27.59%，該類(lèi)患者發(fā)生冠心病、阿爾茲海默癥和血管性癡呆的風(fēng)險(xiǎn)最高，與本研究有害基因型占比結(jié)果相似，因此對(duì)該部分患者進(jìn)行健康生活指導(dǎo)及早期藥物干預(yù)具有重要臨床意義[17]。既往有研究顯示，E2 等位基因會(huì)降低LDL 水平，E4 等位基因則能夠升高LDL[18]。此次研究結(jié)果顯示：ApoE基因多態(tài)性與血脂水平無(wú)明確相關(guān)性（P＞0.05）。這些不同研究結(jié)果提示，ApoE 基因多態(tài)性與血脂水平之間的相關(guān)性仍然不完全明確，推測(cè)可能與不同的ApoE 等位基因介導(dǎo)脂蛋白降解的速率不同相關(guān)，有待更大樣本量和更為嚴(yán)謹(jǐn)?shù)呐R床設(shè)計(jì)進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，本研究初步了解甘肅地區(qū)漢族ACS患者的SLCO1B1 和ApoE 基因型及等位基因頻率分布特點(diǎn)，且進(jìn)一步表明ACS 患者SLCO1B1 和ApoE 基因多態(tài)性與血脂水平無(wú)相關(guān)性。本研究的樣本量較少，仍需更大樣本量臨床數(shù)據(jù)進(jìn)一步研究。ApoE 和SLCO1B1 基因測(cè)定是精準(zhǔn)醫(yī)療的縮影之一，通過(guò)基因多態(tài)性檢測(cè)，關(guān)注SLCO1B1 和ApoE風(fēng)險(xiǎn)類(lèi)基因患者，以期能為臨床他汀類(lèi)藥物應(yīng)用的有效性與安全性提供重要參考。