銀黃二陳合劑黃芩苷提取轉(zhuǎn)移率工藝研究

張傳津　牛華星　張志民　魏茂蓮　宮玲玲　王尚明

摘要 通過(guò)考察黃芩苷轉(zhuǎn)移率，改進(jìn)和完善銀黃二陳合劑提取工藝，進(jìn)一步提高銀黃二陳合劑中黃芩苷的含量。結(jié)果顯示，在提取溶媒中加入不同量的pH調(diào)節(jié)劑枸椽酸鈉，可以有效增加黃芩苷在水中的溶解度，其中添加0.20%枸椽酸鈉效果較好，可以提高黃芩苷的轉(zhuǎn)移率10%以上，為含黃芩制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供了可靠的研究基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 銀黃二陳合劑；黃芩苷；轉(zhuǎn)移率；提取工藝

中圖分類(lèi)號(hào) R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2023）06-0170-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.06.041

Study on the Extraction and Transfer Rate of Baicalin from Yinhuang Erchen Compound

ZHANG Chuan－jin，NIU Hua－xing，ZHANG Zhi－min et al

（Institute of Feed Veterinary Drug Control of Shandong Province，Jinan，Shandong 250010）

Abstract By investigating the transfer rate of baicalin，the extraction process of Yinhuang erchen compound was improved and perfected，and the content of baicalin in Yinhuang erchen compound was further increased. The results showed that adding different amounts of pH regulator sodium citrate could effectively increase the solubility of baicalin in water，and adding 0.20% sodium citrate was the best，which could improve the transfer rate of baicalin by more than 10%，providing a reliable research basis for the quality control of baicalin preparation products.

Key words Yinhuang erchen compound;Baicalin;Transfer rate;Extraction process

銀黃二陳合劑是由黃芩、金銀花、姜半夏等藥味組方而成的純中藥口服制劑，具有清熱解毒、燥濕化痰、理氣和中的作用，臨床用于治療溫?zé)峥人?；方中黃芩瀉肺熱而平喘，金銀花清解疫毒，共為主藥，其中黃芩為唇形科植物黃芩（Scutellaria baicalensis Georgi）的干燥根，現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究證明，其有效成分主要有黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等黃酮類(lèi)化合物［1-2］，其中黃芩苷是黃芩藥材以及含黃芩制劑常用質(zhì)控指標(biāo)成分。

黃芩中的黃芩苷在植物中以鎂鹽形式存在，可以被沸水溶出。綜合考慮溶媒的毒性、成本、生產(chǎn)安全性，在系列提取溶媒、提取工藝摸索的試驗(yàn)基礎(chǔ)上，銀黃二陳合劑最終的工藝制法中，黃芩是經(jīng)水煮提取，濃縮澄清后入藥的［3］。但在制備及長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察中發(fā)現(xiàn)，黃芩苷含量較初提取液有所降低，由于黃芩苷在冷水中難溶，精制過(guò)程中黃芩苷可能存在析出而損失［4-5］。該試驗(yàn)主要考察提取液的pH對(duì)黃芩苷轉(zhuǎn)移率的影響，以期為銀黃二陳合劑提取工藝提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試材。黃芩藥材，批號(hào)202109011，購(gòu)自禹神中藥材專(zhuān)業(yè)合作社；金銀花藥材，批號(hào)202110305，購(gòu)自臨沂尚潤(rùn)中藥材有限公司;黃芩提取物（黃芩苷含量85%），批號(hào)2021090801，山東迅達(dá)康獸藥有限公司提供。

1.1.2 試劑。乙醇、PEG400、甘油、丙二醇、乙酸乙酯、聚山梨酯80、無(wú)水亞硫酸鈉、氫氧化鈉，均為國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)Z0271910，純度96.1%），中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；甲醇（色譜純，Merck公司）；磷酸二氫鉀（分析純，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

1.1.3 儀器。Agilent 1260 高效液相色譜儀，配DAD檢測(cè)器（安捷倫，美國(guó)）；BP211D分析天平，感量0.000 01 g（賽多利斯，德國(guó)）；PB-10酸度計(jì)（賽多利斯，德國(guó)）；Milli-Q Advantage A10超純水系統(tǒng)（密理博，美國(guó)）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 pH對(duì)黃芩苷溶解性的影響。黃芩苷為淡黃色至棕黃色針晶，幾乎不溶于水，易溶于氫氧化鈉等堿性溶液中，但當(dāng) pH過(guò)高時(shí)，黃芩苷含量隨時(shí)間的延長(zhǎng)顯著降低［3］，因此，該研究采用黃芩提取物添加不同量的氫氧化鈉考察pH對(duì)黃芩苷溶解及含量的影響［6-7］。

1.2.2 pH調(diào)節(jié)劑對(duì)黃芩苷提取轉(zhuǎn)移率的影響。

黃芩苷易溶于堿性溶液中，但當(dāng) pH過(guò)高時(shí)，黃芩苷含量隨時(shí)間的延長(zhǎng)顯著降低，故需要篩選出最適宜的pH調(diào)節(jié)劑來(lái)保證黃芩苷的含量及穩(wěn)定性。經(jīng)過(guò)小試篩選了系列pH調(diào)節(jié)劑（硼酸鹽、磷酸鹽、枸椽酸鈉和氫氧化鈉），發(fā)現(xiàn)枸椽酸鈉堿性溫和，具有一定的緩沖和穩(wěn)定溶液pH作用，并且不會(huì)導(dǎo)致黃芩苷水解，由于方中還含有共為主藥的金銀花，所以同時(shí)要兼顧pH對(duì)綠原酸的影響［6-7］。

1.2.3 黃芩苷轉(zhuǎn)移率的計(jì)算。其計(jì)算公式：轉(zhuǎn)移率=制劑中黃芩苷含量/黃芩藥材含量×100%。

1.2.4 黃芩苷含量測(cè)定。

1.2.4.1 黃芩藥材的黃芩苷含量測(cè)定。按照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020年版二部“黃芩”項(xiàng)下含量測(cè)定方法檢測(cè)。

1.2.4.2 制劑中黃芩苷的含量測(cè)定。

（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-冰醋酸（50∶50∶1）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為274 nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1 500。

（2）對(duì)照品溶液的制備。取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50%甲醇制成0.16 mg/mL的溶液，即得。

（3）供試品溶液的制備。精密量取本品1 mL，置于50 mL 容量瓶中，加50%甲醇適量，超聲20 min，放置至室溫，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.22 μm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

（4）含量測(cè)定。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2 結(jié)果與分析

2.1 pH對(duì)黃芩苷溶解性的影響

為了細(xì)化不同pH對(duì)黃芩苷溶解性的影響，該研究分別用0.45%、0.46%、0.47%、0.48%、0.49%、0.50%、0.51%和0.52%的氫氧化鈉在80 ℃溫度下溶解黃芩提取物，并測(cè)定不同氫氧化鈉加入量對(duì)藥液pH和性狀的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明（表1），按0.45%和0.46%的量加入氫氧化鈉，黃芩提取物不溶解；氫氧化鈉加入量為0.47%～0.52%，黃芩提取物溶解完全，而且隨著氫氧化鈉加入量的增加藥液的顏色逐漸加深。當(dāng)pH為5.56～5.83時(shí)藥液的顏色為淺棕黃色，當(dāng)pH為6.47～7.04時(shí)藥液的顏色為棕黃色，當(dāng)pH達(dá)到7.60時(shí)，藥液變成棕紅色。且通過(guò)檢測(cè)不同pH條件下的黃芩苷含量發(fā)現(xiàn)，當(dāng)pH在5.56～5.83時(shí)黃芩苷含量較高，pH為6.47～7.04時(shí)黃芩苷含量變化不明顯，但當(dāng)pH為7.60時(shí)黃芩苷含量降低顯著，說(shuō)明黃芩苷已發(fā)生水解氧化。由此可以確定黃芩苷在堿性溶液中不穩(wěn)定，但是pH太低時(shí)黃芩提取物又不能全部溶解，因此根據(jù)此試驗(yàn)結(jié)果確定溶解黃芩苷適宜的藥液pH為5.56～7.04。

2.2 pH調(diào)節(jié)劑對(duì)黃芩苷提取轉(zhuǎn)移率的影響

分別在不同提取水中添加0.20%、0.30%、0.50%的枸櫞酸鈉，按銀黃二

陳合劑工藝流程提取、濃縮后檢測(cè)，結(jié)果顯示，在提取水中添加0.20%～0.50%的枸櫞酸鈉，對(duì)黃芩苷、綠原酸的轉(zhuǎn)移率有不同的影響。添加0.20%～0.50%枸櫞酸鈉，黃芩苷轉(zhuǎn)移率較空白提取水均有所提高；而不同添加水平的枸櫞酸鈉導(dǎo)致綠原酸的轉(zhuǎn)移率也發(fā)生變化，0.20%枸櫞酸鈉添加量較好，隨著枸櫞酸鈉添加量增加至0.30%、0.50%時(shí)，轉(zhuǎn)移率則下降，由于綠原酸分子結(jié)構(gòu)中有酯鍵、不飽和雙鍵和多元酚3個(gè)不穩(wěn)定部分［6-8］，對(duì)pH也非常敏感，隨著枸櫞酸鈉量的增加，pH升高，導(dǎo)致綠原酸發(fā)生降解；添加0.30%的枸櫞酸鈉，藥液pH為5.61，黃芩苷轉(zhuǎn)移率最高，可達(dá)59.19%，但綠原酸轉(zhuǎn)移率僅為31.11%。綜合考慮綠原酸的轉(zhuǎn)移率，0.20%枸櫞酸鈉添加量較好，黃芩苷、綠原酸的轉(zhuǎn)移率分別為56.39%、53.11%。

3 討論與結(jié)論

按《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020年版規(guī)定，黃芩藥材中黃芩苷（C21H18O11）含量不得低于9.0%，金銀花中綠原酸（C16H18O9）含量不得低于1.5%［9］。以最低規(guī)定計(jì)算，以黃芩苷轉(zhuǎn)移率50%、綠原酸轉(zhuǎn)移率49%計(jì)算，銀黃二陳合劑中黃芩苷含量理論值應(yīng)不低于10.77 mg/mL，綠原酸含量理論值應(yīng)不低于2.43 mg/mL。以上是實(shí)驗(yàn)室小試的結(jié)果，最終的含量限度應(yīng)以中試試驗(yàn)結(jié)果為依據(jù)。

銀黃二陳合劑是山東迅達(dá)康獸藥有限公司等單位研發(fā)的純中藥復(fù)方新制劑，其中黃芩苷、綠原酸分別是黃芩、金銀花的主要質(zhì)控指標(biāo)成分［10-11］，研究結(jié)果表明，枸椽酸鈉對(duì)黃芩苷的溶解有極大的促溶作用，可有效防止黃芩苷的析出，提高藥液黃芩苷的含量；由于綠原酸轉(zhuǎn)移率隨著枸櫞酸鈉添加量增大而下降明顯，綜合考量，選擇枸櫞酸鈉添加量0.20%效果最理想。

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基金項(xiàng)目 國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃重點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)“防治畜禽免疫系統(tǒng)疫病的現(xiàn)代中獸藥產(chǎn)品創(chuàng)制” （2017YFD0501505）。

作者簡(jiǎn)介 張傳津（1967—），男，山東莒南人，研究員，從事中獸藥質(zhì)量控制及新制劑的研發(fā)工作。

收稿日期 2022-03-31