解淀粉芽胞桿菌PHODG36 的解磷、促生及防治馬鈴薯黑痣病的功能分析

張曉云，叢 蓉，于穩(wěn)欠，郭慶港，李社增，馬 平

（河北省農(nóng)林科學(xué)院 植物保護(hù)研究所/河北省農(nóng)業(yè)有害生物綜合防治創(chuàng)新中心/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部華北北部作物有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 保定 071000）

馬鈴薯（Solanum tuberosumL.）是我國(guó)繼水稻、小麥、玉米之后的第四大糧食作物，具有營(yíng)養(yǎng)豐富、適應(yīng)性廣、經(jīng)濟(jì)價(jià)值高等特點(diǎn)［1］，馬鈴薯的產(chǎn)量和品質(zhì)除受自身特性影響外，還受到氣候、栽培管理、病蟲害等諸多因素影響，其中肥料對(duì)其影響很大［2］。磷作為植物生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)元素之一，對(duì)馬鈴薯的生長(zhǎng)代謝與產(chǎn)量起著重要的作用［3］。但由于磷元素的固定作用，施入土壤中的磷絕大部分以難溶性磷酸鹽狀態(tài)存在，植物難以直接吸收利用，磷肥當(dāng)季利用率只有10%～20%，其中馬鈴薯的磷肥利用率僅為11.2%［4-5］。因此，如何提高土壤中磷的利用效率，滿足馬鈴薯的磷素需求，已成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。土壤中存在一類能夠?qū)㈦y溶態(tài)磷轉(zhuǎn)化為植物可吸收利用形態(tài)的微生物，稱為解磷菌或溶磷菌［6］。解磷菌在土壤磷循環(huán)中發(fā)揮著重要作用，它能夠提高土壤中可溶性磷含量，改善植物磷素營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)植物生長(zhǎng)，進(jìn)而增加作物產(chǎn)量［7-8］。

近年來，隨著馬鈴薯種植面積逐年擴(kuò)大，由于缺乏抗病品種加上輪作倒茬困難，導(dǎo)致由立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）引起的馬鈴薯黑痣病等土傳病害發(fā)生日趨嚴(yán)重，嚴(yán)重地塊的發(fā)病率高達(dá)70%～80%，極大的影響馬鈴薯的產(chǎn)量和品質(zhì)［9］，成為制約馬鈴薯產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的重要因素之一。長(zhǎng)期以來，馬鈴薯黑痣病的防治主要以化學(xué)防治為主，然而化學(xué)農(nóng)藥的大量不合理使用，造成病原菌產(chǎn)生抗藥性、農(nóng)藥殘留和環(huán)境污染等一系列問題。生物防治尤其是利用活體微生物可有效防治植物土傳病害，且環(huán)保無殘留，符合綠色生產(chǎn)需求，已逐漸引起人們的重視［10］。Hussain 等［11］發(fā)現(xiàn)，枯草芽胞桿菌HussainT-AMU 菌株能夠抑制黑痣病菌生長(zhǎng)并有效防治馬鈴薯黑痣病。

據(jù)報(bào)道有些解磷菌除具有解磷活性外，還能夠抑制植物病原菌的生長(zhǎng)。朱德旋等［12］篩選出1 株高效解無機(jī)磷伯克霍爾德菌B51-7，對(duì)7 種植物病原真菌具有較強(qiáng)的拮抗作用。宮安東等［13］發(fā)現(xiàn)，吡咯伯克霍爾德菌WY6-5 能降解無機(jī)磷和有機(jī)磷，同時(shí)可抑制8 種重要病原真菌的生長(zhǎng)。目前，用于馬鈴薯黑痣病生物防治的生防細(xì)菌較多，但同時(shí)具有解磷與防病雙重作用的生防細(xì)菌尚未見報(bào)道。因此，篩選出兼具解磷促生及抑菌防病多功能生防菌株對(duì)馬鈴薯高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)發(fā)展具有重要意義。

本研究旨在從植物根際土壤中篩選獲得高效解磷細(xì)菌，明確其對(duì)馬鈴薯的促生作用、對(duì)病原菌的抑菌功能及對(duì)馬鈴薯黑痣病的防治效果，以期為防病促生微生物產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)化研發(fā)提供優(yōu)良菌株資源。

1 材料和方法

1.1 供試材料

供試土樣：采集新疆、云南、四川、貴州、山東、江蘇及河北7 省18 種不同作物根圍土壤樣品71 份，裝于自封塑料袋中帶回實(shí)驗(yàn)室，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

供試培養(yǎng)基：解無機(jī)磷培養(yǎng)基（NBRIP）：葡 萄 糖10 g，磷 酸 鈣5 g，MgCl2·6H2O 5 g，MgSO4·7H2O 0.25 g，KCl 0.2 g，(NH4)2SO40.1 g，H2O 1 000 mL，pH 7.0～7.2；LB 培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，酵母粉5 g，NaCl 5 g，H2O 1 000 mL，pH 7.0～7.2；上述培養(yǎng)基加入1.5%的瓊脂即得到相應(yīng)的固體培養(yǎng)基。PDA 培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂15 g，H2O 1 000 mL；發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米粉30 g、豆餅粉20 g、NaH2PO44 g、KH2PO40.3 g、Na2CO31.0 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、CaCO32.0 g，H2O 1 000 mL，pH 7.0～7.2；黑麥培養(yǎng)基：黑麥60 g，蔗糖 20 g，瓊脂粉 12 g，H2O 1 000 mL。

供試馬鈴薯品種：‘希森6 號(hào)’，購(gòu)自菁菁緣農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司。

供試病原真菌：馬鈴薯黃萎病菌（Verticillium dahliae）、馬鈴薯枯萎病菌（Fusarium oxysporum）、馬鈴薯黑痣病菌（Rhizoctonia solani）、馬鈴薯早疫病菌（Alternaria solani）及馬鈴薯晚疫病菌（Phytophthora infestans）均由河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所分離并保存。

1.2 解磷微生物的分離與篩選

1.2.1 解磷微生物的初篩 稱取1.0 g 土樣，加至裝有玻璃珠的滅菌三角瓶中，加入99 mL 無菌水，30 ℃、180 r/min 振蕩30 min，采用梯度稀釋法進(jìn)行稀釋，分 別 取10-3、10-4、10-5稀 釋 液100 μL，涂 布 于NBRIP 培養(yǎng)基平板上，30 ℃ 恒溫培養(yǎng)5～7 d。挑取能夠產(chǎn)生透明圈的單菌落點(diǎn)接于NBRIP 培養(yǎng)基平板中央，30 ℃ 恒溫培養(yǎng)5～7 d，測(cè)量透明圈直徑（D）和菌落生長(zhǎng)直徑（d），計(jì)算解磷比（D/d），初步判斷溶磷能力。

1.2.2 解磷微生物的復(fù)篩 選取解磷能力比較高的菌株，挑取單菌落接種于LB 液體培養(yǎng)基中，30 ℃、180 r/min 培養(yǎng)48 h，4 ℃、10 000 r/min 離心10 min收集菌體，用無菌水懸浮菌體制成菌懸液，并調(diào)節(jié)其濃度為OD600=1.0。吸取2 mL 菌懸液接種于裝有50 mL NBRIP 液體培養(yǎng)基的300 mL 三角瓶中，30 ℃、180 r/min 培養(yǎng)6 d 后，采用鉬銻抗比色法［14］測(cè)定發(fā)酵液中的可溶性磷濃度，進(jìn)一步判斷其溶磷能力。

1.3 PHODG36 菌株對(duì)不同馬鈴薯病原菌的抑制作用

采用平板對(duì)峙法，測(cè)定PHODG36 菌株對(duì)馬鈴薯不同病原真菌的抑制作用。

在新活化的馬鈴薯晚疫病菌菌落邊緣打取菌盤（直徑6 mm），轉(zhuǎn)接至黑麥培養(yǎng)基平板中央，20 ℃恒溫培養(yǎng)5 d 后，在距離菌盤2 cm 處點(diǎn)接PHODG36 菌株，以不接種PHODG36 菌株的病原菌平板為對(duì)照，20 ℃恒溫繼續(xù)培養(yǎng)，待空白對(duì)照病原菌長(zhǎng)至培養(yǎng)皿邊緣時(shí)，測(cè)量對(duì)照病原菌的菌落半徑和PHODG36 菌株處理后的菌落半徑，計(jì)算抑菌率。

在新活化的馬鈴薯病原菌（黃萎病菌、枯萎病菌、黑痣病菌及早疫病菌）菌落邊緣打取菌盤（直徑6 mm），轉(zhuǎn)接至PDA 平板中央，在距離菌盤2 cm處點(diǎn)接PHODG36 菌株，以不接種PHODG36 菌株的病原菌平板為對(duì)照，25 ℃恒溫培養(yǎng)，待空白對(duì)照病原菌長(zhǎng)至培養(yǎng)皿邊緣時(shí)，測(cè)量對(duì)照病原菌的菌落半徑和PHODG36 菌株處理后的菌落半徑，并計(jì)算抑菌率。

1.4 PHODG36 菌株發(fā)酵液的制備

將PHODG36 菌株在LB 平板上活化，挑取單菌落轉(zhuǎn)接至裝有250 mL LB 固體培養(yǎng)基的克氏瓶中，37 ℃培養(yǎng)5 d，用無菌水洗下克氏瓶中的菌苔，轉(zhuǎn)入80 L 發(fā)酵罐（裝有50 L 發(fā)酵培養(yǎng)基）中，32 ℃培養(yǎng)18～20 h，當(dāng)芽胞形成率≥95%時(shí)結(jié)束發(fā)酵，得到PHODG36 菌株發(fā)酵液。采用稀釋平板涂布法［15］檢測(cè)發(fā)酵液中的活菌含量并用無菌水調(diào)制為5×109CFU/mL。

1.5 PHODG36 菌株對(duì)馬鈴薯的促生作用評(píng)價(jià)

挑選大小一致、帶有1～2 個(gè)芽眼的馬鈴薯原原種播種于裝有550 g 無菌蛭石的花盆（盆口直徑18 cm、盆底直徑13 cm、高15 cm）中，每盆播種10 粒種子，分別澆施400 mL PHODG36 發(fā)酵液10 倍稀釋液（5×108CFU/mL，無菌水稀釋，下同）、100倍稀釋液（5×107CFU/mL）、500倍稀釋液（1×107CFU/mL）及1 000 倍稀釋液（5×106CFU/mL），以澆入等量發(fā)酵培養(yǎng)基10 倍稀釋液作為空白對(duì)照，置于25 ℃溫室中培養(yǎng)。每個(gè)處理4 次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1 盆，每間隔6 d 澆施不同濃度的PHODG36 菌株發(fā)酵液1 次，共澆施4 次，最后1 次澆施7 d 后（自播種25 d）測(cè)量株高、植株地上部鮮重及干重、地下部鮮重及干重。

1.6 PHODG36 菌株對(duì)馬鈴薯黑痣病的防治效果評(píng)價(jià)

在新活化的馬鈴薯黑痣病菌菌落邊緣打取菌盤（直徑6 mm），轉(zhuǎn)接至PDA 平板中央，25 ℃培養(yǎng)7 d 后，用勻漿機(jī)充分打碎培養(yǎng)物后與無菌育苗基質(zhì)（田園土：草炭=1∶1，v/v）混勻（1 皿病原菌∶1.2 kg 育苗基質(zhì)）制成帶菌育苗基質(zhì)，將均勻一致、帶有1～2 個(gè)芽眼的薯塊種植于裝有1.2 kg 帶菌育苗基質(zhì)的花盆（盆口直徑：18 cm、盆底直徑：13 cm、高：15 cm）中，每盆播種2 塊，分別澆施300 mL PHODG36 發(fā)酵液10 倍稀釋液、100 倍稀釋液及500 倍稀釋液，以澆入等量發(fā)酵培養(yǎng)基10 倍稀釋液作為空白對(duì)照，置于20 ℃、相對(duì)濕度55%的人工氣候室中培養(yǎng)（光照∶黑暗=16 h∶8 h）。每個(gè)處理3 次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6 盆，每間隔10 d 澆施不同濃度的PHODG36 菌株發(fā)酵液1 次，共澆施3 次，最后1 次澆施7 d（自播種37 d）后調(diào)查馬鈴薯黑痣病的發(fā)病情況，并計(jì)算病情指數(shù)和防治效果［16］。

馬鈴薯苗期黑痣病的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)病斑的橫向平均長(zhǎng)度總和占地下莖周長(zhǎng)的比例衡量發(fā)病嚴(yán)重度［17］。分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0 級(jí)：植株沒有病斑；1 級(jí)：嚴(yán)重度為1%～25%；2 級(jí)：嚴(yán)重度為26%～50%；3 級(jí)：嚴(yán)重度為51%～75%；4 級(jí)：嚴(yán)重度為76%～100%。

病情指數(shù)=∑（各級(jí)病株數(shù)×相應(yīng)級(jí)值）/（調(diào)查總株數(shù)×最高級(jí)值）×100

防治效果（%）=［（對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/對(duì)照病情指數(shù)］×100

1.7 菌株P(guān)HODG36 的鑒定

1.7.1 形態(tài)特征鑒定 將PHODG36 菌株劃線接種于LB 平板上，30 ℃培養(yǎng)24 h，觀察單菌落形態(tài)。挑取單菌落轉(zhuǎn)接于LB 液體培養(yǎng)基中，在30 ℃、180 r/min 振蕩培養(yǎng)24 h 和36 h，分別取樣于顯微鏡（DP71，日本Olympus 公司）下觀察PHODG36 菌株的菌體及芽胞形態(tài)。

1.7.2 Biolog 微生物鑒定 采用Biolog 微生物鑒定系統(tǒng)（GEN III-Omnilog 型，美國(guó)Biolog 公司）對(duì)PHODG36 菌株進(jìn)行94 種表型測(cè)試，包括71 種碳源利用測(cè)試和23 種化學(xué)敏感測(cè)試，根據(jù)該系統(tǒng)給出的相似值判斷PHODG36 菌株的分類地位。

1.7.3 分子生物學(xué)鑒定 利用細(xì)菌基因組提取試劑盒（天根生化科技（北京）有限公司）提取菌株P(guān)HODG36 的基因組DNA。以該菌株基因組DNA 為模板，利用引物27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)［18］對(duì)其16S rDNA 序列進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，通過序列比對(duì)初步確定PHODG36 菌株屬級(jí)水平的分類地位。通過對(duì)PHODG36 菌株全基因組序列進(jìn)行分析，獲得看 家 基 因gyrA（GenBank No：OP559191）、gyrB（GenBank No：OP559192）、rpoB（GenBank No：OP559193）和rpoC（GenBank No：OP559194）序列。利用MEGA 5.0 軟件進(jìn)行Clustal W 多重序列比對(duì)，并通過鄰接法（Neighbor-joining method）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，根據(jù)聚類結(jié)果對(duì)PHODG36 菌株進(jìn)行分子鑒定［19］。

1.8 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2010 和Origin 2019 進(jìn)行數(shù)據(jù)整理與作圖。利用IBM SPSS 19.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析，使用鄧肯氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 解磷細(xì)菌的篩選

利用NBRIP 固體培養(yǎng)基分離并初篩獲得549 株解無機(jī)磷細(xì)菌，進(jìn)一步利用NBRIP 液體培養(yǎng)基對(duì)解磷比高于1.5 的18 株解磷細(xì)菌進(jìn)行復(fù)篩。由圖1 可知，PHODG36 菌株的解磷能力最強(qiáng)，溶磷量達(dá)到79.7 mg/L，其次為PHOD13菌株，溶磷量為78.0 mg/L，二者無顯著性差異；PHODB35 菌株的溶磷量為75.7 mg/L，與PHOD13 菌株和PHOD11 菌株無顯著性差異。其中PHODG36 菌株的溶磷量最高，故以該菌株作為后續(xù)研究菌株。

圖1 不同菌株的溶磷量Fig.1 Amount of dissolved phosphorus of different bacteria strains

2.2 PHODG36 菌株對(duì)5 種馬鈴薯病害病原菌的拮抗能力

PHODG36 菌株對(duì)5 種馬鈴薯病害病原菌具有不同程度的抑制作用，如圖2 所示，該菌株對(duì)馬鈴薯黑痣病菌的拮抗能力較強(qiáng)，抑菌率達(dá)到69.6%，與對(duì)早疫病菌的抑菌率（65.9%）無顯著性差異，但顯著高于對(duì)其它3 種病原菌的抑菌率；其次是對(duì)枯萎病菌的拮抗能力，抑菌率為58.2%；對(duì)馬鈴薯黃萎病菌與馬鈴薯晚疫病菌的抑菌率分別為54.6%與57.4%，二者無顯著差異（P＞0.05）。

圖2 PHODG36 菌株對(duì)不同馬鈴薯病害病原菌的抑制作用Fig.2 Antifungal activities of strain PHODG36 against different potato disease pathogens

2.3 PHODG36 菌株對(duì)馬鈴薯的促生作用評(píng)價(jià)

PHODG36 菌株不同濃度發(fā)酵液對(duì)馬鈴薯幼苗促生效果不同。如表1 所示，經(jīng)該菌株發(fā)酵液10 倍稀釋液處理后，馬鈴薯幼苗株高、地上部鮮重和干重、根鮮重和干重分別為15.2 cm、17.5 g、1.2 g、7.9 g及0.4 g，顯著高于空白對(duì)照（P＜0.05），增幅分別為178.3%、509.8%、396.9%、160.4% 及146.4%；經(jīng)該菌株發(fā)酵液100 倍稀釋液處理后，馬鈴薯幼苗株高、地上部鮮重和干重分別為11.8 cm、9.0 g、0.8 g，顯著高于空白對(duì)照，增幅分別為116.5%、214.5%和217.7%，而根鮮重和干重與空白對(duì)照差異不顯著（P＞0.05）；經(jīng)該菌株發(fā)酵液500 倍與1 000 倍稀釋液處理后，上述各項(xiàng)指標(biāo)與空白對(duì)照無顯著性差異。

表1 PHODG36 菌株對(duì)盆栽馬鈴薯幼苗株高、鮮重及干重的影響Table 1 Effects on height, fresh weight and dry weight of potato plants of strain PHODG36

2.4 PHODG36 菌株對(duì)馬鈴薯黑痣病的防治效果

PHODG36 菌株不同濃度發(fā)酵液對(duì)馬鈴薯黑痣病的防效見表2。經(jīng)該菌株3 個(gè)濃度發(fā)酵液處理后，馬鈴薯黑痣病的病情指數(shù)為20.1～27.8，均顯著低于空白對(duì)照（46.5）；其中以10 倍稀釋液處理防效最高，達(dá)到56.8%，與100 倍稀釋液處理沒有顯著性差異（45.7%），但顯著高于500 倍稀釋液處理（40.2%）；100 倍稀釋液處理后防效與500 倍處理（40.2%）無顯著性差異（P＞0.05）。

表2 PHODG36 菌株對(duì)馬鈴薯黑痣病的防治效果Table 2 Control efficacy of strain PHODB36 on potato black scurf

2.5 PHODG36 菌株的鑒定

2.5.1 形態(tài)特征鑒定 PHODG36 菌株的形態(tài)特征見圖3。該菌株在LB 培養(yǎng)基上培養(yǎng)菌落乳白色，邊緣不整齊；PHODG36 菌株菌體為桿狀，芽胞中生，橢圓形，初步判斷PHODG36 菌株屬于芽胞桿菌屬（Bacillusspp.）。

圖3 PHODG36 菌株的形態(tài)特征Fig.3 The morphology of strain PHODG36

2.5.2 Biolog 微生物鑒定系統(tǒng)鑒定 通過Biolog 微生物鑒定系統(tǒng)對(duì)PHODG36 菌株進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明PHODG36 菌株與枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）的相似值最高，達(dá)到0.509。

2.5.3 分子生物學(xué)鑒定 PHODG36菌株的16S rDNA序列經(jīng)擴(kuò)增、測(cè)序、Blast 比對(duì)后構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，如圖4 所示，該菌株的16S rDNA 基因序列與暹羅芽胞桿菌、解淀粉芽胞桿菌及枯草芽胞桿菌的16S rDNA 基因序列同源性均為99.8%，說明該菌株屬于芽胞桿菌屬細(xì)菌。進(jìn)一步獲得PHODG36 菌株的gyrA、gyrB、rpoB、和rpoC基因序列并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，如圖5 所示，PHODG36 菌株與解淀粉芽胞桿菌聚于同一分支。

圖4 基于16S rDNA 基因序列構(gòu)建PHODG36 菌株系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.4 Phylogenetic tree for strain PHODG36 based on 16S rDNA gene sequence

圖5 基于gyrA、gyrB、rpoB、和rpoC 基因序列構(gòu)建PHODG36 菌株系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.5 Phylogenetic tree for strain PHODG36 based on gyrA, gyrB, rpoB and rpoC gene sequences

綜合以上形態(tài)特征、Biolog 微生物鑒定系統(tǒng)、16S rDNA 及gyrA、gyrB、rpoB、和rpoC基因序列分析的結(jié)果，將PHODG36 菌株鑒定為解淀粉芽胞桿菌（B.amyloliquefaciens）。

3 結(jié)論與討論

肥料、促生和植保產(chǎn)品等農(nóng)業(yè)生產(chǎn)資料是保障農(nóng)作物高效生產(chǎn)的重要措施。磷是植物生長(zhǎng)發(fā)育及高產(chǎn)不可缺少的肥料元素之一，土壤缺磷會(huì)影響作物產(chǎn)量。但我國(guó)土壤中有效磷含量不足，難以直接滿足作物的磷素需求［20］。為提高土壤中磷的有效性，高效解磷微生物篩選及其利用成為國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者的關(guān)注熱點(diǎn)，并開展相關(guān)研究。目前報(bào)道的解磷微生物以細(xì)菌種類最多，主要包括芽胞桿菌屬（Bacillussp.）、假單胞菌屬（Pseudomonassp.）、歐文氏菌屬（Erwiniasp.）、沙雷氏菌屬（Serratiasp.）、土壤桿菌屬（Agrobacteriumsp.）、泛菌屬（Pantoeasp.）和固氮菌屬（Azotobactersp.）等［21］。本研究著重高效解磷微生物的篩選，采用溶磷圈法從7 省18 種不同作物根圍71 份土樣中分離549 株解無機(jī)磷細(xì)菌，進(jìn)一步利用鉬銻抗比色法復(fù)篩獲得1 株解磷能力較強(qiáng)的微生物菌株P(guān)HODG36。在形態(tài)特征確定PHODG36 菌株為芽胞桿菌類細(xì)菌的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步通過Biolog 微生物鑒定系統(tǒng)和分子生物學(xué)方法對(duì)該菌株進(jìn)行分類鑒定。但Biolog 鑒定結(jié)果與分子生物學(xué)鑒定結(jié)果不一致，分析其原因，一是因?yàn)锽iolog 鑒定是以細(xì)菌特有的“代謝指紋”為基礎(chǔ)的，其鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確度容易受到外界條件如培養(yǎng)條件和人為操作等的影響［22］；二是因?yàn)锽iolog 鑒定屬于生理生化指標(biāo)范疇，由于枯草芽胞桿菌類細(xì)菌具有較近的親緣關(guān)系和高度相似的生理生化特性［23］，Biolog 鑒定可能無法進(jìn)行準(zhǔn)確區(qū)分。Patel 等［24］報(bào)道，利用4 個(gè)看家基因gyrA-gyrB-rpoB-rpoC序列可以對(duì)芽胞桿菌進(jìn)行準(zhǔn)確的分類鑒定。因此，PHODG36 菌株的分類地位，以gyrA-gyrB-rpoBrpoC序列鑒定結(jié)果為準(zhǔn)，為解淀粉芽胞桿菌（B.amyloliquefaciens）。該項(xiàng)工作在一定程度上豐富了我國(guó)肥效微生物資源庫(kù)。

優(yōu)秀的農(nóng)業(yè)微生物菌株應(yīng)具有促生及防病等多種功能。近年來，關(guān)于解磷菌促進(jìn)作物生長(zhǎng)的研究報(bào)道較多。Collavino 等［25］研究發(fā)現(xiàn)，解磷菌產(chǎn)氣腸桿菌（Enterobacter aerogenes）R4M-A 菌株能促進(jìn)菜豆的生長(zhǎng)；梅新蘭等［26］研究表明，解磷菌巨大芽胞桿菌（B.megaterium）Z4 與熒光假單胞菌（P.Fluorescens）X5 處理后玉米株高、干重較對(duì)照均有所提高；趙衛(wèi)松等［27］研究表明，接種解磷菌解淀粉芽胞桿菌PHODB35 后，番茄株高、地上鮮重、地下鮮重較對(duì)照分別增加28.21%、22.59%和113.06%；宮安東等［13］發(fā)現(xiàn)，解磷菌吡咯伯克霍爾德菌WY6-5 能夠高效抑制灰霉菌、黃曲霉菌和禾谷鐮刀菌等多種重要病原真菌的生長(zhǎng)。本研究采用盆栽試驗(yàn)評(píng)價(jià)PHODB36 菌株對(duì)馬鈴薯的促生效果和防治黑痣病的效果，明確該菌株能夠顯著提高馬鈴薯幼苗的株高、鮮重和干重，且對(duì)黑痣病的防效達(dá)到56.8%。因此該菌株是1 株較為優(yōu)秀的農(nóng)業(yè)微生物菌株，具有廣闊的應(yīng)用前景。

實(shí)驗(yàn)室獲得的優(yōu)良菌株施入田間后，容易受到土壤中多種因素（土壤溫度、濕度、pH 值、原有微生物等）影響，其解磷活性或防病效果會(huì)減弱或降低［28-29］。本研究獲得的PHODG36 菌株，在大田條件下的促生與防病效果如何，需要進(jìn)一步進(jìn)行研究。此外，外源微生物施入田間，可能與土著微生物發(fā)生相互作用，影響土著微生物的群落結(jié)構(gòu)［30］。因此，后續(xù)研究應(yīng)該加強(qiáng)PHODG36 菌株與土壤微生物交互作用的深入研究，為明確該菌株的作用機(jī)理提供依據(jù)。

綜上所述，解淀粉芽胞桿菌PHODG36 是1 株具有溶磷、促生和防病等功能的優(yōu)秀微生物菌株，進(jìn)一步建立其配套的產(chǎn)業(yè)化關(guān)鍵技術(shù)，將為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)提供“藥肥”雙功能的新產(chǎn)品和新技術(shù)。