藤茶中二氫楊梅素和楊梅素對(duì)體外胃蛋白酶模型建立及活性評(píng)價(jià)

楊璐 陳仕學(xué) 王世青 姚元勇 張萌 黃玉

摘要 為了解藤茶中二氫楊梅素、楊梅素對(duì)胃蛋白酶活性的影響，通過探索對(duì)體外胃蛋白酶模型建立的影響因素確定建立條件，選用胃蛋白酶—血紅蛋白為反應(yīng)體系，在一定條件下分析胃蛋白酶作用時(shí)間、胃環(huán)境模擬成分（NaCl溶液、鹽酸溶液）、終止劑三氯乙酸、血紅蛋白、胃蛋白酶活性的影響因素以及二氫楊梅素和楊梅素對(duì)胃蛋白酶活性的影響。結(jié)果表明，胃蛋白酶作用時(shí)間為10 min、胃環(huán)境模擬成分（0.1 mol/L NaCl溶液和0.065 mol/L鹽酸溶液）、5 mL血紅蛋白溶液（1%）、1 mL胃蛋白酶（0.10 mg/mL）。另外，以不同濃度的二氫楊梅素、楊梅素為實(shí)驗(yàn)組，以酶活性變化指標(biāo)為考察組，考察二氫楊梅素和楊梅素對(duì)胃蛋白酶活性的影響。結(jié)果為當(dāng)二氫楊梅素用量為0.05 mg時(shí)，對(duì)0.1 mg胃蛋白酶有最大抑制作用，空白組酶活力（u）為10 632.322 9，實(shí)驗(yàn)組酶活力（u）為695.680 9，抑制率為93.46%；當(dāng)楊梅素用量為0.15 mg時(shí)，對(duì)0.1 mg蛋白酶有最大抑制作用，空白組酶活力（u）為10 632.322 9，實(shí)驗(yàn)組酶活力（u）為2 260.962 9，抑制率為78.74%。由此可知，二氫楊梅素和楊梅素對(duì)胃蛋白酶均有明顯的抑制作用，且在同劑量的黃酮參與反應(yīng)中，二氫楊梅素的抑制率比楊梅素的大，這為后期的具體應(yīng)用奠定了一定的理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 二氫楊梅素；楊梅素；胃蛋白酶；酶活力；抑制率

中圖分類號(hào) R284.1? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 1007-7731（2023）06-0028-07

Abstract In order to understand the rattan tea dihydrogen arbutus pigment， myricetin influence on pepsin activity， through the exploration of the influence factors of pepsin in vitro model to establish conditions were determined， the selection of pepsin， hemoglobin as reaction system， under certain conditions to explore stomach protease action time， environmental simulation component （NaCl solution， hydrochloric acid solution）， termination of trichloroacetic acid， hemoglobin and the factors influencing the activity of pepsin and dihydrogen arbutus pigment and myricetin on pepsin activity， the results show that： The action time of pepsin was 10 min， the simulated components of gastric environment （0.1 mol/L NaCl solution and 0.065 mol/L hydrochloric acid solution）， 5 mL hemoglobin solution （1%）， and 1 mL pepsin （0.10 mg/mL）.In addition， the effects of dihydromyricetin and myricetin at different concentrations on pepsin activity were investigated by taking dihydromyricetin and myricetin as the experimental group and the change of enzyme activity as the study group.The results showed that dihydromyricetin had the largest inhibitory effect on 0.1 mg pepsin when the dosage was 0.05 mg， the enzyme activity （u） of the blank group was 10 632.322 9， and the enzyme activity （u） of the experimental group was 695.680 9， with an inhibition rate of 93.46%.When the dosage of myricetin was 0.15 mg， it had the maximum inhibition effect on the protease of 0.1 mg， the enzyme activity （u） of the blank group was 10 632.322 9， and the enzyme activity （u） of the experimental group was 2 260.962 9， and the inhibition rate was 78.74%.It can be seen that both dihydromyricetin and myricetin have obvious inhibitory effects on pepsin， and the inhibition rate of dihydromyricetin is higher than that of myricetin in the reaction with the same dose of flavonoids， which provides certain theoretical basis for the specific application in the later stage.

Keywords dihydromyricetin; myricetin; pepsin; enzyme activity; inhibition rate

胃蛋白酶是胃中唯一的蛋白質(zhì)水解酶，是機(jī)體中重要的消化酶之一。蛋白質(zhì)由食道進(jìn)入胃后，首先經(jīng)胃蛋白酶水解成多肽，部分多肽再被蛋白酶分解為酪氨酸、苯丙氨酸等氨基酸，最后被人體吸收。部分藥物進(jìn)入胃后，會(huì)改變胃蛋白酶的活性環(huán)境，最終對(duì)胃蛋白酶的活性以及藥物在體內(nèi)的分布與代謝產(chǎn)生重要影響。

藤茶作為藥食兩用植物，主要分布于我國長江流域以南的廣東、廣西、湖南、江西、貴州等省區(qū)[1]，具有清熱、消炎、降血糖、降血脂等功效[2]。二氫楊梅素（Dihydromyricetin，DMY）、楊梅素（Myricetin，MYR）占藤茶中總黃酮含量的30%左右[3]，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。近年來，有關(guān)二氫楊梅素和楊梅素的生物活性研究較多，均表明二氫楊梅素和楊梅素具有優(yōu)良的生物活性，二氫楊梅素和楊梅素成分在消炎、鎮(zhèn)痛、抗高血壓、保肝護(hù)肝及解酒、增強(qiáng)免疫力、抗氧化和抑菌[4-10]等方面均表現(xiàn)出較好的生物活性作用，是具有潛在開發(fā)價(jià)值的一類天然藥物。然而，大多數(shù)藥物的治療途徑都需經(jīng)過胃的吸收進(jìn)入血液，進(jìn)而送達(dá)病灶部位發(fā)揮藥效。因此，研究黃酮醇類化合物二氫楊梅素和楊梅素對(duì)胃蛋白酶活性的影響具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

目前，關(guān)于黃酮類或黃酮醇類天然產(chǎn)物對(duì)胃蛋白酶的活性影響研究報(bào)道較少，梁會(huì)麗[11]報(bào)道了木犀草素、川陳皮素、染料木素、水飛薊賓、野黃芩苷、大豆甙元、金絲桃苷、葛根素、甘草素、桑色素、芹菜素、山萘酚、槐角苷、槲皮素、黃芩素、黃芩苷、柚皮素、柚皮苷、蘆丁共19種黃酮化合物對(duì)胃蛋白酶活性的研究，指出19種黃酮化合物對(duì)胃蛋白酶有明顯的抑制作用；秦湉等[12]報(bào)道了對(duì)鯉魚胃蛋白酶和大腸淀粉酶活性的研究，并指出二氫楊梅素對(duì)胃蛋白酶的活性有提高作用，對(duì)大腸淀粉酶有抑制作用。

本文通過建立體外胃模擬模型，進(jìn)一步考察DMY、MYR對(duì)胃蛋白酶活力的影響及量效關(guān)系，測定了DMY、MYR對(duì)胃蛋白酶活力的抑制作用，可為后期天然黃酮醇類化合物的開發(fā)應(yīng)用提供重要的參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

材料：藤茶（來源于銅仁學(xué)院藤茶種植基地）。

試劑：楊梅素（天津希恩思生化科技有限公司），二氫楊梅素（銅仁學(xué)院材料與化學(xué)工程學(xué)院應(yīng)用化學(xué)研究所），胃蛋白酶（上海源葉生物科技有限公司），血紅蛋白、酪氨酸（上海麥克林生化科技有限公司），三氯乙酸（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所），氯化鈉（天津市鼎盛鑫化工有限公司），鹽酸（成都金山化學(xué)試劑有限公司），乙醇（上海潤捷化學(xué)試劑有限公司）。

儀器：759S紫外可見分光光度計(jì)（上海棱光科技有限公司），RC-3溶出度測試儀（天津市精拓儀器科技有限公司），BSA224S分析天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器），TG20KR-D離心機(jī)（貴州科輝科學(xué)器材有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 體外胃模擬模型的建立。為了進(jìn)一步獲得科學(xué)性的體外胃模擬模型建立數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)分別以胃蛋白酶作用時(shí)間、胃環(huán)境模擬成分（NaCl溶液、鹽酸溶液）、終止劑（三氯乙酸）、血紅蛋白及胃蛋白酶為研究對(duì)象，對(duì)體外胃模擬模型建立的因素進(jìn)行討論分析。

1.2.1.1 溶液配制。0.02 mg/mL胃蛋白酶溶液，稱0.2 mg胃蛋白酶溶于10 mL稀鹽酸溶液（0.065 mol/L）；0.5 mg/mL酪氨酸溶液，稱5 mg酪氨酸溶于10 mL稀鹽酸溶液（0.065 mol/L）；1%血紅蛋白溶液，稱0.1 g血紅蛋白溶于10 mL氯化鈉溶液（0.1 mol/L），5%三氯乙酸溶液，稱0.5 g三氯乙酸溶于10 mL蒸餾水。

1.2.1.2 實(shí)驗(yàn)操作。（1）胃蛋白酶作用時(shí)間的優(yōu)化：向胃模擬反應(yīng)容器A、B、C中加入5 mL 1%血紅蛋白溶液于37 ℃保溫10 min后，加入0.02 mg/mL胃蛋白酶溶液1 mL，A、B、C攪拌反應(yīng)時(shí)間分別為10、30、60 min，最后加入5%三氯乙酸5 mL攪勻，離心取清液，使用紫外可見分光光度計(jì)在190～1 100 nm進(jìn)行全波長掃描。（2）胃環(huán)境模擬成分NaCl、鹽酸及終止劑三氯乙酸的影響分析：取0.1 mol/L氯化鈉溶液、0.065 mol/L稀鹽酸溶液、5.0%的三氯乙酸各10 mL于胃模擬反應(yīng)容器中37 ℃保溫10 min，使用紫外可見分光光度計(jì)在190～1 100 nm進(jìn)行全波長掃描。（3）鹽酸對(duì)胃蛋白酶、血紅蛋白的影響分析：取0.02 mg/mL的胃蛋白酶溶液10 mL于溶出儀中37 ℃保溫10 min，使用紫外可見分光光度計(jì)在190～1 100 nm進(jìn)行全波長掃描。實(shí)驗(yàn)組1：取5 mL 1%血紅蛋白溶液轉(zhuǎn)移至胃模擬反應(yīng)容器A中，恒溫37 ℃，保溫10 min。然后，向胃模擬反應(yīng)容器A中加入1 mL稀鹽酸（0.065 mol/L）溶液，恒溫蠕動(dòng)10 min，再向反應(yīng)器A中加入5 mL 5%三氯乙酸，攪勻，離心取清液。對(duì)照組1：取5 mL 0.5 mg/mL酪氨酸溶液分別轉(zhuǎn)移至胃模擬反應(yīng)容器B中，恒溫37℃，保溫10 min。然后，向胃模擬反應(yīng)容器B中加入1 mL稀鹽酸（0.065 mol/L）溶液，恒溫蠕動(dòng)10 min，再向反應(yīng)器B中加入5 mL 5%三氯乙酸，攪勻，離心取清液。對(duì)照品：向胃模擬反應(yīng)容器中，加入5 mL 1%血紅蛋白溶液于37 ℃保溫10 min后，加入0.5 mg/mL酪氨酸溶液1 mL，攪拌反應(yīng)10 min，最后加入5%三氯乙酸5 mL攪勻，離心取清液。供試品：向胃模擬反應(yīng)容器中加入5 mL 1%血紅蛋白溶液于37 ℃保溫10 min后，加入0.02 mg/mL胃蛋白酶溶液1 mL，攪拌反應(yīng)10 min，最后加入5%三氯乙酸5 mL攪勻，離心取清液。使用紫外可見分光光度計(jì)在190～1 100 nm進(jìn)行全波長掃描。（4）胃蛋白酶濃度的優(yōu)化：分別配制0.02、0.06、0.10、0.14、0.18、0.22 mg/mL胃蛋白酶溶液備用。對(duì)照品空白：向胃模擬反應(yīng)容器中加入5 mL 1%血紅蛋白溶液于37 ℃保溫10 min后，再向胃模擬反應(yīng)容器中加入5%三氯乙酸5 mL攪勻，最后加入0.065 mol/L鹽酸溶液1 mL，攪拌反應(yīng)10 min，離心取清液。供試品空白：向胃模擬反應(yīng)容器中加入5 mL 1%血紅蛋白溶液于37 ℃保溫10 min后，再向胃模擬反應(yīng)容器加入5%三氯乙酸5 mL攪勻，最后加入各濃度胃蛋白酶溶液1 mL，攪拌反應(yīng)10 min，離心取清液。供試品：向胃模擬反應(yīng)容器中加入5 mL 1%血紅蛋白溶液于37 ℃保溫10 min后，加入各濃度胃蛋白酶溶液1 mL，攪拌反應(yīng)10 min，最后加入5%三氯乙酸5 mL攪勻，離心取清液。對(duì)照品操作同鹽酸因素對(duì)胃蛋白酶、血紅蛋白影響分析中的對(duì)照品使用紫外-可見分光光度計(jì)在275 nm處測定吸光度值。

1.2.2 體外胃蛋白酶反應(yīng)體系的影響分析、活力評(píng)價(jià)。（1）DMY和MYR對(duì)體外胃蛋白酶反應(yīng)體系的影響分析：配制0.025 mg/mL的二氫楊梅素和同濃度的楊梅素溶液于胃模擬反應(yīng)容器中37 ℃保溫10 min，使用紫外可見分光光度計(jì)在190～1 100 nm進(jìn)行全波長掃描。（2）DMY和MYR對(duì)胃蛋白酶活力的評(píng)價(jià)：分別配制濃度為1.25、2.50、3.75、5.00、10.00、15.00、20.00、25.00 mg/mL的二氫楊梅素和同濃度的楊梅素乙醇溶液備用。供試品空白：向胃模擬反應(yīng)容器中加入5 mL 1%血紅蛋白溶液于37 ℃保溫10 min后，再向胃模擬反應(yīng)容器加入5%三氯乙酸5 mL攪勻，最后加入0.10 mg/mL胃蛋白酶溶液1 mL和10 μL不同濃度的DMY、MYR溶液，攪拌反應(yīng)10 min，離心取清液。供試品：向胃模擬反應(yīng)容器中加入5 mL 1%血紅蛋白溶液于37 ℃保溫10 min后，加入胃蛋白酶溶液1 mL和10 μL不同濃度的DMY、MYR溶液，攪拌反應(yīng)10 min，最后加入5%三氯乙酸5 mL攪勻，離心取清液。對(duì)照品空白操作同胃蛋白酶濃度因素優(yōu)化中的對(duì)照品空白、對(duì)照品操作同鹽酸因素對(duì)胃蛋白酶、血紅蛋白影響分析中的對(duì)照品。使用紫外-可見分光光度計(jì)在275 nm處測定吸光度值。胃蛋白酶活性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)如下：

胃蛋白酶活力值=（Ai×WS×n）/（AS×W×10×181.19） （1）

式中，Ai為供試品平均吸光度（=供試品-供試品空白）；WS為每1 mL酪氨酸溶液中酪氨酸的量，ug；AS為對(duì)照品平均吸光度（=對(duì)照品-對(duì)照品空白）；W為胃蛋白酶的取樣量，g；n為供試品稀釋倍數(shù)。

抑制率（%）=（空白胃蛋白酶活力值-含DMY/MYR胃蛋白酶活力值）/空白胃蛋白酶活力值 （2）

2 結(jié)果與分析

2.1 體外胃模擬模型建立

2.1.1 體外胃模擬模型建立的影響因素分析。（1）胃蛋白酶作用時(shí)間的選擇。根據(jù)1.2.1.1實(shí)驗(yàn)操作（1），結(jié)果見圖2。由圖2可知，隨胃蛋白酶作用時(shí)間的延長，在紫外吸收275 nm處，均有不同程度的吸收響應(yīng)。其中，相比作用時(shí)間10 min與30 min的吸收響應(yīng)值而言，兩者吸收響應(yīng)值相近。然而，對(duì)比作用時(shí)間60 min的吸收響應(yīng)值，其吸收響應(yīng)值相對(duì)較大，說明該因素對(duì)體外胃模擬模型的建立有一定的影響，其原因可能為反應(yīng)體系中的酸性會(huì)造成血紅蛋白的分解，從而導(dǎo)致吸光度響應(yīng)值增大。因此，選擇胃蛋白酶的最佳作用時(shí)間10 min為因素。

（2）胃環(huán)境模擬成分NaCl、鹽酸及終止劑三氯乙酸的影響分析。根據(jù)1.2.1.2的操作步驟（2）進(jìn)行具體實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見圖3。由圖3可知，NaCl溶液作為血紅蛋白的溶劑，鹽酸溶液分別作為胃蛋白酶和酪氨酸的溶劑，在紫外吸收275 nm處，可觀察到NaCl和鹽酸均無明顯吸收峰；另外，還考察終止劑三氯乙酸（可與血紅蛋白結(jié)合，沉淀血紅蛋白，終止反應(yīng)）對(duì)模型體系的影響，在275 nm處也未發(fā)現(xiàn)明顯的吸收峰。由此可見，胃環(huán)境模擬成分NaCl、鹽酸及終止劑三氯乙酸在體外胃模擬模型建立試驗(yàn)均無影響，均可忽略不計(jì)。

（3）鹽酸對(duì)胃蛋白酶、血紅蛋白的影響分析。根據(jù)1.2.1.2操作步驟（3）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見圖4。由圖4可知，在吸收波長為275 nm處，可明顯地觀察到鹽酸對(duì)胃蛋白酶在胃模擬環(huán)境中位產(chǎn)生相應(yīng)的吸收響應(yīng)，從而說明鹽酸這一因素對(duì)胃蛋白酶無分解作用；另外，在鹽酸對(duì)血紅蛋白的影響實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組1在275 nm處有特征吸收峰，和對(duì)照組1中酪氨酸出峰波長接近，且這2組出峰波長均與供試品和對(duì)照品的出峰波長接近。由此說明，鹽酸對(duì)血紅蛋白有一定影響，可使血紅蛋白水解產(chǎn)生氨基酸。因此，在整個(gè)反應(yīng)體系中應(yīng)考慮鹽酸對(duì)血紅蛋白產(chǎn)生的影響。

（4）胃蛋白酶濃度的選擇。根據(jù)1.2.1.2操作步驟（4）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見圖5。由圖5可知，在相同1%血紅蛋白-胃蛋白酶的反應(yīng)體系中，隨著胃蛋白酶濃度的增加，單位酶活力有所增加，當(dāng)其濃度增加到0.1 mg/mL時(shí)胃蛋白酶活力值達(dá)到最大，繼續(xù)增加胃蛋白酶濃度活力值逐漸減小，這可能與供試品空白的吸光度值有關(guān)，供試品空白中提前加入三氯乙酸的目的是終止反應(yīng)，但出現(xiàn)胃蛋白酶濃度增加活力值降低的現(xiàn)象，可能是因?yàn)榉磻?yīng)中三氯乙酸未將血紅蛋白完全沉淀，從而導(dǎo)致胃蛋白酶濃度越高，供試品空白吸光度越高，活力值減小的現(xiàn)象。根據(jù)2015版《中國藥典》第二部規(guī)定，按干燥品計(jì)算，每1 g中含胃蛋白酶活力不得少于3 800單位。在上述不同胃蛋白酶濃度反應(yīng)體系中，只有胃蛋白酶濃度0.02 mg/mL時(shí)活力值未達(dá)到3 800，且當(dāng)濃度為0.10 mg/mL時(shí)，酶活力值最大，之后隨濃度增加而降低。因此，0.10 mg/mL作為體外胃模擬實(shí)驗(yàn)胃蛋白酶的最佳反應(yīng)濃度。

2.1.2 體外胃模擬模型建立的影響因素確定。綜合以上影響因素分析，構(gòu)建體外胃模擬模型的影響因素，結(jié)果見圖6。由圖6可知，構(gòu)建體外胃模擬模型因素可確定為：胃蛋白酶作用時(shí)間為10 min、胃環(huán)境模擬成分（0.1 mol/LNaCl溶液和0.065 mol/L鹽酸溶液）、5 mL血紅蛋白溶液（1%）、1 mL胃蛋白酶（0.10 mg/mL）。

2.2 體外胃蛋白酶反應(yīng)體系的影響分析及對(duì)胃蛋白酶活力評(píng)價(jià)

2.2.1 DMY、MYR對(duì)體外胃蛋白酶反應(yīng)體系的影響分析。根據(jù)1.2.2操作步驟（1）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見圖7。由圖7可知，DMY特征吸收峰在290 nm左右，MYR特征吸收峰在330 nm左右，而本實(shí)驗(yàn)用于測定反應(yīng)中產(chǎn)生酪氨酸的波長為275 nm，它們之間的吸收峰未出現(xiàn)重合和疊加現(xiàn)象，且供試品的吸收峰雖然較弱，但依然和對(duì)照品吻合出峰，波長為275 nm。因此，在考察DMY、MYR對(duì)胃蛋白酶活性的影響中，檢測酪氨酸生成時(shí)，并不會(huì)對(duì)反應(yīng)生成的酪氨酸的吸光度響應(yīng)值造成誤差影響。

2.2.2 DMY、MYR對(duì)胃蛋白酶活力評(píng)價(jià)及作用機(jī)制初步分析。（1）DMY、MYR對(duì)胃蛋白酶活力評(píng)價(jià)。根據(jù)1.2.2的操作步驟（1）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見圖8和圖9。由圖8和圖9可以得出，二氫楊梅素和楊梅素對(duì)胃蛋白酶活性均有抑制作用，當(dāng)二氫楊梅素用量為0.05 mg時(shí)，對(duì)0.1 mg胃蛋白酶有最大抑制作用，胃蛋白酶活力值（u）為695.680 9，抑制率為93.46%；楊梅素用量為0.15 mg時(shí)，對(duì)0.1 mg胃蛋白酶有最大抑制作用，胃蛋白酶活力值（u）為2 260.962 9，抑制率為78.74%。

（2）DMY、MYR分子構(gòu)型對(duì)胃蛋白酶活性影響機(jī)制初步分析。由圖10可知，楊梅素和二氫楊梅素含有相同的羥基數(shù)目，且在反應(yīng)中除2種黃酮本身的不同外，其他所處的條件都相同，唯一的不同點(diǎn)是楊梅素與二氫楊梅素的母核結(jié)構(gòu)不同。楊梅素為平面結(jié)構(gòu)，排列較為緊密，分子間引力較大，不利于外源分子進(jìn)入，導(dǎo)致水溶性低，不利于和蛋白質(zhì)搶奪酶的結(jié)合位點(diǎn)；二氫楊梅素具有空間結(jié)構(gòu)，系非平面分子，分子間引力降低，有利于外源分子進(jìn)入導(dǎo)致水溶性優(yōu)于楊梅素，有利于和蛋白質(zhì)搶奪酶的結(jié)合位點(diǎn)。又由DMY、MYR對(duì)胃蛋白酶活力影響評(píng)價(jià)可知，在相同劑量黃酮參與的胃蛋白酶反應(yīng)中，二氫楊梅素的抑制率比楊梅素抑制率大，而且在含有相同羥基數(shù)目的情況下，母核結(jié)構(gòu)為二氫黃酮的活性優(yōu)于黃酮活性。因此，二氫楊梅素對(duì)胃蛋白酶活性的抑制率大于楊梅素。這一結(jié)果與梁會(huì)麗[11報(bào)道的在含有相同羥基的情況下，母核為二氫黃酮的活性比黃酮和異黃酮活性要強(qiáng)]結(jié)論相一致。

3 結(jié)論

本研究主要探討了藤茶中二氫楊梅素、楊梅素對(duì)胃蛋白酶活性的影響，通過探索對(duì)體外胃蛋白酶模型建立的影響因素確定建立條件，選用胃蛋白酶—血紅蛋白為反應(yīng)體系，在一定條件下分析胃蛋白酶作用時(shí)間、胃環(huán)境模擬成分（NaCl溶液、鹽酸溶液）、終止劑三氯乙酸、血紅蛋白及胃蛋白酶活性的影響因素及二氫楊梅素和楊梅素對(duì)胃蛋白酶活性的影響，結(jié)果表明：胃蛋白酶作用時(shí)間為10 min、胃環(huán)境模擬成分（0.1 mol/LNaCl溶液和0.065 mol/L鹽酸溶液）、5 mL血紅蛋白溶液（1%）、1 mL胃蛋白酶（0.10 mg/mL）。另外，以不同濃度的二氫楊梅素、楊梅素考察對(duì)胃蛋白酶活性的影響。結(jié)果為：二氫楊梅素用量為0.05 mg時(shí)對(duì)0.1 mg胃蛋白酶有最大抑制作用，空白組酶活力（u）為10 632.322 9，實(shí)驗(yàn)組酶活力（u）為695.680 9，抑制率為93.46%；楊梅素用量為0.15 mg時(shí)對(duì)0.1 mg蛋白酶有最大抑制作用，空白組酶活力（u）為10 632.322 9，實(shí)驗(yàn)組酶活力（u）為2 260.962 9，抑制率為78.74%。由此可知，二氫楊梅素和楊梅素對(duì)胃蛋白酶都有明顯的抑制作用，且在同劑量的黃酮參與反應(yīng)中，二氫楊梅素的抑制率比楊梅素的大，其原因可能是在含有羥基數(shù)目相同的情況下，母核結(jié)構(gòu)為二氫黃酮的活性優(yōu)于黃酮活性，且二氫楊梅素對(duì)胃蛋白酶活性的抑制作用大于楊梅素。本文的研究將在臨床上對(duì)胃腸道疾病診斷具有重大意義，可為研究臨床應(yīng)用中黃酮類化合物引起消化不良反應(yīng)奠定一定的基礎(chǔ)，同時(shí)也為黃酮類化合物與胃蛋白酶相互作用機(jī)理研究提供科學(xué)依據(jù)，并為黃酮類作為功能性食品的開發(fā)和應(yīng)用起指導(dǎo)作用。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 鄭道君，劉國民.中國藤茶資源的研發(fā)概況[J].農(nóng)業(yè)網(wǎng)絡(luò)信息，2006（6）：136-142.

[2] 孫培冬，王小洪.氫楊梅素對(duì)酪氨酸酶抑制作用研究[J].化學(xué)研究與應(yīng)用，2013，25（6）：871-874.

[3] 孔艷月.藤茶中活性成分的改性制備與分子印跡分離純化研究[D].長沙：中南大學(xué)，2014.

[4] 何桂霞，楊偉朋，裴剛，等.二氫楊梅素抗脂質(zhì)過氧化作用的研究[J].中國中藥雜志，2003，28（12）：1188-1190.

[5] 楊書珍，張友勝，寧正祥，等.二氫楊梅素對(duì)幾種食品常見菌的抑制效果[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2003，15（1）：40-42.

[6] 潘人琦，郁建平.二氫楊梅素解酒作用的研究[J].山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào)，2012，31（3）：247-249.

[7] MATSUMOTO T，TAHARA S. Ampelopsin，a major antifungal constituent from salix sachalinensis and its methyl ethers.Nippon nogeikagakukaishi [J]. Joumal of the Japan Society for Bioseience Biotechnology and Agrochemistry， 2001，75（6）：659-667.

[8] 覃潔萍，鐘正賢，周桂芬，等.雙氫楊梅樹皮素降血糖的試驗(yàn)研究[J].中國中藥雜志，2001，18（5）：351-353.

[9] 張友勝，寧正祥，楊書珍，等.顯齒蛇葡萄蛇二氫楊梅樹皮素的抗氧化作用及其機(jī)制[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2003，389（4）：241-244.

[10] 王丹，郁建平，劉灝.藤茶二氫楊梅素抗氧化活性研究[J].山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào)，2013，32（3）：243-246.

[11] 梁會(huì)麗.黃酮類化合物與胃蛋白酶的相互作用及其對(duì)酶活性影響的研究[D].鄭州：鄭州大學(xué)，2014.

[12] 秦湉，李芳香，逯鳳肖，等.二氫楊梅素對(duì)鯉魚生長及某些生理指標(biāo)的影響[J].山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào)，2016，35（2）：91-94.

（責(zé)編：張宏民）

基金項(xiàng)目 貴州省教育廳創(chuàng)新群體重大研究項(xiàng)目（黔教合KY字[2018]033）；貴州省千層次創(chuàng)新型人才（2017-2015-015）。

作者簡介 楊璐（1998—），女，貴州銅仁人。研究方向：天然產(chǎn)物提取及應(yīng)用。