高效液相色譜法測(cè)定菠菜中阿維菌素殘留量

李 爽

（朝陽(yáng)市檢驗(yàn)檢測(cè)中心，遼寧朝陽(yáng) 122000）

阿維菌素具有強(qiáng)烈的殺螨、殺蟲(chóng)、殺線蟲(chóng)的防蟲(chóng)害作用[1]，在我國(guó)的農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)防治體系中具有非常重要的地位，被廣泛應(yīng)用于水果、蔬菜等蟲(chóng)螨的預(yù)防與治療中[2]，具有非常好的防蟲(chóng)效果，但食品中阿維菌素的殘留會(huì)對(duì)人體的神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)臟等多處產(chǎn)生損傷[3]?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）中限定了食品中阿維菌素的最大殘留量，因此食品中阿維菌素的殘留量的測(cè)定非常重要。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

菠菜粉中阿維菌素含量檢測(cè)內(nèi)部質(zhì)控樣品，大連中食國(guó)實(shí)檢測(cè)技術(shù)有限公司，指定值0.398 mg·kg-1標(biāo)準(zhǔn)差0.003 5 mg·kg-1；鮮菠菜，購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)；阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（1 000 μg·mL-1），批號(hào)S069003，國(guó)產(chǎn)；丙酮（色譜純，天津科密歐公司）、甲醇（色譜純，天津科密歐公司）；SPE C18固相萃取凈化小柱（規(guī)格：60 mg/3 mL，Waters，使用前用5 mL 甲醇和5 mL 水活化）；ODS C18固相萃取凈化小柱（規(guī)格：100 mg/6 mL，Waters，使用前用5 mL 甲醇和5 mL 水活化）。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀（紫外檢測(cè)器）Waters E2695-2489；AB204-N 型電子分析天平，上海梅特勒-托利多；N-EVAP 112 氮吹儀，美國(guó)Organomafion 公司；GTCS-2018 恒溫水浴振蕩器，常州金壇良友儀器有限公司；高速低溫冷凍離心機(jī)，德國(guó)Sigrna 公司；MS-1 微型旋渦混合器，德國(guó)依卡公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；過(guò)濾器，濾膜孔徑0.45 μm；微量移液器1（規(guī)格100 ～1 000 μL，Thermo）；微量移液器2（規(guī)格10 ～100 μL，Thermo）；微量移液器3（規(guī)格5 ～50 μL，Thermo）。

1.3 方法

1.3.1 高效液相色譜條件

采用高效液相色譜法[4-7]，ODS-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇（A）∶水（B）為（85 ∶15，V/V）；流速：1.0 mL·min-1；波長(zhǎng)：245 nm；柱溫：40[8]；進(jìn)樣量：20 μL。阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的高效液相色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的高效液相色譜圖

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的配制

（1）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（20 μg·mL-1）。使用微量移液器量取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.5 mL 于25 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制。使用微量移液器精確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（20 μg·mL-1）0.05 mL、0.10 mL、0.25 mL、2.50 mL 和5.00 mL 分別置于10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。配制成濃度為0.1 μg·mL-1、0.2 μg·mL-1、0.5 μg·mL-1、5.0 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1和20.0 μg·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3.3 菠菜粉中阿維菌素的提取

稱取菠菜粉內(nèi)部質(zhì)控樣品2 g（精確至0.01 g），置于100 mL 具塞錐形瓶，加入18 mL 水（菠菜粉∶水=1 ∶9 相當(dāng)于20 g 菠菜鮮樣），超聲波清洗器振蕩溶解制成鮮樣，加入50 mL 丙酮[9]，于振蕩器上振蕩0.5 h，用布氏漏斗抽濾[10]，分別用20 mL 丙酮洗滌兩次錐形瓶及殘?jiān)?。合并丙酮提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀設(shè)置水浴40 減壓濃縮至約2 mL。

1.3.4 提取液凈化

將1.3.3 項(xiàng)下濃縮后的提取液完全轉(zhuǎn)入預(yù)處理后的C18固相萃取柱[11]，再用5 mL 三級(jí)水淋洗，棄去淋洗液。用5 mL 甲醇洗脫解吸阿維菌素，收集解吸洗脫液，40 氮?dú)鈨x吹至近干。準(zhǔn)確加入1.0 mL 甲醇溶解殘?jiān)?，?.45 μm 過(guò)濾器過(guò)濾，濾液待液相色譜上機(jī)測(cè)定。

1.3.5 空白樣品

將鮮菠菜粉碎制樣，稱取20 g（精確至0.01g），置于100 mL 具塞錐形瓶，超聲波清洗器振蕩，加入丙酮溶液50 mL，按1.3.3 項(xiàng)下方法抽濾提取，按1.3.4項(xiàng)下方法凈化，制成空白樣品的待測(cè)液。

1.3.6 測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器平衡穩(wěn)定后，標(biāo)樣溶液連續(xù)進(jìn)樣5 針，分別計(jì)算各針響應(yīng)值，待相鄰兩針變化小于1%，分組別按順序上機(jī)進(jìn)行液相色譜分析測(cè)定。

1.3.7 結(jié)果計(jì)算

質(zhì)控樣中阿維菌素的含量計(jì)算公式為

式中：X為質(zhì)控樣中阿維菌素的含量，μg·g-1；ρ為樣品中阿維菌素濃度，mg·L-1；V為試樣最終定容體積，mL；m為樣品質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與分析

2.1 固相萃取柱的優(yōu)化篩選

本實(shí)驗(yàn)對(duì)比了不同固相萃取柱對(duì)阿維菌素的凈化效果[12]，實(shí)驗(yàn)共分4 組，分別精密稱取2 g 菠菜粉置于4 個(gè)100 mL 具塞錐形瓶，按1.3.3 項(xiàng)下方法提取，4 組實(shí)驗(yàn)凈化時(shí)分別選擇ODS C18（200 mg）、SPE C18（500 mg）、SPE C18（200 mg）、SPE C18（60 mg）4 種不同的固相萃取小柱按1.3.4 項(xiàng)下凈化方法進(jìn)行凈化，凈化后樣品經(jīng)液相色譜測(cè)定。結(jié)果表明，選用SPE C18（60 mg）固相萃取柱凈化的組別阿維菌素回收率最高（91.3%），凈化效果最好。

2.2 線性范圍

配 制 質(zhì) 量 濃 度 為0.1 ～20.0 μg·mL-1的 標(biāo) 準(zhǔn)系列溶液，以阿維菌素質(zhì)量濃度（x，ng·mL-1）為橫坐標(biāo)，阿維菌素峰面積響應(yīng)值（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r2=0.992 4，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=-3 687.999x+20 605.22。

2.3 回收率實(shí)驗(yàn)

本實(shí)驗(yàn)分為6 組，分別精密稱取6 份菠菜粉內(nèi)部質(zhì)控樣1.00 g、1.05 g、2.03 g、2.01 g、5.02 g和5.06 g，（精確至0.01 g），相當(dāng)于各組阿維菌素的含量分別為0.398 μg、0.418 μg、0.808 μg、0.808 μg、1.998 μg和2.014 μg，均按1.3.3 項(xiàng)下方法提取，選用SPE C18（60 mg）固相萃取柱，按1.3.4 項(xiàng)下凈化，經(jīng)高效液相色譜儀測(cè)定各組濃度，按1.3.7 項(xiàng)下公式計(jì)算出各組阿維菌素實(shí)測(cè)值分別為0.362 μg、0.378 μg、0.728 μg、0.724 μg、1.861 μg 和1.873 μg， 空 白 樣品阿維菌素含量為0 μg，回收率分別為90.95%、90.43%、90.10%、89.60%、93.14%和93.00%，平均回收率為91.20%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.65%。

3 結(jié)論與討論

農(nóng)藥殘留對(duì)人體的各組織和臟器都產(chǎn)生較大損害，阿維菌素作為除螨劑的主要農(nóng)藥之一，被廣泛被應(yīng)用于果蔬種植過(guò)程的蟲(chóng)螨防治[13]，過(guò)量使用農(nóng)藥會(huì)造成其在食物中的殘留，進(jìn)入人體后其在體內(nèi)殘留時(shí)間長(zhǎng)達(dá)30 d[14]，因此阿維菌素的殘留量的測(cè)定至關(guān)重要。本研究采用丙酮振蕩萃取菠菜粉中的阿維菌素，比對(duì)篩選最優(yōu)固相萃取柱確定凈化方法，提高了阿維菌素經(jīng)固相萃取處理后的回收率，并同時(shí)起到了很好的凈化作用，本方法采用HPLC（紫外檢測(cè)器）測(cè)定菠菜粉中阿維菌素的農(nóng)藥殘留量，方法簡(jiǎn)便可靠，可有效地減少雜質(zhì)峰的干擾，提高蔬菜中阿維菌素參數(shù)定性及定量的準(zhǔn)確性，能夠滿足果蔬中阿維菌素農(nóng)藥殘留的限量檢測(cè)要求，為制定食品中阿維菌素殘留量的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)提供了良好依據(jù)。