水產(chǎn)品中五氯苯酚及其鈉鹽檢測技術(shù)研究進展

何正和，陸井蓮，姜穎慧，魏云計，朱臻怡

（淮安海關(guān)綜合技術(shù)服務(wù)中心，江蘇淮安 223001）

隨著社會的發(fā)展，水產(chǎn)品在人們飲食中的占比逐漸增加。早期五氯苯酚及其鈉鹽作為藥物被廣泛用于除雜草和滅螺[1]，但由于其易溶于水、不易降解，在動植物體內(nèi)富集[2]。微量五氯苯酚及其鈉鹽即可對人體神經(jīng)系統(tǒng)、肝、腎造成損傷，同時影響內(nèi)分泌系統(tǒng)，因此水產(chǎn)品中五氯苯酚及其鈉鹽的檢測十分必要。本文介紹了近些年水產(chǎn)品中五氯苯酚及其鈉鹽的常用檢測方法并對其進行了展望。

1 五氯苯酚及其鈉鹽概述

五氯苯酚（Pentachlorophenol，PCP）是一種酚類化合物，具有很強的毒性，因苯環(huán)上的5 個氫被氯取代使其具有較強的酸性。五氯苯酚及其鈉鹽在酸性條件下以五氯苯酚形式穩(wěn)定存在，在堿性條件下能夠以五氯酚鹽的形式穩(wěn)定存在。五氯苯酚及其鈉鹽易溶于水，被廣泛用于除雜草和滅螺，由于其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定不易被降解的性質(zhì)使其容易在動植物體內(nèi)富集，對動物和人的神經(jīng)系統(tǒng)、相關(guān)組織造成損傷。

五氯苯酚及其鈉鹽在被廣泛應(yīng)用的同時，所造成的環(huán)境問題也日益受到人們的高度重視。20 世紀末，五氯酚及其鈉鹽被國際癌癥研究機構(gòu)列為致癌物[3]。隨后，許多國家逐漸將其列為禁用藥物。2002年，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布的文件《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》及《無公害食品 漁用藥物使用準則》（NY 5071—2002）中明確對該藥物進行了禁用規(guī)定。2009 年我國將五氯酚及其鈉鹽列為水產(chǎn)品監(jiān)督抽檢的主要參數(shù)之一。由此，水產(chǎn)品中五氯酚及其鈉鹽的準確快速測定顯得就十分有意義。

2 五氯苯酚及其鈉鹽的檢測原理

針對五氯苯酚及其鈉鹽的檢測大致分為兩種，一種是間接測定法，另一種是直接測定法。其中，間接測定法比較常見，運用較為廣泛。該方法是將水產(chǎn)品中的五氯苯酚及其鈉鹽酸化后全部轉(zhuǎn)化為五氯苯酚，五氯苯酚與相應(yīng)的酸酐結(jié)合生成相應(yīng)的五氯苯酚酯。五氯苯酚酯經(jīng)過不同的儀器進行檢測，從而計算出五氯苯酚及其鈉鹽的含量。直接測定法在實際中運用較少，是將目標化合物以五氯苯酚或五氯酚鈉的形式直接采用儀器檢測。這兩個方法各有優(yōu)缺點。間接測定法多一步衍生化反應(yīng)，前處理相對復(fù)雜，且衍生化反應(yīng)會對化合物造成一定的損失，但是衍生后的產(chǎn)物在儀器上響應(yīng)較好，靈敏度較高，所以應(yīng)用較為廣泛。直接測定法的前處理簡單、損失少，但儀器的響應(yīng)較低，因此應(yīng)用較少?；诖耍疚膶Σ煌瑑x器方法對水產(chǎn)品中五氯苯酚及其鈉鹽的檢測進行了概述。

3 水產(chǎn)品中五氯苯酚及其鈉鹽的檢測方法

3.1 氣相色譜法

氣相色譜是測定水產(chǎn)品中五氯苯酚及其鈉鹽最為常用的方法，該方法大多數(shù)是將五氯苯酚及其鈉鹽酸化后經(jīng)過衍生化試劑轉(zhuǎn)化為五氯苯酚酯，最后經(jīng)過氣相色譜進行檢測。例如，研究者們將水產(chǎn)品中的五氯苯酚及其鈉鹽在酸性條件下轉(zhuǎn)化為五氯苯酚，再用正己烷萃取后經(jīng)過乙酸酐衍生為五氯苯酚乙酸酯，最后通過配有電子捕獲檢測器的氣相色譜儀進行檢測[4-7]。此方法的應(yīng)用較為成熟，被廣泛用于水產(chǎn)品中五氯苯酚及其鈉鹽殘留量的測定，同時該方法也被制定了水產(chǎn)檢測的標準[8]。張世娟等[9]采用正己烷提取，濃硫酸凈化等不同前處理方式降低乳化現(xiàn)象后，將樣品經(jīng)過衍生化后用氣相色譜儀進行檢測。梁倩、端禮欽等[10-11]用氣相色譜內(nèi)標定量法檢測水產(chǎn)品中的五氯苯酚及其鈉鹽含量，該方法選取2,4,6-三溴苯酚作為內(nèi)標物。采用該內(nèi)標法對水產(chǎn)品中的五氯苯酚及其鈉鹽含量進行檢測可以降低乳化、衍生化等步驟對待測物造成的損失，可增強方法的穩(wěn)定性和準確性。池締萍[12]運用固相微萃取超聲輔助技術(shù)聯(lián)合氣相色譜法直接對水產(chǎn)品中的五氯苯酚及其鈉鹽含量進行檢測，該方法無需進行衍生化操作，具有簡便快速的特點。

3.2 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法

采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測水產(chǎn)品中五氯酚及其鈉鹽含量的實際應(yīng)用較少，前處理過程和大多數(shù)氣相色譜儀法測定水產(chǎn)品中五氯酚及其鈉鹽含量的前處理方法相差不大，即將樣品中的待測物經(jīng)過酸化，用乙酸酐等衍生化試劑進行衍生化后經(jīng)氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀測定[13-16]。朱曉華等[13]將樣品中的五氯苯酚及其鈉鹽經(jīng)過硫酸酸化，HLB 固相萃取小柱凈化，在碳酸鉀溶液中和乙酸酐生成五氯苯乙酯。含五氯苯乙酯的提取液經(jīng)過TR-5MS 毛細管色譜柱進行氣相色譜分離，采用負化學(xué)電離源和選擇性反應(yīng)監(jiān)測模式進行質(zhì)譜分析，內(nèi)標法定量。該方法用于水產(chǎn)品中五氯酚及鈉鹽含量的測定，檢出限為1.0 μg·kg-1。陳紅燕等[14]同樣通過酸化衍生化過程，將五氯苯酚及其鈉鹽的衍生物用氣相色譜-質(zhì)譜測定。該方法的檢出限為4.0 μg·kg-1，相對標準偏差均小于10%，能夠很好地排除水產(chǎn)品五氯苯酚的假陽性問題。史玉坤等[15]將水產(chǎn)品中的五氯苯酚及其鈉鹽酸化衍生化后的五氯苯乙酯經(jīng)過Thermo TG-SQC色譜柱（15 m×0.25 mm，0.25μm）分離，氣相色譜-質(zhì)譜測定，方法的測定下限（S/N=10）為1.04 ng·g-1。符昌雨等[16]將待檢水產(chǎn)品中的10 種含氯苯酚經(jīng)過氫氧化鉀溶液超聲提取，乙酸酐衍生，然后正己烷溶液提取，采用氣相色譜-質(zhì)譜儀進行定量檢測。該方法的定量限為2.5 μg·kg-1，可用于水產(chǎn)品中含氯苯酚及其鹽類的日常監(jiān)測。總體來說，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測水產(chǎn)品中五氯酚及其鈉鹽含量，要通過衍生化后進行測定，前處理要求較高。

3.3 液相色譜法

液相色譜法測定水產(chǎn)品中五氯酚及其鈉鹽的研究較少。劉麗等[17]運用超高效液相色譜法測定了水產(chǎn)品中的酚類物質(zhì)。該方法采用GX-271 ASPEC 固相萃取小柱進行分離和富集目標化合物，而后經(jīng)過甲醇和乙酸的混合溶液進行梯度洗脫，最后在柱溫30 ，進樣量5 μL，流速0.6 mL·min-1條件下進行檢測。李昌亮[18]運用同樣方法成功對水產(chǎn)品中酚類物質(zhì)進行了定量檢測。超高效液相色譜法能夠用于水產(chǎn)品酚類物質(zhì)的測定，該方法不同于大多數(shù)氣相和氣質(zhì)聯(lián)用法測定衍生后的化合物，而是直接對分離富集后的酚類化合物進行測定。雖然該方法的前處理較為簡單，不需要經(jīng)過衍生化操作，但超高效液相色譜進行酚類化合物的測定中，針對五氯酚及其鈉鹽的含量檢測占酚類化合物的60%以上。目前還沒有采用超高效液相色譜專門針對水產(chǎn)品中五氯苯酚及其鈉鹽進行測定的研究 。

3.4 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定水產(chǎn)品中五氯酚及其鈉鹽的運用比較成熟。2016 年，國家發(fā)布了《食品安全國家標準 動物源性食品中五氯酚殘留量的測定液相色譜- 質(zhì) 譜法》（GB 23200.92—2016）[19]，該標準中采用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法直接對水產(chǎn)品中的五氯酚進行測定，不同于大多數(shù)氣相和氣質(zhì)聯(lián)用法測定衍生后的化合物。李詩言等[20]對高效液相色譜儀串聯(lián)質(zhì)譜法測定水產(chǎn)品中五氯酚及其鈉鹽含量的方法進行了優(yōu)化。優(yōu)化后的前處理是將樣品經(jīng)過有機溶劑萃取后進入大粒徑的陰離子交換小柱富集，凈化濃縮。結(jié)果表明，該方法在不同水產(chǎn)品基質(zhì)中的定量限為0.5 μg·kg-1，基質(zhì)加標回收率為92.4%～102.0%，相對標準偏差為3.21%～9.15%。與標準方法相比，優(yōu)化后的方法能夠減少前處理所需時間，解決了蟹類水產(chǎn)品樣品回收率偏低的問題。

4 結(jié)語

隨著水產(chǎn)品在人們食物中占比的增加，水產(chǎn)品的質(zhì)量越來越備受重視。五氯苯酚及其鈉鹽作為水產(chǎn)品中的禁用藥物，將繼續(xù)被列為監(jiān)督抽檢必檢項目之一?？焖儆行У貙λa(chǎn)品中五氯苯酚及其鈉鹽進行測定，將會是一直被研究的課題。衍生化反應(yīng)的間接法所得產(chǎn)物的響應(yīng)雖然較高，但是有些反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率不高且前處理較為復(fù)雜，從實際操作來看，由于實驗室條件的不同，有些檢測實驗室達不到標準或者相關(guān)文獻的檢測限量。直接測定法更能反映出樣品中該化合物含量的真實性，具有更好的研究前景。同時，通過調(diào)整儀器的檢測器等部件增加其響應(yīng)的程度也是研究的一個方面。