植物油中黃曲霉毒素B1均勻性和穩(wěn)定性分析

陳姍姍，李婧，李超，吳坤，劉李婷

陜西省產(chǎn)品質量監(jiān)督檢驗研究院農(nóng)副食品所（西安 710048）

黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）是二氫呋喃氧雜萘鄰酮的衍生物，含有一個雙呋喃環(huán)和一個氧雜萘鄰酮（香豆素）。AFB1是已知的化學物質中致癌性最強的一種。AFB1對包括人和若干動物具有強烈的毒性，其毒性作用主要是對肝臟的損害。在天然食物中以AFB1在各種黃曲霉毒素中最為多見，危害性也最強，國家質檢總局規(guī)定AFB1是大部分食品的必檢項目之一[7]。其中，堅果類食品與植物油類食品檢出率最高，試驗通過植物油在不同周期內產(chǎn)生的AFB1含量進行穩(wěn)定性試驗測試，從而得到AFB1在一定周期內的穩(wěn)定性[1]。

1 材料與方法

采用GB 5009.22—2016《食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》[8]第三法 高效液相色譜-柱后衍生法。

樣品用乙腈和水超聲提取后，稀釋，稀釋液過免疫親和柱，收集洗脫液經(jīng)氮吹流動相定容，上機測定。均勻性試驗：分別測定10組A、B、C（A、B、C為三個不同濃度的樣品）的平行樣中的AFB1。穩(wěn)定性試驗：在均勻性試驗后，分3次間隔5～7 d后測定A、B、C各10個樣中的AFB1含量。

1.1 材料與試劑

乙腈、水、吐溫20、甲醇。

1.2 儀器與設備

高效液相色譜儀，日本島津，型號LC-20AD，配有熒光檢測器、分析天平、光化學衍生器、全自動固相萃取儀[5]、氮吹儀。

1.3 前處理方法

稱取5 g試樣于50 mL離心管中，加入20 mL乙腈-水溶液（84+16，V/V），渦旋混勻，置于超聲波中20 min，在6 000 r/min下離心10 min，取上清液備用。準確移取4 mL上清液，加入46 mL的PBS，混勻過免疫親和柱[6]。免疫親和柱內的液體放棄后，將上述樣液過免疫親和柱，調節(jié)下滴速度，控制樣液以待樣液滴完后，加入20 mL水每次10 mL，以穩(wěn)定流速淋洗免疫親和柱。待水滴完后，抽干親和柱。在親和柱下部放置10 mL刻度試管，用2 mL甲醇洗脫親和柱，控制1～3 mL/min的速度下滴，再抽干親和柱，收集全部洗脫液至試管中。在50 ℃下用氮氣緩緩地將洗脫液吹至近干，用初始流動相定容至1.0 mL，渦旋30 s溶解殘留物，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，收集濾液于進樣瓶中以備進樣，同時做空白試驗。同時加質控試驗。

1.4 數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計

對A、B、C這3組植物油中AFB1含量進行均勻性評價、穩(wěn)定性評價。對采用GB 5009.22—2016[4]中的第一法、第二法與第三法的結果進行方法間比對。

2 樣品均勻性及穩(wěn)定性檢驗

2.1 均勻性檢驗

按照CNAS-GL003：2018《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》[2]的規(guī)定，采用單因子方差分析法進行樣品均勻性檢驗。從制備好的A、B、C的3個濃度水平樣品中隨機抽取10份樣品用于均勻性檢驗，每個樣品重復測定2次。在短時間內由同一測試人員，使用GB 5009.22—2016[9]的測試方法、相同測試條件對樣品進行項目的檢測。樣品均勻性試驗采用單因子方差統(tǒng)計分析進行評定，只有當樣品中檢測含量的F值小于F臨界值（F0.05(9,10)=3.02）時，表明制備樣品均勻。樣品均勻性檢測數(shù)據(jù)見表1，方差分析見表2。

2.2 穩(wěn)定性檢驗

盲樣考核參加實驗室均在省內，在此過程中，不同地方氣溫差異不大，盲樣考核樣品采用領樣形式，1 d內可到達各參加實驗室，樣品在傳遞過程中常溫保存。

模擬樣品傳遞過程中的條件，在試驗期間的不同時間間隔，抽取10個樣本、每個樣本重復測定2次，檢驗方法、檢測人員、儀器、實驗室條件與均勻性檢驗相同。穩(wěn)定性試驗持續(xù)時間為21 d，測定時間間隔按先密后疏的原則設計，共分為3個間隔。樣品分別于制樣后天進行檢測。以均勻性試驗所得結果為參比數(shù)據(jù)，采用t檢驗方法進行穩(wěn)定性檢驗。當t值小于tα（n1+n2-2）時，則表明2個平均值之間無顯著性差異，即制備樣品穩(wěn)定。樣品穩(wěn)定性性檢測數(shù)據(jù)見表3。

表3 測定結果 單位：μg/kg

3 結果與分析

通過測定分析A、B、C的3組濃度水平的樣品，結果表明，在室溫25 ℃左右時，無顯著性差異體現(xiàn)于樣品內和樣品間，樣品均勻性結果合格，在1月內樣品穩(wěn)定性結果合格。證明這3濃度水平樣品有良好的均勻性和穩(wěn)定性，可作為植物油中AFB1含量測定的能力驗證樣品[3]。

4 結論

通過此次試驗結果得到黃曲霉毒素B1在固定的環(huán)境溫度影響下一個月之內黃曲霉毒素B1含量可穩(wěn)定不變的規(guī)律性，從而為各個實驗室在制作盲樣考核數(shù)據(jù)提供參考，得到數(shù)據(jù)的準確性。