rhIL23R-CHR/Fc融合蛋白通過(guò)下調(diào)ENST00000522718抑制Act-HaCaT細(xì)胞炎癥和增殖

王黎明，蔣小猛，高 悅，馬宇驍，曾愛(ài)中，郭 薇*

（1中國(guó)藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，南京 211198；2南京醫(yī)科大學(xué)逸夫醫(yī)院消化內(nèi)科，南京 211112）

銀屑?。╬soriasis）俗稱“牛皮癬”，是一類免疫介導(dǎo)的，以角質(zhì)細(xì)胞異常增殖為主要特征的慢性皮膚炎癥疾病，全世界大約有1.25 億人患有銀屑?。?］。超過(guò)80%的銀屑病患者表現(xiàn)為斑塊狀銀屑病，患者皮膚表面出現(xiàn)大量紅色斑塊，表面覆蓋多層銀白色鱗屑，分布在全身多個(gè)組織［2］。高水平的細(xì)胞因子和活化的免疫細(xì)胞經(jīng)血液循環(huán)影響全身多個(gè)組織或器官［3］，引發(fā)Ⅱ型糖尿?。?］、炎癥性腸?。?］、心血管疾病［6］等多種并發(fā)癥。由于未及時(shí)就診、臨床診斷失誤及社會(huì)偏見(jiàn)等原因，許多銀屑病患者遭受極大的痛苦。

作為一種常見(jiàn)的自身免疫性疾病，銀屑病的病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。遺傳、環(huán)境、感染、內(nèi)分泌以及神經(jīng)精神等因素均可誘發(fā)銀屑病［7］，適應(yīng)性免疫應(yīng)答參與自身抗體形成和自身反應(yīng)性T細(xì)胞的應(yīng)答，被認(rèn)為是自身免疫性疾病中主要的致病因素［8］。近年研究發(fā)現(xiàn)，Th17 細(xì)胞及IL-23/IL-17 軸在銀屑病中引起的表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的過(guò)度增殖和分化紊亂發(fā)揮主要致病作用［3］。雖然靶向IL-23/IL-17 治療顯著改善了銀屑病患者病情，但由于存在部分患者治療應(yīng)答差等原因，仍需多種新的治療策略或新型抗炎途徑。因此，需要進(jìn)一步闡明銀屑病的發(fā)病機(jī)制，為開(kāi)發(fā)新的診斷或治療方法奠定基礎(chǔ)。

隨著測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，非編碼（non-coding，nc）RNA 對(duì)銀屑病遺傳性和致病性的影響成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。長(zhǎng)鏈非編碼（long non-coding，lnc）RNA 是一類長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的ncRNA，通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與 DNA，RNA 或蛋白相互作用來(lái)調(diào)節(jié)基因表達(dá)［9］，幾乎參與了生物學(xué)進(jìn)程的各個(gè)方面。Gupta 等［10］獲得了銀屑病患者皮膚和健康皮膚lncRNA 差異表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)了lncRNA 在銀屑病及阿達(dá)木單抗治療中的潛在重要性，并通過(guò)基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析了差異表達(dá)的lncRNA 在銀屑病中的初步作用機(jī)制［11］。研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA PSORS1C3易感基因與銀屑病發(fā)病顯著相關(guān)［12］。銀屑病非損傷皮膚中應(yīng)激誘導(dǎo)的銀屑病易感基因PRINS 過(guò)表達(dá)，導(dǎo)致非損傷表皮的應(yīng)激反應(yīng)發(fā)生改變，促進(jìn)了銀屑病的發(fā)病［12-13］，并通過(guò)調(diào)節(jié)G1P3 降低角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡［12-14］。Tsoi 等［15］在銀屑病皮膚和正常皮膚中鑒定出1 214 個(gè)差異表達(dá)的lncRNA 分子，推測(cè)可能參與銀屑病的免疫病理。lncRNA MEG3通過(guò)調(diào)節(jié)PI3K/AKT/mTOR 信號(hào)通路在TNFα 刺激的角質(zhì)形成細(xì)胞和銀屑病小鼠中促進(jìn)自噬并 抑 制 炎 癥［16］。 lncRNA SPRR2C［17］，lncRNA MIR31HG［18］，lncRNA RP6-65G23.1［19］及l(fā)ncRNA H19［20］等通過(guò)改變角質(zhì)形成細(xì)胞的表型和功能參與銀屑病的病理過(guò)程。越來(lái)越多的研究證據(jù)表明，lncRNA與銀屑病發(fā)病關(guān)系密切［21］。

本課題組前期獲得了靶向IL-23 p19 亞基的rhIL23R-CHR/Fc 融合蛋白，在銀屑病小鼠體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)rhIL23R-CHR/Fc 融合蛋白與IL-23 結(jié)合后，阻斷IL-23/IL-23R 結(jié)合，抑制Th17 細(xì)胞和ILC3 細(xì)胞等介導(dǎo)的炎癥應(yīng)答［22］?；谇捌诘难芯炕A(chǔ)，使用TNF-α 刺激人皮膚永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株（HaCat），建立銀屑病細(xì)胞模型（Act-HaCaT），進(jìn)一步在體外探究rhIL23R-CHR/Fc 融合蛋白調(diào)控Act-HaCaT 細(xì)胞功能的下游關(guān)鍵lncRNA 分子，并研究lncRNA 分子在Act-HaCaT 細(xì)胞中的作用機(jī)制。通過(guò)了解銀屑病發(fā)病關(guān)鍵分子，尋找銀屑病生物標(biāo)志物，為個(gè)體化和針對(duì)性的治療提供新的靶標(biāo)。

1 材 料

1.1 試 劑

HaCat細(xì)胞（廣州吉妮歐生物科技公司）；FBS、DMEM-HG 基礎(chǔ)培養(yǎng)基（美國(guó)Gibco 公司）；硫酸鏈霉素、氨卞青霉素［中國(guó)生工生物工程（上海）股份有限公司］；重組人TNF-α（美國(guó)PeproTech 公司）；Trizol（美 國(guó)Intrivogen 公 司）；HiScript?Ⅲ RT SuperMix、SYBR Green（南京諾唯贊生物科技公司）；ELISA 檢測(cè)試劑盒（杭州聯(lián)科生物科技有限公司）；MTT（德國(guó)Merck公司）；siRNA（上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司）。

1.2 儀 器

Nanodrop 2000、QuanstudioTM3 Real-Time PCR Instruction、細(xì)胞培養(yǎng)箱、Countstar 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀［賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司］；全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀［美谷分子儀器（上海）有限公司］。

2 方 法

2.1 銀屑病細(xì)胞模型建立

HaCat 細(xì)胞在含有10% FBS 的DMEM-HG 基礎(chǔ)培養(yǎng)基并加有終濃度為100 U/mL 硫酸鏈霉素和氨卞青霉素的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

按每孔1 × 105個(gè)細(xì)胞的密度種植細(xì)胞于24孔板中，并在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中過(guò)夜貼壁培養(yǎng)，24 h 后給藥終濃度為10 ng/mL TNF-α，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，建立銀屑病細(xì)胞模型（Act-HaCaT）。

2.2 全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

利用全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)（廣州基迪奧生物科技有限公司）獲得Act-HaCaT 和HaCat 細(xì)胞的lncRNA表達(dá)譜，測(cè)序總共對(duì)26 566個(gè)lncRNA基因進(jìn)行了檢測(cè)，共有219 個(gè)lncRNA 顯著差異表達(dá)（FDR ＜ 0.05，|log2FC| ≥ 1，P＜ 0.05）。

2.3 RNA分離提取和qRT-PCR

根據(jù)說(shuō)明書(shū)使用Trizol 試劑提取HaCat 和Act-HaCaT 細(xì)胞總RNA。使 用Nanodrop 2000 檢 測(cè)RNA 的濃度和純度。使 用HiScript?Ⅲ RT SuperMix 將每個(gè)樣本的1μg 總RNA 逆轉(zhuǎn)錄 為cDNA，SYBR Green 通過(guò)qRT-PCR 對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行定量。具體方案如文獻(xiàn)所述［23］。

2.4 酶聯(lián)反應(yīng)吸附法（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）

收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，1 000 r/min離心10 min，吸取上清液，使用ELISA 檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)IL-6 和IL-8 的蛋白濃度。分別在對(duì)應(yīng)孔中加入2 倍倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品100 μL 和細(xì)胞上清液100 μL 后，在每個(gè)孔中加入檢測(cè)抗體稀釋液50 μL，300 r/min 搖床上震蕩孵育2 h，洗滌；加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素100 μL 室溫孵育45 min 并洗滌后，加底物100 μL 顯色15 min，每孔加入反應(yīng)終止液100 μL，使用酶標(biāo)儀在450和570 nm下進(jìn)行檢測(cè)。

2.5 MTT

按每孔5 × 103個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞于96 孔板，每孔補(bǔ)加含血清濃度為1% DMEM-HG 完全培養(yǎng)基，至終體積為100 μL。將96 孔板細(xì)胞置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中過(guò)夜貼壁培養(yǎng)。貼壁培養(yǎng)后給藥10 ng/mL TNF-α（Act-HaCaT）和不加TNF-α 刺激的空白對(duì)照孔（HaCat），每組設(shè)置6 個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，每孔加入5 mg/mL MTT 10 μL，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng) ，4 h 后使用1 mL 無(wú)菌注射器吸掉培養(yǎng)基，每孔加DMSO 150 μL，500 r/min 振蕩10 min。將培養(yǎng)板在酶標(biāo)儀上檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為570 nm，校正波長(zhǎng)為 630 nm。

2.6 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析應(yīng)用GraphPad 8.0 軟件進(jìn)行，各項(xiàng)指標(biāo)均以平均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)誤（±s）表示。兩組間樣本的差異顯著性比較采用Unpairedt-test（two-tailed）進(jìn)行，兩組以上樣本差異顯著性比較使用One-Way ANOVA 分析。P＜ 0.05為組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 TNF-α 促進(jìn)HaCat 細(xì)胞增殖和炎癥因子的表達(dá)

TNF-α 體外刺激人角質(zhì)形成細(xì)胞系HaCat 細(xì)胞，是建立銀屑病細(xì)胞模型的常用方法之一。使用10 ng/mL 重組人TNF-α 刺激HaCat 細(xì)胞（Act-HaCaT 組）24 h 后，顯著增加了HaCat 細(xì)胞IL-6（P＜ 0.01）、IL-8（P＜ 0.05）、IL-1α（P＜ 0.05）、IL-1β（P＜ 0.001）及IL-23（P＜ 0.001）細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄（圖1-A），TNF-α 刺激后IL-23 的轉(zhuǎn)錄增加的最為顯著，其mRNA 水平提高了約5 倍。此外，Act-HaCaT 組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-6（P＜ 0.01）和IL-8（P＜ 0.05）炎癥因子的分泌水平也顯著升高（圖1-B）。同時(shí)，TNF-α 還促進(jìn)了HaCat細(xì)胞的增殖能力（P＜ 0.01）（圖1-C）。

3.2 rhIL23R-CHR/Fc抑制TNF-α刺激的HaCat細(xì)胞的功能

在前期的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)rhIL23R-CHR/Fc融合蛋白通過(guò)抑制體內(nèi)Th17和ILC3細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥免疫應(yīng)答，降低炎癥因子的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)，能夠顯著改善銀屑病樣小鼠的癥狀。在銀屑病病理皮損中，人角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)IL-23 等炎癥因子，誘導(dǎo)Th17細(xì)胞的活化，形成銀屑病的炎癥反應(yīng)回路。本研究結(jié)果顯示rhIL23R-CHR/Fc 給藥后抑制了Act-HaCaT 細(xì)胞的增殖，且具有濃度依賴性（P＜ 0.05），rhIL23R-CHR/Fc 質(zhì)量濃度在100 和1 000 ng/mL時(shí)可極顯著抑制Act-HaCaT細(xì)胞增殖，抑制率分別 為（25.49 ± 7.84）% 和（33.96 ± 6.44）%（圖2-A），與100 ng/mL rhIL23R-CHR/Fc相比，1 000 ng/mL rhIL23R-CHR/Fc 對(duì)細(xì)胞增殖的抑制率更高，但無(wú)顯著性差異，因此后續(xù)以100 ng/mL rhIL23R-CHR/Fc 作為合適的給藥濃度。在給藥100 ng/mL rhIL23R-CHR/Fc 融合蛋白后，在Act-HaCaT細(xì)胞中上調(diào)表達(dá)的IL-6、IL-8、IL-1α、IL-1β以及IL-23 等炎癥因子其轉(zhuǎn)錄水平均受到明顯抑制（P＜ 0.05）（圖2-B）。

Figure 1 Pproliferation and inflammation factor production in HaCat cells and HaCat cells activating by TNF-α (± s, n = 3)

Figure 2 rhIL23R-CHR/Fc fusion protein inhibited proliferation and inflammation factor production in Act-HaCaT (± s, n = 3)

3.3 差異表達(dá)lncRNA和mRNA的生物信息學(xué)分析

利用全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)獲得Act-HaCaT 和HaCat 細(xì)胞的lncRNA 的表達(dá)譜，結(jié)果顯示，Act-HaCaT 與HaCat 細(xì)胞相比，差異表達(dá)的lncRNA 共有219 個(gè)，其中表達(dá)上調(diào)的有113 個(gè)，表達(dá)下調(diào)的lncRNA有106個(gè)（圖3-A，3-B）。

基于生物信息學(xué)分析結(jié)果，利用qRT-PCR 對(duì)Act-HaCaT中前20個(gè)顯著上調(diào)進(jìn)行二次驗(yàn)證，與測(cè)序結(jié)果趨勢(shì)一致的有3 個(gè)上調(diào)的lncRNA：ENST00000531381、 ENST00000522718 和ENST00000415917（圖3-C）。因此接下來(lái)以顯著上調(diào)的lncRNA作為研究對(duì)象。

通過(guò)rhIL23R-CHR/Fc 給藥，探索rhIL23RCHR/Fc 在調(diào)控Act-HaCaT 細(xì)胞的功能時(shí)，可能參與調(diào)控的lncRNA 分子。以前期篩選顯著上調(diào)的lncRNA 為基礎(chǔ)，利用qRT-PCR 進(jìn)行篩選，結(jié)果顯示，在Act-HaCaT 細(xì)胞中給藥100 ng/mL rhIL23RCHR/Fc 后，目 標(biāo)lncRNA 分 子ENST00000531381（P＜ 0.001）和ENST00000522718（P＜ 0.001）的轉(zhuǎn)錄水平受到明顯抑制，而lncRNA ENST00000415917在融合蛋白給藥后轉(zhuǎn)錄水平增加（圖3-D）。表明rhIL23R-CHR/Fc 可能通過(guò)調(diào)節(jié)ENST00000531381和ENST00000522718 的基因表達(dá)，進(jìn)而影響Act-HaCaT細(xì)胞的功能。

Figure 3 Screening of lncRNA downstream of rhIL23R-CHR/Fc (± s, n = 3)

3.4 目標(biāo)lncRNA 抑制Act-HaCaT 細(xì)胞的增殖及炎癥因子轉(zhuǎn)錄

通過(guò)rhIL23R-CHR/Fc 給藥后，篩選得到可能參 與IL-23 通 路 的lncRNA ENST00000531381 和ENST00000522718。使 用siRNA 對(duì) 目 標(biāo)lncRNA ENST00000531381 和ENST00000522718 進(jìn) 行 敲減。與陰性對(duì)照（si-NC）組相比，siRNA 干擾后lncRNA靶基因的水平降低（圖4-A）。

敲低目標(biāo)lncRNA 后，利用MTT 檢測(cè)其對(duì)Act-HaCaT 細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，敲低ENST00000522718 后，Act-HaCaT 細(xì)胞的增 殖 受 到 明 顯 抑 制（P＜ 0.01），而 敲 低ENST00000531381 對(duì)Act-HaCaT 細(xì) 胞 的 增 殖 無(wú) 顯著影響（圖4-B）。敲低ENST00000522718 顯著抑制Act-HaCaT 細(xì)胞中炎癥因子的轉(zhuǎn)錄（P＜ 0.05），而敲低ENST00000531381 不僅未抑制，而且還部分促進(jìn)了Act-HaCaT 細(xì)胞中炎癥因子的轉(zhuǎn)錄（圖4-C）。因 此，ENST00000522718 可 能 是rhIL23RCHR/Fc 融合蛋白可能是參與IL-23 通路降低Act-HaCaT炎癥和增殖能力的關(guān)鍵分子。

4 討 論

角質(zhì)形成細(xì)胞與免疫細(xì)胞異常增殖是銀屑病主要病理特征［24］?；罨腡h細(xì)胞產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞的基因表達(dá)，調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)。被激活的角質(zhì)形成細(xì)胞參與銀屑病病理，維持并加劇皮膚炎癥，釋放趨化因子等招募活化的T細(xì)胞，形成銀屑病致病的炎癥循環(huán)回路［25］。人正常皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞衍生的HaCat 細(xì)胞是銀屑病藥理學(xué)研究及藥物篩選的常用體外模型。可通過(guò)添加TNF-α 誘導(dǎo)HaCat 細(xì)胞模擬銀屑病的病理［16，26］。研究表明，TNF-α 不僅調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應(yīng)，而且還調(diào)節(jié)組織重塑，細(xì)胞凋亡，細(xì)胞周期和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)等進(jìn)程。用10 ng/mLTNF-α 處理HaCat細(xì)胞24 h后細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-17A、IL-23及IL-22 的表達(dá)明顯升高［27］。此外，TNF-α 還能刺激HaCat 細(xì)胞IL-1α、IL-1β、IL-6 及IL-8 的轉(zhuǎn)錄［28］。本研究利用TNF-α 刺激的HaCat細(xì)胞為模型細(xì)胞，通過(guò)與未刺激的HaCat細(xì)胞比較，發(fā)現(xiàn)TNF-α 不僅誘導(dǎo)了HaCat細(xì)胞炎癥因子的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)，而且還促進(jìn)HaCat細(xì)胞的體外增殖。

目前對(duì)于銀屑病的病理機(jī)制尚不完全清楚，故而限制了相關(guān)臨床檢測(cè)和預(yù)后指標(biāo)的發(fā)現(xiàn)。大多數(shù)哺乳動(dòng)物和其他復(fù)雜生物體的基因組會(huì)轉(zhuǎn)錄成ncRNA，包括miRNA、lncRNA 和環(huán)狀（circle，circ）RNA等。近年來(lái)ncRNA 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)機(jī)體復(fù)雜的生理過(guò)程逐漸被揭示，在自身免疫疾病、腫瘤及心血管疾病中發(fā)揮重要作用［29-32］。lncRNA 是ncRNA 中轉(zhuǎn)錄程度最高的RNA，在多種腫瘤中發(fā)揮了重要的生物學(xué)功能［33-34］，然而關(guān)于lncRNA在銀屑病中的作用了解較少。為了進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)銀屑病發(fā)病的關(guān)鍵分子，通過(guò)二代測(cè)序發(fā)現(xiàn)HaCat 細(xì)胞和Act-HaCaT 細(xì)胞的差異表達(dá)lncRNA共有219 個(gè)，利用qRT-PCR 技術(shù)差異lncRNA 進(jìn)行初步篩選，得到候選3 個(gè)差異上調(diào)的目標(biāo)lncRNA分子ENST00000531381、ENST00000522718和ENST00000415917。

Figure 4 Determining the function of lncRNAs in cells (± s, n = 3)

在前期研究中發(fā)現(xiàn)rhIL23R-CHR/Fc 融合蛋白能夠顯著改善銀屑病小鼠癥狀，并探討了rhIL23RCHR/Fc 在銀屑病小鼠體內(nèi)的藥理機(jī)制，基于以上結(jié)果，本研究試圖探索rhIL23R-CHR/Fc 融合蛋白影響HaCat 細(xì)胞功能的潛在機(jī)制。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，rhIL23R-CHR/Fc 可以以濃度依賴性的方式抑制Act-HaCaT 細(xì)胞增殖，還能抑制IL-23 等炎癥因子轉(zhuǎn)錄和IL-6、IL-8 的分泌水平，但其作用的下游分子機(jī)制尚不明確。近年來(lái)不斷有研究證明lncRNAs 通過(guò)多種機(jī)制調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞的促分化和抗分化，但lncRNA 在調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞分化中的確切作用尚不明確。Gupta 等［10］利用RNA 測(cè)序鑒定了阿達(dá)木治療前后的銀屑病患者及與健康個(gè)體皮膚中l(wèi)ncRNA 轉(zhuǎn)錄組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)銀屑病患者與健康人有971 個(gè)差異表達(dá)的lncRNA，阿達(dá)木單抗治療前后有157 個(gè)差異表達(dá)的lncRNA，而阿達(dá)木治療后與健康人有377 個(gè)差異表達(dá)的lncRNA。該研究充分說(shuō)明了lncRNA 在銀屑病病理發(fā)展及生物治療中的潛在重要性。本研究中，通過(guò)Act-HaCaT 細(xì)胞給藥rhIL23R-CHR/Fc 融合蛋白，進(jìn)一步篩選rhIL23R-CHR/Fc 影響HaCat 細(xì)胞功能的下游lncRNA 分子。在3 個(gè)候選lncRNA 中，lncRNA ENST00000531381 和ENST00000522718 的 水 平 在rhIL23RCHR/Fc 給藥后受到明顯抑制。為了驗(yàn)證目標(biāo)lncRNA 分子對(duì)HaCat 細(xì)胞是否具有調(diào)節(jié)功能，接下來(lái)利用siRNA 在Act-HaCaT 細(xì)胞中敲低目標(biāo)lncRNA 的水平，檢測(cè)細(xì)胞功能的變化，結(jié)果證實(shí)目標(biāo)lncRNA ENST00000522718 能夠調(diào)節(jié)HaCat細(xì)胞的增殖及炎癥因子的水平；然而敲低lncRNA ENST00000531381 后HaCat 細(xì)胞的炎癥因子轉(zhuǎn)錄水平部分降低，但對(duì)細(xì)胞增殖沒(méi)有明顯影響。因此本研究認(rèn)為ENST00000522718 是rhIL23RCHR/Fc調(diào)節(jié)HaCat細(xì)胞功能的下游分子。

ceRNA 機(jī)制是目前研究最火熱的調(diào)控方式之一，成為銀屑病治療中的潛在新型靶標(biāo)［35］。本研究基于前期的研究基礎(chǔ)，通過(guò)體外研究，得到了rhIL23R-CHR/Fc 融合蛋白調(diào)控Act-HaCaT 細(xì)胞功能的下游關(guān)鍵lncRNA ENST00000522718，并探究了ENST00000522718 在在Act-HaCaT 細(xì)胞中的作用機(jī)制。之后將繼續(xù)探索ENST00000522718 下游的miRNA 以 及mRNA，闡 明ceRNA 網(wǎng) 絡(luò) 在rhIL23R-CHR/Fc 融合蛋白影響HaCat 細(xì)胞功能中的調(diào)控機(jī)制。進(jìn)一步揭示lncRNA 在銀屑病發(fā)病及rhIL23R-CHR/Fc 治療銀屑病的潛在機(jī)制，為今后針對(duì)銀屑病的核酸藥物治療研究提供候選分子。