黑骨藤化學(xué)成分的研究

余璽陳晨

（平頂山學(xué)院醫(yī)學(xué)院，河南 平頂山467000）

黑骨藤Periploca Radix為蘿摩科杠柳屬植物西南杠柳的根或全株［1］，其味苦辛、性溫，功效祛濕除痹、舒筋活絡(luò)，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛、強(qiáng)直性脊柱炎、跌打損傷等，其主要成分包括黃酮、神經(jīng)酰胺、三萜、生物堿、強(qiáng)心苷、揮發(fā)油、苯丙素、甾體等［2］，具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗氧化、神經(jīng)保護(hù)、抗過敏、提高免疫力、強(qiáng)心等作用［3-4］。黨榮敏等［5］研究表明，黑骨藤可有效降低痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)炎性反應(yīng)，抑制滑膜細(xì)胞增生，改善關(guān)節(jié)滑膜功能。本實(shí)驗(yàn)對(duì)黑骨藤化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離得到14 個(gè)化合物，均為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)。

1 材料

RTQ-X8.0 型質(zhì)譜儀、AV-600 型核磁共振波譜儀（德國Bruker 公司）；GmbH153 型電子天平（德國Sartorius 公司）；Hpf-1722 型分析天平（美國Ohaus 公司）；Tlpt-152 型超聲清洗器（瑞士Mettlr-Toledo 公司）；SEN-172 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（廣東香山衡器集團(tuán)股份有限公司）；YPL273 型恒溫電熱水浴鍋（上海英展機(jī)電企業(yè)有限公司）。Sephadex LH-20（美 國Pharmacia公司）；100～200、300～400 目柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）。DMEM／F12 培養(yǎng)基（北京博爾生物技術(shù)有限公司）；DMSO 培養(yǎng)液（上?？锛夹g(shù)有限公司）；甲氨蝶呤（澳大利亞Pfizer 公司）。黑骨藤Periploca Radix購于河南省平頂山市，經(jīng)平頂山學(xué)院夏西超教授鑒定為為蘿摩科杠柳屬植物西南杠柳的根或全株。

2 提取與分離

取干燥黑骨藤35.7 kg，30 倍量90%乙醇加熱回流提取3次，每次2 h，合并提取液，減壓濃縮回收溶劑，得浸膏8.4 kg，超聲分散于水中，配制成混懸液，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液減壓濃縮成干浸膏，分別得石油醚部分（136.2 g，F(xiàn)r.A）、二氯甲烷部分（114.3 g，F(xiàn)r.B）、乙酸乙酯部分（109.4 g，F(xiàn)r.C）、正丁醇部分（121.3 g，F(xiàn)r.D）。

Fr.A 經(jīng)100～200 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇為流動(dòng)相梯度洗脫，合并相似組分，得到7 個(gè)流分Fr.A1～Fr.A7。Fr.A3 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇為流動(dòng)相梯度洗脫，合并相似組分，得到10 個(gè)流分Fr.A3-1～Fr.A3-10，F(xiàn)r.A3-5 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮（30∶70）為流動(dòng)相洗脫，得化合物3（18 mg）；Fr.A3-9 經(jīng)Sephadex LH-20柱，以氯仿-甲醇（5∶1）為流動(dòng)相洗脫，得化合物2（23 mg）。

Fr.B 經(jīng)100～200 目硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮-甲醇為流動(dòng)相梯度洗脫，合并相似組分，得到9 個(gè)流分Fr.B1～Fr.B9）。Fr.B3 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇為流動(dòng)相梯度洗脫，合并相似組分，得到7 個(gè)流分Fr.B3-1～Fr.B3-7，F(xiàn)r.B3-2 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇（10∶80∶10）為流動(dòng)相洗脫，得化合物1（25 mg）；Fr.B3-4 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇（20∶70∶10）為流動(dòng)相洗脫，得化合物4（22 mg）。Fr.B5 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇為流動(dòng)相梯度洗脫，合并相似組分，得到8 個(gè)流分Fr.B5-1～Fr.B5-8，F(xiàn)r.B5-3 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇（10∶70∶20）為流動(dòng)相洗脫，得化合物11（22 mg）；Fr.B5-5 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇（10∶80∶10）為流動(dòng)相洗脫，得化合物12（26 mg）。Fr.B6 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇為流動(dòng)相梯度洗脫，合并相似組分，得到9 個(gè)流分Fr.B6-1～Fr.B6-9，F(xiàn)r.B6-2 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇（10∶60∶30）為流動(dòng)相洗脫，得化合物5（19 mg）；Fr.B6-7 經(jīng)Sephadex LH-20 分離，以氯仿-甲醇（5∶1）為流動(dòng)相洗脫，得化合物10（23 mg）。

Fr.C 經(jīng)100～200 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇為流動(dòng)相梯度洗脫，合并相似組分，得到8 個(gè)流分Fr.C1～Fr.C8。Fr.C2 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇為流動(dòng)相梯度洗脫，合并相似組分，得到9 個(gè)流分Fr.C2-1～Fr.C2-9，F(xiàn)r.C2-2經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇（10∶70∶20）為流動(dòng)相洗脫，得化合物6（21 mg）；Fr.C2-5 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇（10∶40∶50）為流動(dòng)相洗脫，得化合物14（22 mg）；Fr.C2-8 經(jīng)Sephadex LH-20，以氯仿-甲醇（5∶1）為流動(dòng)相洗脫，得化合物9（29 mg）。Fr.C4 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇為流動(dòng)相梯度洗脫，合并相似組分，得到7 個(gè)流分Fr.C4-1～Fr.C4-7，F(xiàn)r.C4-3 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇（10∶60∶30）為流動(dòng)相洗脫，得化合物7（32 mg）。Fr.C7 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇為流動(dòng)相洗脫，合并相似組分，得到8 個(gè)流分Fr.C7-1～Fr.C7-8，F(xiàn)r.C7-3經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇（10∶60∶30）為流動(dòng)相洗脫，得化合物8（18 mg）；Fr.C7-5 經(jīng)300～400 目硅膠柱，以石油醚-丙酮-甲醇（10∶30∶60）為流動(dòng)相洗脫，得化合物13（28 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色針晶，ESI-MSm／z：201.2［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：11.14（1H，s，H-9），7.91（1H，d，J＝12.0 Hz，H-7），7.54（1H，dd，J＝8.2 Hz，H-6），7.35（1H，td，J＝8.2 Hz，H-4），6.95（1H，dd，J＝8.2 Hz，H-3），6.72（1H，td，J＝8.2 Hz，H-5），6.46（1H，dd，J＝12.0，2.2 Hz，H-8），3.91（3H，s，H-10）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：119.2（C-1），158.1（C-2），110.3（C-3），130.5（C-4），120.3（C-5），127.1（C-6），139.1（C-7），119.4（C-8），166.3（C-9），54.2（C-10）。與文獻(xiàn)［6］報(bào)道的鄰甲氧基肉桂酸基本一致。

化合物2：無色粉末，ESI-MSm／z：380.7［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.62（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H-6′），7.47（1H，d，J＝8.2 Hz，H-2′），6.71（1H，d，J＝12.0 Hz，H-5′），4.24（1H，d，J＝8.2 Hz，Glc-H-1），4.19（1H，m，H-3），4.02（1H，m，H-3），3.74（3H，s，3′-OCH3），3.68（1H，dd，J＝12.0，2.2 Hz，Glc-H-6α），3.59（1H，J＝12.0，8.2 Hz，Glc-H-6β），3.28（2H，m，H-2），3.24～3.12（3H，m，Glc-H-3～5），3.03（1H，m，Glc-H-2）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：135.4（C-1），70.1（C-2），67.2（C-3），128.4（C-1′），116.3（C-2′），153.1（C-3′），153.7（C-4′），112.5（C-5′），125.2（C-6′），105.1（Glc-C-1），74.7（Glc-C-2），77.8（Glc-C-3），72.4（Glc-C-4），78.1（Glc-C-5），63.4（Glc-C-6），55.7（3′-OCH3）。與文獻(xiàn) ［7 ］報(bào)道的 βhydroxypropiovanillone-3-O-β-D-glucopyranoside 基本一致。

化合物3：白色粉末，ESI-MSm／z：292.8［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.43～7.38（2H，m，H-2，6），7.35～7.29（2H，m，H-3，5），7.27～7.21（1H，m，H-4），4.76（1H，d，J＝8.2 Hz，H-7），4.62（1H，d，J＝8.2 Hz，H-7），4.17（1H，d，J＝8.2 Hz，H-1′），3.73（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H-6′α），3.52（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H-6′β），3.17～2.97（4H，m，H-2′～5′）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：126.8（C-1），129.3（C-2），128.1（C-3），137.5（C-4），128.1（C-5），129.3（C-6），70.3（C-7），100.8（C-1′），74.1（C-2′），76.8（C-3′），69.4（C-4′），77.1（C-5′），60.8（C-6′）。與文獻(xiàn)［7］報(bào)道的苯甲醇-β-D-葡萄糖苷基本一致。

化合物4：黃色油狀物，ESI-MSm／z：443.1［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：6.49（1H，s，H-2′），6.41（2H，s，H-2，6），3.92（1H，d，J＝8.2 Hz，H-7），3.86（3H，s，3′-OCH3），3.79（6H，s，3，5-OCH3），3.71（1H，m，H-9α），3.68（1H，m，H-9′α），3.61（1H，m，H-9′β），3.45（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H-9β），3.31（3H，s，5′-OCH3），2.63（2H，m，H-7′），1.92（1H，m，H-8），1.73（1H，m，H-8′）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：139.1（C-1），129.5（C-2），147.2（C-3），132.6（C-4），113.7（C-5），106.3（C-6），42.8（C-7），50.3（C-8），63.7（C-9），130.2（C-1′），106.1（C-2′），145.8（C-3′），136.4（C-4′），146.3（C-5′），126.1（C-6′），34.2（C-7′），39.1（C-8′），67.3（C-9′），57.2（3-OCH3），57.2（5-OCH3），56.1（3′-OCH3），60.2（5′-OCH3）。與文獻(xiàn)［8］報(bào)道的lyoniresinol 基本一致。

化合物5：白色油狀物，ESI-MSm／z：249.1［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：5.79（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H-8），5.68（1H，d，J＝8.2 Hz，H-7），4.41（1H，m，H-9），2.80（1H，d，J＝8.2 Hz，H-2α），2.39（1H，d，J＝8.2 Hz，H-4α），2.19（1H，m，H-5），2.07（1H，d，J＝8.2 Hz，H-4β），1.69（1H，d，J＝12.0 Hz，H-2β），1.31（3H，d，J＝8.2 Hz，H-10），1.15（3H，s，H-12），1.03（3H，s，H-11），0.87（3H，d，J＝8.2 Hz，H-13）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：43.1（C-1），50.8（C-2），209.4（C-3），46.1（C-4），37.2（C-5），76.8（C-6），132.4（C-7），134.7（C-8），69.1（C-9），24.2（C-10），25.1（C-11），25.7（C-12），16.1（C-13）。與文獻(xiàn)［9］報(bào)道的4，5-dihydroblumenol A 基本一致。

化合物6：黃色粉末，ESI-MSm／z：454.8［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：8.12（1H，d，J＝12.0 Hz，H-8），7.52（1H，d，J＝8.2 Hz，H-5），7.36（1H，s，H-4），7.08（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H-7），5.06（1H，d，J＝8.2 Hz，H-1′），2.08（3H，s，2-CH3）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：165.3（C-1），119.2（C-2），159.4（C-3），106.1（C-4），112.9（C-5），160.8（C-6），122.4（C-7），130.1（C-8），185.6（C-9），182.5（C-10），99.6（C-1′），74.1（C-2′），75.2（C-3′），70.1（C-4′），76.8（C-5′），59.2（C-6′），52.4（2-CH3）。與文獻(xiàn)［10］報(bào)道的2-methyl -1，3，6-trihydroxy-9，10-anthraquinone-3-O-β-glucoside 基本一致。

化合物7：白色粉末，ESI-MSm／z：399.7［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：5.31（1H，s，H-14），4.02（1H，t，J＝8.2 Hz，H-15），3.91（1H，t，J＝8.2 Hz，H-16a），3.76（1H，m，H-2），3.68（1H，t，J＝8.2 Hz，H-16b），3.57（1H，d，J＝12.0 Hz，H-19a），3.22（1H，d，J＝12.0 Hz，H-19b），1.41（3H，s，H-22），1.30（3H，s，H-23），1.12（3H，s，H-18），0.91（3H，s，H-17），0.79（3H，s，H-20）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：52.3（C-1），66.4（C-2），43.8（C-3），40.1（C-4），54.8（C-5），23.5（C-6），35.8（C-7），139.2（C-8），49.3（C-9），42.3（C-10），22.7（C-11），34.2（C-12），36.1（C-13），128.2（C-14），80.3（C-15），64.1（C-16），25.2（C-17），26.1（C-18），65.1（C-19），18.4（C-20），109.4（C-21），27.3（C-22），26.1（C-23）。與文獻(xiàn) ［11］報(bào)道的isopropylidenkirenol 基本一致。

化合物8：白色粉末，ESI-MSm／z：185.2［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.51（2H，d，J＝8.2 Hz，H-2，6），7.39（1H，d，J＝12.0 Hz，H-3），7.18（1H，m，H-8），6.51（1H，d，J＝12.0 Hz，H-5），3.42（3H，s，3-OCH3），3.09（1H，s，H-9）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：136.1（C-1），126.8（C-2），129.1（C-3），141.6（C-4），129.1（C-5），126.8（C-6），137.2（C-7），127.3（C-8），173.1（C-9），49.2（3-OCH3）。與文獻(xiàn)［12］報(bào)道的2-propenoic acid-3-phenyl-methyl ester 基本一致。

化合物9：無色針晶，ESI-MSm／z：271.4［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：6.91（1H，s，H-6），6.82（2H，d，J＝8.2 Hz，H-2，5），4.58（1H，d，J＝2.2 Hz，H-7），4.51（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H-9a），4.18（2H，m，H-9b，H-9′a），4.24（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H-9′b），3.37（1H，m，H-8），3.12（1H，m，H-8′）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：133.1（C-1），120.6（C-2），109.1（C-3），148.2（C-4），147.6（C-5），107.1（C-6），87.3（C-7），49.1（C-8），69.4（C-9），176.9（C-7′），45.8（C-8′），70.1（C-9′）。與文獻(xiàn)［13］報(bào)道的acuminatolide基本一致。

化合物10：無色油狀物，ESI-MSm／z：271.2［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.02（1H，d，J＝12.0 Hz，H-5），6.71（1H，d，J＝12.0 Hz，H-6），6.53（1H，s，H-2），6.12（1H，m，H-3′），4.38（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H-9α），3.93（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H-9β），3.37（1H，m，H-8），2.28（3H，s，H-7），1.94（3H，d，J＝8.2 Hz，H-4′），1.65（3H，s，H-5′），1.41（3H，d，J＝8.2 Hz，H-10）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：139.2（C-1），117.6（C-2），153.8（C-3），128.1（C-4），124.6（C-5），120.8（C-6），20.7（C-7），31.9（C-8），70.2（C-9），17.1（C-10），170.2（C-1′），126.8（C-2′），140.1（C-3′），15.7（C-4′），21.3（C-5′）。與文獻(xiàn)［14］報(bào)道的9-angeloyloxythymol 基本一致。

化合物11：棕色粉末，ESI-MSm／z：367.2［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：13.62（1H，s，6-OH），6.31（1H，brs，H-3），6.09（1H，d，J＝8.2 Hz，H-5），5.03（1H，d，J＝8.2 Hz，H-1′），3.91（3H，s，H-2-OCH3），3.80（1H，m，H-6′a），3.59（1H，m，H-6′b），3.53～3.46（3H，m，H-2′，3′，5′），3.27（1H，m，H-4′）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：105.8（C-1），166.1（C-2），91.7（C-3），164.3（C-4），95.8（C-5），163.1（C-6），202.5（C-7），33.2（C-8），100.3（C-1′），72.8（C-2′），76.5（C-3′），70.1（C-4′），77.1（C-5′），59.3（C-6′），55.8（2-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］報(bào)道的annphenone 基本一致。

化合物12：黃色粉末，ESI-MSm／z：633.7［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.61（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H-6′），7.59（1H，d，J＝8.2 Hz，H-2′），6.91（1H，d，J＝12.0 Hz，H-5′），6.41（1H，d，J＝2.2 Hz，H-8），6.09（1H，d，J＝2.2 Hz，H-6），5.28（1H，d，J＝8.2 Hz，H-1?），4.41（1H，d，J＝12.0 Hz，H-1?），3.69～3.18（10H，H-2″～H-6″，H-2″～H-5?），1.02（3H，d，J＝12.0 Hz，6?-CH3）；13CNMR（CD3OD，150 MHz）δ：132.5（C-1），157.2（C-2），132.7（C-3），176.8（C-4），161.5（C-5），97.1（C-6），163.9（C-7），94.1（C-8），157.1（C-9），104.2（C-10），120.8（C-1′），114.9（C-2′），145.1（C-3′），149.1（C-4′），160.7（C-5′），122.1（C-6′），100.8（C-1″），73.8（C-2″），76.1（C-3″），71.3（C-4″），75.8（C-5″），66.5（C-6″），99.8（C-1?），69.2（C-2?），67.3（C-3?），72.1（C-4?），68.4（C-5?），18.1（C-6?）。與文獻(xiàn) ［16］報(bào)道的蘆丁基本一致。

化合物13：棕色粉末，ESI-MSm／z：581.3［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.13（2H，s，H-2?，6?），7.02（1H，d，J＝12.0 Hz，H-5′），6.91（1H，d，J＝8.2 Hz，H-2′），6.83（1H，d，J＝12.0 Hz，H-8），6.73（1H，d，J＝12.0 Hz，H-7），6.54（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H-6′），6.41（1H，d，J＝8.2 Hz，H-2），6.31（2H，d，J＝8.2 Hz，H-6），6.14（1H，t，J＝8.2 Hz，H-4），4.83（1H，d，J＝8.2 Hz，H-1″），4.61（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H-6″a），4.27（1H，dd，J＝8.2，2.2 Hz，H-6″b），3.75（1H，m，H-5″），3.51（1H，m，H-2″），3.47（1H，m，H-3″），3.29（1H，m，H-4″）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：139.2（C-1），105.8（C-2），160.3（C-3），103.5（C-4），161.2（C-5），105.8（C-6），127.4（C-7），130.2（C-8），136.1（C-1′），115.3（C-2′），147.4（C-3′），145.7（C-4′），117.2（C-5′），120.3（C-6′），104.1（C-1″），75.2（C-2″），78.1（C-3″），71.9（C-4″），76.3（C-5″），65.1（C-6″），120.3（C-1?），109.8（C-2?），147.2（C-3?），139.6（C-4?），147.2（C-5?），109.4（C-6?），167.9（C-7?）。與文獻(xiàn)［17］報(bào)道的piceatannol 4′-O-（6″-O-galloyl）-β-Dglucopyranoside 基本一致。

化合物14：白色粉末，ESI-MSm／z：302.7［M＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.08（1H，s，H-12），3.92（1H，s，H-5），3.73（1H，d，J＝12.0 Hz，H-9β），3.02（1H，dd，J＝12.0，8.2 Hz，H-1），2.91（1H，d，J＝12.0 Hz，H-9α），2.38（1H，m，H-3α），2.18（1H，m，H-2α），2.09（3H，s，H-13），1.63（1H，m，H-3β），1.49（1H，m，H-2β），1.28（3H，s，H-15），1.21（3H，s，H-14）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：70.3（C-1），24.1（C-2），35.8（C-3），64.3（C-4），62.9（C-5），188.5（C-6），123.1（C-7），155.2（C-8），40.1（C-9），57.9（C-10），124.1（C-11），139.2（C-12），11.3（C-13），16.7（C-14），18.1（C-15）。與文獻(xiàn)［12］報(bào)道的curcuzederone 基本一致。

5 結(jié)論

本研究從黑骨藤中分離得到14 個(gè)化合物，均為首次從該植物中分離得到，可豐富其化學(xué)成分的物質(zhì)基礎(chǔ)。