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    錦燈籠宿萼與果實(shí)的石油醚部位化學(xué)成分及抗氧化活性比較①

    2020-02-28 05:30:52吳莉莉
    關(guān)鍵詞:石油醚清除率自由基

    吳 爽,吳莉莉,趙 稷,滕 楊

    (佳木斯大學(xué)北藥與功能食品實(shí)驗(yàn)室,黑龍江 佳木斯 154007)

    0 引 言

    錦燈籠(PhysalisalkekengiL.var.francheti(Mast.)Makino)是茄科(Solanaceae)酸漿(PhysalisalkekengiL.)屬植物,多年生草本植物[1],又稱之為紅姑娘,洛神珠,掛燈籠,燈籠草,泡泡草等,被《中國藥典》2015 年版一部收載[2]。本品具有清熱、解毒、鎮(zhèn)痛、強(qiáng)心、利尿之功能,用于治療熱咳、咽痛、黃疸、痢疾、水腫,疔瘡和丹毒[3],現(xiàn)代藥理研究表明錦燈籠具有顯著的抗炎[4]、抗菌[5]、抗腫瘤[6]、防治糖尿病[7,8]、利尿[9]和血管舒張[10,11]等藥理活性。目前國內(nèi)外研究多集中宿萼的化學(xué)成分和藥理作用,而單獨(dú)對果實(shí)化學(xué)成分的研究較少,根據(jù)民間百姓秋冬的做法,大多是食用其果實(shí),有很好的止咳、降糖作用,因此對錦燈籠果實(shí)的化學(xué)成分進(jìn)行提取與分析,并對錦燈籠宿萼與果實(shí)的石油醚部位化學(xué)成分及抗氧化活性的比較研究是十分有意義的,為其在營養(yǎng)、保健和藥用等方面的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

    1 儀器與試劑

    RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);FA2004型電子天平,(上海恒平科學(xué)儀器有限公司);電熱恒溫水浴鍋(余姚市遠(yuǎn)東數(shù)控儀器廠);U3000-Q Exactive型LC-MS/MS(美國Thermo公司);UV757 紫外分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

    甲醇(色譜純,天津市凱通化學(xué)試劑有限公司));乙醇、丙酮、(分析純,天津市凱通化學(xué)試劑有限公司);石油醚為分析純級(天津市富宇精細(xì)化工有限公司)。

    2 方 法

    2.1 錦燈籠宿萼與果實(shí)的石油醚萃取物制備

    將錦燈籠宿萼與果實(shí)人工剝離,分別將其宿萼(297.13 g)與果實(shí)(2286.27 g)部分剪碎,以95 % 乙醇(固液比1∶3)在74 ℃恒溫水浴鍋反復(fù)浸提3次,每次24 h,合并提取液,減壓濃縮蒸干,再分別將浸膏經(jīng)水溶解、石油醚萃取(體積比1∶1),得石油醚提取物。

    2.2 MS/MS分析石油醚部位化學(xué)成分

    離子傳輸毛細(xì)管的溫度為320 ℃,蒸發(fā)溫度為350 ℃,毛細(xì)管的電壓為3.0 kV,鞘氣壓力為30 bar,輔助氣壓為10 bar,采集方式為單離子檢測掃描(single ion monitoring,SIM),離子極性為負(fù)離子,離子化方式為電噴霧離子化。

    甲醇溶解上述宿萼與果實(shí)的石油醚萃取物制成濃度0.01 g·mL-1的樣品溶液,進(jìn)樣10 μL進(jìn)行質(zhì)譜分析。再將得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)在數(shù)據(jù)庫中檢索,對照信號(hào)強(qiáng)度、相對分子質(zhì)量等分析錦燈籠宿萼與果實(shí)中所含的化學(xué)成分。

    2.3 錦燈籠宿萼與果實(shí)的石油醚萃取物清除DPPH·自由基能力考察

    樣品溶液的配制:分別精密稱取錦燈籠宿萼與果實(shí)石油醚萃取物 1.003 g和1.000g 置于2燒杯中,均用95 % 乙醇溶解定容至 100 mL,再分別移取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL稀釋為2mL得濃度為0.002、0.004、0.006、0.008、0.01 g·mL-1的宿萼石油醚部位樣品溶液,搖勻備用。方法同上配制濃度為0.0008、0.0016、0.0024、0.0032、0.0040 g·mL-1的果實(shí)石油醚部位樣品溶液,搖勻備用。

    DPPH·溶液配制:精確稱取0.0212 g DPPH·乙醇溶解,定容至250 mL,配制成濃度為0.2 mol·L-1的DPPH·溶液。

    取10 mL試管30支,15支為一組,取其中10支各自加入上述樣品溶液2.0 mL,再加入新鮮配制的DPPH·溶液2.0 mL,充分混合均勻,在室溫下放到避光處進(jìn)行反應(yīng)30 min,于517 nm波長處測定其吸光度,記為AR;其他條件不變,用無水乙醇代替待測AR中的錦燈籠宿萼樣品溶液,并測其吸光度A0,同樣加入不同濃度的宿萼樣品溶液2.0 mL 于試管中,再加入2.0 mL 95 % 乙醇溶液,混合均勻,方法同上測得其吸光度AX,平行測定三次,并以Vc做陽性對照。錦燈籠宿萼與果實(shí)石油醚萃取物清除DPPH·的計(jì)算公式為E%=1-(AR-AX/A0)×100% 。

    3 結(jié)果與討論

    3.1 錦燈籠宿萼與果實(shí)的石油醚萃取結(jié)果

    按“2.1”項(xiàng)下方法得錦燈籠宿萼與果實(shí)石油醚部位提取物分別為19.37 g和11.70g。

    3.2 MS/MS分析宿石油醚部位成分結(jié)果

    石油醚部位成分復(fù)雜且多為已知的小分子化合物,對其主要成分進(jìn)行定性分析,按“2.2”項(xiàng)下方法經(jīng)MS/MS檢測,通過對每個(gè)色譜峰的二級碎片進(jìn)行分析,并與mzCloud、Thermo mzVault Mass Frontier中相關(guān)信息綜合對比,從宿萼和果實(shí)中分別得到8個(gè)和10個(gè)小分子化學(xué)成分,見表1。錦燈籠宿萼和果實(shí)石油醚部位的化學(xué)成分主要為氨基酸、生物堿和黃酮類化合物等,且僅存在2個(gè)相同化合物羥基酪醇和L-苯丙氨酸,其它均不相同,可見錦燈籠宿萼和果實(shí)石油醚部位的化學(xué)成分存在明顯差異。

    表1 MS/MS分析宿萼與果實(shí)石油醚部位化學(xué)成分

    3.3 石油醚萃取物清除DPPH·自由基結(jié)果

    按照“2.3”項(xiàng)的操作方法,測定結(jié)果顯示錦燈籠宿萼與果實(shí)的石油醚部位對DPPH·自由基具有一定的清除能力結(jié)果見表2。宿萼的石油醚萃取物在濃度為0.002 g·mL-1時(shí),清除率為30.0%, 1.000 g·mL-1時(shí),清除率為87.5 %,隨著濃度的遞增,對DPPH·自由基清除能力呈現(xiàn)遞增趨勢,用 IC50計(jì)算軟件計(jì)算所得的 IC50值為3.416 mg·mL-1;同樣果實(shí)的石油醚萃取物在濃度為0.0008 g·mL-1時(shí),清除率為33.3%, 0.0040g·mL-1時(shí),清除率為82.7 %,亦成劑量依賴關(guān)系, IC50值為1.711 mg·mL-1;且同濃度0.0040 g·mL-1果實(shí)的石油醚部位對DPPH·自由基的清除能力大于宿萼的石油醚部位。

    表2宿萼與果實(shí)石油醚部位清除DPPH·自由基結(jié)果

    序號(hào)宿萼石油醚部位果實(shí)石油醚部位Vc濃度g·mL-1清除率%濃度g·mL-1清除率%清除率%10.002030.00.000833.391.220.004054.70.001639.593.130.006074.40.002455.593.740.008081.60.003274.193.751.000087.50.004082.793.8

    4 結(jié) 論

    本實(shí)驗(yàn)利用MS/MS分析錦燈籠宿萼與果實(shí)石油醚萃取物的化學(xué)成分,共分析得到16種化學(xué)成分,僅有2種相同的化合物,故有很大的差異性;考察了錦燈籠宿萼與果實(shí)石油醚萃取物對DPPH·自由基的清除能力,IC50值分別為3.416、1.711mg mL-1,因此其果實(shí)的石油醚部位抗氧化活性優(yōu)于宿萼的石油醚部位。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步開發(fā)本植物不同部位的活性功能提供理論依據(jù)與參考。

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