扁蕾化學(xué)成分的研究

希古日干王圖古拉寶鋼圖諾木拉哈利嘎蘇達(dá)畢力格拉喜那木吉拉

（內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼028000）

扁蕾為龍膽科一年生或二年生草本植物扁蕾Gentianopsis barbata（Froel.）Ma 的全草，其味苦，性寒，具有祛 “協(xié)日”、清熱、愈傷、健胃等功效，作為蒙古族傳統(tǒng)醫(yī)藥的特色藥材，有著良好的療效，尤其對“協(xié)日”病，如黃疸型肝炎、膽囊炎、胃炎等消化道疾病［1-2］，但目前對該植物化學(xué)成分和藥理活性的研究較少。前期從扁蕾中分離提取多種化合物［3-7］，大多為口山酮、黃酮、萜類，具有抗腫瘤、抗炎、抗菌等多種藥理活性［8-12］；本實驗在此基礎(chǔ)上得到12 個化合物，其中化合物4、5、7、11、12 均為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)。

1 材料

AVAIVCE Ⅲ-500 型核磁共振波譜儀（德國Bruker 公司）；TQS 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Waters 公司）；KQ-800 -E 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；WRX-4 顯微熔點測定儀（上海易測儀器設(shè)備有限公司）；LD-20 AT 島津制備液相色譜儀（日本島津公司）。Venusil MP C18反相色譜柱（100 Ao，21.2 × 250 mm，10 μm）；薄層色譜柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；Sephade×LH-20 葡聚糖凝膠（瑞典Pharmacia 公司）；柱色譜硅膠及GF254 薄層板（青島海洋化工廠）。扁蕾采自內(nèi)蒙古西烏珠穆沁旗，經(jīng)內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院布和巴特爾教授鑒定為扁蕾Gentianopsis barbata（Froel.）Ma。甲醇為色譜純（山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司）；其他試劑均為分析純。

2 提取與分離

取扁蕾1.1 kg，粉碎后用95%乙醇回流提取3次，每次3 h，提取液減壓濃縮得浸膏0.5 kg，加500 mL 去離子水?dāng)嚢璩苫鞈乙海来斡檬兔?、二氯甲烷、正丁醇各萃?次，合并各層，減壓濃縮至干，分別得石油醚層120.2 g、二氯甲烷層117.4 g、正丁醇層113.3 g。

取石油醚層3 g，經(jīng)硅膠柱（500 g），以石油醚-二氯甲烷（3∶2）為流動相洗脫，得流分F.1～F.100，洗脫液經(jīng)TLC 檢測，合并相似組成，得化合物3（1 g）。

取二氯甲烷層3 g，經(jīng)凝膠柱（500 g），以甲醇-二氯甲烷（3∶2）為流動相洗脫，得流分F.1～F.21、F.2.1～F.2.87，洗脫液經(jīng)TLC 檢測，合并相似組成，得化合物1（2 g）、2（1.4 g）、6（1 g）、8（2 g）、10（3 g）。再將F.7～F.21 合并，經(jīng)反相制備HPLC，以不同體積分?jǐn)?shù)甲醇為流動相梯度洗脫，得化合物9（0.2 g）。

正丁醇層經(jīng)反相制備HPLC，以不同體積分?jǐn)?shù)甲醇為流動相梯度洗脫，得化合物4（0.5 g）、5（0.5 g）、7（0.4 g）、11（0.4 g）、12（0.3 g）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末，溶于甲醇；ESI-MSm／z287.0 ［M ＋H］＋，C15H10O6。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：7.38（brs，1H），7.37（brs，1H）為C環(huán)2′和6′位苯環(huán)氫信號，6.90（d，J＝8.2 Hz，1H）為C 環(huán)5′位鄰耦產(chǎn)生的氫信號，6.54（s，1H）位B 環(huán)3 位氫原子信號，6.43（brs，1H），6.20（brs，1H）為A 環(huán)7 位和9 位間耦產(chǎn)生的氫信號。13CNMR（125 MHz，MeOD）δ：182.5（C-4），164.9（C-2），164.7（C-7），161.8（C-5），157.9（C-9），149.6（C-4′），145.6（C-3′），122.2（C-1′），118.9（C-6′），115.4（C-5′），112.7（C-2′），103.9（C-10），102.4（C-3），98.7（C-6），93.6（C-8）。與文獻(xiàn)［13］報道的木犀草素一致。

化合物2：黃色針狀結(jié)晶，溶于甲醇；ESI-MSm／z276.0 ［M＋H］＋，C14H12O6。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：11.91（s，1H）和9.51（s，2H）為1，7，8 位活潑氫信號，7.30（d，J＝8.9Hz，1H）和6.91（d，J＝8.9 Hz，1H）為5，6位鄰耦氫信號，6.62（d，J＝2.0 Hz，1H）和6.40（d，J＝2.1 Hz，1H）為2，4 位間耦氫信號，3.89（s，3H）為3 位甲氧基信號（OCH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：184.8（C ＝O），167.5（C-3），162.4（C-1），158.2（C-4a），148.5（C-4b），147.6（C-8），141.0（C-7），124.6（C-6），107.9（C-8a），106.5（C-5），102.2（C-8b），97.7（C-2），93.3（C-4），56.7（C-3）。與文獻(xiàn)［14］報道的1，7，8-三羥基-3-甲氧基口山酮一致。

化合物3：淡黃色針狀結(jié)晶，溶于甲醇；ESIMSm／z289.0 ［M-H］-，C15H14O6。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：13.30（s，1H），9.62（s，1H）為1，7 位活潑氫信號，7.39（d，J＝9.1 Hz，1H），7.23（d，J＝9.1 Hz，1H）為2，4 位鄰耦氫信號，6.34（d，J＝2.3 Hz，1H）和6.54（d，J＝2.3 Hz，1H）為2，4 位間耦氫信號，3.87（s，3H），3.81（s，3H）為3，8 位甲氧基信號（OCH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：181.0（C ＝O），166.5（C-3），163.3（C-1），157.2（C-4a），149.8（C-8），147.5（C-4b），145.7（C-7），124.9（C-6），115.4（C-8a），113.7（C-5），103.7（C-8b），97.2（C-2），92.3（C-4），61.5（C-3），56.5（C-8）。與文獻(xiàn)［13］報道的1，7-二羥基-3，8-二甲氧基口山酮一致。

化合物4：黃色無定型粉末，溶于甲醇；ESIMSm／z363.1 ［M-H］-，C18H20O8。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ；12.59（s，1H）為1 位活潑氫信號，7.15（d，J＝2.5 Hz，1H），7.07（d，J＝2.5 Hz，1H）為6，8 位間耦氫信號，4.06（s，3H），3.99（s，3H），3.91（s，3H），3.88（s，3H），3.82（s，3H）為5 個甲氧基信號（OCH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：180.1（C-9），156.4（C-7），154.2（C-3），151.9（C-1），141.9（C-5），135.3（C-4b），134.3（C-4a），132.8（C-4），130.5（C-2），120.9（C-8a），113.3（C-8b），107.8（C-6），95.6（C-8），61.9（C-1′），61.1（C-2′），61.1（C-3′），57.2（C-4′），56.2（C-5′）。與文獻(xiàn)報道的1-羥基-2，3，4，5，7-五甲氧基口山酮一致［15］。

化合物5：黃色粉末，溶于甲醇；ESI-MSm／z303.1 ［M-H］-，C16H16O6。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.71（s，1H）為1 位活潑氫信號，7.70（d，J＝8.0Hz，1H），7.42（t，J＝8.0 Hz，1H），7.54（d，J＝7.9 Hz，1H）為苯環(huán)上6，7，8位氫信號，3.98（d，J＝8.6 Hz，6H，），3.74（s，3H）為3 個甲氧基信號（OCH3），13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：180.6（C-9），160.2（C-3），153.1（C-1），152.7（C-4a），148.1（C-5），145.6（C-4b），131.3（C-2），124.2（C-7），120.3（C-8a），116.7（C-8），115.6（C-6），103.4（C-8b），91.7（C-4），60.1（C-1′），56.7（C-2′），56.3（C-3′）。與文獻(xiàn)［16］報道的1-羥基-2，3，5-三甲氧基口山酮一致。

化合物6：黃色無定型粉末，易溶于甲醇；ESI-MSm／z303.0 ［M-H］-，C16H16O6。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：13.29（s，1H）為1 位活潑氫信號，7.22（d，J＝9.1 Hz，1H）和7.39（d，J＝9.1 Hz，1H）為5，6 位鄰耦氫信號，6.32（d，J＝2.3 Hz，1H）和6.52（d，J＝2.3 Hz，1H）為2，4 位間耦氫信號，3.81（s，3 H）和3.87（brs，6H）為3，7，8 位甲氧基信號（OCH3）。與文獻(xiàn)［17］報道的1-羥基-3，7，8-三甲氧基口山酮一致。

化合物7：黃色針狀結(jié)晶，易溶于甲醇；ESIMSm／z333.0 ［M-H］-，C17H18O7。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.62（s，1H）為1 位活潑氫信號，7.71（d，J＝9.9 Hz，1H）為5 位三旋體系（AB2）結(jié)構(gòu)氫信號，7.52（dd，J＝9.9，3.1 Hz，1H）為6 位三旋體系（AB2）結(jié)構(gòu)氫信號，7.51（d，J＝3.1 Hz，1H）為8 位三旋體系（AB2）結(jié)構(gòu)氫信號，4.06（s，3H）、3.89（brs，6H）和3.83（s，3H）為4 個甲氧基信號（OCH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：181.3（C-9），156.4（C-7），154.4（C-3），150.8（C-1），150.2（C-4a），145.9（C-4b），135.2（C-2），132.6（C-4），125.9（C-6），120.3（C-8a），120.2（C-6），105.5（C-8），104.7（C-8b），62.2（C-1′），61.9（C-2′），61.1（C-3′），56.3（C-4′）。與文獻(xiàn) ［18］報道的1-羥基-2，3，4，7-四甲氧基口山酮一致。

化合物8：黃色顆粒狀，少量溶于甲醇；ESIMSm／z449.1 ［M＋H］＋，C15H16O6。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：13.00（s，1H）為活潑氫信號，7.46（dd，J＝8.4，2.3 Hz，1H）為C 環(huán)6′位氫信號，7.42（d，J＝2.3 Hz，1H）為C 環(huán)2′位氫信號，6.91（d，J＝8.4 Hz，1H）為C 環(huán)5′ 鄰耦氫信號，6.79（d，J＝2.1 Hz，1H）和6.45（d，J＝2.1 Hz，1H）為A 環(huán)8，5 位間耦氫信號，6.76（s，1H）為B 環(huán)3 位孤立氫信號，5.09（d，J＝7.5 Hz，1H）位端基碳原子上的氫信號，3.72～3.16（m，10H）為鏈接糖苷上的氫信號。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：182.4（C-4），164.9（C-2），163.4（C-7），161.6（C-5），157.4（C-9），150.4（C-4′），146.3（C-3′），121.9（C-1′），119.6（C-6′），116.5（C-5′），114.0（C-2′），105.8（C-10），103.6（C-3），100.4（C-1″），100.0（C-6），95.2（C-8），77.6（C-5″），76.9（C-3″），73.6（C-2″），70.0（C-4″），61.1（C-6″）。與文獻(xiàn)［19］報道的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷一致。

化合物9：黃色無定型粉末，溶于甲醇；ESIMSm／z581.3 ［M-H］-，C26H32O15。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.16（d，J＝9.0 Hz，1H）和7.30（d，J＝9.1 Hz，1H）為5，6 位鄰耦氫信號，6.77（d，J＝2.3 Hz，1H）和6.73（d，J＝2.3 Hz，1H）為4，2 位間耦氫信號，4.92（d，J＝7.7 Hz，1H）和4.18（d，J＝7.6 Hz，1H）為兩個糖的端基碳上的氫信號，3.88（s，3H）和3.80（s，3H）為8，3 位甲氧基信號（OCH3）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：175.1（C ＝O），164.6（C-3），159.5（C-1），158.2（C-4a），148.9（C-8），147.3（C-4b），145.6（C-7），123.5（C-6），117.8（C-7a），113.1（C-5），107.9（C-8b），104.6（C-1′），103.1（C-1″），100.6（C-2），95.3（C-4），80.8（C-5′），77.0（C-3″），76.8（C-3′），73.8（C-2″），73.8（C-2′），69.9（C-4′），69.6（C-4″），66.1（C-6′），64.6（C-5″），61.3（C-3），56.5（C-8）。與文獻(xiàn)［20］報道的1-O-［β-D-吡喃木糖（1 →6）-β-D-吡喃葡萄糖］-7-羥基-3，8-二甲氧基口山酮一致。

化合物10：白色粉末，易溶于甲醇；ESI-MSm／z455.1［M-H］-，C30H48O3。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：12.03（s，1H），5.16（s，1H），4.30（d，J＝5.2 Hz，1H），2.99（dd，J＝10.2，5.3 Hz，1H），2.81～2.69（m，1H）為連氧碳上的氫信號，1.96～0.62（m，21H）為7 個甲基質(zhì)子信號。13CNMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：144.3（C-13），121.9（C-12），77.3（C-3），55.3（C-5），47.5（C-9），40.6（C-14），38.9（C-8），38.5（C-4），37.1（C-1），33.8（C-10），32.6（C-7），27.4（C-2），26.1（C-15），23.4（C-11），23.1（C-16），18.5（C-6）。與文獻(xiàn)［21］報道的齊墩果酸一致。

化合物11：淡黃色粉末，溶于甲醇；ESI-MSm／z359.1［M＋H］＋，C16H22O9。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.49（s，1H）為雙鍵上3 位氫信號，4.50（d，J＝7.9 Hz，1H）為連糖端基碳上的1′位氫原子信號。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：164.7（C-11），151.5（C-3），132.4（C-8），120.4（C-10），104.9（C-4），98.1（C-1′），95.6（C-1），77.4（C-5′），76.4（C-3′），73.1（C-2′），70.1（C-4′），67.7（C-7），61.1（C-6′），41.5（C-9），26.8（C-5），24.3（C-6）。與文獻(xiàn)［22］報道的獐牙菜苷一致。

化合物12：淡黃色粉末，溶于甲醇；ESI-MSm／z413.1［M＋Na］＋，C17H26O10。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：7.36（s，1 H，H-3）為3 位雙鍵上的氫信號，5.12（d，J＝5.0 Hz，1H）為1 位連氧碳上的氫信號，4.47（m，1H）為7 位氫信號，3.88（m，1H）為連糖6′氫信號，3.62（s，3H）為12 位甲基（CH3）上的氫信號，3.16（m，1H）為5 位氫信號，2.06（m，1H）為9 位氫信號，1.84（m，1H）為8 位氫信號，1.76（m，2H）為6 位氫信號，0.98（d，J＝6.8 Hz，3H）為10 位甲基（CH3）上的氫信號。13C-NMR（125 MHz，DMSOd6）δ：167.0（C-11），150.6（C-3），112.1（C-4），98.6（C-1′），96.1（C-1），77.2（C-3′），76.7（C-5′），73.1（C-2′），72.1（C-7），70.1（C-4′），61.1（C-6′），51.0（C-12），44.7（C-8），41.7（C-6），40.5（C-9），30.8（C-5），13.5（C-10）。與文獻(xiàn)［23］報道的馬錢素一致。

4 結(jié)論

本實驗從扁蕾95 %乙醇提取物中分離鑒定了12 個化合物，其中化合物4、5、7、11、12 均為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)，可為其今后開發(fā)利用提供依據(jù)。