吳康秀，黎志國，劉穗萍，蘇鴻君，熊敏敏*

頭頸鱗狀細(xì)胞癌（head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC）發(fā)生于口腔、咽喉和喉部的黏膜上皮，是頭頸癌最常見的惡性腫瘤［1］。超過60%的HNSCC 患者在診斷時(shí)表現(xiàn)出局部轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差［2］。因此，研究HNSCC 預(yù)后評估的生物標(biāo)志物，對于判斷HNSCC 疾病進(jìn)展和改善預(yù)后具有重要意義。

糖基化作為一種翻譯后修飾，是指在酶的催化下，將糖基轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)或脂質(zhì)上的過程，參與細(xì)胞黏附、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫調(diào)節(jié)等多種生理過程［3］。糖基化異?？赡苡绊懠?xì)胞的增殖、黏附、轉(zhuǎn)移、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，在癌癥的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用。糖基化異常有多種機(jī)制，包括糖基轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)水平異常［4-6］、糖基轉(zhuǎn)移酶分泌過程中定位異常［7］、分子伴侶活性異常［8］等。例如乳腺癌中唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因ST6GALNAC5 的過表達(dá)會促進(jìn)腫瘤的腦轉(zhuǎn)移［9］。而敲低乳腺癌細(xì)胞系的ST6GALNAC2 基因會導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移的增加［10］。唾液酸轉(zhuǎn)移酶ST6GALNAC1 將唾液酸添加到絲氨酸或蘇氨酸殘基的α-2，6 鍵上，在各種腫瘤中異常表達(dá)，已被證明與胃癌、乳腺癌和前列腺癌的不良預(yù)后相關(guān)［11］，還有研究發(fā)現(xiàn)ST6GALNAC1 的異常表達(dá)與膀胱癌免疫細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)相關(guān)［12］，但其在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中的作用尚不清楚。

在這項(xiàng)研究中，我們旨在研究ST6GALNAC1在HNSCC 中的預(yù)后和免疫作用，評估其作為HNSCC 生物標(biāo)志物的價(jià)值。主要的研究內(nèi)容包含：糖基轉(zhuǎn)移酶差異基因的篩選、基因表達(dá)分析、生存曲線分析、免疫細(xì)胞景觀分析、相關(guān)通路分析、實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。本研究將為探究ST6GALNAC1 在HNSCC的發(fā)病、臨床預(yù)后和免疫治療中的潛在功能提供新依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)獲取和預(yù)處理

從腫瘤基因組圖譜（The Cancer Genome Atlas，TCGA）數(shù)據(jù)庫中獲取HNSCC 的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和HNSCC 患者的臨床信息數(shù)據(jù)（表1），并根據(jù)從GENCODE 獲得的GeneSymbol 和ENSG_ID 的 轉(zhuǎn)錄本注釋信息，將ENSG_ID 映射到GeneSymbol 上，最終獲得了轉(zhuǎn)換后的HNSCC 全基因組表達(dá)譜。由參考文獻(xiàn)獲得參與糖基化過程的173 個(gè)糖基轉(zhuǎn)移酶基因［13］。

表1 TCGA 數(shù)據(jù)庫中HNSCC 患者的臨床信息

1.2 HNSCC 中糖基轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)分析

使用R 軟件Limma 包對HNSCC 表達(dá)譜進(jìn)行差異基因篩選，以獲得腫瘤組和正常組間的差異基因，將篩選結(jié)果繪制成火山圖，篩選標(biāo)準(zhǔn)：|log2（fold change）|＞1，P＜0.05。將以上篩選出的差異基因和173 個(gè)糖基轉(zhuǎn)移酶基因?qū)Ρ龋玫紿NSCC 糖基轉(zhuǎn)移酶差異表達(dá)基因，繪制韋恩圖。本研究利用UALCAN［14］（http：//ualcan.path.uab.edu/）門 戶 網(wǎng)站上的TGCA 分析得到了ST6GALNAC1 mRNA 水平表達(dá)數(shù)據(jù)及其與HNSCC 患者不同臨床病理特征的相關(guān)性。同時(shí)，通過UALCAN 數(shù)據(jù)庫上的臨床蛋白質(zhì)組學(xué)腫瘤分析聯(lián)盟（CPTAC）數(shù)據(jù)集和人類蛋白組圖譜（HPA）數(shù)據(jù)庫［15］獲得了ST6GALNAC1 在正常組織和HNSCC 腫瘤組織的蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)。

1.3 生存預(yù)后分析

本研究從GEPIA2［16］可視化網(wǎng)站上獲取HNSCC 的總體生存（overallsurvival，OS）曲線和無病生存（disease free survival，DFS）曲線。以ST6GALNAC1 基因表達(dá)量的中位數(shù)作為閾值將HNSCC 腫瘤樣本分成高表達(dá)組和低表達(dá)組，以月為單位進(jìn)行繪圖，假設(shè)檢驗(yàn)采用對數(shù)秩檢驗(yàn)。

1.4 免疫細(xì)胞浸潤分析

通 過TIMER2.0［17］（Tumour Immune Estimation Resource，Version2，http：//timer.cistrome.org/）數(shù)據(jù)庫的Immune 版塊對ST6GALNAC1 表達(dá)與腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞的相關(guān)性進(jìn)行分析。以ST6GALNAC1 基因表達(dá)量的中位數(shù)作為閾值將HNSCC 腫瘤樣本分成高表達(dá)組和低表達(dá)組?；赥CGA 數(shù)據(jù)庫中的HNSCC 的轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜，使用R 軟件IOBR 包選擇ESTIMATE、EPIC、Xcell 算法計(jì)算兩組樣本的免疫浸潤細(xì)胞評分。從TCGA 數(shù)據(jù)庫獲得HNSCC 免疫檢查點(diǎn)基因和HLA 基因表達(dá)譜，利用Sangerbox 在線畫圖工具繪制箱型圖來可視化兩組樣本免疫檢查點(diǎn)基因和HLA 基因的表達(dá)差異結(jié)果，檢驗(yàn)方法采用秩和檢驗(yàn)。

1.5 ST6GALNAC1 相關(guān)基因的富集分析

使用STRING［18］工具（https：//string-db.org/）構(gòu)建ST6GALNAC1 及其相關(guān)蛋白的相互作用網(wǎng)絡(luò)。通過GEPIA2 工具獲得ST6GALNAC1 相關(guān)的前100個(gè)靶基因，將ST6GALNAC1 與前5 名相關(guān)基因進(jìn)行成對基因相關(guān)性分析，通過Sangerbox 在線畫圖工具來分析和可視化GO 和KEGG 分析，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異設(shè)為P＜0.05。

1.6 Western Blot

1.6.1 細(xì)胞來源 人舌鱗癌細(xì)胞Cal27 和從口腔分離出來的人正常成纖維細(xì)胞（Normal Fibroblast，NF）來源于中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院口腔科黃志權(quán)課題組的贈送。

1.6.2 細(xì)胞處理和蛋白樣品的制備 將人舌鱗癌細(xì)胞Cal27 和NF 種到6 cm 的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞密度長到80%左右時(shí)，用無菌PBS 洗滌3 次，加入200 μL 細(xì)胞裂解液（100 mM Tris-Hcl（pH6.8），1 mM EDTA-Na2，1×蛋白酶抑制劑，2% SDS，1 mM PMSF），室溫靜置5 min 后，將裂解液轉(zhuǎn)移至無菌EP 管中，95℃金屬浴變性30 min，用12 000 r/min 的轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清，采用BCA試劑盒測定蛋白濃度，用裂解液將各組蛋白溶液的濃度和體積調(diào)成一致，加入loading buffer，混勻，95 ℃金屬浴煮5 min。

1.6.3 Western Blot 配制8%的分離膠和5%濃縮膠，將處理好的蛋白樣品等體積上樣，恒壓100 V電泳，溴酚藍(lán)條帶跑到距離凝膠底部約1 cm 處時(shí)即可停止電泳；恒壓100 V 轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)180 min；將PVDF 膜用5% BSA 在室溫下封閉30 min，使用1：1000 的ST6GALNAC1 兔抗體或1∶2000 的β-actin小鼠抗體在室溫下孵育膜1 h，用1×TBST 洗滌膜3 次后，加入1∶10 000 的HRP 綴合的羊抗兔IgG 抗體或HRP 綴合的羊抗鼠IgG 抗體，放室溫的搖床上孵育1 h，用1×TBST 洗滌膜3 次；將ECL 發(fā)光液配好，淋到膜上，浸軟完全，顯影。

1.7 總RNA 的提取和實(shí)時(shí)熒光定量PCR

使用總RNA 提取試劑盒（vazyme，RC112-01）提取細(xì)胞的總RNA，利用Hifair?Ⅲ1st Strand cDNA Synthesis SuperMix（Yeasen，11141ES60）、Hieff UNICON?Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix（Yeasen，11184ES08）來分別進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和qPCR，具體步驟參考相關(guān)的說明書。選GAPDH作為內(nèi)參。ST6GALNAC1 引物序列為上游：5′-AGCTCTGTGACCAGGTGAGT-3′；下游：5′-ATCCCTTCATCGTGTAGCCG-3′。GAPDH引物序列為上游：5′-ACAGTCAGCCGCATCTTCTT-3′；下 游：5′-GACAAGCTTCCCGTTCTCAG-3′。PCR 擴(kuò) 增 條 件：94℃2 min，94℃2 s，58 ℃20 s，72 ℃20 s，40 個(gè)循環(huán)。

2 結(jié) 果

2.1 ST6GALNAC1 基因及蛋白質(zhì)在HNSCC 癌組織中表達(dá)降低

根據(jù)所設(shè)定的顯著性和閾值，對TCGA 數(shù)據(jù)庫獲取的HNSCC 轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜進(jìn)行分析，對比癌組織和正常組織的基因表達(dá)水平，篩選得到在HNSCC 癌組織中異常表達(dá)的1399 個(gè)基因，其中800個(gè)基因表達(dá)升高，399個(gè)基因表達(dá)降低（圖1A）。其中，17 個(gè)糖基轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)異常（圖1B），分 別 是COLGALT1、EXT1、POGLUT2、GALNT2、CHPF、GALNT6、GALNT18、LARGE2、ALG3、XXYLT1表 達(dá) 增 加，GALNT12、GALNT5、FUT2、GCNT3、ST6GALNAC1、FUT6、FUT3 表達(dá)降低，唾液酸轉(zhuǎn)移酶ST6GALNAC1 基因在HNSCC 中表達(dá)顯著下調(diào)（圖1C-D）。

圖1 ST6GALNAC1 基因在HNSCC 中的表達(dá)分析

基于ULCAN數(shù)據(jù)庫挖掘，CPTAC 分析結(jié)果顯

示，ST6GALNAC1 蛋白在HNSCC 中表達(dá)下調(diào)（圖1E）。HPA 數(shù)據(jù)庫的免疫組化結(jié)果表明，與正常組織相比，ST6GALNAC1 在HNSCC 癌組織的表達(dá)顯著降低（圖1F）。以上結(jié)果表明，在HNSCC 癌組織中唾液酸轉(zhuǎn)移酶ST6GALNAC1 無論是在mRNA水平，還是蛋白水平均表達(dá)下調(diào)。

2.2 ST6GALNAC1 表達(dá)水平與HNSCC 患者臨床病理特征的相關(guān)性

利用UALCAN 數(shù)據(jù)庫分析ST6GALNAC1 基因表達(dá)與HNSCC 患者臨床病理特征的相關(guān)性。ST6GALNAC1 基因表達(dá)與HNSCC 患者性別無相關(guān)性（圖2A）。隨著HNSCC 患者年齡的增加，或患者出現(xiàn)近端和遠(yuǎn)端淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，ST6GALNAC1 基因表達(dá)水平逐漸降低（圖2B、2C）。ST6GALNAC1 基因表達(dá)與HNSCC 患者的腫瘤分期存在負(fù)相關(guān)關(guān)系，但與腫瘤分化程度成正相關(guān)性（圖2D、2E）。

圖2 HNSCC 患者中ST6GALNAC1 的表達(dá)與不同臨床特征的相關(guān)性分析

其次，通過GEPIA2 數(shù)據(jù)庫研究ST6GALNAC1表達(dá)與HNSCC 患者生存時(shí)間之間是否有聯(lián)系，生存分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)ST6GALNAC1 表達(dá)能夠顯著影響HNSCC 患者的生存預(yù)后情況，具體表現(xiàn)為ST6GALNAC1-Low 組HNSCC 患者預(yù)后較差，總體生存時(shí)間（OS）和無病生存時(shí)間（DFS）縮短，而ST6GALNAC1-High 組患者則有良好臨床預(yù)后（圖3A、B）。綜上所述，ST6GALNAC1 表達(dá)降低與HNSCC 患者的臨床病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，和不良預(yù)后生存相關(guān)，ST6GALNAC1 可能是一個(gè)有價(jià)值的能夠預(yù)測HNSCC 患者生存時(shí)間的預(yù)后標(biāo)志物。

圖3 ST6GALNAC1 表達(dá)水平HNSCC 患者的生存預(yù)后分析

2.3 ST6GALNAC1 表達(dá)與HNSCC 腫瘤組織的免疫細(xì)胞浸潤呈負(fù)相關(guān)性

我們利用TIMER2.0 數(shù)據(jù)庫分析ST6GALNAC1表達(dá)與HNSCC 腫瘤組織微環(huán)境腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（cancer-associated fibroblasts，CAFs）的相關(guān)性。TIMER，TIDE，XCEL，MCPCOUNTER，EPIC 算法的結(jié)果顯示ST6GALNAC1表達(dá)與HNSCC中CAFs浸潤呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（圖4A）。進(jìn)一步，我們基于HNSCC 的基因表達(dá)譜，使用R 軟件IOBR 包選擇ESITMATE、EPIC、Xcell 算法評估ST6GALNAC1-High 組和ST6GALNAC1-Low 組HNSCC 患者的免疫細(xì)胞浸潤情況。ESITMATE 算法結(jié)果顯示，和ST6GALNAC1-High 組 相 比，ST6GALNAC1-Low 組HNSCC 患者的基質(zhì)細(xì)胞、免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞純度評分較高，說明ST6GALNAC1-Low 組HNSCC患者的基質(zhì)細(xì)胞、免疫細(xì)胞浸潤程度較高，腫瘤細(xì)胞的含量也較高（圖4B）。EPIC 算法結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ST6GALNAC1-Low 組患者的CAFs、巨噬細(xì)胞、CD4 T細(xì)胞和NK細(xì)胞的比例升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖4C）。同樣地，Xcell 算法結(jié)果表明，ST6GALNAC1-Low 組患者大多數(shù)免疫細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的比例也是明顯增加的（圖4E）。另外，我們還觀察到ST6GALNAC1-Low 組患者絕大部分的HLA 基因和免疫檢查點(diǎn)基因表達(dá)的顯著上調(diào)，而ST6GALNAC1-High組患者則是相反的趨勢（圖4D、4F）。綜上所述，在HNSCC 中，ST6GALNAC1 表達(dá)降低與各類免疫細(xì)胞浸潤增加、免疫檢查點(diǎn)基因和HLA 基因表達(dá)上調(diào)相關(guān)。

圖4 ST6GALNAC1 表達(dá)與HNSCC 中免疫細(xì)胞景觀的相關(guān)性分析

2.4 ST6GALNAC1 及其相關(guān)蛋白參與糖蛋白的生物合成過程

為了給后續(xù)的機(jī)制研究提供思路，我們進(jìn)一步挖掘與ST6GALNAC1 相關(guān)的基因，并分析他們之間的聯(lián)系。利用STRING 在線工具進(jìn)行蛋白-蛋白相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)繪制，鑒定了20 個(gè)已有實(shí)驗(yàn)證明與ST6GALNAC1 相關(guān)的基因（圖5A）。然后，在GEPIA2 數(shù)據(jù)庫獲得前100 個(gè)ST6GALNAC1 相關(guān)基因，發(fā)現(xiàn)ST6GALNAC1表達(dá)與含V-Set 免疫球蛋白域蛋白2（VSIG2）、粘蛋白20（MUC20）、磷酸二酯酶4C（PDE4C）、脂肪酶H（LIPH）、巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶3（FUT3）的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（圖5B）。GO 和KEGG 富集分析揭示了ST6GALNAC1 及其相關(guān)蛋白主要參與蛋白糖基化過程，黏蛋白型O-聚糖生物合成和糖鞘脂生物合成過程（圖5C），ST6GALNAC1 及其相關(guān)蛋白的改變可能通過影響以上生物合成過程，進(jìn)一步改變癌細(xì)胞的生物學(xué)過程，從而影響HNSCC 的發(fā)生發(fā)展和免疫細(xì)胞的浸潤。

圖5 ST6GALNAC1 相關(guān)基因的富集分析

2.5 人舌鱗癌細(xì)胞系的ST6GALNAC1 表達(dá)降低

為了驗(yàn)證ST6GALNAC1 的表達(dá)，我們選擇人舌鱗癌細(xì)胞系（Cal27）來展開進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。通過Western Blot 和q-PCR 來 檢 測Cal27 的ST6GALNAC1 表達(dá)水平，結(jié)果顯示，與人口腔正常成纖維細(xì) 胞（Normal Fibroblast，NF）相 比，Cal27 細(xì) 胞ST6GALNAC1 的蛋白和mRNA 水平是表達(dá)下降的（圖6 A-B）。

圖6 Cal27 細(xì)胞的ST6GALNAC1 表達(dá)水平分析

3 討 論

ST6GALNAC1屬于唾液酸轉(zhuǎn)移酶家族，目前已經(jīng)在卵巢癌［19］、食管鱗狀細(xì)胞癌［20］、結(jié)腸癌［21］、膀胱癌［12］、前列腺癌［22］等腫瘤以及潰瘍性結(jié)腸炎［23］、子宮內(nèi)膜異位癥［24］等多種疾病中發(fā)現(xiàn)ST6GALNAC1的異常表達(dá)。本研究顯示ST6GALNAC1 在HNSCC癌組織中表達(dá)顯著下降，且ST6GALNAC1 的表達(dá)隨著患者年齡的增長和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)而降低，這表明ST6GALNAC1 是治療HNSCC 的潛在靶點(diǎn)。

此外，有研究表明ST6GALNAC1 的表達(dá)與預(yù)后生存狀態(tài)相關(guān)。研究人員發(fā)現(xiàn)，ST6GALNAC1過表達(dá)會導(dǎo)致胃癌細(xì)胞腹腔轉(zhuǎn)移增強(qiáng)和小鼠生存期縮短［25］。本研究顯示ST6GALNAC1 表達(dá)降低與較差的OS 和DFS 相關(guān)，說明ST6GALNAC1 是預(yù)測HNSCC 患者預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。

腫瘤微環(huán)境（TME）由先天性免疫細(xì)胞、適應(yīng)性免疫細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)組成，在腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮舉足輕重的作用，可以顯著影響臨床結(jié)果［26］。生物信息學(xué)工具的飛速發(fā)展使得科研人員能夠迅速全面了解腫瘤微環(huán)境的各類細(xì)胞浸潤情況，從而找到新的治療方向。在本研究中，我們分析了HNSCC 中ST6GALNAC1 表達(dá)與各類細(xì)胞浸潤的關(guān)系。結(jié)果顯示，在HNSCC 中，ST6GALNAC1表達(dá)與CAFs 浸潤呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，即ST6GALNAC1低表達(dá)的HNSCC 患者，CAFs 浸潤增加。CAFs 是腫瘤激活的成纖維細(xì)胞，是TME 中最豐富的基質(zhì)成分之一［27］。越來越多的證據(jù)表明，CAFs 與多種癌癥的不良預(yù)后相關(guān)［28，29］。我們還發(fā)現(xiàn)，ST6GALNAC1 表達(dá)降低的HNSCC 患者，CD8+T 細(xì)胞、Th1、Th2、Treg、NK、NKT、巨噬細(xì)胞的比例增高。高密度的T 細(xì)胞，特別是激活的CTLs 和Th1 細(xì)胞與一些腫瘤的良好預(yù)后相關(guān)，比如結(jié)腸癌、黑素瘤、胰腺癌和多發(fā)性骨髓瘤［30，31］。然而，也有證據(jù)表明，實(shí)體瘤中的許多T 細(xì)胞亞群參與了腫瘤的促進(jìn)、進(jìn)展或轉(zhuǎn)移，這些T 細(xì)胞亞群包括CD8+T 細(xì)胞［32］、產(chǎn) 生IFN-γ 的Th1 細(xì) 胞［33］、Th2 細(xì) 胞［34］、Th17 細(xì)胞［35］。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）是腫瘤微環(huán)境中最常見的免疫細(xì)胞之一，TAMs 主要促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長，可能是血管生成、腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移所必需的細(xì)胞［36］，有研究發(fā)現(xiàn)含量高的TAMs 通常是與預(yù)后不良相關(guān)的［37］。Treg 細(xì)胞主要通過抑制機(jī)體的抗腫瘤反應(yīng)而發(fā)揮促腫瘤作用［38］。腫瘤微環(huán)境中的TAMs、Tregs、中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和髓系來源異質(zhì)性細(xì)胞（MDSCs）等具有免疫抑制特性的免疫細(xì)胞，會賦予癌細(xì)胞免疫逃逸機(jī)制，使其逃離CD8+T 細(xì)胞或NK 細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷，增強(qiáng)癌細(xì)胞獲得新突變、進(jìn)化和快速生長的能力［39］。此外，我們還發(fā)現(xiàn)ST6GALNAC1 表達(dá)降低的HNSCC 大部分免疫檢查點(diǎn)基因和HLA 基因表達(dá)增高，表明ST6GALNAC1低表達(dá)患者免疫靶向治療獲益更大。

對ST6GALNAC1 相關(guān)基因進(jìn)行功能富集分析，發(fā)現(xiàn)他們主要參與蛋白糖基化過程，黏蛋白型O-聚糖生物合成和糖鞘脂生物合成過程，這也可能是ST6GALNAC1 參與HNSCC 發(fā)生發(fā)展的潛在機(jī)制。有報(bào)道指出，糖基轉(zhuǎn)移酶活性改變會導(dǎo)致糖基化過程不能順利進(jìn)行，從而暴露Tn 抗原，Tn抗原和半乳糖凝集素3（galectin3）結(jié)合，介導(dǎo)了腫瘤的轉(zhuǎn)移［40］。

最后，我們通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)了ST6GALNAC1 在Cal27 中是低表達(dá)的。盡管ST6GALNAC1 基因表達(dá)的增加在許多癌癥中促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，但有研究發(fā)現(xiàn)它對起源于神經(jīng)組織的癌癥（如膠質(zhì)瘤）具有相反的作用［41］，這可能是因?yàn)橥僖核峄谏窠?jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)和再生中起著關(guān)鍵作用，ST6GALNAC1 可能也是通過類似的機(jī)制對HNSCC產(chǎn)生影響的，然而，本篇論文僅對ST6GALNAC1 在HNSCC 中的表達(dá)進(jìn)行了體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，仍需要進(jìn)一步的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探究ST6GALNAC1 的功能以及機(jī)制。

綜上所述，本研究通過多個(gè)數(shù)據(jù)庫分析明確了ST6GALNAC1 表達(dá)與HNSCC 臨床預(yù)后和免疫細(xì)胞浸潤的關(guān)系，確定了ST6GALNAC1 相關(guān)的基因；還通過實(shí)驗(yàn)確認(rèn)了ST6GALNAC1 在Cal27 中是表達(dá)下調(diào)的。這些結(jié)果提示ST6GALNAC1 可能是一種新的、有前景的HNSCC 預(yù)后和免疫治療生物標(biāo)志物，相信這些發(fā)現(xiàn)可能為前瞻性功能實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)，并最終在臨床實(shí)踐中產(chǎn)生積極的影響。