葛根芩連湯藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制研究進(jìn)展

路立峰， 張媛媛， 李振興， 蔣雨來

(山東藥品食品職業(yè)學(xué)院藥品技術(shù)研發(fā)中心，山東 威海 264210)

葛根芩連湯首載于張仲景《傷寒論》，原方名為葛根黃芩黃連湯，亦為后世《醫(yī)方類聚》《醫(yī)方集解》《傷寒大白》等醫(yī)藥典籍所收載，至近代《中國醫(yī)藥大辭典》始成葛根芩連湯方名。葛根芩連湯由葛根、黃芩、黃連、炙甘草組成，具有表里雙解、清熱止利之功，為治熱陷陽明、協(xié)熱下利常用方，適用于脈促喘而汗出者[1]?，F(xiàn)代研究表明，葛根芩連湯具有抗炎抑菌、降血糖、解熱、降血脂、抗氧化等多種藥理作用[2-6]，可用于治療胃腸型感冒、糖尿病、細(xì)菌性痢疾、輪狀病毒腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎等疾病[7-11]，其現(xiàn)代成方制劑有葛根芩連膠囊、片、口服液、顆粒、丸及微丸等，其中丸劑和片劑被2020年版《中國藥典》一部收錄。本文總結(jié)葛根芩連湯近十年來在化學(xué)成分、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、制備工藝、鑒別、含量測定等方面的進(jìn)展，以期為傳統(tǒng)湯劑的傳承、成方制劑的創(chuàng)新開發(fā)、質(zhì)量控制與評價(jià)提供參考。

1 化學(xué)成分

葛根芩連湯的化學(xué)成分主要有黃酮類、生物堿類、皂苷類、酚酸類、香豆素類、木脂素類等[12-13]。其中，黃酮類成分主要來源于葛根、黃芩和甘草，以葛根素、大豆苷、黃芩苷、芒柄花苷、芒柄花素、漢黃芩素、槲皮素為主；生物堿類成分全部來源于黃連，含小檗堿、表小檗堿、黃連堿、藥根堿、巴馬汀等；皂苷類成分主要來源于甘草，有甘草苷、異甘草苷、甘草皂苷G2等；此外，還有綠原酸、葛根香豆素、考邁斯托醇等酚酸類，香豆素類和木脂素類成分。

2 藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

2.1 基于成分導(dǎo)向的物質(zhì)基礎(chǔ)研究 成分導(dǎo)向型物質(zhì)基礎(chǔ)研究以獲取結(jié)構(gòu)明確的化合物為導(dǎo)向，多注重成分的獲得，而忽視湯液藥效物質(zhì)的表達(dá)，但與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析、質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測等技術(shù)相結(jié)合，可彌補(bǔ)其在方藥系統(tǒng)性和整體性研究方面存有的不足，實(shí)現(xiàn)藥效物質(zhì)的分離和篩選。超高效液相色譜-線性離子阱-靜電場軌道阱組合式高分辨質(zhì)譜(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)是一種新興技術(shù)，能實(shí)現(xiàn)未知成分的快速鑒定與分析，已逐漸用于快速識別三七、茯苓、秦艽等中藥飲片的化學(xué)成分，然而在中藥湯劑及成方制劑研究中鮮有報(bào)道。王婷婷等[12]通過構(gòu)建化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫，對葛根芩連湯中化學(xué)成分進(jìn)行UPLC-LTQ-Orbitrap-MS快速鑒定，完成整體和類群化學(xué)成分的推測及成分歸屬，共鑒定得到67個化合物，其中黃酮類36個、生物堿類12個、三萜及三萜皂苷類4個，另有酚酸類、香豆素類、木脂素類和苯乙醇苷類15個，該方法全面、快速、系統(tǒng)地實(shí)現(xiàn)葛根芩連湯化學(xué)成分的高分辨分析，為葛根芩連湯藥效物質(zhì)基礎(chǔ)闡釋和質(zhì)量控制研究提供參考依據(jù)。

2.2 基于體外模型的藥效物質(zhì)研究 目前葛根芩連湯藥效物質(zhì)篩選研究的模型主要有大鼠腸外翻生物模型、四氧嘧啶致小鼠高血糖模型和鏈尿佐菌素(STZ)復(fù)合高脂飼料2型糖尿病模型等，前者主要用于體外腸道吸收的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)篩選，后兩者則用于糖尿病的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)篩選。通過建立腸外翻生物模型，張華等[14]采用HPLC法分析葛根芩連湯及葛根芩連組、芩連組、芩連甘草組這3個不同配伍組的生物堿成分在腸道給藥后的動態(tài)變化規(guī)律，研究表明，黃連堿、藥根堿、小檗堿、巴馬汀這4個組分在不同腸段的吸收均為線性吸收，符合零級吸收速率，其中小檗堿、巴馬汀的最佳吸收部位為空腸，黃連堿、藥根堿的最佳吸收部位為結(jié)腸，并且方中其他藥能促進(jìn)黃連生物堿類成分的吸收。王躍等[15]以腸道轉(zhuǎn)運(yùn)P-糖蛋白抑制劑維拉帕米為依據(jù)，進(jìn)一步研究配伍對黃連生物堿腸吸收特性的影響，研究發(fā)現(xiàn)，各生物堿在各腸段的吸收均顯著性增加，且葛根能有效促進(jìn)十二指腸和空腸段生物堿成分的吸收，黃芩能增加回腸和結(jié)腸段黃連堿、小檗堿、巴馬汀成分的吸收，闡明葛根芩連湯復(fù)方配伍機(jī)制及合理性。葛根芩連湯具有降低血糖的藥理活性，王霜等[16]基于基線等比增減設(shè)計(jì)研究葛根-黃連藥對不同配比對小鼠血糖的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，葛根-黃連藥對劑量比為3∶8時，降低四氧嘧啶和STZ糖尿病模型血糖效果最佳，并能使正常小鼠血糖降低，對STZ所致糖尿病的血清總膽固醇、甘油三酯降低效果突出。建立在已知靶點(diǎn)基礎(chǔ)上的體外藥效物質(zhì)研究雖能客觀、系統(tǒng)的反映湯劑的作用機(jī)能，但卻無法全面表達(dá)機(jī)體整體機(jī)能。

2.3 基于藥動學(xué)的藥效物質(zhì)研究 葛根芩連湯成分多、靶點(diǎn)多、作用途徑多，其整體藥效作用特征的表達(dá)是研究的關(guān)鍵科學(xué)問題。王琦等[17]通過LC/MS/MS技術(shù)對葛根芩連湯42種入血的生物活性成分(標(biāo)志物)進(jìn)行分析和藥動學(xué)研究，結(jié)果表明，甘草酸通過抑制P-糖蛋白提高小檗堿的滲透性，甘草酸與小檗堿配伍后，能增強(qiáng)其抗糖尿病的作用，使血糖下降46.9%，胰島素水平較對照組升高40.8%，并呈劑量依賴性，該方法通過活性成分藥動學(xué)的改變，揭示葛根芩連湯協(xié)同用藥抗糖尿病的作用機(jī)制。毛瑩等[18]發(fā)現(xiàn)，葛根芩連湯藥效組分能降低胃排空速度、抑制小腸蠕動而達(dá)到良好的止瀉作用。張藝竹等[19]通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)合大鼠腸外翻及在體單向腸道灌流試驗(yàn)，研究葛根芩連湯不同配伍在大鼠體內(nèi)藥動學(xué)腸吸收，結(jié)果顯示，全方配伍能促進(jìn)葛根素、黃芩苷、小檗堿、甘草苷這4種成分在腸道中的吸收，全方組大鼠體內(nèi)葛根素、黃芩苷、小檗堿AUC值升高，但同時加快肝藥酶對甘草苷的代謝，使甘草苷AUC值降低，該結(jié)果通過藥動學(xué)闡釋葛根芩連湯方配伍的原理和機(jī)制。張啟云等[20]灌胃給予SD大鼠葛根芩連湯的11種入血成分并進(jìn)行HPLC-ESI-MS/MS檢測及成分歸屬，采用曲線下面積(AUC0～∞)自定義權(quán)重系數(shù)建立整合藥動學(xué)模型，結(jié)果表明，總黃酮、總生物堿類的藥動學(xué)參數(shù)t1/2、AUC0～∞分別為6.08 h、30.00 mg/L·h和28.86 h、1.07 mg/L·h。該方法從多成分分類整合藥動學(xué)的角度，反映出同類化合物整體在生物體內(nèi)的藥動學(xué)變化規(guī)律，但該方法在表達(dá)整體藥效作用的關(guān)聯(lián)上，尚存有一定的欠缺。

2.4 基于血清代謝組學(xué)的藥效物質(zhì)研究 湯劑藥效的發(fā)揮，與吸收入血成分密切相關(guān)，吸收入血成分的鑒定和分析，是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)，也是真實(shí)反映藥效物質(zhì)的核心。張敏等[21-22]采用氫核磁共振代謝組學(xué)技術(shù)，研究葛根芩連湯對2型糖尿病的干預(yù)和高果糖誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠糞便代謝。張敏等[21]鑒定得到15個T2DM潛在生物標(biāo)志物，并發(fā)現(xiàn)葛根芩連湯能不同程度地回調(diào)14個標(biāo)志物，認(rèn)為其可通過調(diào)節(jié)能量代謝、脂質(zhì)代謝、氨基酸代謝等途徑發(fā)揮作用，此結(jié)果通過研究大鼠血清中內(nèi)源性代謝物的變化，從代謝組學(xué)的角度為其臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論基礎(chǔ)。汪雙紅等[22]發(fā)現(xiàn)，葛根芩連湯能抵抗丙酸、乙酸、琥珀酸、?；撬岷透视退缴?，降低正丁酸、丙氨酸和谷氨酸水平，從而改善胰島素抵抗引起的大鼠氨基酸代謝、脂肪酸氧化、腸道微生物代謝等代謝紊亂狀態(tài)。該方法雖能客觀真實(shí)地反映出入血成分的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，但卻忽視了動物機(jī)體差異性帶來的影響，對無法入血的成分或入血后代謝的部分成分，不能實(shí)現(xiàn)有效的辨識與篩選。

2.5 基于譜效關(guān)系的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究 譜效關(guān)系是基于通過化學(xué)成分分析，構(gòu)建化學(xué)成分群的特征指紋圖譜，再結(jié)合適宜的藥效評價(jià)模型，實(shí)現(xiàn)中藥指紋圖譜和藥效學(xué)的有效關(guān)聯(lián)，用于評價(jià)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究。它受化合物對照品種類及色譜分離技術(shù)的限制，尚不能全面表征化學(xué)成分的指紋特征。劉文等[23]在超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)指紋圖譜基礎(chǔ)上，采用主成分分析及灰色關(guān)聯(lián)度分析，確定葛根素、大豆苷、黃連堿、表小檗堿、鹽酸藥根堿、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、漢黃芩苷、黃芩素、甘草酸銨等主要成分的共同作用，是葛根芩連湯改善濕熱內(nèi)蘊(yùn)型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型血清及組織液TNF-α影響的藥效信息物質(zhì)。

3 質(zhì)量控制

目前，葛根芩連湯質(zhì)量控制的研究內(nèi)容主要集中在粉碎、煎煮、純化精制等關(guān)鍵制備工藝，鑒別和含量測定這3個方面，而其出膏率、水分、浸出物、污染物檢查等物質(zhì)基準(zhǔn)研究的文獻(xiàn)報(bào)道則少見。

3.1 制備工藝

3.1.1 超微粉碎 超微粉碎是利用機(jī)械力或流體動力，使藥材細(xì)胞破壁，獲取均勻超微粉末的方法，具有可控性強(qiáng)、適用范圍廣的特點(diǎn)，并能有效提高體外溶出度和節(jié)省藥材。劉蕊等[24]研究表明，葛根芩連湯300目超微粉比細(xì)粉中的葛根素、黃芩苷溶出含量分別提高56.10%、41.73%，能顯著增強(qiáng)有效成分的溶出度。該研究為藥材的可持續(xù)化利用和減少服用量方面提供了有益參考。

3.1.2 煎煮 煎煮是傳統(tǒng)湯劑獲取有效物質(zhì)或有效物質(zhì)群組的主要手段，也是決定湯液安全有效的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，更是提高湯液質(zhì)量穩(wěn)定均一的控制措施。對葛根芩連湯煎煮方面的研究集中在煎法、加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)、煮取量等?！秱摗分杏懈鸶诉B湯“以水八升，先煮葛根，減二升，內(nèi)諸藥，煮取二升”的記載，周娜娜等[25]發(fā)現(xiàn)，加水量與煮取量的多少能反映出對煎煮時間的把控，并推測出《傷寒論》中葛根芩連湯的煎煮時間應(yīng)為45 min。王曉軍[26]考察合煎、分煎及共煎對葛根芩連湯有效化學(xué)成分的影響，發(fā)現(xiàn)分煎劑中葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀平均百分含量為1.93%、0.60%、0.14%、0.07%，明顯高于合煎劑及共煎劑，由此推薦分煎法制備葛根芩連湯。文謹(jǐn)?shù)萚27]對不同量值(一兩等于13.8 g和一兩等于3 g)下的葛根芩連湯，進(jìn)行經(jīng)方本原和現(xiàn)代常規(guī)煎煮法比較，發(fā)現(xiàn)高量值時，本原法煎煮的湯劑有效成分煎出量和干膏率均低于現(xiàn)代常規(guī)法，而低量值時，則均優(yōu)于現(xiàn)代常規(guī)法，提示有效成分的煎出量未能與藥材的使用量成相應(yīng)的倍數(shù)，并為此方的古為今用提供了參考依據(jù)。王立等[28]考察葛根芩連湯、黃芩單煎液、黃連單煎液這3種煎煮方式，發(fā)現(xiàn)葛根芩連湯中其他成分能對黃芩苷、小檗堿的入血吸收產(chǎn)生顯著影響，并能延長黃芩苷在體內(nèi)的作用時間。張家成等[29]以葛根素、漢黃芩苷、小檗堿、大豆苷、甘草酸銨、甘草苷、巴馬汀等主要成分溶出量為評價(jià)指標(biāo)，確定最佳煎煮工藝為9倍量水，煎煮時間50 min，發(fā)現(xiàn)在相同煎煮時間和次數(shù)的條件下，主要成分的溶出量隨加水量的增多而呈現(xiàn)上升趨勢，9倍的加水量為明顯拐點(diǎn)；在相同加水量和煎煮次數(shù)條件下，主要成分的溶出量隨煎煮時間的延長亦呈現(xiàn)上升趨勢，50 min為明顯改變點(diǎn)，但在80 min時有些成分的溶出會減少。章軍等[30]基于中醫(yī)配伍理論，對君臣佐使藥分配權(quán)重系數(shù)，進(jìn)行葛根芩連湯提取工藝的綜合評價(jià)，確定最佳煎煮工藝為8倍量水提取3次，每次1 h，此工藝穩(wěn)定可靠、重復(fù)性高、穩(wěn)定性好，為臨床用藥煎煮和工業(yè)生產(chǎn)提供參考。此外，還有動態(tài)優(yōu)化法優(yōu)化葛根芩連湯提取工藝研究報(bào)道。

3.1.3 微生物發(fā)酵 微生物發(fā)酵是傳統(tǒng)中藥與現(xiàn)代生物技術(shù)相結(jié)合的新興技術(shù)，在提高有效成分含量、獲取新的活性物質(zhì)、降低副作用、促進(jìn)生物利用度等方面具有明顯優(yōu)勢。杜晨暉等[31]通過釀酒酵母ATCC9763、GIM2.9，采用兩步培養(yǎng)法，對葛根芩連湯進(jìn)行發(fā)酵，紫外-可見分光光度法測定發(fā)酵樣品總黃酮和總生物堿的含量，結(jié)果表明，此方法能夠降低細(xì)胞壁的阻滯作用，促進(jìn)有效成分的溶出，并使總黃酮含量分別提高32.90%、30.20%、總生物堿含量分別提高24.91%、30.89%，為中藥復(fù)方制劑的研究與開發(fā)提供一種新的思路。李津等[32]對葛根芩連湯進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，以發(fā)酵產(chǎn)物對酵母靜息細(xì)胞的活性作為評價(jià)指標(biāo)，正交試驗(yàn)優(yōu)選確定最佳工藝為1∶1的生藥量和面粉量，高溫高壓滅菌，接種15 g/L酵母液，35 ℃發(fā)酵5 d，此方法制備的發(fā)酵產(chǎn)物生物活性強(qiáng)，能增強(qiáng)酵母靜息細(xì)胞葡萄糖代謝能力，并為后期大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

3.1.4 殼聚糖絮凝沉降 殼聚糖絮凝沉淀是利用殼聚糖的高吸附性能，與被分離組分結(jié)合形成架橋，獲得沉淀絮狀物的一種分離技術(shù)。孫星等[33]優(yōu)選葛根芩連湯殼聚糖絮凝沉降工藝，確定葛根芩連湯中黃酮和生物堿類成分的最佳純化條件為藥液質(zhì)量濃度0.78 g/mL，殼聚糖加入量10%，藥液pH值6，并進(jìn)行沉降效果和指紋相似度比較，結(jié)果表明，該方法與原藥液HPLC圖最為相似，對小檗堿的損失量較大，而對葛根素、黃芩苷的保留率較高，并認(rèn)為殼聚糖絮凝沉淀能改變藥液中有效成分之間的組成比例，進(jìn)而改變藥效性質(zhì)，應(yīng)慎重選擇殼聚糖絮凝沉降作為葛根芩連湯的精制工藝。

3.2 鑒別 除薄層色譜鑒別外，色譜指紋鑒別技術(shù)如HPLC指紋圖譜、UPLC-MS/MS指紋圖譜、紅外指紋圖譜等，也較多的應(yīng)用在葛根芩連湯的質(zhì)量控制研究中。

3.2.1 HPLC指紋圖譜 安叡等[34]采用RE-HPLC法，以甲醇-水(含0.5%甲酸和0.5%三乙胺)為流動相，梯度洗脫，在270 nm波長下以葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿為藥材參照峰，得到葛根、黃芩、黃連的特征峰群，建立葛根芩連湯和藥材的數(shù)字化色譜-指紋圖譜(HPLC-DFPS)，實(shí)現(xiàn)對葛根、黃芩、黃連的鑒別，但該方法受制于對照品種類的局限，無法對方中諸藥協(xié)同產(chǎn)生的新成分指認(rèn)，尚不足以實(shí)現(xiàn)指紋圖譜主要色譜峰的全面定性。宋麗軍等[35-36]利用HPLC-DAD檢測，在250、280、346 nm波長下識別葛根芩連湯23個特征峰，明確其中12個色譜峰的歸屬，實(shí)現(xiàn)對全方4味藥多成分的同時測定，此鑒別方法色譜信息豐富、分離度好、分離時間短，可用于成分的快速鑒定，并有助于葛根芩連湯及各組分的質(zhì)量控制。

3.2.2 UPLC-MS/MS指紋圖譜 UPLC-MS指紋圖譜具有分離性能強(qiáng)、分離度好、分辨率高的優(yōu)點(diǎn)，能全面反映待測組分的化學(xué)成分信息，可系統(tǒng)表明藥物成分的整體觀。王鈺樂等[37]建立葛根芩連湯UPLC-MS/MS指紋圖譜分析方法，以鹽酸小檗堿為參照峰，UPLC-TQMS檢測，定性鑒定出8個共有峰，確認(rèn)39個特征指紋峰的歸屬，其中13個來源于葛根，17個來源于黃芩，6個來源于黃連，3個來源于炙甘草，該方法操作簡單、信息量豐富、靈敏度高、分離效果好，為該湯劑的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

3.2.3 傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)指紋圖譜 與液相色譜指紋圖譜相比，紅外光譜指紋圖譜具有對樣品無損傷、不需摸索色譜條件、可獲取整體宏觀信息的優(yōu)勢，既能反映中藥內(nèi)在的物質(zhì)基礎(chǔ),又能在宏觀上有效控制中藥整體質(zhì)量。因其專屬性高，廣泛應(yīng)用于湯劑的品質(zhì)評價(jià)、組方與拆方機(jī)理研究中。越來越多的研究者采用FT-IR技術(shù)探究葛根芩連湯紅外指紋特征，徐蓓蕾等[38]確認(rèn)1 727、1 614、1 509、1 448、1 362、1 272、1 031、838、767、582 cm-1等區(qū)域?yàn)槠浼t外指紋特征峰；石玉娟等[39]在研究配伍對葛根芩連湯總多糖含量影響變化時，發(fā)現(xiàn)葛根、黃連兩藥配伍后，多糖紅外特征官能團(tuán)增多，能增加多糖溶出含量；任蕾等[40]根據(jù)紅外指紋吸收峰的強(qiáng)弱推測藥效，顯示全方配伍得到的IR指紋特征峰最強(qiáng)最多，甘草能顯著促進(jìn)葛根素的溶出，黃連能抑制黃芩素的溶出，但黃芩有助于黃連藥效的發(fā)揮。

3.3 含量測定

3.3.1 HPLC法 HPLC法簡便快捷、專屬性強(qiáng)、效率高，已廣泛的應(yīng)用于湯劑與成方制劑的質(zhì)量控制中。相關(guān)學(xué)者已采用HPLC-DAD檢測，實(shí)現(xiàn)對葛根芩連湯全方四藥中的葛根素、大豆苷、黃芩苷、甘草苷、黃連堿、藥根堿、小檗堿、鹽酸表小檗堿、巴馬汀、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、大豆苷元、甘草酸銨這14種藥效組分含量的同時測定，并完成藥效組分間的結(jié)構(gòu)比確認(rèn)，可用于全面評價(jià)和控制葛根芩連湯質(zhì)量[41-44]。

3.3.2 UPLC法 張華等[45]將UPLC法與DAD(PDA)檢測結(jié)合，在10 min內(nèi)快速測定葛根芩連湯腸外翻囊樣品中葛根素、大豆苷、甘草苷、野黃芩苷、黃芩苷、漢黃芩苷等6種黃酮類成分的含量，該方法操作簡便、快速準(zhǔn)確、靈敏可靠，并為葛根芩連湯大鼠腸吸收動力學(xué)研究提供參考。

3.3.3 苯酚-濃硫酸法 多糖是具有廣泛的抗腫瘤、抗微生物、抗氧化、降血脂和調(diào)節(jié)免疫等生物學(xué)活性[46]。石玉娟等[39]采用苯酚-濃硫酸法測定葛根芩連湯不同配伍對總多糖含量的影響，研究表明，葛根與黃芩、甘草、黃連不同配伍時，多糖含量分別為1.46%、1.48%、0.99%，該研究為葛根芩連湯多糖臨床藥效的發(fā)揮提供數(shù)據(jù)支持。

3.3.4 ICP-AES法 微量元素離子對中藥湯劑功效的表達(dá)具有重要意義，若超出限度或過多，就會危害人體健康。尹愛武等[47]對葛根芩連湯進(jìn)行不同煎煮時間的ICP-AES法無機(jī)元素測定，結(jié)果表明，煎煮時間為60 min時煎液中Ca、Mg、Zn、Fe、Mn、Cu、Sr含量分別為473.39、594.04、4.71、40.33、5.40、1.75、4.93 μg/g，與90 min的煎液差別不大，且2種煎液中均未檢測到Co、Ni、Cd、Pb這4種有害元素，該方法為葛根芩連湯的質(zhì)量控制和臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

綜上所述，在測定成分的選擇上，以藥效活性物質(zhì)為導(dǎo)向，表現(xiàn)湯液質(zhì)量；在成分的測定上，趨向多成分的同時測定，實(shí)現(xiàn)湯液質(zhì)量控制；在測定技術(shù)的選擇上，以快速、全面、準(zhǔn)確為目標(biāo)，評價(jià)湯液控制質(zhì)量；在湯液的臨床使用上，以安全、有效為目的，突出湯液藥品特性。可以預(yù)測的是，針對葛根芩連湯基準(zhǔn)物質(zhì)研究的不足，當(dāng)以《古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑簡化注冊審批管理規(guī)定》為技術(shù)要求，完善相關(guān)研究，夯實(shí)制劑質(zhì)控基礎(chǔ)，進(jìn)而促進(jìn)該方制劑的注冊，推進(jìn)品種的二次開發(fā)。

4 結(jié)語

中醫(yī)藥學(xué)是一個偉大寶庫，應(yīng)當(dāng)努力發(fā)掘，加以提高。隨著中醫(yī)藥發(fā)展上升為國家戰(zhàn)略，以葛根芩連湯為代表的經(jīng)典名方的現(xiàn)代化是中藥現(xiàn)代化的重要組成部分，也是傳承精華的主陣地，更是守正創(chuàng)新的突破口。湯劑的研究，雖在化學(xué)成分、藥效物質(zhì)和質(zhì)量控制方面取得了一定的發(fā)展，但依然道阻且長?；诖?，以下幾點(diǎn)仍需思考：①湯劑研究應(yīng)突出臨床價(jià)值導(dǎo)向。湯劑來源于臨床，應(yīng)用于臨床，反饋于臨床，臨床療效是其生命線，也是檢驗(yàn)湯劑質(zhì)量優(yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)線，故其研究設(shè)計(jì)當(dāng)以臨床療效為中心，以藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究和質(zhì)量控制研究為2個基本點(diǎn)；以藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究探討其作用機(jī)制，表達(dá)釋其功能主治；以湯劑質(zhì)量控制研究進(jìn)行制劑研發(fā)，保障其制劑屬性，協(xié)同促進(jìn)臨床療效。②藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究是闡釋臨床功效和作用本質(zhì)的核心，其研究的思路和方法也呈現(xiàn)出多元化、多樣化，但仍有一定程度的不足和局限。對湯劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究，一是堅(jiān)持動態(tài)發(fā)展理念，引入計(jì)算機(jī)現(xiàn)代技術(shù)，對藥效物質(zhì)進(jìn)行精準(zhǔn)辨識、篩選與預(yù)測，再結(jié)合真實(shí)世界的藥理試驗(yàn)，評價(jià)其真實(shí)性，尋找到能代表其藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)；二是堅(jiān)持中醫(yī)整體觀念，建立多學(xué)科交融，多層次篩選和多維評價(jià)的研究模式，實(shí)現(xiàn)方證效應(yīng)表達(dá)，全面、系統(tǒng)地揭示湯劑的物質(zhì)基礎(chǔ)，闡釋其作用機(jī)制和配伍規(guī)律。③在質(zhì)量控制研究中，借鑒新技術(shù)、新方法，引進(jìn)新設(shè)計(jì)、新理念，進(jìn)行處方篩選、工藝優(yōu)化、穩(wěn)定性研究、臨床安全性評價(jià)等全方位、動態(tài)性的過程控制評價(jià)，實(shí)現(xiàn)傳統(tǒng)湯劑的整體觀質(zhì)量評價(jià)。在制劑研發(fā)中，從藥味來源、工藝設(shè)計(jì)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)到物質(zhì)基準(zhǔn)研究，遵循臨床用藥需求，促進(jìn)整體質(zhì)量傳遞，推進(jìn)中藥質(zhì)量控制的整體轉(zhuǎn)變；在標(biāo)準(zhǔn)制定上，淘汰能耗高、成本高、污染大的檢驗(yàn)方法，堅(jiān)持綠色、環(huán)保、低毒的新模式，構(gòu)建綠色集成標(biāo)準(zhǔn)，增強(qiáng)科技與經(jīng)濟(jì)價(jià)值；在原料把控上，從種植、采收、加工到流通，嚴(yán)格控制藥材質(zhì)量，建立可追溯的綠色質(zhì)量控制體系；在制劑生產(chǎn)中，從投料、提取、制備到包裝，嚴(yán)控每一生產(chǎn)環(huán)節(jié)，明確關(guān)鍵質(zhì)量屬性，建立全過程的綠色制造質(zhì)量控制體系，培育和造就一批臨床價(jià)值高、科技含量足、競爭力強(qiáng)的名優(yōu)品種，推進(jìn)中醫(yī)藥的高質(zhì)量發(fā)展。