白花地膽草酚類成分的研究

張夢(mèng)瑤， 黃 強(qiáng)， 黃云峰， 華會(huì)明， 張 濤， 鄒忠梅

(1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300000；2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193；3.沈陽(yáng)藥科大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110016；4.廣西中醫(yī)藥研究院中藥資源研究所，廣西 南寧 530022)

白花地膽草ElephantopustomentosusL.為菊科地膽草屬多年生草本植物，廣泛分布于海南、臺(tái)灣、廣東以及福建等地[1]，其味苦、辛，性寒，具有清熱、解毒、涼血、利濕功效[2]，主要含有倍半萜、酚類、三萜、甾體等化學(xué)成分，有著抗炎、抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗氧化等活性，但目前相關(guān)研究側(cè)重于萜類，對(duì)酚類涉及較少[3-7]。因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)白花地膽草酚類成分進(jìn)行研究，共從中分離得到15個(gè)該類化合物，其中化合物1～5、8～14為首次從地膽草屬植物中分離得到，化合物6為首次從白花地膽草中發(fā)現(xiàn)。

1 材料

AM600型核磁共振儀(德國(guó)Bruker公司)；LTQ Orbitrap XL型液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜儀(美國(guó)Thermo Fisher公司)；Waters 2535型semi-PHPLC色譜儀，配置2489型UV檢測(cè)器(美國(guó)Waters公司)；YMC-Pack ODS-A型色譜柱(日本YMC公司)；Heating Both Ⅱ490型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司)；真空隔膜泵(德國(guó)Ilmvac公司)；SHB-B型循環(huán)水式真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；JY02S型紫外分析儀(北京君意設(shè)備有限公司)。柱色譜、薄層色譜用硅膠GF254(青島海洋化工廠)；Sephadex LH-20(美國(guó)GE Healthcare公司)。白花地膽草于2018年5月采自廣西省容縣，經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院中藥資源研究所黃云峰研究員鑒定為菊科地膽草屬植物白花地膽草ElephantopustomentosusL.干燥全草，標(biāo)本(編號(hào)SCI-NCL003130-3)保存于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所國(guó)家中藥化合物庫(kù)。甲醇、乙腈為色譜純(美國(guó)Thermo Fisher公司)；其他試劑均為分析純(北京化工廠)。

2 提取與分離

取白花地膽草全草15 kg，粉碎后用10倍量95%乙醇加熱回流提取2次，每次2 h，合并提取液，減壓濃縮得總浸膏830 g，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水進(jìn)行萃取，得到石油醚部位Fr.A(350 g)、乙酸乙酯部位Fr.B(117 g)、正丁醇部位Fr.C(150 g)、水部位Fr.D(185 g)。

對(duì)乙酸乙酯部位進(jìn)行硅膠柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇(100∶0～0∶100)梯度洗脫，合并得到Fr.B1(1.03 g)、Fr.B2(10.88 g)、Fr.B3(3.01 g)、Fr.B4(5.06 g)、Fr.B5(13.92 g)、Fr.B6(51.33 g)、Fr.B7(29.79 g)。Fr.B6經(jīng)MCI柱色譜，甲醇-水(60∶40～100∶0)洗脫，通過(guò)TLC合并得到Fr.B6.1(32.9 g)、Fr.B6.2(5.8 g)、Fr.B6.3(11.24 g)，F(xiàn)r.B6.1(32.9 g)經(jīng)硅膠柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇(100∶0～0∶100)梯度洗脫，通過(guò)TLC合并得到Fr.B6.1.1(0.03 g)、Fr.B6.1.2(0.37 g)、Fr.B6.1.3(0.15 g)、Fr.B6.1.4(0.35 g)、Fr.B6.1.5(1.06 g)、Fr.B6.1.6(2.02 g)、Fr.B6.1.7(7.08 g)、Fr.B6.1.8(16.96 g)，F(xiàn)r.B6.1.7(7.08 g)經(jīng)半制備HPLC(50%甲醇-0.1%甲酸)得到化合物9(18 mg)、10(18.7 mg)、11(10.7 mg)，將Fr.B6.1.7.3經(jīng)半制備HPLC(30%乙腈-0.1%甲酸)得到化合物12(2.3 mg)、14(3 mg)，F(xiàn)r.B6.1.7.5(507 mg)經(jīng)半制備HPLC(35%甲醇-0.1%甲酸)得到化合物2(5.4 mg)、13(70 mg)、15(30 mg)，F(xiàn)r.B6.1.7.1經(jīng)半制備HPLC(18%乙腈-0.1%甲酸)得到化合物1(39 mg)、5(10.2 mg)、6(5.0 mg)，F(xiàn)r.B6.1.7.2(1 750 mg)經(jīng)制備HPLC(55%甲醇-0.1%甲酸)、半制備HPLC(32%乙腈-0.1%甲酸)得到化合物3(2 mg)、4(16.3 mg)，F(xiàn)r.B6.1.7.4(1 930 mg)經(jīng)Sephadex LH-20、半制備HPLC得到化合物7(1.9 mg)、8(2.3 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無(wú)定型粉末，HR-ESI-MSm/z：325.126 1[M-H]-，分子式C16H22O7。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.08(1H，d，J= 8.2 Hz，H-6)，6.72(1H，dd，J= 8.2，2.0 Hz，H-5)，6.83(1H，d，J= 2.0 Hz，H-3)，5.95(1H，m，H-8)，4.98～5.11(1H，m，H-9)，3.84(3H，s，H-10)，4.85(1H，d，J= 7.2 Hz，H-1′)，3.87(1H，dd，J= 12.0，1.6 Hz，H-6′)，3.69(1H，m，H-6′)，3.31～3.49(6H，m，H-7，2′，3′，4′，5′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：146.3(C-1)，150.7(C-2)，114.0(C-3)，136.4(C-4)，122.1(C-5)，118.1(C-6)，40.8(C-7)，139.0(C-8)，115.9(C-9)，56.6(C-10)，103.0(C-1′)，74.9(C-2′)，78.2(C-3′)，71.3(C-4′)，77.8(C-5′)，62.4(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，故鑒定為丁香酚苷。

化合物2：黃色無(wú)定型粉末，HR-ESI-MSm/z：405.118 0[M-H]-，分子式C20H22O9。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.50(2H，d，J= 6.9 Hz，H-3′，7′)，7.40(2H，m，H-4′，6′)，7.33(1H，m，H-5′)，7.26(1H，t，J= 8.3 Hz，H-5)，6.74(1H，dd，J= 8.3，0.9 Hz，H-4)，6.59(1H，dd，J= 8.3，0.9 Hz，H-6)，5.38(1H，s，H-1)，4.94(1H，d，J= 7.6 Hz，H-1″)，3.86(1H，dd，J= 12.1，2.3 Hz，H-6″)，3.68(1H，dd，J= 12.1，2.3 Hz，H-6″)，3.35～3.44(4H，m，H-2″，3″，4″，5″)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：170.0(C-1)，110.8(C-2)，158.2(C-3)，107.7(C-4)，134.0(C-5)，111.5(C-6)，159.8(C-7)，68.1(C-1′)，137.4(C-2′)，129.2(C-3′)，129.5(C-4′)，129.2(C-5′)，129.5(C-6′)，129.2(C-7′)，102.7(C-1″)，74.9(C-2″)，78.0(C-3″)，71.2(C-4″)，78.3(C-5″)，62.5(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，故鑒定為3-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-羥基苯甲酸芐酯。

化合物3：黃色油狀，HR-ESI-MSm/z：547.137 9[M-H]-，分子式C26H28O13。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.45(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7″)，7.36(2H，s，H-2′，6′)，6.97(1H，d，J= 1.3 Hz，H-2″)，6.80(1H，dd，J= 8.2，1.3 Hz，H-6″)，6.74(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5″)，6.23(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8″)，5.75(1H，m，H-3)，5.05(1H，dd，J= 8.3，2.9 Hz，H-4)，4.38(1H，m，H-5)，3.81(6H，s，H-3′，5′-OCH3)，3.77(3H，s，H-8)，2.42(1H，dd，J= 14.5，3.7 Hz，H-2)，2.23(1H，m，H-2)，2.14-2.15(2H，d，J= 9.5 Hz，H-6)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：75.3(C-1)，36.9(C-2)，70.2(C-3)，75.9(C-4)，66.1(C-5)，41.6(C-6)，176.2(C-7)，53.1(C-8)，121.5(C-1′)，108.2(C-2′，6′)，148.8(C-3′，5′)，141.8(C-4′)，167.2(C-7′)，56.7(C-3′，5′-OCH3)，127.6(C-1″)，114.9(C-2″)，146.8(C-3″)，148.6(C-4″)，116.4(C-5″)，123.1(C-6″)，147.4(C-7″)，114.8(C-8″)，168.4(C-9″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，故鑒定為4-咖啡酰-3-芥子?？鼘幩峒柞?。

化合物4：黃色固體，HR-ESI-MSm/z：543.153 0[M-H]-，分子式C27H28O12。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.62(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7′)，7.55(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7″)，7.06(2H，d，J= 2.0 Hz，H-2′，2″)，6.96(2H，d，J= 8.2 Hz，H-5′，5″)，6.79(2H，dd，J= 8.2，2.0 Hz，H-6′，6″)，6.35(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8′)，6.23(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8″)，5.41(1H，m，H-3)，5.31(1H，m，H-5)，4.13(1H，q，J= 7.1 Hz，H-8)，3.98(1H，dd，J= 6.6，3.1 Hz，H-4)，2.33(2H，m，H-6)，2.16(2H，m，H-2)，1.24(3H，t，J= 7.1 Hz，H-9)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：74.5(C-1)，36.6(C-2)，72.2(C-3)，69.7(C-4)，71.9(C-5)，35.6(C-6)，175.1(C-7)，62.6(C-8)，14.3(C-9)，127.8(C-1′)，115.1(C-2′)，146.9(C-3′)，149.7(C-4′)，116.5(C-5′)，123.1(C-6′)，147.4(C-7′)，115.4(C-8′)，168.7(C-9′)，127.6(C-1″)，115.1(C-2″)，146.8(C-3″)，149.6(C-4″)，116.4(C-5″)，123.0(C-6″)，147.1(C-7″)，114.8(C-8″)，167.9(C-9″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，故鑒定為3,5-O-二咖啡酰奎寧酸乙酯。

化合物5：白色無(wú)定型粉末，HR-ESI-MSm/z：381.110 0[M-H]-，分子式C18H22O9。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.53(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7′)，7.04(1H，d，J= 2.1 Hz，H-2′)，6.78(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5′)，6.94(1H，dd，J= 8.2，2.1 Hz，H-6′)，6.22(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8′)，5.22～5.32(1H，m，H-3)，4.07～4.19(3H，m，H-5，8)，3.74(1H，m，H-4)，2.0～2.25(4H，m，H-2，6)，1.24(3H，t，J= 7.1 Hz，H-9)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：75.7(C-1)，37.6(C-2)，72.2(C-3)，72.5(C-4)，70.3(C-5)，37.9(C-6)，174.9(C-7)，62.5(C-8)，14.3(C-9)，127.6(C-1′)，115.0(C-2′)，147.2(C-3′)，149.7(C-4′)，116.5(C-5′)，123.0(C-6′)，146.9(C-7′)，115.0(C-8′)，168.3(C-9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，故鑒定為3-O-咖啡?？鼘幩嵋阴?。

化合物6：白色無(wú)定型粉末，HR-ESI-MSm/z：367.101 7[M-H]-，分子式C17H20O9。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.53(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7′)，7.06(1H，d，J= 2.0 Hz，H-2′)，6.95(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5′)，6.80(1H，dd，J= 8.2，2.0 Hz，H-6′)，6.23(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8′)，5.29(1H，m，H-5)，4.16(1H，m，H-4)，3.76(1H，m，H-3)，2.17～2.32(4H，m，H-2，6)，3.70(3H，s，H-8)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：75.8(C-1)，31.7(C-2)，70.3(C-3)，72.5(C-4)，72.5(C-5)，37.9(C-6)，175.4(C-7)，53.0(C-8)，127.5(C-1′)，115.1(C-2′)，146.7(C-3′)，149.6(C-4′)，116.5(C-5′)，123.0(C-6′)，147.2(C-7′)，114.9(C-8′)，168.3(C-9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，故鑒定為綠原酸甲酯。

化合物7：淡黃色無(wú)定型粉末，HR-ESI-MSm/z：285.036 0[M-H]-，分子式C15H10O6。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.36～7.42(2H，m，H-2′，6′)，6.90(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5′)，6.54(1H，s，H-3)，6.44(1H，d，J= 2.1 Hz，H-8)，6.21(1H，d，J= 2.1 Hz，H-6)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：166.0(C-2)，105.3(C-3)，183.9(C-4)，163.2(C-5)，100.1(C-6)，166.4(C-7)，95.0(C-8)，151.0(C-9)，103.8(C-10)，123.6(C-1′)，116.8(C-2′)，159.4(C-3′)，147.1(C-4′)，77.8(C-5′)，62.4(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，故鑒定為木犀草素。

化合物8：淡黃色無(wú)定型粉末，HR-ESI-MSm/z：739.167 0[M-H]-，分子式C40H34O14。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：8.01(2H，d，J= 8.6 Hz，H-2′，6′)，7.70(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7″)，7.50(2H，d，J= 8.6 Hz，H-2″，6″)，7.42(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7?)，7.34(2H，d，J= 8.6 Hz，H-2?，6?)，6.81(4H，dd，J= 8.6，2.3 Hz，H-3′，5′，3?，5?)，6.84(2H，d，J= 8.6，H-3″，5″)，6.44(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8″)，6.33(1H，brs，H-8)，6.15(1H，brs，H-6)，6.10(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8?)，5.39(1H，d，J= 7.9 Hz，glc-1)，5.14(1H，t，J= 9.2 Hz，glc-3)，4.32(1H，dd，J= 11.8，2.1 Hz，glc-6a)，4.24(1H，dd，J= 11.8，6.2 Hz，glc-6b)，3.69(1H，dd，J= 9.5，7.9 Hz，glc-2)，3.55～3.62(2H，m，glc-4，5)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：159.3(C-2)，135.1(C-3)，129.4(C-4)，161.6(C-5)，100.0(C-6)，166.0(C-7)，94.8(C-8)，158.4(C-9)，105.6(C-10)，103.6(glc-1)，74.1(glc-2)，78.6(glc-3)，70.1(glc-4)，75.7(glc-5)，64.0(glc-6)，122.5(C-1′)，132.2(C-2′)，116.1(C-3′)，161.3(C-4′)，116.1(C-5′)，132.2(C-6′)，127.3(C-1″)，131.2(C-2″)，116.8(C-3″)，161.2(C-4″)，116.8(C-5″)，131.2(C-6″)，146.8(C-7″)，115.4(C-8″)，168.9(C-9″)，127.1(C-1?)，131.2(C-2?)，116.8(C-3?)，161.2(C-4?)，116.8(C-5?)，131.2(C-6?)，146.6(C-7?)，114.6(C-8?)，168.7(C-9?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道基本一致，故鑒定為山柰酚3-O-(3″,6″-二-O-E-p-香豆酰)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物9：無(wú)色針晶(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：137.023 0[M-H]-，分子式C7H6O3。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.85(1H，d，J= 7.7 Hz，H-6)，7.45(1H，t，J= 7.7 Hz，H-4)，6.88～6.91(2H，m，H-3，5)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：114.2(C-1)，163.2(C-2)，118.1(C-3)，136.5(C-4)，120.0(C-5)，131.6(C-6)，173.8(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道基本一致，故鑒定為鄰羥基苯甲酸。

化合物10：無(wú)色針晶(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：163.037 3[M-H]-，分子式C9H8O3。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.30(1H，d，J= 15.6 Hz，H-8)，7.58(1H，d，J= 15.6 Hz，H-7)，6.80(2H，d，J= 8.3 Hz，H-2，6)，7.45(2H，d，J= 8.3 Hz，H-3，5)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：127.3(C-1)，131.0(C-2，6)，116.8(C-3，5)，161.1(C-4)，146.4(C-7)，116.8(C-8)，171.3(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道基本一致，故鑒定為反式對(duì)羥基肉桂酸。

化合物11：無(wú)色針晶(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：163.039 6[M-H]-，分子式C9H8O3。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.77(1H，d，J= 12.7 Hz，H-7)，5.78(1H，d，J= 12.7 Hz，H-8)，7.60(2H，d，J= 8.4 Hz，H-2，6)，6.73(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3，5)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：127.9(C-1)，131.3(C-2，6)，115.8(C-3，5)，159.7(C-4)，143.0(C-7)，116.8(C-8)，171.1(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道基本一致，故鑒定為順式對(duì)羥基肉桂酸。

化合物12：無(wú)色針晶(甲醇)，1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.87(2H，d，J= 8.2 Hz，H-2，6)，6.81(2H，d，J= 8.2 Hz，H-3，5)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：123.2(C-1)，133.0(C-2，6)，116.0(C-3，5)，163.2(C-4)，173.8(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道基本一致，故鑒定為對(duì)羥基苯甲酸。

化合物13：白色針晶(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：153.020 1[M-H]-，分子式C7H6O3。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.45(1H，d，J= 2.0 Hz，H-2)，6.81(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5)，7.43(1H，d，J= 8.2，2.0 Hz，H-6)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：123.1(C-1)，117.7(C-2)，145.9(C-3)，151.7(C-4)，115.7(C-5)，123.9(C-6)，170.4(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道基本一致，故鑒定為原兒茶酸。

化合物14：白色粉末，HR-ESI-MSm/z：197.043 8[M-H]-，分子式C9H10O5。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.04(2H，s，H-2，6)，4.27(2H，q，J= 7.1 Hz，H-8)，1.35(3H，t，J= 7.1 Hz，H-9)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：121.7(C-1)，110.0(C-2，6)，146.6(C-3，5)，139.7(C-4)，168.5(C-7)，61.6(C-8)，14.6(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道基本一致，故鑒定為沒(méi)食子酸乙酯。

化合物15：淡黃色無(wú)定型粉末，HR-ESI-MSm/z：179.033 3[M-H]-，分子式C9H8O4。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.04(1H，brs，H-2)，6.78(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5)，6.93(1H，dd，J= 8.2，2.0 Hz，H-6)，6.22(1H，d，J= 15.8 Hz，H-8)，7.53(1H，d，J= 15.8 Hz，H-7)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：127.8(C-1)，115.0(C-2)，146.7(C-3)，149.4(C-4)，116.4(C-5)，122.9(C-6)，147.0(C-7)，115.6(C-8)，171.2(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道基本一致，故鑒定為咖啡酸。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)從白花地膽草中分離得到15個(gè)酚類化合物，包括9個(gè)苯酚類、4個(gè)咖啡酰基奎寧酸類、2個(gè)黃酮類。其中，化合物3、4屬于二咖啡?；鼘幩犷?，具有良好的抗氧化活性和抗糖尿病活性[20]；經(jīng)化合物7處理后的腫瘤細(xì)胞通過(guò)與AKT競(jìng)爭(zhēng)受體，能使其磷酸化被抑制，促進(jìn)凋亡蛋白caspase-3和PARP表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞死亡[21]；化合物15具有良好的抗腫瘤作用，可通過(guò)影響microRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)以及能上調(diào)腫瘤細(xì)胞內(nèi)線粒體活性氧水平，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[22]，可為后續(xù)白花地膽草其他化學(xué)成分研究提供依據(jù)，并為該植物生物活性考察提供物質(zhì)基礎(chǔ)。