紫外分光光度法測定凝膠中葡萄糖酸氯己定含量

蘇 淮，禹 柳，楊素珍，陳玉榮，張 輝

（山東福瑞達生物股份有限公司，山東 濟南 250101）

氯己定（也稱為洗必泰）屬胍類消毒防腐劑，其中醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定因其良好的溶解性、廣譜的抑菌性能，在藥品中常作為防腐劑使用，對革蘭陰性菌和革蘭陽性菌都有效，用于滴眼劑、凝膠劑等劑型的防腐，使產(chǎn)品保持良好的微生物限度水平[1-3]。

葡萄糖酸氯己定的含量測定方法，目前在中國藥典（2020年版）、胍類消毒劑衛(wèi)生要求（GB/T 26367-2020）等國家標準中均有收載，如紫外分光光度法、滴定法、高效液相色譜法等，但在凝膠劑型中，由于增稠劑的存在，對葡萄糖酸氯己定的含量測定存在一定影響[4-5]。本研究采用紫外分光光度法，消除了增稠劑的影響，準確測定了葡萄糖酸氯己定的含量，具有經(jīng)濟、準確的優(yōu)點。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-610S紫外/可見光分光度計（上海元析儀器有限公司）；Agilent 8454紫外/可見光分光度計（安捷倫科技中國有限公司）；ME204電子天平[梅特勒托利多儀器（上海）有限公司]；KQ-500E超聲波儀（昆山市超聲儀器有限公司）；LAB DANCER S000旋渦混合器（德國IKA）；DHG-9023烘箱（廣東泰宏君科學儀器股份有限公司）。

1.2 試藥

醋酸氯己定對照品（中國食品藥品檢定研究院，純度：96.9 %，批號：1TN6-YNOQ）；葡萄糖酸氯己定凝膠（自制，濃度：0.5 %）；乙醇（國藥集團化學試劑有限公司，分析純，批號：20201222）；冰醋酸（國藥集團化學試劑有限公司，分析純，批號：20190724）。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品溶液制備 取醋酸氯己定對照品約10 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并稀至刻度，振搖均勻，備用。

2.1.2 供試品溶液制備 取凝膠樣品4份，每份約2 g（含葡萄糖酸氯己定約10 mg），精密稱定，分別置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液至刻度，分別按以下方式處理：（1）室溫2800 r/min振搖10 min，得溶液1；（2）常溫超聲（40 kHz）提取30 min，得溶液2；（3）40 ℃水浴加熱60 min，得溶液3；（4）室溫，2800 r/min 振搖3次，每次10 min，放置過夜（約16 h），得溶液4。4種溶液分別精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，分別得供試品溶液1～4，備用。

2.1.3 空白輔料溶液制備 按凝膠處方制備不含葡萄糖酸氯己定的空白凝膠，取約2 g，精密稱定，置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液稀至刻度，按2.1.2項下方法處理。精密量取處理后溶液5 ml，置50 ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，得空白輔料溶液1～4。

2.2 葡萄糖酸氯己定含量測定

精密稱取樣品2 g（相當于醋酸氯己定對照品10 mg），置100 ml量瓶中，加入1.5 mol/L的醋酸溶液溶解并稀釋至刻度，按2.1.2項下方法（1）處理，精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，260 nm波長處測定吸光度。按下式計算樣品中葡萄糖酸氯己定的含量。

式中，X為樣品中葡萄糖酸氯己定的含量（g/kg），m為醋酸氯己定對照品的質量（mg），A1為醋酸氯己定對照品溶液的吸光度值，A2為供試品溶液的吸光度值，m0為供試品質量（g），1.4348為醋酸氯己定與葡萄糖酸氯己定的換算系數(shù)。

2.3 波長的選擇

以醋酸-乙醇溶液為空白，取2.1項下的對照溶液、空白輔料溶液1及供試品溶液1，200～400 nm范圍內(nèi)掃描。對照溶液1及供試品溶液1在260 nm處有最大吸收峰，空白溶液1在260 nm處無吸收干擾。采用同樣的方法重復掃描供試品溶液2～4，均可得出相同結論，因此確定260 nm為檢測波長。

圖1 紫外掃描光譜

2.4 線性關系考察

取醋酸氯己定對照品約20 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并稀至刻度，搖勻，精密量取1，2，3，4，5 ml，分別置50 ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻。以乙醇為空白，在260 nm處測定吸光度。以對照品溶液的吸光度（A）對濃度（C）做標準曲線，線性方程為：A=0.03101C+0.09813（r=0.9998）。結果表明，醋酸氯己定在4～20 μg/ml范圍時濃度與吸光度呈線性關系。

2.5 精密度試驗

2.5.1 重復性 取0.5 %葡萄糖酸氯己定凝膠，按2.1.2項下方法平行制備6份供試品溶液，分別測定。供試品溶液1，2，3，4的含量RSD分別為4.22 %，2.27 %，2.71 %，1.52 %。其中方法4的重復性最佳。

2.5.2 中間精密度 在不同時間，由研究室另一名試驗人員，按2.1.2項下供試品溶液4的處理方式，配制6份供試品溶液，使用不同廠家及型號的儀器進行檢測。供試品溶液含量RSD值為0.90 %，表明方法中間精密度良好。

2.5.3 儀器精密度 取2.1.1項下對照品溶液，平行測定6次，計算RSD。結果，6次測定平均吸光度為0.4101，RSD為0.47 %，表明儀器的精密度良好。

2.6 耐用性

2.6.1 穩(wěn)定性 取對照品溶液及供試品溶液，分別于配制后0，1，2，4，8 h，在260 nm處檢測吸光度，結果表明對照品溶液及4種供試品溶液8 h內(nèi)吸光度RSD值分別為1.79 %，1.14 %，1.22 %，0.81 %，0.95 %，表明溶液穩(wěn)定性良好。

2.6.2 提取液濃度影響 精密稱取12份樣品，每份2 g，分別置100 ml量瓶中，分為3組，每組4份，組1、組2、組3分別加1.45，1.50，1.55 mol/L醋酸溶液至刻度；每組4份樣品分別按2.1.2項下4種方法處理后，分別精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，260 nm波長處測定吸光度，見表1。結果顯示，提取液濃度改變對4種供試品溶液的含量檢測數(shù)值影響不大。

表1 提取液濃度影響試驗結果

2.7 回收率

按處方制備不含葡萄糖酸氯己定的空白凝膠。取空白凝膠9份，每份約2 g，精密稱定，置100 ml量瓶中，分別加入葡萄糖酸氯己定對照品溶液，使其終濃度達0.4 %，0.5 %，0.6 %，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并稀至刻度，按2.1.2項下方法處理。精密量取5 ml置50 ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別測定，結果見表2。由表2可見，采用方法4處理，葡萄糖酸氯己定回收率最佳。

表2 回收率試驗結果

2.8 樣品測定

取3批葡萄糖酸氯己定免洗消毒凝膠，按方法4制備供試品溶液，每批平行檢測3次，結果見表3。

表3 葡萄糖酸氯己定免洗消毒凝膠含量測定結果

3 討論

葡萄糖酸氯己定的幾種國標檢測方法中，紫外分光光度法及高效液相色譜法使用廣泛，由于凝膠劑型的特殊性，需采取特殊的前處理去除輔料干擾。有報道采用高效液相色譜法檢測，樣品需經(jīng)超聲振蕩提取、轉移離心、過濾等步驟，其分離提取過程步驟較多，易導致目標成分損失[6]。

本研究比較了不同樣品處理方式對凝膠中葡萄糖酸氯己定含量測定的影響。研究結果顯示多次振蕩結合靜置過夜的處理方法，提取效率最佳[7]。本研究建立的測定方法具有操作簡單、經(jīng)濟環(huán)保的優(yōu)勢，且具有較高的回收率、穩(wěn)定性和重復性，適用于氯己定凝膠劑型的含量測定，同時也便于基層生產(chǎn)企業(yè)推廣使用。