乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)采用化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法的效果

卓萍娟

（東?？h中醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 連云港，222300）

乙型肝炎是HBV病毒引發(fā)的疾病，患者會(huì)出現(xiàn)肝臟炎性病變，疾病往往會(huì)累及身體的多個(gè)器官[1-2]。肝臟是人體重要器官，在人體新陳代謝過程中具有重要的作用。乙肝的傳染性較強(qiáng)，感染乙肝后患者會(huì)出現(xiàn)食欲下降、頭暈、乏力等，如果病情惡化，可發(fā)展為肝硬化，甚至是癌癥，危及患者的生命安全，所以乙肝患者應(yīng)盡早確診和規(guī)范治療[3]。乙肝早期的確診對(duì)于治療和預(yù)后很重要。熒光定量PCR檢驗(yàn)是乙肝診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于其對(duì)環(huán)境和操作技術(shù)要求較高，在臨床應(yīng)用上會(huì)受到一定的限制。近年來，化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法是常用的血清學(xué)檢驗(yàn)方式，兩種檢驗(yàn)方式在乙肝診斷中均有廣泛的應(yīng)用[4-5]。酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)技術(shù)是將抗原與酶復(fù)配，并用顯色法進(jìn)行測試?；瘜W(xué)發(fā)光法是以化學(xué)檢測系統(tǒng)中被測物體的數(shù)量與所發(fā)出的光強(qiáng)之間存在的線性關(guān)系，然后再由發(fā)光計(jì)測量其光的強(qiáng)度，達(dá)到對(duì)被測材料的測量[6]。為評(píng)估乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中使用酶聯(lián)免疫法與化學(xué)發(fā)光法的差異性，本研究對(duì)2020年1月～2021年1月東海縣中醫(yī)院收治的100例疑似乙型肝炎患者分別提供化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)以及酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)，以此開展調(diào)研。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2020年1月～2021年1月東?？h中醫(yī)院收治的疑似乙型肝炎患者100例，均采用血清學(xué)檢驗(yàn)，分別提供化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)以及酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)。100例疑似乙型肝炎患者中，女43例，男57例；年齡23～80歲，平均年齡（46.85±9.49）歲。所有患者均知情同意參與本研究，且本研究已被東海縣中醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均出現(xiàn)乏力、食欲下降以及肝區(qū)不適的癥狀；②患者臨床資料完整；③患者意識(shí)清晰，可正常溝通。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期和哺乳期女性；②中途退出研究者；③合并惡性腫瘤者；④合并精神類疾病者；⑤合并其他急性重癥疾病者；⑥長期使用免疫抑制劑治療者；⑦合并感染性疾病者。

1.3 方法

100例疑似乙型肝炎患者均于清晨抽取空腹靜脈血5 mL，離心處理10 min，轉(zhuǎn)速為3 000 r/min，分離上層清液后，放置在-20 ℃的環(huán)境中待檢。①化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)：將受試者的血液樣品放在包含HBV核抗體的聚苯乙烯試管，在37 ℃的條件下放置2 h，然后用磷酸鹽緩沖鹽溶液清洗，3 min/次，共清洗3次，添加100 uL過氧化氫+100 uL魯米洛，使用自動(dòng)發(fā)光化學(xué)發(fā)光裝置進(jìn)行測試。使用電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（生產(chǎn)企業(yè)：羅氏，型號(hào)：Cobas e 601）及其配套試劑開展檢驗(yàn)。相關(guān)操作嚴(yán)格依據(jù)對(duì)應(yīng)試劑盒說明書進(jìn)行。②酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)：試劑和微孔反應(yīng)條放在室溫下30 min，隨后將樣品放入微孔反應(yīng)條中，密封30 min，將樣品放入37 ℃的容器中，放置30 min，將溶液倒入微孔反應(yīng)條中，使用自動(dòng)樣品預(yù)處理裝置進(jìn)行測試。使用全自動(dòng)酶標(biāo)儀（生產(chǎn)企業(yè)：北京若水合科技有限公司，型號(hào)：BS97-680）及其配套試劑開展檢驗(yàn)。

1.4 觀察指標(biāo)

①以熒光定量PCR檢驗(yàn)作為金標(biāo)準(zhǔn)，比較化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法的檢驗(yàn)結(jié)果，即分別檢測化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)的陽性率、陰性率。

②對(duì)比化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)的敏感度、特異度、準(zhǔn)確性、陽性預(yù)測值以及陰性預(yù)測值。其中，敏感度=真陽性例數(shù)/（真陽性+假陰性）例數(shù)×100%。特異度=真陰性例數(shù)/（假陽性+真陰性）例數(shù)×100%。準(zhǔn)確性=（真陽性+真陰性）例數(shù)/（假陽性+真陰性+真陽性+假陰性）例數(shù)×100%。陽性預(yù)測值=真陽性例數(shù)/（真陽性+假陽性）例數(shù)×100%。陰性預(yù)測值=真陰性例數(shù)/（假陰性+真陰性）例數(shù)×100%。

③化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)在乙肝患者中乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗體、乙肝表面抗體以及乙肝核心抗體的陽性檢出率。陽性率的判定標(biāo)準(zhǔn)：乙肝e抗原≥0.05 NCU/mL，乙肝表面抗原≥10.0 mU/mL，乙肝e抗體≥2.0 NCU/mL，乙肝表面抗體≥0.2 ng/mL，乙肝核心抗體≥1.5 NCU/mL。

④化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)在乙肝患者中乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗體、乙肝表面抗體、乙肝核心抗體的表達(dá)水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 23.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)量資料用（±s）表示，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)的總檢測結(jié)果比較

100例疑似乙型肝炎患者的熒光定量PCR檢驗(yàn)結(jié)果：陽性率為72.00%、陰性率為28.00%?；瘜W(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)的陽性率為71.00%、陰性率為29.00%。酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)的陽性率為62.00%、陰性率為38.00%。見表1。

表1 化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)的總檢測結(jié)果比較

2.2 化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)的檢測效能比較

化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)的敏感度、準(zhǔn)確性和陽性預(yù)測值均高于酶聯(lián)免疫法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。但是化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)在特異度、陰性預(yù)測值上比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)的檢測效能比較 [n（%）]

2.3 化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)在不同指標(biāo)中的陽性率比較

化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗體的陽性率高于酶聯(lián)免疫法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?；瘜W(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)在乙肝表面抗體、乙肝核心抗體陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)在不同指標(biāo)中的陽性率比較 [n（%）]

2.4 化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)不同指標(biāo)的表達(dá)水平比較

化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗體、乙肝表面抗體、乙肝核心抗體的表達(dá)水平均高于酶聯(lián)免疫法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)不同指標(biāo)水平比較 （±s）

表4 化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)、酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)不同指標(biāo)水平比較 （±s）

檢查方式 例數(shù) 乙肝e抗原（NCU/mL）乙肝表面抗原（mU/mL）乙肝e抗體（NCU/mL）乙肝表面抗體（ng/mL）乙肝核心抗體（NCU/mL）化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn) 72 0.11±0.02 11.56±1.32 2.99±0.31 0.30±0.05 1.69±0.20酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn) 72 0.07±0.01 10.28±1.22 2.23±0.29 0.29±0.06 1.67±0.21 t 33.941 108.612 332.441 84.853 16.971 P＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

3 討論

乙型肝炎是一種傳染性強(qiáng)，具有遷延性的疾病，部分患者會(huì)出現(xiàn)肝功能受損和黃疸，若不及時(shí)進(jìn)行救治，容易引發(fā)肝硬化，甚至演變?yōu)楦伟?，降低患者生存質(zhì)量[7-9]。HBV是一種雙鏈DNA病毒，它會(huì)在體內(nèi)長時(shí)間潛伏，當(dāng)機(jī)體的免疫力下降時(shí)，HBV會(huì)被活化并在體內(nèi)增殖，最終導(dǎo)致乙型肝炎。乙型肝炎初期一般沒有任何征兆，很難被發(fā)現(xiàn)，隨著病情的發(fā)展，肝組織會(huì)越來越細(xì)，患者罹患肝硬化、肝癌的風(fēng)險(xiǎn)也會(huì)越來越大，而且預(yù)后也會(huì)越來越差。因此，早期診斷對(duì)改善乙肝患者的預(yù)后非常關(guān)鍵[10-13]。

熒光定量PCR檢驗(yàn)技術(shù)可以根據(jù)病毒的含量來判斷HBV在體內(nèi)的增殖狀況，但是熒光定量PCR檢驗(yàn)的運(yùn)行過程繁瑣、成本高、對(duì)環(huán)境和操作技術(shù)的要求更高，在中小型醫(yī)院很難得到廣泛的應(yīng)用。酶聯(lián)免疫法是一種常規(guī)的血清學(xué)檢查手段，它具有操作簡便、檢查費(fèi)用低廉、檢驗(yàn)耗時(shí)較短等優(yōu)點(diǎn)，適合大規(guī)模樣品的檢測，所以酶聯(lián)免疫法是乙型肝炎早期篩查的重要方式[14-15]。但它的缺點(diǎn)是容易受到外部環(huán)境的影響，無法對(duì)其進(jìn)行定量分析；同時(shí)，不同的抗膨化抗體反應(yīng)也會(huì)對(duì)測試的效果產(chǎn)生一定的影響，造成假陽性?；瘜W(xué)發(fā)光法是一種高靈敏度、快速檢測、定性、定量分析的新技術(shù)，在乙型肝炎檢測中具有顯著的優(yōu)越性。化學(xué)發(fā)光法是利用熒光基材在相應(yīng)酶的催化下發(fā)出熒光，并利用熒光的光強(qiáng)來進(jìn)行定量分析，而在這一過程中，突變抗體不會(huì)對(duì)測試的結(jié)果造成任何干擾，并且化學(xué)發(fā)光法可以精確識(shí)別出突變株，降低人工干擾，因此具有很高的精確性。HBV-M檢測可以為疾病類型的鑒別診斷提供依據(jù)。若乙肝表面抗原為陽性，說明HBV在身體中具有復(fù)制性，乙肝表面抗原作為乙肝的觀察指標(biāo)，可以反映身體是否出現(xiàn)乙肝病毒感染，同時(shí)還可以反映機(jī)體的肝臟損傷程度，乙肝表面抗原在乙型肝炎的診斷中具有重要價(jià)值?；瘜W(xué)發(fā)光法在乙肝表面抗原陽性檢出率具有較高的優(yōu)勢，檢出率高于酶聯(lián)免疫法[16-17]。本研究結(jié)果顯示，化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)的陽性率為71.00%高于酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)的陽性率62.00%，說明在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中化學(xué)發(fā)光法具有更高的陽性檢出率。本研究發(fā)現(xiàn)，化學(xué)發(fā)光法的敏感度、準(zhǔn)確性和陽性預(yù)測值均高于酶聯(lián)免疫法，化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗體的陽性率高于酶聯(lián)免疫法，化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)乙肝e抗原、乙肝表面抗原、乙肝e抗體、乙肝表面抗體、乙肝核心抗體的具體值均高于酶聯(lián)免疫法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。充分說明在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中，化學(xué)發(fā)光法具有較高的應(yīng)用價(jià)值，整體檢驗(yàn)效果優(yōu)于酶聯(lián)免疫法。

綜上所述，化學(xué)發(fā)光法在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的效果優(yōu)于酶聯(lián)免疫法，具有較高的陽性檢出率，并且敏感度、準(zhǔn)確性和陽性預(yù)測值均高于酶聯(lián)免疫法，值得在臨床中應(yīng)用。