高脂飲食結(jié)合VCD藥物誘導(dǎo)圍絕經(jīng)期肥胖小鼠模型的研究＊

李珊珊，李 翔，柯碧蓮，陳穎棋，曾曉鈴，岳虹妤，孫漫沁，徐世芬，宓軼群＊＊

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院 上海200071；2.上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院 上海200080；3.上海中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院 上海201203）

圍絕經(jīng)期（perimenopausal）是女性由生育期向絕經(jīng)期過度的生理性階段[1]。該階段卵巢功能逐漸衰退，引起女性體內(nèi)雌激素水平變化，主要表現(xiàn)為血清雌激素水平（Estrogen，E2）下降和促卵泡刺激素（Follicle Stimulating Hormone，F(xiàn)SH）水平升高[2-3]，引發(fā)一系列臨床表現(xiàn)如肥胖[4-5]、血脂異常[6]、骨質(zhì)疏松[7-8]、心血管疾病[9]、焦慮抑郁[10]以及代謝綜合征[11]等問題，極大地影響圍絕經(jīng)期女性的身心健康和生活質(zhì)量。研究表明，進(jìn)入圍絕經(jīng)期后，不僅容易發(fā)生圍絕經(jīng)期肥胖，圍絕經(jīng)期肥胖又可以反過來影響圍絕經(jīng)期階段的時(shí)間長(zhǎng)短、癥狀的輕重等，兩者相互作用相互影響[5]。避免圍絕經(jīng)期肥胖的發(fā)生可以有效降低圍絕經(jīng)期心血管疾病、婦科癌癥等相關(guān)疾病的發(fā)生率，是臨床中亟待解決的重要問題，也對(duì)圍絕經(jīng)期肥胖女性有著重要指導(dǎo)意義。

針灸作為祖國(guó)醫(yī)學(xué)的一個(gè)重要分支，在治療圍絕經(jīng)期肥胖方面具有顯著的療效和優(yōu)勢(shì)[12-14]，課題組前期臨床研究發(fā)現(xiàn)，針刺可以改善圍絕經(jīng)期睡眠障礙[15]、緩解圍絕經(jīng)期潮熱[16]。最近，在前期基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)通過穴位埋線能夠有效幫助圍絕經(jīng)期肥胖患者減輕體重，并改善圍絕經(jīng)期綜合征。但具體針刺或埋線是如何起到減肥作用的尚不清楚，國(guó)內(nèi)外對(duì)圍絕經(jīng)期肥胖的研究也較少見。故課題組擬開展電針治療圍絕經(jīng)期肥胖的機(jī)制研究，然而查閱相關(guān)資料發(fā)現(xiàn)關(guān)于圍絕經(jīng)期的機(jī)制研究大多為圍絕經(jīng)期血脂異常、圍絕經(jīng)期抑郁等，故有必要開展電針治療圍絕經(jīng)期肥胖的相關(guān)機(jī)制研究，而穩(wěn)定成熟的圍絕經(jīng)期肥胖動(dòng)物模型是探索電針治療圍絕經(jīng)期肥胖的重要基礎(chǔ)。

近年來，關(guān)于圍絕經(jīng)期動(dòng)物模型主要包括自然衰老模型、卵巢摘除模型、藥物誘導(dǎo)模型等[17-20]，然而自然衰老模型周期過長(zhǎng)，卵巢摘除模型不符合生理性絕經(jīng)特點(diǎn)等諸多問題[20]。研究表明采用4-乙烯基環(huán)己烯二環(huán)氧化物（4-Vinylcyclohexene Diepoxide，VCD）藥物可以靶向誘導(dǎo)卵巢損傷，不損傷其他器官，可以模擬圍絕經(jīng)期的狀態(tài)[21-23]，但在中醫(yī)藥領(lǐng)域的相關(guān)研究中，尚未得到有效的應(yīng)用。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，通過高脂飲食誘導(dǎo)，可以引起雌性小鼠體質(zhì)量明顯增加，通過VCD誘導(dǎo)可以成功造成圍絕經(jīng)期小鼠模型，但尚未對(duì)圍絕經(jīng)期肥胖進(jìn)行聯(lián)合造模，故本研究在前期研究基礎(chǔ)上，采用高脂飲食（High Fat Diet，HFD）喂養(yǎng)加VCD藥物誘導(dǎo)構(gòu)建圍絕經(jīng)期肥胖小鼠模型，以期更加接近于生理性絕經(jīng)過程，更好地模擬圍絕經(jīng)期肥胖發(fā)生的狀態(tài)，為下一階段進(jìn)行圍絕經(jīng)期肥胖實(shí)驗(yàn)研究提供成熟、穩(wěn)定的動(dòng)物模型。本研究由上海市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)青年科技英才揚(yáng)帆計(jì)劃（21YF1444600）提供經(jīng)費(fèi)支持。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)8周雌性C57BL/6小鼠30只，購自北京 維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK（滬）2017-0011。飼養(yǎng)于上海市中醫(yī)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)中心，分籠飼養(yǎng)，室溫24-26℃，濕度60%，通風(fēng)良好，自由攝食攝水，晝夜節(jié)律12 h。本實(shí)驗(yàn)已通過上海市中醫(yī)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查（倫理批號(hào)：2021010），實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格按照中華人民共和國(guó)科技部發(fā)布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》。

1.2 藥物及配置方法

4-乙烯基環(huán)己烯二環(huán)氧化物（4-Vinylcyclohexene Diepoxide，VCD），100 mL/瓶，濃度1.094 g·mL-1（貨號(hào)：94956，Sigma公司，美國(guó)）；玉米油，500 mL/瓶（貨號(hào)：IC9000，索萊寶，中國(guó)）。配制方法：VCD給藥量160 mg·kg-1，取15 mL離心 管，加入 玉 米油10.74 mL和VCD原液0.2 mL，配制成20 mg·mL-1的VCD玉米油溶液，以160 mg·kg-1小鼠體重的劑量進(jìn)行頸皮下注射，進(jìn)行造模[24]。

1.3 材料與試劑

D12492高脂飼料（脂肪含量：60% kcal），江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司；血清雌激素（E2）和促卵泡雌激素（FSH）的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒（BPE20381（E2），BPE20419（FSH），上海朗頓生物技術(shù)股份有限公司）；0.9%氯化鈉溶液10 mL/支（中國(guó)大冢制藥有限公司）；蘇木素伊紅染色試劑盒，各100 mL（貨號(hào)：C0105S，上海碧云天生物技術(shù)有限公司）；4%多聚甲醛500 mL/瓶（上海睿寶和生物技術(shù)有限公司），異 氟 烷100 mL/瓶（Baxter Healthcare Corporation）。

1.4 儀器

電子天平（型號(hào)：AL204-IC，梅特勒）；高速冷凍離心機(jī)（型號(hào)：3-30KS，SIGMA）；低溫冰箱-86（型號(hào)：MDF-382E(N)，三洋）；低溫冰箱-20（型號(hào)：HYC92，海爾）；光學(xué)顯微鏡（BX43，奧林巴斯），粘附載玻片（50片，世泰）石蠟切片機(jī)（型號(hào)：HM325，Thermo Scientific），小動(dòng)物麻醉機(jī)（型號(hào)：HSIV-u，Raymain）。

2 方法

2.1 分組及給藥

30只小鼠在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，行陰道脫落細(xì)胞涂片觀察動(dòng)情周期變化情況。選擇動(dòng)情周期符合以下標(biāo)準(zhǔn)的小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：整個(gè)動(dòng)情周期持續(xù)在4-5天，包含動(dòng)情前期、動(dòng)情期、動(dòng)情后期、動(dòng)情間期4個(gè)階段。將符合標(biāo)準(zhǔn)的小鼠隨機(jī)抽取20只分為對(duì)照組及模型組，每組各10只，進(jìn)行為期2個(gè)月的造模，每組小鼠耳背打孔編號(hào)，固定每日上午9:00-10:00進(jìn)行稱重、測(cè)量體長(zhǎng)、腰圍、陰道脫落細(xì)胞涂片等。

HFD+VCD組（模型組）：造模周期共2月，在小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)后，即開始高脂飲食喂養(yǎng)60日，同時(shí)開始每日1次VCD注射以誘導(dǎo)圍絕經(jīng)期，連續(xù)給藥14天。給藥結(jié)束后繼續(xù)采用高脂飲食喂養(yǎng)至第60日。VCD造模參照Acosta等人[24]報(bào)道的造模方法，按照160 mg·kg-1體質(zhì)量于每日相同時(shí)間頸皮下注射VCD玉米油溶液，連續(xù)注射14天，每日注射1次，注射后立即放回原籠，并密切關(guān)注小鼠活動(dòng)狀況，14天給藥結(jié)束后進(jìn)行動(dòng)情周期檢測(cè)，若陰道涂片顯示無正常動(dòng)情周期變化或動(dòng)情周期紊亂提示小鼠進(jìn)入圍絕經(jīng)期，圍絕經(jīng)期模型成功。繼續(xù)高脂喂養(yǎng)，喂養(yǎng)至60日，再次進(jìn)行動(dòng)情周期檢測(cè)及肥胖指標(biāo)檢測(cè)，陰道涂片顯示圍絕經(jīng)期，小鼠體質(zhì)量增加＞20%可初步判定達(dá)到圍絕經(jīng)期肥胖標(biāo)準(zhǔn)，兩者同時(shí)發(fā)生判斷為造模成功?？瞻捉M（對(duì)照組）：采用正常飲食喂養(yǎng)，每日相同時(shí)間頸皮下注射160 mg·kg-1玉米油，連續(xù)給藥14天，喂養(yǎng)至60日。

2.2 取材

給藥結(jié)束繼續(xù)喂養(yǎng)至2月齡，將對(duì)照組小鼠及模型組陰道脫落涂片顯示動(dòng)情周期處于后期或間期的小鼠，在異氟烷誘導(dǎo)濃度3%，維持濃度1.5%的氣麻后眼眶采血，將麻醉后的小鼠其頭部略朝下，迅速摘取小鼠眼球，用1.5 mL EP管接取，取血后置于EP管內(nèi)靜置30 min。后將全血在3000 rpm、4℃條件下離心20 min，離心后吸取上清液置于1.5 mL EP管中存放于-80℃冰箱待用。切除的脂肪組織立即稱重，卵巢標(biāo)本用4%多聚甲醛固定，做病理切片。

2.3 觀察指標(biāo)

2.3.1 動(dòng)情周期觀察

陰道脫落細(xì)胞采集及涂片：分別在造模前、注射14天VCD玉米油溶液后、造模結(jié)束后連續(xù)5天，每日9:00-10:00進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞采集及涂片。操作方法：左右抓取固定小鼠，外陰清潔消毒后，右手持200μL的移液槍，將吸有10 μL、0.9%氯化鈉溶液槍頭尖端插入小鼠陰道0.5-1 cm，輕輕吹打沖洗陰道3-5次，吹打的速度不宜過快，吹打沖洗后將移液槍里的陰道液滴于載玻片上，制作為陰道涂片，風(fēng)干后進(jìn)行蘇木素-伊紅（HE）染色，染色后在普通光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行陰道涂片觀察，記錄動(dòng)情周期變化情況[21]。

2.3.2 體質(zhì)量、體長(zhǎng)、腰圍、Lee’s指數(shù)、脂肪濕重

造模期間觀察并記錄小鼠的生理狀況，每周固定時(shí)間對(duì)2組小鼠進(jìn)行稱量體質(zhì)量、測(cè)量體長(zhǎng)、腰圍，小鼠體質(zhì)量增加＞20%可初步判定達(dá)到肥胖標(biāo)準(zhǔn)，造模2m后進(jìn)行Lee’s指數(shù)計(jì)算：Lee’s指數(shù)=體質(zhì)量(g)^(1/3)/體長(zhǎng)(cm)×103。脂肪濕重：氣麻下眼球取血后立即解剖，迅速摘取小鼠脂肪組織，并用電子天平稱重并記錄數(shù)據(jù)。

2.3.3 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）檢測(cè)血清E2、FSH水平

小鼠氣麻下眼球取血，所得血清樣品使用E2以及FSH酶練免疫測(cè)定試劑盒（杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司）在實(shí)驗(yàn)操作手冊(cè)指導(dǎo)下進(jìn)行檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)品及樣本加標(biāo)記物抗體后37℃溫育30 min，加分離劑15 min，3000 rpm離心20 min。

2.3.4 卵巢大小、濕重及組織形態(tài)學(xué)觀察

將小鼠處死后從腹腔開口摘取卵巢，清除卵巢周圍脂肪組織，進(jìn)行拍照對(duì)比大小。并將其置于4%多聚甲醛中固定。經(jīng)過75%、85%、95%、100%酒精逐級(jí)脫水，以及二甲苯透明后進(jìn)行浸蠟及包埋。組織蠟塊凝固后置于4℃暫存待切片，石蠟切片于二甲苯于梯度酒精及蒸餾水中進(jìn)行脫蠟水化透明，并依次進(jìn)行蘇木素染色10 min，分化液分化15 s，流動(dòng)水沖洗，蒸餾水浸泡15 min，伊紅染色2 min，流動(dòng)水沖洗，蒸餾水浸泡5 min，梯度酒精脫水，二甲苯透明，封片觀察。

2.4 統(tǒng)計(jì)方法

本實(shí)驗(yàn)所有數(shù)據(jù)采用Graphpad Prism 8.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）進(jìn)行表示，兩組間比較，符合正態(tài)分布和方差齊性的采用Student’sTtest分析，不符合正態(tài)分布或者方差齊性采用秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 兩組小鼠陰道脫落細(xì)胞涂片比較

兩組小鼠陰道脫落細(xì)胞涂片結(jié)果見圖1。小鼠正常的完整動(dòng)情周期持續(xù)4-5天，共分為4個(gè)階段[25]。動(dòng)情周期：此階段鏡下可見輪廓明顯、扁平而膨圓的有核上皮細(xì)胞，少量白細(xì)胞及角化鱗狀細(xì)胞（圖1-C1）。動(dòng)情期：鏡下可見簇狀、扁平、邊緣不整齊、無核的楓葉狀角化鱗狀細(xì)胞，鏡下一般少見或無有核上皮細(xì)胞及白細(xì)胞（圖1-C2）。動(dòng)情后期：此階段鏡下可見3種細(xì)胞類型，白細(xì)胞增多為主，少量的有核上皮細(xì)胞及角化鱗狀上皮細(xì)胞（圖1-C3）。動(dòng)情間期：此階段鏡下幾乎滿視野均為白細(xì)胞，偶見少量有核上皮細(xì)胞（圖1-C4）。

圖1 兩組小鼠陰道脫落細(xì)胞涂片結(jié)果（HE染色，×400）

對(duì)照組小鼠呈現(xiàn)規(guī)律的動(dòng)情周期變化（C1-C4），HFD+VCD組（模型組）從給藥后14天開始出現(xiàn)動(dòng)情周期延長(zhǎng)，維持至給藥結(jié)束2月后，出現(xiàn)動(dòng)情周期紊亂，陰道脫落細(xì)胞涂片表現(xiàn)為連續(xù)的動(dòng)情間期，或連續(xù)的動(dòng)情期，后動(dòng)情期缺失，動(dòng)情周期紊亂，各期變化無規(guī)律周期性（M1-M4）。

3.2 兩組體質(zhì)量、體長(zhǎng)、腰圍、Lee’s指數(shù)、脂肪濕重結(jié)果

由表1可見，體質(zhì)量方面模型組小鼠明顯重于對(duì)照組小鼠，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；體長(zhǎng)方面模型組小鼠體長(zhǎng)長(zhǎng)于對(duì)照組小鼠，兩組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；腰圍上模型組小鼠腰圍高于對(duì)照組小鼠腰圍，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；Lee’s指數(shù)模型組小鼠較對(duì)照組小鼠具有明顯增高，兩組比較具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

表1 小鼠體質(zhì)量、體長(zhǎng)、腰圍、Lee’s指數(shù)、脂肪濕重比較(±s)

表1 小鼠體質(zhì)量、體長(zhǎng)、腰圍、Lee’s指數(shù)、脂肪濕重比較(±s)

注：*P＜0.001。

組別對(duì)照組(n=10)模型組(n=10)體質(zhì)量22.56±0.54*31.12±0.68體長(zhǎng)9.47±0.25*9.84±0.21腰圍6.63±0.27*8.20±0.15 Lee’s指數(shù)304.91±5.68*334.08±5.12脂肪濕重1.51±0.14*5.26±0.12

3.3 兩組血清E2、FSH水平

由表2可見，經(jīng)過HFD+VCD造模后造模后，模型組小鼠血清雌二醇（E2）水平相比對(duì)照組有下降的趨勢(shì)，但兩組相比差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。模型組小鼠血清卵泡刺激素（FSH）水平較對(duì)照組小鼠明顯增高，兩組比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。

表2 小鼠血清E2、FSH水平檢測(cè)結(jié)果（±s）

表2 小鼠血清E2、FSH水平檢測(cè)結(jié)果（±s）

注：*P＜0.001。

FSH（ng·mL-1）14.56±3.63*48.62±7.84組別對(duì)照組(n=10)模型組(n=10)E2（pg·mL-1）123.16±23.72 116.42±26.55

3.4 兩組小鼠卵巢大小及組織形態(tài)學(xué)結(jié)果

造模后，兩組小鼠卵巢情況如下（圖2），模型組卵巢較對(duì)照組卵巢體積顯著減小，重量顯著減輕。卵巢組織形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示（圖3）：對(duì)照組卵巢組織HE染色可見卵巢結(jié)構(gòu)清晰，卵泡生長(zhǎng)活躍，清晰可見數(shù)量正常，形態(tài)規(guī)則的各級(jí)卵泡，卵泡液含量較多，黃體結(jié)構(gòu)完整，發(fā)于良好，體積較大，細(xì)胞豐富。VCD+HFD造模后，模型組小鼠的卵巢明顯萎縮，卵巢中總卵泡數(shù)目、原始、成熟卵泡數(shù)目均顯著減少，黃體數(shù)量較多。

圖2 兩組小鼠卵巢大小

圖3 卵巢組織形態(tài)學(xué)結(jié)果（HE染色，×100）

4 討論

研究表明，女性進(jìn)入圍絕經(jīng)期階段會(huì)出現(xiàn)體重增加、脂質(zhì)代謝異常、體內(nèi)脂肪堆積等現(xiàn)象，進(jìn)一步發(fā)生圍絕經(jīng)期肥胖[26]。而圍絕經(jīng)期肥胖容易加重圍絕經(jīng)期癥狀、延長(zhǎng)圍絕經(jīng)期時(shí)長(zhǎng)，嚴(yán)重者甚至?xí)T發(fā)心血管疾病、代謝綜合征等[27-28]，因此，治療圍絕經(jīng)期肥胖對(duì)于圍絕經(jīng)期女性的身心健康具有重大的臨床意義。中醫(yī)認(rèn)為女性七七，天癸竭，任脈虛，太沖脈衰少，是女性生理和心里變化重大的一個(gè)階段，屬于中醫(yī)學(xué)“絕經(jīng)前后諸證”范疇，根據(jù)不同癥狀可以歸類于中醫(yī)“郁證”“臟燥”等，主要與肝、腎、脾三大臟腑相關(guān)。通過中醫(yī)藥干預(yù)改善肝郁可以有效緩解圍絕經(jīng)期抑郁、焦慮等情況[29-30]，調(diào)節(jié)脾腎功能可以避免圍絕經(jīng)期代謝綜合征的發(fā)生[31]。近年來，中醫(yī)藥學(xué)者開始關(guān)注圍絕經(jīng)期肥胖的相關(guān)研究[12][14][26]。但目前局限于臨床研究，尚缺乏中醫(yī)藥干預(yù)圍絕經(jīng)期肥胖的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。

本次研究結(jié)果表明，模型組小鼠的陰道脫落細(xì)胞涂片顯示小鼠動(dòng)情周期紊亂，出現(xiàn)了動(dòng)情周期延長(zhǎng)、部分動(dòng)情期的缺失、某動(dòng)情期的停滯等，說明造模后，模型組小鼠卵巢功能出現(xiàn)衰退，2個(gè)月陰道脫落細(xì)胞涂片觀察發(fā)現(xiàn)，小鼠的動(dòng)情周期仍處于紊亂狀態(tài)，無規(guī)律出現(xiàn)，整個(gè)動(dòng)情周期延長(zhǎng)，該研究結(jié)果與上海龍華醫(yī)院運(yùn)用超促排卵方法誘導(dǎo)圍絕經(jīng)期模型陰道涂片結(jié)果相互印證[32]。因此，HFD+VCD誘導(dǎo)模型小鼠的陰道脫落細(xì)胞涂片結(jié)果說明該造模方法符合圍絕經(jīng)期階段卵巢功能改變，且能夠維持2月左右的時(shí)長(zhǎng)，具有一定的穩(wěn)定性。

相關(guān)研究表明，單純的經(jīng)過VCD誘導(dǎo)，也會(huì)引起小鼠出現(xiàn)體重增加，但增加幅度有限，并不能穩(wěn)定的達(dá)到肥胖的標(biāo)準(zhǔn)[11]。本研究HFD+VCD模型組在給藥結(jié)束后，模型組小鼠體重有所增加，但與對(duì)照組未產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，也驗(yàn)證了該觀點(diǎn)。故本研究采用了HFD+VCD喂養(yǎng)連續(xù)2月，2個(gè)月后肉眼觀察兩組小鼠體重變化明顯。肥胖相關(guān)指標(biāo)顯示，模型組體質(zhì)量明顯高于對(duì)照組，體長(zhǎng)明顯長(zhǎng)于對(duì)照組，腰圍也高于對(duì)照組，Lee’s指數(shù)也有顯著的差異，小鼠造模成功取材后稱得模型組小鼠脂肪濕重較對(duì)照組小鼠脂肪濕重具有明顯差異。說明小鼠在單純VCD誘導(dǎo)后體重會(huì)有所增加，與圍絕經(jīng)期體重增加相似，而加上高脂飲食誘導(dǎo)2月后成功出現(xiàn)圍絕經(jīng)期肥胖模型。

經(jīng)過HFD+VCD造模后，模型組小鼠血清E2水平較對(duì)照組有所下降，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明卵巢功能有所衰退，E2水平下降。模型組小鼠血清FSH較對(duì)照組小鼠血清FSH明顯增高，說明造模后模型組小鼠卵巢功能衰退，E2下降后FSH代償性增高，也驗(yàn)證了FSH與E2之間負(fù)反饋關(guān)系的存下。因此經(jīng)過HFD+VCD造模后，在血清性激素水平上，模型組小鼠血清水平較好的模擬了圍絕經(jīng)期小鼠性。較對(duì)照組相比，卵巢組織體積縮小、重量明顯減輕，提示模型組小鼠卵巢發(fā)生萎縮，符合圍絕經(jīng)期小鼠卵巢狀態(tài)。根據(jù)2018年中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥實(shí)驗(yàn)藥理專委會(huì)《關(guān)于圍絕經(jīng)期綜合征動(dòng)物模型制備規(guī)范（草案）》中對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征動(dòng)物卵巢組織病理變化標(biāo)準(zhǔn)[33]，本研究對(duì)照組小鼠卵巢組織屬于“-”，卵巢HE染色可見各級(jí)卵泡生長(zhǎng)良好、成熟卵泡存在，黃體發(fā)育好，顆粒細(xì)胞層次明顯，卵泡液豐富，血管豐富；模型組小鼠卵巢組織沒有卵泡，卵巢萎縮，無血管。說明經(jīng)過HFD+VCD造模后，模型組卵巢組織形態(tài)學(xué)的改變提示卵巢功能的衰退，符合圍絕經(jīng)期小鼠的卵巢病理組織變化。

綜上，本研究創(chuàng)新性的采用HFD喂養(yǎng)結(jié)合VCD藥物誘導(dǎo)，此次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：HFD喂養(yǎng)加上VCD藥物誘導(dǎo)能夠成功促進(jìn)卵巢功能衰退，加速圍絕經(jīng)期小鼠發(fā)生肥胖，且能夠滿足圍絕經(jīng)期小鼠動(dòng)情周期紊亂、血清E2相對(duì)下降、FSH水平顯著增高、卵巢組織病理變化。該方法造模的結(jié)果更接近于生理性絕經(jīng)后出現(xiàn)的圍絕經(jīng)期肥胖的表現(xiàn)，模型較為穩(wěn)定，可持續(xù)2月左右。在接下來的中醫(yī)藥領(lǐng)域關(guān)于圍絕經(jīng)期肥胖的動(dòng)物研究中，可以采用HFD+VCD誘導(dǎo)制備圍絕經(jīng)期肥胖小鼠模型，模型能夠模擬接近生理狀態(tài)下絕經(jīng)的狀況，本研究結(jié)果為中醫(yī)藥領(lǐng)域研究圍絕經(jīng)期肥胖的小鼠模型制備提供了參考依據(jù)。