楤木葉中黃酮類化合物的分離和鑒定

黎冠蘭，王知斌，吳林武，常耀丹，孫延平，楊炳友，匡海學（黑龍江中醫(yī)藥大學教育部北藥基礎(chǔ)與應用研究重點實驗室，哈爾濱 150040）

楤木[Aralia elata（Miq.）Seem.]為五加科楤木屬植物，葉為羽狀復葉，小葉片較小[1]。楤木的藥用價值始載于《千金方》：“又方截取檐頭尖少許，燒灰，水和服，當作孔出膿血取愈”。現(xiàn)代藥理學研究表明其具有“適應原”樣，有保肝、抗癌等多種作用，具有十分廣闊的開發(fā)前景[2]。但迄今為止對楤木的化學成分研究主要集中在皂苷類[3-4]，對黃酮類化學成分的研究較少，因此為進一步闡明楤木葉的化學成分，充分利用楤木這一藥用資源，本文對楤木葉的黃酮類化學成分展開研究。

1 材料

Triple TOF 5600液質(zhì)聯(lián)用儀（美國AB SCIEX公司）；Bruker Avance Ⅲ-400核磁共振光譜儀（德國Bruker公司）；Waters 2695-2998分析型HPLC（美國Waters公司）；SHIMADZU LC-6AD制備型HPLC（島津公司）；反相ODS（YMC公司）、柱色譜硅膠（80～100目，200～300目）和薄層色譜用硅膠板（青島海洋化工廠）；色譜甲醇（美國默克公司）；其余試劑均為分析純。

楤木葉于2009年7月采摘于我國安徽省，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學樊銳鋒教授鑒定為五加科楤木屬植物楤木[Aralia elata（Miq.）Seem.]的干燥葉。樣品標本保存于黑龍江中醫(yī)藥大學中藥化學教研室（20091110）。

2 提取與分離

取干燥的楤木葉3.5 kg研成粉末，95%乙醇回流提取3次，每次2.5 h，濾過，合并乙醇提取液；再以70%乙醇回流提取3次，每次2.5 h；濾過，合并乙醇提取液。將兩種提取液合并，減壓回收溶劑得乙醇提取物。將此提取物加水懸浮后，用正丁醇萃取，萃取液減壓濃縮。取正丁醇萃取部位260.2 g，經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇溶劑系統(tǒng)進行梯度洗脫，洗脫液經(jīng)TLC薄層檢識合瓶，將成分相近者合并，得到10個組分（Fr.1～10），再經(jīng)ODS、Toyopearl反相柱色譜、制備型HPLC等現(xiàn)代分離技術(shù)分離純化得到9個化合物。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色無定形粉末。UVλ（nm）：209.2，276.4，314.4；（cm－1）：1480，1650，3376；ESI-MS在m/z：457.1476處給出[M＋Na]＋離子峰（計算值：457.1475）。

在1H-NMR（400 MHz，C5D5N）譜中，δH7.24（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2，H-6）和7.34（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3，H-5）處信號呈現(xiàn)一個苯環(huán)AA'BB'偶合系統(tǒng)，提示為對位取代苯環(huán)，而δH6.67（1H，d，J＝2.4 Hz，H-3'），6.59（1H，dd，J＝2.4，9.0 Hz，H-5'）和7.79（1H，d，J＝9.0 Hz，H-6'）處信號呈現(xiàn)一個苯環(huán)ABX偶合系統(tǒng)；δH3.23（2H，t，J＝7.6 Hz，H-α）和3.00（2H，t，J＝7.6 Hz，H-β）處存在兩個亞甲基信號；δH3.70（3H，s，4'-OCH3）處存在一個甲氧基信號；此外，在δH5.62（1H，d，J＝7.3 Hz，H-1''）處存在一個糖端基質(zhì)子信號，根據(jù)耦合常數(shù)推斷該糖苷鍵為β構(gòu)型。酸水解：經(jīng)1 mol·L－1鹽酸溶解，水液處理后，用HPLC分析，旋光檢測器檢測，鑒定化合物1的糖基部分為D-葡萄糖。

在13C-NMR（100 MHz，C5D5N）譜中，共呈現(xiàn)22個碳信號，其中δC135.0（C-1）、130.0（C-2、C-6）、117.1（C-3、C-5）、157.2（C-4）處為對位取代苯環(huán)信號；δC114.1（C-1'）、165.8（C-2'）、101.7（C-3'）、166.5（C-4'）、107.8（C-5'）、132.6（C-6'）處為1'、2'、4'-三取代苯環(huán)的碳信號；δC102.3（C-1''）、75.0（C-2''）、78.9（C-3''）、71.3（C-4''）、78.6（C-5''）、62.4（C-6''）處存在一組β-D-葡萄糖基上的碳信號；此外，還有δC40.2（H-α）、29.6（H-β）處存在兩個亞甲基碳信號，δC55.7（4'-OCH3）處存在一個甲氧基碳信號，δC204.4（C＝O）處存在一個羰基碳信號，推測該化合物為二氫查爾酮類化合物。

化合物1苷元部分的核磁數(shù)據(jù)與4，2'-dihydroxy-4'-methoxydihydrochalcone基本一致，主要區(qū)別在于化合物1多出一組葡萄糖基碳氫信號[5]。通過HMBC譜確定化合物1中糖的連接位置。在HMBC譜中，δH5.62（1H，d，J＝7.3 Hz，H-1''）和δC157.2（C-4）相關(guān)，表明葡萄糖連接在對位取代苯環(huán)的C-4位上。δH7.79（1H，d，J＝9.0 Hz，H-6'）和δC165.8（C-2'）相關(guān)，δH3.70（3H，s，4'-OCH3）處甲氧基質(zhì)子信號和δC166.5（C-4'）處相關(guān)，表明甲氧基和1'、2'、4'-三取代苯環(huán)的C-4'位相連；δH7.79（1H，d，J＝9.0 Hz，H-6'）和δC204.4（C＝O）相關(guān)，表明羰基連接在C-1'位上；此外，δH3.23（2H，t，J＝7.6 Hz，H-α）和δC135.0（C-1）、204.4（C＝O）相 關(guān)，δH3.00（2H，t，J＝7.6 Hz，H-β）和δC130.0（C-2、C-6）、204.4（C＝O）相關(guān)，可以推測-CH2-CH2-一端與羰基相連，另一端與對位取代苯環(huán)的C-1位相連。

綜上，鑒定化合物1為4'-甲氧基-二氫查爾酮苷元-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，查閱SciFinder發(fā)現(xiàn)該化合物為新化合物。通過對1H-NMR譜、13C-NMR譜、1H-1H COSY譜、HMBC譜和DEPT-135譜對化合物1的碳氫數(shù)據(jù)進行了準確的歸屬（見表1）?；瘜W結(jié)構(gòu)見圖1。

表1 化合物1的1H and 13C-NMR 譜數(shù)據(jù)(C5D5N 400/100 MHz)Tab 1 1H and 13C-NMR data of 1 (C5D5N 400/100 MHz)

圖1 化合物1的關(guān)鍵HMBC和1H-1H COSY相關(guān)Fig 1 Key HMBC and 1H-1H COSY correlation of compound 1

化合物2：黃色無定形粉末。ESI-MSm/z：605.2 [M＋Na]＋。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：3.25（2H，t，J＝7.4 Hz，H-α），2.96（2H，t，J＝7.4 Hz，H-β），7.16（2H，d，J＝8.7 Hz，H-2，H-6），7.00（2H，d，J＝8.7 Hz，H-3，H-5），6.57（1H，d，J＝2.4 Hz，H-3'），6.61（1H，dd，J＝2.4，9.0 Hz，H-5'），7.80（1H，d，J＝9.0 Hz，H-6'），4.84（1H，d，J＝7.5 Hz，H-1''），3.24～3.90（6H，m，H-2''～6''），4.99（1H，d，J＝7.4 Hz，H-1'''），3.24～3.90（6H，m，H-2'''～6'''）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：40.9（C-α），30.7（C-β），206.0（C＝O），136.3（C-1），130.4（C-2），117.9（C-3），157.6（C-4），117.9（C-5），130.4（C-6），116.0（C-1'），165.8（C-2'），105.0（C-3'），165.1（C-4'），109.4（C-5'），133.4（C-6'），102.5（C-1''），74.9（C-2''），78.3（C-3''），71.4（C-4''），78.0（C-5''），62.5（C-6''），101.3（C-1'''），74.7（C-2'''），78.1（C-3'''），71.2（C-4'''），77.8（C-5'''），62.3（C-6'''）。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物2為4-O-β-D-吡喃葡萄糖-二氫查爾酮苷元-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，經(jīng)SciFinder數(shù)據(jù)庫檢索表明該化合物為新的天然產(chǎn)物。

化合物3：淡黃色粉末。ESI-MSm/z：419.1 [M＋H]＋。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：7.59（1H，d，J＝15.0 Hz，H-α），7.74（1H，d，J＝15.0 Hz，H-β），7.64（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2，H-6），7.08（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3，H-5），6.23（1H，d，J＝2.5 Hz，H-3'），6.34（1H，dd，J＝2.5，9.0 Hz，H-5'），7.90（1H，d，J＝9.0 Hz，H-6'），4.92（1H，d，J＝7.5 Hz，H-1''），3.30～3.85（6H，m，H-2''～H-6''）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：119.6（C-α），144.1（C-β），193.0（C＝O），130.3（C-1）、133.0（C-2），117.6（C-3），160.6（C-4），117.6（C-5），133.0（C-6），114.5（C-1'），166.4（C-2'），103.5（C-3'），166.8（C-4'），109.0（C-5'），133.4（C-6'），101.3（C-1''），74.8（C-2''），78.0（C-3''），71.2（C-4''），77.9（C-5''），62.3（C-6''）。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物3為異甘草苷。

化合物4：黃色無定形粉末。ESI-MSm/z：457.1 [M＋Na]＋。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：3.20（2H，t，J＝7.4 Hz，H-α），2.77（2H，t，J＝7.4 Hz，H-β），6.92（2H，d，J＝8.7 Hz，H-2，H-6），6.58（2H，d，J＝8.7 Hz，H-3，H-5），6.73（1H，d，J＝2.3 Hz，H-3'），6.54（1H，dd，J＝2.3，8.8 Hz，H-5'），7.50（1H，d，J＝8.8 Hz，H-6'），3.74（3H，s，4'-OCH3），4.93（1H，d，J＝7.3 Hz，H-1''），3.28（1H，m，H-2''），3.36（1H，m，H-3''），3.36（1H，m，H-4''），3.28（1H，m，H-5''），3.80（1H，dd，J＝1.9，12.0 Hz，H-6''a），3.57（1H，dd，J＝6.0，12.0 Hz，H-6''b）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：46.0（C-α），30.4（Cβ），200.4（C＝O），132.9（C-1），130.2（C-2），116.4（C-3），157.1（C-4），116.4（C-5），130.2（C-6），122.6（C-1'），159.7（C-2'），102.3（C-3'），164.8（C-4'），108.7（C-5'），132.5（C-6'），55.8（4'-OCH3），102.7（C-1''），75.0（C-2''），79.4（C-3''），71.5（C-4''），79.1（C-5''），62.6（C-6''）。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物4為4'-O-methyldavidioside。

化合物5：黃色針狀結(jié)晶。ESI-MSm/z：421.1 [M＋H]＋。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：3.03（2H，t，J＝7.4 Hz，H-α），2.96（2H，t，J＝7.4 Hz，H-β），6.94（2H，d，J＝8.6 Hz，H-2，H-6），6.61（2H，d，J＝8.6 Hz，H-3，H-5），6.43（1H，d，J＝2.4 Hz，H-3'），6.61（1H，dd，J＝2.4，8.9 Hz，H-5'），7.69（1H，d，J＝8.9 Hz，H-6'），5.75（1H，d，J＝7.2 Hz，H-1''），3.21～3.86（6H，m，H-2''～H-6''）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：40.7（C-α），29.8（C-β），204.8（C＝O），131.9（C-1），130.1（C-2），116.4（C-3），157.4（C-4），116.4（C-5），130.1（C-6），115.1（C-1'），165.3（C-2'），104.7（C-3'），164.6（C-4'），108.8（C-5'），132.7（C-6'），101.5（C-1''），74.8（C-2''），78.2（C-3''），71.1（C-4''），78.5（C-5''），62.3（C-6''）。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物5為confusoside。

化合物6：淡黃色粉末。ESI-MSm/z：441.1 [M＋Na]＋。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ：5.51（1H，dd，J＝3.0，13.0 Hz，H-2），2.86（1H，dd，J＝3.0，16.5 Hz，H-3a），3.14（1H，dd，J＝13.0，16.5 Hz，H-3b），8.14（1H，d，J＝8.6 Hz，H-5），6.88（1H，dd，J＝2.5，8.6 Hz，H-6），6.79（1H，d，J＝2.5 Hz，H-8），7.55（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2'，H-6'），7.38（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3'，H-5'），5.62（1H，d，J＝7.4 Hz，H-1''），4.07～4.48（6H，m，H-2''～H-6''）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ：79.1（C-2），44.1（C-3），190.1（C＝O），128.3（C-5），111.5（C-6），166.1（C-7），102.0（C-8），164.1（C-9），114.5（C-10），130.3（C-1'），128.2（C-2'），117.0（C-3'），158.4（C-4'），117.0（C-5'），128.2（C-6'），101.7（C-1''），74.5（C-2''），78.6（C-3''），71.1（C-4''），79.1（C-5''），62.1（C-6''）。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物6為4'-羥基-二氫黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物7：黃色針狀結(jié)晶。ESI-MSm/z：595.1 [M＋H]＋。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：6.19（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.38（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），8.05（2H，d，J＝8.0 Hz，H-2'，H-6'），6.87（2H，d，J＝8.0 Hz，H-3'，H-5'），5.11（1H，d，J＝7.4 Hz，H-1''），3.25～3.81（10H，m，H-2''～H-6''，H-2'''～H-5'''），4.51（1H，d，J＝1.4 Hz，H-1'''），1.12（3H，d，J＝6.2 Hz，H-6'''）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：159.4（C-2），135.5（C-3），179.4（C-4），163.0（C-5），100.0（C-6），166.2（C-7），95.0（C-8），159.4（C-9），105.6（C-10），122.8（C-1'），132.4（C-2'），116.2（C-3'），161.5（C-4'），116.2（C-5'），132.4（C-6'），104.6（C-1''），75.8（C-2''），78.2（C-3''），72.3（C-4''），77.2（C-5''），68.6（C-6''），102.4（C-1'''），72.1（C-2'''），71.5（C-3'''），73.9（C-4'''），69.7（C-5'''），17.9（C-6'''）。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物7為山柰酚-3-Oβ-D-蕓香糖苷。

化合物8：黃色針狀結(jié)晶。ESI-MSm/z：465.1 [M＋H]＋。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：6.14（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.32（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），7.64（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2'），6.84（1H，d，J＝8.2 Hz，H-5'），7.62（1H，dd，J＝2.0，8.2 Hz，H-6'），5.22（1H，d，J＝7.0 Hz，H-1''），3.24～3.86（6H，m，H-2''～H-6''）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：158.4（C-2），135.7（C-3），179.4（C-4），163.0（C-5），100.0（C-6），166.1（C-7），94.8（C-8），159.0（C-9），105.6（C-10），123.1（C-1'），116.0（C-2'），145.9（C-3'），149.9（C-4'），117.6（C-5'），123.3（C-6'），104.5（C-1''），75.8（C-2''），78.3（C-3''），71.2（C-4''），78.1（C-5''），62.6（C-6''）。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物8為槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物9：黃色針狀結(jié)晶。ESI-MSm/z：303.0 [M＋H]＋。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：6.18（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.40（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），7.67（1H，d，J＝2.4 Hz，H-2'），6.88（1H，d，J＝8.4 Hz，H-5'），7.53（1H，dd，J＝2.4，8.4 Hz，H-6'）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：147.6（C-2），135.6（C-3），175.7（C-4），156.0（C-5），98.0（C-6），163.7（C-7），93.2（C-8），160.6（C-9），102.9（C-10），121.8（C-1'），114.9（C-2'），144.9（C-3'），146.7（C-4'），115.5（C-5'），119.8（C-6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻[13]數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定化合物9為槲皮素。

4 結(jié)論

本文對楤木葉的正丁醇萃取部分進行了深入的化學成分研究，共分離鑒定得到9個黃酮類化合物，其中，化合物1為未見報道的新化合物，化合物2為從植物中分離得到的新天然產(chǎn)物，化合物4、5為首次在楤木屬中分離得到，化合物9為首次從楤木葉中分離得到。這進一步豐富了楤木的化學成分，為深入挖掘其潛在的生物活性成分和質(zhì)量標志物奠定了基礎(chǔ)。