羔羊胃顆粒在慢性萎縮性胃炎大鼠中的作用效果及對炎性因子的影響研究

陳昌欣

(福建省泉州市第一醫(yī)院消化內(nèi)科,福建 泉州 362000)

慢性萎縮性胃炎(GAS)是常見的一種消化系統(tǒng)疾病,具有反復(fù)發(fā)作、病程長等特點[1-2]。GAS特征以胃黏膜固有腺體萎縮常伴炎性反應(yīng)及腸上皮化生常見[3-4]。隨著人們飲食結(jié)構(gòu)的改變,生活習(xí)慣的變化,GAS發(fā)病率呈不斷上升趨勢,嚴(yán)重影響人們生活質(zhì)量[5-6]。因此,采取及時有效的治療慢性萎縮性胃炎方法。羔羊胃顆粒是一種復(fù)發(fā)制劑,組成包括羔羊胃的提取液和維生素b12,具有健脾消食功效,主要用于慢性胃炎引起的食欲不振、上腹部不適及脹滿等。本文研究探討羔羊胃顆粒在GAS大鼠中的作用效果及對炎性因子的影響,以期為GAS治療及其作用機(jī)制提供參考。現(xiàn)將報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

SD大鼠40只,雄性,體重(180±20)g,由北京維通利華實驗動物技術(shù)公司提供,許可證號:SCXK(京)2016-0006。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,控制室溫23±2℃,控制濕度50%～70%。羔羊胃提取物b12顆粒(廠家:新疆生化藥業(yè)有限公司;國藥準(zhǔn)字H20140012)。

1.2 主要試劑及儀器

主要試劑:胃動素(MTL)試劑盒(上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司),胃泌素(MTL)試劑盒(上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司),白介素-1β(IL-1β)試劑盒(上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司),白介素-6(IL-6)試劑盒(上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司),白介素-10(IL-10)試劑盒(上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司),腫瘤壞死因子-α(TNF-α)試劑盒(上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司)。

主要儀器:日本奧林巴斯公司BX53光學(xué)顯微鏡;美國Bio-rad伯樂iMark酶標(biāo)儀;日立7600型全自動生化分析儀。

1.3 方法

1.3.1 GAS模型制備

給予2%的水楊酸鈉溶液,每日2mL灌胃,灌胃前1h禁飲禁食,前3周正常飲食,后3周間日常足量飲食,進(jìn)行6周。

1.3.2 實驗分組及給藥方法

40只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、低劑量組和高劑量組,各10只。低劑量組給予1.2g/(kg·d)灌胃,每日1次;高劑量組給予4.8g/(kg·d),每日1次;正常組和模型組給予等劑量生理鹽水灌胃,每日1次。各組大鼠連續(xù)灌胃4周。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 胃黏膜病理組織學(xué)改變

采用HE染色法評價胃黏膜病理組織學(xué),取胃黏膜組織,采用多聚甲醛固定24h,常規(guī)石蠟包埋,HE染色,再于光學(xué)顯微鏡下觀察胃黏膜病理組織學(xué)改變。

1.4.2 胃黏膜損傷指數(shù)

于大鼠全胃,沿胃大彎側(cè)剪開,將全胃展開,沖洗胃黏膜,采用10%福爾馬林固定,平鋪于解剖顯微鏡載物臺上觀察損傷情況,根據(jù)Cuth法計黏膜損傷指數(shù)。

1.4.3 血清GAS和MTL水平測定

取大鼠靜脈血,以10cm半徑,3000r/min,離心8min,采集血清標(biāo)本,于-20℃下保存待測。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清GAS和MTL水平,嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說明書測定。

1.4.4 炎癥因子水平測定

取大鼠靜脈血,以10cm半徑,3000r/min,離心8min,采集血清標(biāo)本,于-20℃下保存待測。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平,嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說明書測定。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 25.0軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以例(百分比)表示,采用χ2檢驗;計量資料均符合正態(tài)分布,采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,行t/F檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠胃黏膜組織病理學(xué)變化

正常組大鼠胃腺體形態(tài)規(guī)則,胃黏膜厚度正常,固有腺及黏膜層毛細(xì)血管無擴(kuò)張,腺上皮與腺管分界清楚;模型組大鼠固有層腺體減少,排列不規(guī)則,胃黏膜不同程度萎縮,且鏡下可見異型增生、腸上皮化生病理改變;低劑量組和高劑量組可見胃黏膜腺體數(shù)量增多,排列較整齊。見圖1。

圖1 各組大鼠胃黏膜組織病理學(xué)

2.2 各組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)變化比較

模型組、低劑量組和高劑量組胃黏膜損傷指數(shù)高于正常組(P<0.05);低劑量組和高劑量組胃黏膜損傷指數(shù)低于模型組(P<0.05);高劑量組胃黏膜損傷指數(shù)低于低劑量組(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)變化比較

2.3 各組大鼠血清GAS和MTL水平比較

模型組、低劑量組和高劑量組血清GAS水平低于正常組,而MTL水平高于正常組(P<0.05);低劑量組和高劑量組血清GAS水平高于模型組,而MTL水平低于模型組(P<0.05);高劑量組血清GAS水平高于低劑量組,而MTL水平低于低劑量組(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠血清GAS和MTL水平比較

2.4 各組大鼠炎癥因子水平比較

模型組、低劑量組和高劑量組血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平高于正常組,而IL-10水平低于正常組(P<0.05);低劑量組和高劑量組血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平低于模型組,而IL-10水平高于模型組(P<0.05);高劑量組血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平低于低劑量組,而IL-10水平高于低劑量組(P<0.05)。見表3。

表3 各組大鼠炎癥因子水平比較

3 討論

GAS是多基因、多階段及多病因逐漸變異積累的一個過程,其癥狀主要為胃部疼痛,且伴反酸、惡心、上腹部飽脹不適等癥狀,容易反復(fù)發(fā)作,不易治愈[7-9]。GAS常與十二指腸反流、煙酒、飲食及幽門螺桿菌感染等致病因素有關(guān)[10-12]。采取及時有效的治療GAS方法尤為重要。

羔羊胃提取物b12顆粒主要成分是羊羔第四胃提取物,其中含雙岐因子、粘蛋白、胃蛋白酶和乳凝酶等多種生物活性成分,且與維生素b12相互組成的復(fù)合型中藥制劑。羔羊胃提取物b12顆粒具有健脾消食功效,臨床主要用于慢性胃炎引起的食欲不振、上腹部不適及脹滿等。現(xiàn)代藥理研究表明,羔羊胃顆粒具有消化蛋白質(zhì)的高度活性,具有超強(qiáng)的凝乳能力,改善偉胃液分泌機(jī)能,并且不會影響蛋白質(zhì)結(jié)合維生素b12的能力;同時羔羊胃顆粒維持腸能菌群平衡,具有很強(qiáng)的消化緩沖作用,從而保護(hù)胃黏膜[13]。本文研究表明,低劑量組和高劑量組胃黏膜損傷指數(shù)低于模型組,可見羔羊胃顆粒可減輕胃黏膜損傷;低劑量組和高劑量組血清GAS水平高于模型組而MTL水平低于模型組,可見羔羊胃顆?？筛纳拼笫笪竸恿W(xué)。

炎性因子與GAS發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[14]。IL-1β是胃酸分泌的一種有效抑制劑,可通過阻斷細(xì)胞內(nèi)鈣依賴性蛋白酶激酶C增加及鈣離子分布而抑制胃酸分泌[15]。IL-6主要由淋巴細(xì)胞、上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌,在炎癥中具有損傷和保護(hù)作用,可通過STAT途徑激活NF-κB,誘導(dǎo)細(xì)胞間黏附分子表達(dá),而其中細(xì)胞間黏附分子在炎性胃腸病上皮細(xì)胞-中性粒細(xì)胞相互作用中發(fā)揮關(guān)鍵作用。IL-6對多細(xì)胞具有促炎作用,誘導(dǎo)肝臟組織產(chǎn)生C反應(yīng)蛋白,加重炎癥反應(yīng)[16]。IL-10作為典型的一種多效性抗炎因子,具有廣泛生物活性,主要由活化的輔助性T、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生,其生物學(xué)作用主要是抑制炎癥反應(yīng)[17]。TNF-α主要由單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等分泌,參與炎癥反應(yīng)和特異性免疫反應(yīng),且可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、纖維母細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌花生四烯酸代謝物、蛋白酶,且可吞噬細(xì)胞產(chǎn)物以及補(bǔ)體片段導(dǎo)致細(xì)胞壞死,間質(zhì)中蛋白質(zhì)破壞的發(fā)生,損害胃黏膜上皮[18]。本文研究表明,低劑量組和高劑量組血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平低于模型組,而IL-10水平高于模型組,可見羔羊胃顆?？赏ㄟ^降低IL-1β、IL-6和TNF-α水平及提高IL-10水平而減輕炎性反應(yīng)。

綜上所述,羔羊胃顆粒在GAS大鼠中作用效果明顯,可減輕胃黏膜損傷,改善胃動力,減輕炎性反應(yīng)。