海螵蛸對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究

趙文玲，朱敏敏，孫虎

(1.淄博市第四人民醫(yī)院，山東 淄博 255000；2.安丘市市立醫(yī)院，山東 安丘 262100;3.山東省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250014)

海螵蛸為烏賊科動(dòng)物無針烏賊(Sepiellamaindronide Rochebrune)或金烏賊(SepiaseculentaHoyle)的干燥內(nèi)殼[1]，為傳統(tǒng)中藥材，味咸、澀，性微溫，具有收斂止血、制酸止痛等功效[2]，臨床應(yīng)用廣泛。另外，海螵蛸還可用于治療胃十二指腸潰瘍、慢性胃炎等疾病，也可用于收斂止血等治療[3]。研究發(fā)現(xiàn)海螵蛸中的碳酸鈣可以中和胃酸，能減輕應(yīng)激引發(fā)的胃黏膜損傷，通過減少胃酸的含量，從而保護(hù)胃黏膜細(xì)胞，達(dá)到防治胃黏膜細(xì)胞損傷的效果[4]。本研究旨在探索中藥海螵蛸對(duì)大鼠胃黏膜的保護(hù)作用，觀察海螵蛸對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的療效，為臨床用藥提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物 海螵蛸(山東建聯(lián)盛嘉中藥有限公司，批號(hào)：190813)；無水乙醇(山東龍玉泉藥用輔料有限公司，批號(hào)：190705)。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 BP211D型電子天平(德國賽多利斯)；XW-80A旋渦振蕩儀(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；Cary60型紫外-可見分光光度計(jì)(安捷倫科技<中國>有限公司)；HH-7智能恒溫水浴鍋(力城科技)；LD-2A型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；不銹鋼高精度專業(yè)級(jí)機(jī)械式游標(biāo)卡尺(浙江得利公司)；大鼠體重機(jī)(Rgz-120)；成像系統(tǒng)(Nikon Eclipse TI-SR)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)雄性Wistar大鼠40只，8周齡，體質(zhì)量180～220 g，購自濟(jì)南鵬悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK(魯)20190003。飼養(yǎng)條件：溫度22～24 ℃，相對(duì)濕度50%～65%，自由進(jìn)食、飲水。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組及造模 適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將40只大鼠按照隨機(jī)分組法分為4組，每組10只，即正常對(duì)照組、模型組、海螵蛸500、1 500 mg·kg-1兩個(gè)劑量組。海螵蛸低、高劑量組分別灌胃給藥，正常組及模型組給予等體積蒸餾水灌胃，每日1次，連續(xù)7 d。末次給藥前一天禁食，末次給藥后30 min，除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠均灌胃無水乙醇(0.2 mL/只)誘導(dǎo)急性胃黏膜損傷模型。

1.5 樣本采集 造模2 h后，將大鼠用乙醚麻醉，待大鼠麻醉后將其固定于專用手術(shù)臺(tái)上，樣本采集過程中如果大鼠有蘇醒跡象則持續(xù)麻醉大鼠。剖開大鼠腹部，從心臟取血置于取血管中備用；將胃幽門和賁門結(jié)扎后剪下胃部并將其取出，將胃部剪開把胃內(nèi)容物收集于離心管內(nèi)備用[5]。剪下部分胃壁用4 ℃的生理鹽水洗凈，冷藏待用；剩余部分注入適量10%的甲醛溶液固定20 min，待其固定后做病理切片進(jìn)行觀察[6]。

1.6 胃黏膜損傷指標(biāo)

1.6.1 胃黏膜損傷指數(shù) 將胃用適量10%的甲醛溶液固定20 min后，沿大彎剪開，把內(nèi)容物洗凈后展開胃黏膜，使用游標(biāo)卡尺對(duì)胃黏膜上的出血點(diǎn)或出血帶的長度和寬度進(jìn)行測量，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 急性酒精損傷肉眼觀察評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

2 結(jié)果

2.1 海螵蛸對(duì)大鼠體重的影響 由表2可知，大鼠灌胃1周后，模型組及海螵蛸高、低劑量組大鼠體重均維持在300 g 左右，與空白對(duì)照組比較無明顯差異(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)期間，各組大鼠均未出現(xiàn)不良反應(yīng)及死亡現(xiàn)象，表明海螵蛸并未產(chǎn)生毒副作用，且對(duì)大鼠體重沒有影響。

表2 海螵蛸對(duì)大鼠體重的影響

2.2 海螵蛸對(duì)大鼠胃黏膜損傷的影響

2.2.1 胃黏膜肉眼觀察情況 肉眼觀察可見，對(duì)照組大鼠胃黏膜色澤正常，觸摸光滑，表面無損傷；模型組大鼠胃黏膜損傷部位顏色呈深紅色，面積最大，損傷最為嚴(yán)重；海螵蛸高劑量組損傷部位顏色比模型組淺，在各組中損傷面積最小，損傷程度最輕；海螵蛸低劑量組胃黏膜損傷程度比高劑量組嚴(yán)重，顏色較深，損傷面積也要更大，但與模型組相比從顏色和面積上來看損傷程度還是明顯較輕的。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明海螵蛸具有保護(hù)大鼠胃黏膜損傷的作用。

2.2.2 海螵蛸對(duì)大鼠胃黏膜損傷指數(shù)、抑制率、面積的影響 由表3可知，模型組胃黏膜損傷指數(shù)較高，胃黏膜損傷面積較大；與模型部比較，海螵蛸500、1 500 mg·kg-1劑量組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)明顯降低，損傷面積顯著縮小(P<0.01)。與500 mg·kg-1劑量組相比，海螵蛸1 500 mg·kg-1劑量組的損傷指數(shù)較低，損傷面積較小，統(tǒng)計(jì)學(xué)比較仍有顯著性差異(P<0.05)，胃黏膜損傷抑制率：海螵蛸高劑量組>海螵蛸低劑量組。

表3 海螵蛸對(duì)大鼠胃黏膜損傷指數(shù)、抑制率、面積的影響

3 討論

無水乙醇是實(shí)驗(yàn)室常用的急性胃黏膜損傷誘導(dǎo)物，灌胃后可直接損傷大鼠的胃黏膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)，致使大鼠胃部胃酸分泌增多，胃黏膜上皮細(xì)胞腫脹，進(jìn)而造成急性胃黏膜損傷。本實(shí)驗(yàn)中我們采用對(duì)胃黏膜上的出血點(diǎn)或出血帶的長度和寬度進(jìn)行測量得到胃黏膜的損傷指標(biāo)，通過測量經(jīng)過胃黏膜潰瘍中心的最大縱徑和橫徑得到胃黏膜的損傷面積，用這兩個(gè)指標(biāo)來評(píng)價(jià)大鼠胃黏膜損傷模型建立與海螵蛸對(duì)胃黏膜的保護(hù)作用。

海螵蛸主要成分是碳酸鈣，能有效降低胃液的酸度，具有較強(qiáng)的細(xì)胞保護(hù)能力。本研究從胃黏膜損傷指數(shù)、損傷抑制率、損傷面積的結(jié)果來看，海螵蛸能有效減輕急性胃黏膜損傷的形成，降低胃黏膜損傷指數(shù)和損傷面積，促進(jìn)其快速恢復(fù)，且呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性，表明海螵蛸具有保護(hù)胃黏膜損傷的作用，且高劑量組的保護(hù)效果較好，從實(shí)驗(yàn)角度進(jìn)一步驗(yàn)證了海螵蛸對(duì)胃黏膜的保護(hù)作用。

當(dāng)下，現(xiàn)代人的生活節(jié)奏逐步加快，伴隨著精神壓力的增加以及飲食習(xí)慣的不規(guī)律，出現(xiàn)消化性胃潰瘍的患者越來越多，且年齡趨于年輕化[9]。當(dāng)前，由于現(xiàn)代人快節(jié)奏的生活方式，大多數(shù)人選擇西醫(yī)治療，見效更快，且便于攜帶[10]。然而，以“治未病”為理念的中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)，在疾病的預(yù)防治療方面已經(jīng)默默地守護(hù)了我們上千年的時(shí)間，在這歷經(jīng)歲月考驗(yàn)的臨床歷史實(shí)踐中中醫(yī)藥展現(xiàn)出了其獨(dú)特的魅力，在“治未病”方面與西醫(yī)相比，它的優(yōu)勢是非常明顯的[11]。通過本實(shí)驗(yàn)研究，可考慮根據(jù)海螵蛸的自身特點(diǎn)開發(fā)成藥食同源的新型功能性食品，讓其發(fā)揮更大的應(yīng)用價(jià)值。