海螵蛸止血作用的現(xiàn)代研究進(jìn)展

王丹，王晶娟

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100102)

海螵蛸為烏賊科動物無針烏賊SepiellamaindronideRochebrune或金烏賊SepiaesculentaHoyle的干燥骨狀內(nèi)殼，被《神農(nóng)本草經(jīng)》列為中品。海螵蛸為咸、澀，微溫，歸肝、腎經(jīng)，具有固精止帶、收斂止血、制酸止痛和收濕斂瘡的功效，主治女子漏下赤白精汁、血閉,陰蝕腫痛寒熱，癥瘕，不孕等癥[1]。海螵蛸主產(chǎn)于廣東、福建、浙江、山東等地，其他沿海地區(qū)均有出產(chǎn)，2015版《中國藥典》[2]提出海螵蛸內(nèi)服治療吐血衄血、崩漏便血、遺精滑精、赤白帶下、胃痛吞酸；外治損傷出血、濕疹濕瘡、潰瘍不斂等?，F(xiàn)代常用于治療各種潰瘍癥，上消化道出血等，均以內(nèi)服為主。整理近年來的文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，海螵蛸外用止血的應(yīng)用較少，故本文通過探討海螵蛸的止血機(jī)制，進(jìn)而為臨床研究者提供新的研發(fā)思路，從而擴(kuò)大海螵蛸的應(yīng)用范圍。

1 本草考證

海螵蛸即為烏賊魚骨，早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中便有海螵蛸“作丸飲以鮑魚汁治血枯”的用法，據(jù)《神農(nóng)本草經(jīng)》記載，其主治女子漏下赤白精汁，血閉，陰蝕腫痛寒熱，癥瘕，不孕癥；《藥性論》也有關(guān)于海螵蛸“止婦人漏血”的記載。在《日華子諸家本草》記載海螵蛸可療血崩;《圣惠方》中亦提及海螵蛸“治吐血及鼻衄不止：烏賊骨，搗細(xì)羅為散，不計時候，以清粥飲調(diào)下二錢”;《本草綱目》記載，海螵蛸“脫則散而不收，故用酸澀之藥以斂其耗散”，其言之意即古人大多采用酸澀之物來治療各種瀉下滑脫之癥，并將這種用藥經(jīng)驗以文書記載，供后人借鑒引用。此外，《本草蒙筌》也有關(guān)于海螵蛸“去目睛浮翳，收創(chuàng)口腐膿”的記載，多用于吐血衄血、遺精帶下、濕瘡濕疹、潰瘍不斂，以及廣泛性的外傷出血等。海螵蛸作為收澀藥的一部分，又兼具收斂止血藥的特性，對其止血作用機(jī)理和臨床應(yīng)用的研究是十分必要的。

2 化學(xué)成分

海螵蛸中主要含碳酸鈣80%～85%，殼角質(zhì)6%～7%，黏液質(zhì)10%～15%，此外還含有少量的氯化鈉、磷酸鹽、鎂鹽等[3]。

李蘭[4]等人采用電感耦合等離子發(fā)射光譜法、熱分析等現(xiàn)代化研究方法對其成分進(jìn)行研究，結(jié)果表明海螵蛸中除含有大量的碳酸鈣之外，還具有豐富的微量元素(如Fe等)，且檢出的11種微量元素的比例為：Ca>Na>Sr>K>P>Mg>Zn>Fe>Cu>Mn>B。海螵蛸含豐富的鈣元素，為26.7%,含鐵65.3 μg·g-1。而豐富的鐵可治療貧血癥，進(jìn)一步解釋了《黃帝內(nèi)經(jīng)》中所提到的海螵蛸作丸飲以鮑魚汁治血枯的用法[5]。

海螵蛸中除了碳酸鈣為主要成分外，其所含有的甲殼素在現(xiàn)代主要應(yīng)用于各種支架材料，其含有的殼聚糖經(jīng)過磷酸化可用于抗銅綠假單胞菌和霍亂弧菌[6]等。為此，海螵蛸不僅在現(xiàn)代行業(yè)的應(yīng)用廣泛，其藥理作用更需進(jìn)一步探究。

3 海螵蛸止血作用的現(xiàn)代研究

從《神農(nóng)本草經(jīng)》到《本草綱目》，古人幾千年的用藥經(jīng)驗便可說明海螵蛸的止血作用的明確性。隨著現(xiàn)代社會的進(jìn)步發(fā)展，僅有用藥經(jīng)驗將無法滿足現(xiàn)代藥理發(fā)展的需求。因此，筆者通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)，對其可能的止血物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行歸納總結(jié)，為后來科研工作者的研究提供一些參考。

3.1 止血作用的確立

袁海燕[7]等人通過總結(jié)關(guān)于治療崩漏的臨床處方的82篇論文中，采用方劑計量學(xué)分析手段，得出止血藥排在前3的分別為生地黃、阿膠、旱蓮草,占止血藥的34.24%；而在這82篇文獻(xiàn)中，海螵蛸的引用頻次高達(dá)51次，充分說明了海螵蛸單味藥或其復(fù)方已廣泛應(yīng)用于各出血病癥。

戰(zhàn)璇[8]等人采用頻數(shù)分析及關(guān)聯(lián)規(guī)則挖掘技術(shù)和關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建技術(shù)對包含海螵蛸的中藥方劑進(jìn)行分析，其中和海螵蛸配伍最多的龍骨、當(dāng)歸等中藥主要針對瘧疾，而與蒲黃等聯(lián)用則主要用于各種出血病癥。通過其實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，海螵蛸治療出血癥、帶下病和崩漏等置信度均在80%以上，且治療崩漏的效果最顯著，支持度占8.46%。研究發(fā)現(xiàn)，海螵蛸單味藥及其復(fù)方制劑在臨床大多用于產(chǎn)后血崩、便血、經(jīng)期延長和崩漏等出血病癥，并且取得良好的效果。

3.2 止血作用機(jī)理

在現(xiàn)代應(yīng)用的海螵蛸主要有三種規(guī)格：生粉(清炒)、麩炒和醋制海螵蛸，其中以生粉應(yīng)用最多。海螵蛸的止血機(jī)理至今仍未闡明，本文旨在比較不同成分的止血機(jī)制，從理論上探究海螵蛸可能的止血機(jī)理，以期為科研工作者提供研究思路。中醫(yī)理論指導(dǎo)下常見的止血機(jī)制常為“血見黑則止”“血得寒則凝”“酸澀收斂止血”等；西醫(yī)理論下的止血，則是通過機(jī)械壓迫或者給予止血劑，通過體內(nèi)外凝血途徑在相應(yīng)出血部位形成血塊來減少出血的過程。運用中醫(yī)理論下的止血機(jī)制，海螵蛸味咸、澀，根據(jù)“酸澀收斂止血”理論，海螵蛸應(yīng)具有止血作用；對于西醫(yī)理論下的止血機(jī)理，筆者則主要通過比對海螵蛸提取物以及海螵蛸中所含有的各類成分，推測海螵蛸發(fā)揮止血作用的可能機(jī)制。

3.2.1 甲殼素的止血作用

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)海螵蛸中含有甲殼素，甲殼素是自然界中儲存量僅次于纖維素的天然高分子多糖，是一種完全可生物降解的多糖，其性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于水和有機(jī)溶劑，溶于較稀的鹽酸、醋酸等[9]，臨床上可用于手術(shù)縫合線。Fischer[10]等人發(fā)現(xiàn)甲殼素纖維(聚-N-葡萄糖胺)通過冗余機(jī)制發(fā)揮止血作用，吸附試驗證實甲殼素纖維可與血小板結(jié)合，促進(jìn)凝血酶的生成、使細(xì)胞內(nèi)游離的鈣離子濃度增多和加速纖維蛋白的凝塊進(jìn)而發(fā)揮止血作用。

Hyeong-Seop Jung[11]等人采用靜電紡絲法制備納米級的β-甲殼素纖維網(wǎng)，將其作為一種新型的創(chuàng)傷敷料，采用X射線衍射儀(XRD)對其結(jié)構(gòu)和物理特性進(jìn)行表征，并利用組織學(xué)等評價方法對動物的創(chuàng)傷情況進(jìn)行分析，與傷組相比，β-甲殼素組傷后3天的創(chuàng)面面積減少，表明β-甲殼素納米纖維具有良好的創(chuàng)傷愈合能力，對于出血后期的組織修復(fù)也有一定療效。

Lingmei[12]等開發(fā)了一種甲殼素復(fù)合止血材料(CP)，并且發(fā)現(xiàn)該復(fù)合物可促進(jìn)凝血酶附著甲殼素表面，使凝血酶在兔動脈和肝出血部位出現(xiàn)強烈吸附而發(fā)揮止血作用，這與前面所說的甲殼素促進(jìn)凝血酶的生成來止血是一致的。

甲殼素類生物的降解是一個十分復(fù)雜的過程[13]。甲殼素在海螵蛸中存在，也大多存在于節(jié)肢動物體中，例如蝦、蟹、蜈蚣、蜘蛛和蟬蛻等。在蟬蛻中分離得到的甲殼素則具有抗癌、增強人體免疫力等作用[14],在不同的藥物中分離得到的甲殼素可能具有不同的藥理作用，這也將為科研工作者提供新的研究思路，比較不同藥物(生物)中分離得到的甲殼素是否具有同樣的作用。

3.2.2 殼聚糖的止血作用

海螵蛸中亦存在殼聚糖，殼聚糖是甲殼素中的N-乙?；蟛糠置撊ブ蟮玫降漠a(chǎn)物，殼聚糖是一種天然的堿性多糖[15]，是自然界唯一含有氨基的陽離子多糖[16]，具備良好的組織相容性，還具有誘導(dǎo)紅細(xì)胞聚集、促進(jìn)血小板活化和激活補體的作用。

Okamoto[17]等人通過改良的Ree-White方法研究甲殼素和殼聚糖對犬的血液凝血和血小板聚集的影響，發(fā)現(xiàn)兩者的混懸液與全血接觸后可縮短凝血時間(BCT)，并可促進(jìn)血小板凝血因子的釋放進(jìn)而發(fā)揮止血和凝血作用。

Benesch[18]等通過氨基丙基三乙氧基硅烷(APTES)涂覆的硅上制備殼聚糖膜在抗凝蛋白的補體中溫育，發(fā)現(xiàn)殼聚糖可以激活補體和凝血系統(tǒng)，進(jìn)而發(fā)揮關(guān)鍵性止血作用。

Klokkevold[19]等通過研究殼聚糖對靜脈注射肝素致家兔舌黏膜止血的影響，結(jié)果證實局部應(yīng)用殼聚糖可有效縮短舍內(nèi)切口的止血時間，并推斷殼聚糖促進(jìn)舌黏膜止血可能與紅細(xì)胞和殼聚糖的相互作用有關(guān)。

尹剛[20]等人采用肝中葉切除出血模型，并使用PH值為6.5、7.5下的新型殼聚糖止血粉涂抹于出血部位并及時記錄出血時間，分別為(261±23)s、(224±28)s，且與云南白藥組相對照具有統(tǒng)計學(xué)差異，并發(fā)現(xiàn)在殼聚糖粉與出血面接觸后血液快速聚集，在創(chuàng)面形成一層膠狀膜，推測新型殼聚糖止血粉在與血液接觸后可形成物理屏障，組織血液的外流，進(jìn)而發(fā)揮止血作用。

Young-Jun Chung[21]等人通過觀察殼聚糖凝膠對功能性內(nèi)窺鏡鼻內(nèi)鏡手術(shù)患者止血和創(chuàng)面的影響，發(fā)現(xiàn)含殼聚糖的手術(shù)盾可安全使用，在術(shù)后可立即止血，未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)。Shikani[22]等人應(yīng)用殼聚糖貼膜治療20例具有嚴(yán)重鼻出血的患者，其中19例受試者的止血時間為(3.6±2.2)min,兩天后取出再無出血和其他副作用。由于甲殼素在體外難溶于水和其他有機(jī)溶劑，當(dāng)脫?；蟮玫降臍ぞ厶莿t溶解性能大大改善，可制備多種材料，這也是現(xiàn)代殼聚糖應(yīng)用更為廣泛的原因。

3.2.3 鈣離子的凝血作用

海螵蛸中鈣含量約為27%[4]，鈣離子為血液中關(guān)鍵的凝血因子iv,參與凝血過程。Aniort[23]等人通過檸檬酸透析液加鈣和去鈣實驗，通過測試牛頓和非牛頓血液流變學(xué)，實驗結(jié)果表明不加鈣的檸檬酸鹽可以降低游離鈣的濃度進(jìn)而抑制凝血，可間接說明鈣離子與凝血過程相關(guān)。

Fangping Chen[24]等人通過將對微孔淀粉(MS)進(jìn)行鈣離子的氧化和自組裝處理，制備鈣改性微孔淀粉(CAM)，實驗表明經(jīng)過鈣修飾的微孔淀粉可快速啟動止血反應(yīng)，而且CAM可激活凝血途徑并誘導(dǎo)血小板的粘附，使CAM的止血作用遠(yuǎn)大于MS，可進(jìn)一步說明鈣離子與MS具有協(xié)同止血作用。

鄭紅[25]通過分析海螵蛸懸浮液對不同實驗組小鼠出血和凝血時間的影響，從而驗證其凝血效果，并對其可能的凝血機(jī)制進(jìn)行探討。結(jié)果表明，海螵蛸具有明顯的止血作用，且海螵蛸各個劑量組均可縮短實驗小鼠的出血和凝血時間。在對海螵蛸進(jìn)行脫鈣處理后仍具有止血效果，但未進(jìn)行脫鈣的凝血時間最短。因而推測海螵蛸的止血機(jī)制可能與其豐富的鈣元素相關(guān)，但在單獨應(yīng)用碳酸鈣時，結(jié)果為陰性。實驗結(jié)果進(jìn)一步證實碳酸鈣可能與止血作用相關(guān)，但由于中藥成分的復(fù)雜性，實驗者推測海螵蛸發(fā)揮止血作用可能是與其含有豐富的微量元素有關(guān)，但不可說明完全與豐富的碳酸鈣無關(guān)。

3.2.4 海螵蛸提取物的止血作用

海螵蛸中主要含有碳酸鈣，其余的多糖、微量元素等則主要通過水提、堿提的方法進(jìn)行試驗[25-27]，且多用于體內(nèi)潰瘍出血之癥。唐麗娟[27]等人采用先醇提，再鹽酸脫鈣處理，最終殘渣以水浸提(或用堿水浸提)的方法得到多糖；郭一峰[28]通過提取多糖鹽組分(CBP-s)，通過小鼠實驗證實海螵蛸多糖對乙醇誘導(dǎo)的胃潰瘍具有修復(fù)作用，可通過增加胃黏膜血流量促進(jìn)肉芽組織中新生血管的形成，并消除過氧化物，從而發(fā)揮體內(nèi)止血作用。

綜上，海螵蛸發(fā)揮止血作用可能與其含有的甲殼素、殼聚糖以及碳酸鈣(鈣元素)相關(guān)，其作用機(jī)理多與促進(jìn)凝血因子的形成以及血小板的活化、誘導(dǎo)紅細(xì)胞聚集、直接參與凝血過程、促進(jìn)纖維蛋白的凝結(jié)以及活化補體相關(guān)，這與西醫(yī)理論下的止血機(jī)理是類同的；而海螵蛸提取物則主要用于體內(nèi)各種潰瘍性出血，這與海螵蛸多糖能保護(hù)胃黏膜、促進(jìn)新生血管的形成等作用密切相關(guān)。

4 海螵蛸的安全性評價

王慧[29]等人用海螵蛸給小鼠灌胃給藥后，探究海螵蛸對小鼠的一般行為和自發(fā)活動,觀察貓在麻醉狀態(tài)下，海螵蛸對其血壓、心電圖和呼吸的影響。實驗證實海螵蛸對小鼠一般行為、自發(fā)活動、協(xié)調(diào)運動等生理活動無明顯影響，且對麻醉貓的血壓、心率、等各項生理性指標(biāo)亦無影響。研究發(fā)現(xiàn)，在給藥量為生理劑量下的海螵蛸對動物的神經(jīng)系統(tǒng)、自主活動、一般行為等均沒有顯著影響，證實海螵蛸的臨床用藥安全性。

Chien[30]等人通過研究海螵蛸與常用的五種中草藥合用探究其對大鼠的毒性作用，研究表明該復(fù)合物(CBC)對雄性和雌性大鼠均無亞急性毒性，與對照組相比血液生化指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異，提示CBC對大鼠的肝腎功能、血脂和營養(yǎng)狀態(tài)以及電解質(zhì)平衡均無顯著影響，進(jìn)一步說明海螵蛸使用的安全性。

彭雅[31]等人通過將海螵蛸復(fù)合支架植入新西蘭兔體內(nèi)，對其進(jìn)行生物學(xué)安全性評估，結(jié)果表明，隨著術(shù)后時間的延長，兔血常規(guī)和血液生化指標(biāo)均達(dá)到正常值，對其試驗組織切片進(jìn)行病理學(xué)檢查結(jié)果符合肌肉植入試驗結(jié)果評定標(biāo)準(zhǔn)，證明海螵蛸體內(nèi)使用的安全性。

鄭紅[25]通過小鼠實驗評價海螵蛸與其他止血材料的止血性能，以豚鼠為模型評價海螵蛸對其背部健康皮膚和破損皮膚產(chǎn)生刺激的反應(yīng)。實驗結(jié)果表明，經(jīng)超微粉碎后的海螵蛸組對皮膚無刺激性和致敏性，初步證實其臨床用藥的安全性。

5 海螵蛸止血作用的應(yīng)用

5.1 傳統(tǒng)使用

海螵蛸具有良好的收斂止血作用，可治療由肝腎不足導(dǎo)致的崩漏出血，經(jīng)常與補腎、固沖止血藥同用。石恩俊[32]用《千金方》中烏賊、阿膠、當(dāng)歸、蒲黃、鹿茸五藥，治療腎陽虧虛所致的月經(jīng)淋漓不止；治療吐血、便血，常與白及等分為末服用，如烏及散；治療外傷性出血時，可研末外用?！侗静菥V目》記載，海螵蛸“研末外敷，治療小兒疳瘡、痘疹臭爛、水火燙傷及外傷出血。燒存性，和雞蛋黃一同研成末外涂，治療小兒鵝口瘡；同蒲黃末外涂治療舌體腫脹及出血；同槐花末一同吹入鼻，止鼻血”[33]。

對于其體內(nèi)外止血的用法還有許多，例如將烏賊骨研成粉末，敷在患處可治跌破出血。由此可見，海螵蛸(烏賊骨)在古代便廣泛用于體內(nèi)外出血，并有顯著成效。石恩俊[32]認(rèn)為胃、十二指腸潰瘍所致的吐血、便血，雖然有可能是久病身體虧虛導(dǎo)致，但其實質(zhì)是胃腸血管的破裂，故用海螵蛸仍可發(fā)揮作用?？梢姾ｓ俚闹寡饔迷诠糯阋延袘?yīng)用，針對于此，對海螵蛸止血的現(xiàn)代應(yīng)用還需進(jìn)一步挖掘與探討。

5.2 現(xiàn)代應(yīng)用

江光定[34]用生大黃海螵蛸粉治療輕中度上消化道出血，其推測海螵蛸中含有碳酸鈣，進(jìn)入胃內(nèi)可以減少胃酸量，而海螵蛸所含有的鈣離子也可能參與凝血過程。而在應(yīng)用該類收斂止血藥時，由于其同時具有收斂和止血雙重特性，會出現(xiàn)便秘等現(xiàn)象，故而可配伍大黃等瀉下藥以緩解收斂之性。

景冬櫻[35]等人在研究軍用快速止血急救裝備時，發(fā)現(xiàn)復(fù)凝粉(海螵蛸+凹凸棒石粉)具有快速的止血效果。將海螵蛸單獨作為一組，分別制備動脈出血和嚴(yán)重創(chuàng)傷出血模型，實驗結(jié)果證實海螵蛸粉與生理鹽水組比較，開始凝血時間和持續(xù)凝血時間均較短，且在規(guī)定時間內(nèi)的止血次數(shù)大于空白對照組，以此證明海螵蛸具有明確的止血功效，這也為軍用止血制劑的進(jìn)一步研發(fā)提供參考方向。

張杰[36]等用黃芪和烏賊骨各30g，再配伍其他止血藥治療由腎氣虛導(dǎo)致的術(shù)后出血不止，在服藥4劑后出血即止，可見海螵蛸可協(xié)同他藥發(fā)揮止血作用。

沈素梅[37]等用烏賊骨與白芨粉相配，治療尿毒癥引起的胃出血并取得良好的療效。烏賊骨和海螵蛸聯(lián)合應(yīng)用，具有較高的粘稠性，可在胃內(nèi)能形成膠膜狀物質(zhì)，使胃黏膜免受胃酸腐蝕，并且海螵蛸含有的碳酸鈣可中和胃酸，使胃液的滲出減少，從而治療由尿毒癥引起的上消化道出血。

6 發(fā)展前景與展望

孟慶步[38]等人通過向糖尿病足患者應(yīng)用海螵蛸及煅石膏，可發(fā)揮止血、斂瘡及生肌的效果，再聯(lián)合應(yīng)用康惠兒敷料，可加速患者創(chuàng)面的愈合，具有重要的應(yīng)用價值。Mansouri K[39]等人研究發(fā)現(xiàn)海螵蛸衍生羥基磷灰石可作為一種適當(dāng)?shù)纳锊牧?可以刺激骨形成和促進(jìn)骨再生，對于大面積創(chuàng)傷或骨折患者具有較好的療效。

海螵蛸作為一味常用的海洋動物藥，其來源廣泛、產(chǎn)量豐富、取材簡便且價格低廉，但大多作為廢材被人遺棄。海螵蛸大多用于臨床潰瘍和各種出血病癥[40]，如皮膚潰瘍[41]，崩漏[42],Ⅲ期壓瘡[43]等，其復(fù)方制劑主要應(yīng)用于消化道疾病，且多與其他藥物聯(lián)合應(yīng)用，而針對其止血功效的產(chǎn)品開發(fā)甚少，故在這里對海螵蛸止血作用的近年研究作以歸納，有望利用海螵蛸研制出新的止血產(chǎn)品，如止血散劑、外用貼劑、軍用止血裝備等。本課題組在研究海螵蛸外用止血時，發(fā)現(xiàn)其止血效果顯著，將其廣泛應(yīng)用于臨床，既可擴(kuò)大其使用范圍，又可緩解他種止血藥的緊張資源，具有良好的發(fā)展前景。

7 結(jié)語

近十多年，隨著人們對海螵蛸研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)海螵蛸不僅在治療消化性潰瘍方面作用顯著，其在生物材料領(lǐng)域的發(fā)展也尤為突出。海螵蛸止血作用及其安全性評價均十分確切，但目前多停留于使用階段，并未進(jìn)行相關(guān)機(jī)理研究。

現(xiàn)代研究已證實其含有的甲殼素、殼聚糖具有明顯止血效果，若能將海螵蛸全粉與甲殼素、殼聚糖、碳酸鈣的止血作用單獨作比較，即可得知海螵蛸中單體成分與全組分止血作用的強弱。由于中藥成分的復(fù)雜性，如果將中藥看作一個“復(fù)方”，則海螵蛸的止血作用不僅與其所含的單體成分相關(guān)，與各成分間的相互作用也應(yīng)有聯(lián)系。未來,仍需要大量的研究去確定海螵蛸的止血機(jī)理，將傳統(tǒng)中醫(yī)藥的應(yīng)用更好的體現(xiàn)于臨床，從傳統(tǒng)中探索“老藥新用途”，從大劑量藥物的服用到“有效物質(zhì)”的應(yīng)用，更好地為科研工作者提供新型設(shè)計思路，有望研發(fā)出多類型的止血材料，為臨床出血病癥的治療提供新的治療手段與方法。