• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    微生物甲殼素酶的研究進(jìn)展及應(yīng)用現(xiàn)狀

    2022-01-26 08:07:50包雍宏王秀文時(shí)文悅宋元達(dá)
    中國果菜 2022年1期
    關(guān)鍵詞:甲殼素芽孢結(jié)構(gòu)域

    包雍宏,吳 琛,王秀文,時(shí)文悅,宋元達(dá)

    (山東理工大學(xué),山東淄博 255000)

    甲殼素由N-乙酰氨基葡萄糖殘基經(jīng)過β-1,4 糖苷鍵聚合而成的線性多糖[1]。全球每年產(chǎn)生甲殼素約1 000億t,產(chǎn)量僅次于纖維素,是自然界中含量第二豐富的天然多糖,被現(xiàn)代科學(xué)譽(yù)為“第六生命要素”[2]。甲殼素主要存在于各種無脊椎動(dòng)物的細(xì)胞外基質(zhì)中,包括海綿、軟體動(dòng)物、線蟲、節(jié)肢動(dòng)物和真菌等[3],它是保護(hù)和支持細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成部分,包裹覆蓋整個(gè)組織或生物體。甲殼素發(fā)現(xiàn)較早,可追溯到200 年前。法國學(xué)者Braconot[4]在1811 年從Agaricusvolvaceus、Hydnumrepandum等真菌中發(fā)現(xiàn)了同時(shí)含有氮和乙?;奈镔|(zhì)。Odier 在1823 年從甲殼類動(dòng)物的外殼中分離出具有相似性質(zhì)的物質(zhì),將其命名為“甲殼素”。甲殼素為白色或淡黃色片狀固體,其分子間的氫鍵作用很強(qiáng),具有很好的化學(xué)穩(wěn)定性。甲殼素難溶于普通試劑,這嚴(yán)重限制了甲殼素的應(yīng)用,目前發(fā)現(xiàn)的較好的甲殼素溶劑有濃硫酸、濃鹽酸、濃磷酸、氫氟酸、濃NaOH、KOH 溶液和一些特殊的溶劑(如氯化鋰/N,N-二甲基乙酰胺、六氟異丙醇/六氟丙醇、三氟醋酸等)。

    自然界中的甲殼素可被微生物降解成多糖,被其他生物利用,維持生態(tài)系統(tǒng)的碳氮循環(huán)。因此,甲殼素的降解代謝對(duì)全球的碳和氮循環(huán)具有重要意義,而維持這種循環(huán)離不開甲殼素降解菌和甲殼素酶。甲殼素酶(chitinase,EC 3.2.1.14)是一種可以專一性水解甲殼素為低分子糖的酶,主要作用于甲殼素中的β-1,4 糖苷鍵。1905 年,BENECKE 等[5]研究芽孢扦菌(Bacilluschitinovrous)分解甲殼素酶的過程中,首次發(fā)現(xiàn)并分離出一類糖苷水解酶,可催化水解甲殼素為N-乙酰氨基葡萄糖聚體或單體。隨著研究的深入,人們逐漸發(fā)現(xiàn)甲殼素酶廣泛分布于自然界中的真菌、細(xì)菌以及放線菌中,同時(shí)在昆蟲、甲殼類動(dòng)物、高等植物甚至病毒中都有發(fā)現(xiàn)。本文介紹了微生物甲殼素酶的分類和分布情況,總結(jié)了近年來微生物甲殼素酶的相關(guān)研究及其在不同行業(yè)的應(yīng)用前景。

    1 甲殼素的降解系統(tǒng)

    1.1 自然界中甲殼素生物降解的作用

    甲殼素的生物降解系統(tǒng)與許多生物的生長和生存相關(guān)。對(duì)于不含甲殼素的細(xì)菌,甲殼素的生物降解系統(tǒng)可以為其提供碳源和氮源[6];對(duì)于以甲殼素為結(jié)構(gòu)支架的生物,甲殼素降解系統(tǒng)能夠降解甲殼素為其結(jié)構(gòu)組分的代謝提供原材料;對(duì)于一些含甲殼素的生物體,該系統(tǒng)還能夠幫助其抵抗很多病蟲的侵害[7]。

    1.2 細(xì)菌降解甲殼素的主要步驟

    自然界中的甲殼素主要是由細(xì)菌降解的。細(xì)菌降解甲殼素主要包括三個(gè)步驟:分解結(jié)晶的甲殼素,將甲殼素鏈水解成二聚體,最后將二聚體水解成單體[8]。在細(xì)胞外環(huán)境中,前兩個(gè)步驟通常由裂解性多糖單氧酶(LPMO)、內(nèi)作用非加工性甲殼素酶和加工性甲殼素酶三種類型的酶催化。LPMO 在CAZy(碳水化合物活性酶)數(shù)據(jù)庫中被歸類為輔助活性(AA)10 和11 家族,可以通過氧化反應(yīng)切割結(jié)晶甲殼素表面的糖苷鍵,并引入氧化末端來促進(jìn)其他分泌性甲殼素酶進(jìn)一步降解甲殼素[9]。甲殼素酶通常會(huì)受到N-乙酰氨基葡萄糖胺(GlcNAc)的誘導(dǎo)和調(diào)節(jié),這是甲殼素的水解產(chǎn)物,或甲殼素低聚物(GlcNAc)n,其中n=2~6。Miyashita 等[10]在研究中發(fā)現(xiàn),GlcNAc 可以作為鏈霉菌(Streptomyces)和擬桿菌(Paenibacillus)甲殼素酶表達(dá)的抑制物。圖1 顯示了甲殼素降解為低聚糖、殼聚糖和N-乙酰葡萄糖胺;而甲殼素多糖在細(xì)胞外被水解成單體或低聚合物后,產(chǎn)物會(huì)通過有效的攝取途徑進(jìn)入細(xì)菌的周質(zhì)或細(xì)胞質(zhì)中,其中甲殼素低聚物會(huì)被β-N-乙酰己糖胺酶繼續(xù)水解為GlcNAc。同時(shí)在一些菌株中,磷酸烯醇式丙酮酸依賴的磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)(PTS)和ATP 結(jié)合盒(ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)體分別負(fù)責(zé)GlcNAc 單體和寡聚物的攝取[11-12]。

    圖1 甲殼素降解為低聚糖(COG)、殼聚糖和N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)Fig.1 Degradation of chitin to COG,chitosan and GlcNAc

    研究發(fā)現(xiàn),不同甲殼素降解菌所產(chǎn)生的甲殼素酶的核苷酸序列具有高度保守性,例如粘質(zhì)沙雷氏菌、芽孢桿菌、霍亂弧菌等產(chǎn)生的甲殼素酶。這種現(xiàn)象被稱作遺傳保護(hù),可以解釋為單細(xì)胞中的多個(gè)基因在一個(gè)細(xì)胞中重復(fù),同時(shí),也有一些細(xì)菌產(chǎn)生的甲殼素酶的基因簇具有獨(dú)特的氨基酸序列。

    2 甲殼素酶的分類與分布

    2.1 甲殼素酶的分類

    甲殼素酶(chitinase,EC 3.2.1.14)是一種可以將甲殼素專一水解為低分子糖的酶(圖2),主要作用于甲殼素中的β-1,4 糖苷鍵。在CAZy 數(shù)據(jù)庫中,甲殼素酶歸屬于糖苷水解酶18 家族(GH18)和19 家族(GH19)以及20家族(GH20),它們?cè)诎被嵝蛄小⒋呋Y(jié)構(gòu)域以及蛋白質(zhì)的3D 結(jié)構(gòu)等方面具有較大差異。GH18 家族的甲殼素酶分布最為廣泛,在病毒、細(xì)菌、植物和動(dòng)物中都有發(fā)現(xiàn)。而GH19 家族的甲殼素酶主要存在于植物中,但在細(xì)菌、病毒、線蟲中也有發(fā)現(xiàn)。根據(jù)序列的相似性,甲殼素酶可以被分為5 類(Ⅰ~Ⅴ)。第Ⅰ類甲殼素酶的催化結(jié)構(gòu)域最為保守,在N 端有一個(gè)富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域。第Ⅱ類與第Ⅰ類的催化結(jié)構(gòu)高度相似,但在N 端缺少一個(gè)富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)[13]。第Ⅲ類與前兩類沒有任何相似之處,第Ⅳ類甲殼素酶與第Ⅰ類相似,但由于缺失了四個(gè)催化結(jié)構(gòu)域,所以比第Ⅰ類要小很多。第Ⅴ類與其他任何一類甲殼素酶都沒有相似性。其中Ⅲ類和Ⅴ類甲殼素酶屬于GH18 家族,Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ類屬于GH19 家族。GH18 家族甲殼素酶可以將甲殼素水解成較短的(GlcNAc)2和(GlcNAc)3片段,再經(jīng)由β-N-乙酰-D-己糖胺酶進(jìn)一步水解成單糖(GlcNAc)。GH18 家族還可進(jìn)一步分為甲殼素酶以及非酶活性的甲殼素酶樣凝集素和甲殼素酶樣蛋白質(zhì)。

    圖2 甲殼素酶水解甲殼素類型Fig.2 Types of chitinase hydrolysis of chitin

    按照產(chǎn)物和底物作用部位的不同,甲殼素酶又可被分為內(nèi)切甲殼素酶和外切甲殼素酶。迄今為止,內(nèi)切甲殼素酶主要來源于GH18 和GH19 兩個(gè)糖苷水解酶家族,而外切甲殼素酶主要來源于GH18 和GH20[9]。內(nèi)切甲殼素酶(EC 3.2.1.14)內(nèi)部任意位置開始水解甲殼素鏈,隨機(jī)生成GlcNAc 的低寡單位,如殼三糖、殼二糖和二乙酰殼二糖。外切甲殼素酶(EC 3.2.1.52)從甲殼素鏈的非還原端開始裂解甲殼素。外切甲殼素酶(EC 3.2.1.52)又被進(jìn)一步分為兩類,甲殼糖苷酶和β-N-乙酰-D-己糖胺酶。甲殼糖苷酶從甲殼素鏈的非還原端催化水解甲殼素并釋放出二乙?;鶜ざ?,β-N-乙酰-D-己糖胺酶則會(huì)將由內(nèi)切甲殼素酶水解產(chǎn)生的低聚GlcNAc 切割成GlcNAc 單體[14]。

    2.2 甲殼素酶的分布

    甲殼素酶廣泛存在于各種病毒、昆蟲、植物和脊椎動(dòng)物中,并具有各種生理功能,如形態(tài)發(fā)生、致病、寄生和防御等[15]。在昆蟲和甲殼類動(dòng)物中,甲殼素酶的主要作用是在發(fā)育過程中分解舊角質(zhì)層以重塑外骨骼,從而保持和支撐生物的形體大小和形狀。對(duì)于一些以甲殼素為營養(yǎng)來源(如細(xì)菌)或以含有甲殼素的物質(zhì)為食物的生物(如脊椎動(dòng)物),甲殼素酶的主要功能是降解甲殼素提供碳源和能量。除此之外,甲殼素酶還參與拮抗作用。對(duì)于真菌而言,甲殼素酶不僅參與提供營養(yǎng),還在與真菌寄生相關(guān)的自溶和形態(tài)發(fā)生功能中起重要作用。由于甲殼素酶可以降解病原體的保護(hù)膜,所以對(duì)于植物而言,甲殼素酶可以保護(hù)其免受真菌感染以及病蟲危害,增強(qiáng)植物的抗性[16]。

    在UniProt(蛋白序列)數(shù)據(jù)庫中,甲殼素酶具有3 967 個(gè)細(xì)胞生物蛋白質(zhì)序列、5 個(gè)病毒來源的蛋白質(zhì)序列和406 個(gè)亞基因組(https://www.uniprot.org/)。表1 對(duì)于目前已報(bào)道過的具有某些特征的微生物來源的甲殼素酶進(jìn)行了總結(jié)。由表知,自然界中,細(xì)菌是甲殼素的主要降解者。大多數(shù)細(xì)菌甲殼素酶屬于GH18 家族,主要來源于粘質(zhì)沙雷氏菌屬(Serratia marcescens)、鏈霉菌屬(Streptomyces)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)等。真菌來源的甲殼素酶同樣屬于GH18家族,子囊菌門的真菌是其主要來源。

    表1 不同微生物來源的甲殼素酶Table 1 Chitinase from different microbial sources

    3 甲殼素酶的生產(chǎn)優(yōu)化

    3.1 優(yōu)化發(fā)酵條件提高甲殼素酶產(chǎn)量

    大多數(shù)微生物甲殼素酶是誘導(dǎo)酶,只在甲殼素或甲殼素衍生物等底物誘導(dǎo)下才能合成甲殼素酶[40]。此外,微生物甲殼素酶還受一些營養(yǎng)和環(huán)境因素的影響,其中營養(yǎng)因素包括碳、氮源以及一些有機(jī)鹽和無機(jī)鹽,環(huán)境因素包括溫度、pH、攪拌速度和發(fā)酵時(shí)間等。研究表明,微生物法制備甲殼素酶的最適溫度一般在28~30 ℃,最適初始pH 為5.0~9.0,底物濃度為1.5%~2.0%。國內(nèi)外研究證實(shí),不同菌株在發(fā)酵條件及抑制因素等方面存在較大的差異。

    有研究人員使用“單因素法”對(duì)微生物培養(yǎng)基的成分和影響甲殼素酶生產(chǎn)的環(huán)境因素進(jìn)行了優(yōu)化,以提高其活性和分泌量。如Gomaa 等[41]在研究中使用膠體甲殼素和酪蛋白作為碳源和氮源,在30 ℃下培養(yǎng)了5d,使蘇云金桿菌(B.thuringiensis)和地衣芽孢桿菌(B.licheniformis)的甲殼素酶產(chǎn)量與活性大大提高。Alhasawi等[42]在將甲殼素粉末作為補(bǔ)料的培養(yǎng)基中培養(yǎng)熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens),其中6 d 培養(yǎng)時(shí)間獲得的甲殼素酶產(chǎn)量最高。Sukalkar 等[14]通過研究發(fā)現(xiàn),大孢子鏈霉菌M1(Streptomyces macrosporeus)生產(chǎn)甲殼素酶的最佳培養(yǎng)基組成是膠體甲殼素、KNO3、CaSO4,最佳培養(yǎng)條件為pH 6,40 ℃、72 h,此條件下甲殼素酶的產(chǎn)量與對(duì)照組相比提高了2.62 倍。

    3.2 利用生物工程技術(shù)提高甲殼素酶產(chǎn)量

    野生型菌株甲殼素酶產(chǎn)量低、活性不高,這極大地限制了甲殼素資源的高效利用。因此,現(xiàn)階段關(guān)于甲殼素酶的研究重點(diǎn)在獲得更高的產(chǎn)量以及提高其催化活性上。除了利用分離培養(yǎng)和環(huán)境宏基因組學(xué)方法篩選新型甲殼素酶降解菌和甲殼素酶,并對(duì)其發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化外,結(jié)合外源表達(dá)和蛋白質(zhì)工程的實(shí)驗(yàn)方法也對(duì)闡明特定結(jié)構(gòu)或氨基酸殘基的功能、提高酶活性及產(chǎn)量提供了重要信息,并取得了一定進(jìn)展。

    3.2.1 外源表達(dá)

    外源表達(dá)是提高靶蛋白產(chǎn)量的有效策略。其中大腸桿菌(Escherichia coli)[43]、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)[44]及畢赤酵母(Pichia pastoris)[45]是甲殼素酶應(yīng)用最為廣泛的表達(dá)系統(tǒng),因?yàn)樗鼈兙哂猩L速度快、發(fā)酵周期短、易于遺傳操作、重組蛋白分泌能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。Mengyan 等[46]采用一系列分子生物學(xué)方法提高了甲殼素酶在枯草芽孢桿菌DAU101 中的表達(dá),包括加入信號(hào)肽使甲殼素酶成功分泌到細(xì)胞外,進(jìn)一步優(yōu)化核糖體結(jié)合位點(diǎn)和間隔序列,以及結(jié)合分子對(duì)接技術(shù)與定點(diǎn)突變技術(shù),將甲殼素酶的表達(dá)水平和比活力分別提高至51.67、249.62 U/mg。

    3.2.2 蛋白質(zhì)工程

    蛋白質(zhì)工程主要包括定向進(jìn)化、定點(diǎn)突變和結(jié)構(gòu)域融合,是在已知甲殼素酶的基礎(chǔ)上進(jìn)行改造和優(yōu)化的重要途徑。其中定向進(jìn)化是通過對(duì)易出錯(cuò)的PCR 進(jìn)行隨機(jī)突變,建立突變文庫,進(jìn)行高通量篩選,高效挑選出具有更高活性的突變體。Songsiriritthigul 等[47]利用該方法將地衣芽孢桿菌甲殼素酶的催化效率提高了2.7 倍。Kidibule等[45]通過定向進(jìn)化的方法獲得了甲殼素酶突變體并利用枯草芽孢桿菌作為外源表達(dá)系統(tǒng),獲得了高產(chǎn)胞外甲殼素酶工程菌株,其酶比活力最高提升了16.89 倍,達(dá)到(1 004.83±0.87)U/mg。

    定點(diǎn)突變是一種提高甲殼素酶性狀的重要手段。Ni等[48]結(jié)合同源模擬、分子對(duì)接和定點(diǎn)突變,構(gòu)建了蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)甲殼素酶突變體,使突變體酶活性提高了60%以上,并表現(xiàn)出抗蟲和抗真菌活性。Emruzi 等[49]通過G191V 定點(diǎn)突變顯著提高了粘質(zhì)沙雷氏菌B4A 甲殼素酶的穩(wěn)定性,使其在50 ℃和60 ℃條件下,分別提高了約5、15 倍。

    結(jié)構(gòu)域融合也是一種提高甲殼素酶活性的手段。結(jié)構(gòu)域融合通過增強(qiáng)甲殼素酶和底物的結(jié)合,從而提高其活性。Takashim 等[50]將GH18 催化域和N-末端LysM結(jié)構(gòu)域進(jìn)行融合,形成融合蛋白。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,融合蛋白的甲殼素酶水解效率明顯高于單催化結(jié)構(gòu)蛋白。Neeraja等[51]將甲殼素酶催化域和CBM融合,提高了甲殼素酶對(duì)底物的親和性、酶活性和構(gòu)象穩(wěn)定性。

    4 甲殼素酶的應(yīng)用

    4.1 農(nóng)業(yè)

    在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)中,造成作物產(chǎn)量損失的重要因素之一是由細(xì)菌、真菌、昆蟲引起的疾病,其中真菌是植物病變的主要原因,占作物病害的70%以上。大多數(shù)植物病原菌的細(xì)胞壁主要成分是甲殼素,甲殼素酶可以通過控制真菌的孢子萌發(fā)以及菌絲體的生長來發(fā)揮其防御作用,因此被認(rèn)為是控制真菌病原菌最有效的制劑之一,被廣泛用于保護(hù)農(nóng)作物免受真菌感染侵害。如由蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)產(chǎn)生的甲殼素酶對(duì)引起馬鈴薯莖塊干腐的玫瑰鐮刀菌(Fusarium roseum)有明顯的抑制作用[52]。El-Shora 等[53]發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)MN548732.1 產(chǎn)生的甲殼素酶對(duì)尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)、茄病鐮刀菌(Fusarium solani)、茄絲核菌(Rhizoctonia solani)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、米根霉(Rhizopus oryzae)和里氏木霉(Trichoderma reesei)有明顯的抑制作用。

    農(nóng)業(yè)害蟲也是造成作物損失的重要因素,目前,化學(xué)農(nóng)藥殺蟲劑被廣泛用于控制農(nóng)業(yè)害蟲,然而化學(xué)農(nóng)藥毒性大,大量使用會(huì)污染環(huán)境,損害人類和其他生物的健康。生物殺蟲劑具有低毒性、生物降解性高、環(huán)境友好型等優(yōu)點(diǎn),其中微生物甲殼素酶是研究熱點(diǎn)。研究表明,甲殼素酶可以水解昆蟲幼蟲中腸圍食膜中的甲殼素成分,從而加速殺蟲劑侵染中腸上皮細(xì)胞,提高幼蟲的死亡率[54]。Suganthi 等[55]在其研究中發(fā)現(xiàn),由熒光假單胞菌(P.fluorescens)MP-13 產(chǎn)生的甲殼素酶對(duì)茶蚊(TMB)的致死率高達(dá)100%。

    4.2 醫(yī)藥

    甲殼素酶可以作為制劑應(yīng)用于醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域,其可以與某些物質(zhì)或微生物整合并具有協(xié)同作用,表現(xiàn)出強(qiáng)大的抑菌效果。目前,許多眼科制劑就是由甲殼素酶與微生物抑制劑合成。Halder 等[56]在研究中指出,抗真菌物質(zhì)與甲殼素酶整合可以有效治療多種真菌感染。Allonsius等[57]通過研究發(fā)現(xiàn),甲殼素酶與乳酸菌,特別是干酪乳酸菌(Lactobacillus casei)具有明顯的協(xié)同作用,可以有效抑制白色念珠菌(Candida albicans)的生長。此外,甲殼素酶還具有抗癌作用。Xing 等[58]在研究中發(fā)現(xiàn),來自灰鏈霉菌和粘質(zhì)沙雷氏菌的甲殼素酶可以破壞小鼠的MCF-7 和B11-2 癌細(xì)胞。Abu-Tahon 等[59]發(fā)現(xiàn),綠色木霉(Trichoderma viride)AUMC13021產(chǎn)生的甲殼素酶對(duì)MCF7和HCT-116 細(xì)胞具有細(xì)胞毒性,IC50值分別為20、40 μg/mL。

    4.3 食品

    甲殼素酶因其良好的抑制真菌作用,可以用于食品保鮮,具有可行性高、節(jié)約成本、節(jié)約時(shí)間等優(yōu)點(diǎn)。甲殼素酶能破壞真菌細(xì)胞壁,抑制孢子萌發(fā),從而延緩食物變質(zhì)。Le 等[60]發(fā)現(xiàn)鹽生弧菌(Salinivibriosp.)產(chǎn)生的甲殼素酶具有較高的抗真菌能力,且安全無害,可用于食品保鮮。Deng等[61]證實(shí)了來自哈茨木霉(Trichodermaharzianum)的甲殼素酶能夠有效抑制灰曲霉(Botrytis cinerea)的生長,且對(duì)人體無害,可用于食品保鮮。從這些研究中可以得出,甲殼素酶能夠作為一種有效且有前途的食品貯藏保鮮物質(zhì)。

    甲殼素酶和甲殼素材料還被廣泛用于生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白。單細(xì)胞蛋白(SCP)是一種高價(jià)值的蛋白質(zhì)來源,可代替魚肉和豆粕成為新的蛋白質(zhì)來源。Tom 等[62]發(fā)現(xiàn)從黏質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)中分離出來的甲殼素酶可以水解甲殼素作為營養(yǎng)物質(zhì)用于畢赤酵母(Pichia kydriavzevii)發(fā)酵產(chǎn)單細(xì)胞蛋白(45%蛋白質(zhì)和8%~11%核酸)。Vyas 等[63]用產(chǎn)自疣狀黏菌(Myrotheciumverrucaria)的甲殼素酶處理甲殼素,并將甲殼素水解物用作釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)NCIM3052 生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白(SCP)的底物。

    5 總結(jié)與展望

    甲殼素酶是一類應(yīng)用前景廣闊的生物酶,能有效用于生物防治、醫(yī)藥化工及食品加工等領(lǐng)域?,F(xiàn)階段,自然分離的甲殼素酶存在活性低、熱穩(wěn)定性差,且甲殼素酶的純化過程繁瑣、產(chǎn)量低,缺乏大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)的條件。但隨著在菌種選育及產(chǎn)酶條件優(yōu)化等方面的進(jìn)一步研究,同時(shí)隨著熱穩(wěn)定微生物甲殼素酶分子結(jié)構(gòu)、催化機(jī)理和其基因水平調(diào)控機(jī)理研究的進(jìn)一步深入,微生物甲殼素酶終將實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化的大規(guī)模生產(chǎn),應(yīng)用領(lǐng)域也將進(jìn)一步擴(kuò)大,并具有越來越廣闊的市場發(fā)展前景。

    猜你喜歡
    甲殼素芽孢結(jié)構(gòu)域
    甲殼素在食品領(lǐng)域的最新研究進(jìn)展
    解淀粉芽孢桿菌Lx-11
    解淀粉芽孢桿菌的作用及其產(chǎn)品開發(fā)
    側(cè)孢短芽孢桿菌A60
    蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域劃分方法及在線服務(wù)綜述
    甲殼素酶的研究進(jìn)展
    30L發(fā)酵罐培養(yǎng)枯草芽孢桿菌產(chǎn)高密度芽孢的研究
    重組綠豆BBI(6-33)結(jié)構(gòu)域的抗腫瘤作用分析
    組蛋白甲基化酶Set2片段調(diào)控SET結(jié)構(gòu)域催化活性的探討
    甲殼素對(duì)蔬菜抗逆性的影響
    中國果菜(2015年2期)2015-03-11 20:01:05
    久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产高清三级在线| 日韩三级伦理在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 久久国产精品大桥未久av | 五月天丁香电影| 免费观看无遮挡的男女| 乱系列少妇在线播放| 热99国产精品久久久久久7| 精品午夜福利在线看| 国产男人的电影天堂91| 高清av免费在线| 国国产精品蜜臀av免费| 综合色丁香网| 国产高清有码在线观看视频| 青青草视频在线视频观看| 2018国产大陆天天弄谢| 丰满人妻一区二区三区视频av| 99久久中文字幕三级久久日本| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲色图综合在线观看| 好男人视频免费观看在线| 亚洲四区av| 亚洲人与动物交配视频| 99热这里只有是精品在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 丝袜喷水一区| a级一级毛片免费在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产精品.久久久| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 又黄又爽又刺激的免费视频.| 青春草视频在线免费观看| 日韩欧美一区视频在线观看 | 插逼视频在线观看| 日本av免费视频播放| 国国产精品蜜臀av免费| 一区二区三区四区激情视频| 精品国产国语对白av| 乱系列少妇在线播放| 18禁动态无遮挡网站| tube8黄色片| 97超碰精品成人国产| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 大香蕉久久网| 国产永久视频网站| 国产精品无大码| 国产一区二区在线观看av| 国产男人的电影天堂91| 亚洲色图综合在线观看| av不卡在线播放| 成人免费观看视频高清| 亚洲色图综合在线观看| 国产视频首页在线观看| 18禁在线播放成人免费| 大片免费播放器 马上看| 老司机亚洲免费影院| 亚洲精品第二区| 香蕉精品网在线| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 午夜免费男女啪啪视频观看| 不卡视频在线观看欧美| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 纵有疾风起免费观看全集完整版| av女优亚洲男人天堂| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲色图综合在线观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 精品久久久久久久久av| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产亚洲5aaaaa淫片| 一区二区三区精品91| 少妇被粗大猛烈的视频| 七月丁香在线播放| 精品久久久久久久久av| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲色图综合在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 成人综合一区亚洲| 熟女电影av网| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 人人澡人人妻人| 简卡轻食公司| 女性被躁到高潮视频| 免费看日本二区| 国产一区有黄有色的免费视频| 在线播放无遮挡| 久久久国产精品麻豆| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久久久久久久大av| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 丰满少妇做爰视频| 亚洲精品第二区| 在线观看人妻少妇| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲av二区三区四区| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 只有这里有精品99| 久久久久久伊人网av| 欧美精品国产亚洲| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 最新的欧美精品一区二区| av免费观看日本| 中国三级夫妇交换| 亚洲内射少妇av| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产男人的电影天堂91| 中国国产av一级| 国模一区二区三区四区视频| 下体分泌物呈黄色| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲第一av免费看| 久久久久久久久久成人| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 精品久久久久久久久亚洲| 成人国产av品久久久| 日本与韩国留学比较| 国产精品欧美亚洲77777| 国产日韩欧美视频二区| 内射极品少妇av片p| 一区在线观看完整版| 久久青草综合色| 另类精品久久| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 亚洲精品视频女| 亚洲精品国产成人久久av| 最近的中文字幕免费完整| 国产精品人妻久久久久久| freevideosex欧美| 午夜免费鲁丝| 青春草国产在线视频| 久热久热在线精品观看| av国产久精品久网站免费入址| 人人澡人人妻人| 亚洲av成人精品一二三区| 欧美日韩在线观看h| 免费观看a级毛片全部| 亚洲综合色惰| 激情五月婷婷亚洲| 毛片一级片免费看久久久久| 精品一区二区三区视频在线| 香蕉精品网在线| 国产免费又黄又爽又色| 尾随美女入室| 九九在线视频观看精品| 亚洲av中文av极速乱| 日日撸夜夜添| 校园人妻丝袜中文字幕| 最近中文字幕高清免费大全6| 男人爽女人下面视频在线观看| 又爽又黄a免费视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 免费人妻精品一区二区三区视频| 午夜免费鲁丝| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲av二区三区四区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 简卡轻食公司| 99re6热这里在线精品视频| av免费观看日本| 日韩欧美精品免费久久| 日韩视频在线欧美| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 18禁在线播放成人免费| 日日啪夜夜爽| 午夜福利网站1000一区二区三区| 一级二级三级毛片免费看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 五月开心婷婷网| 精品久久久久久电影网| 国产精品熟女久久久久浪| 99久久精品一区二区三区| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产在视频线精品| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲美女黄色视频免费看| 嫩草影院新地址| 乱码一卡2卡4卡精品| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 一本久久精品| 精品亚洲成a人片在线观看| 制服丝袜香蕉在线| 国产精品三级大全| 国产精品伦人一区二区| 女人久久www免费人成看片| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 岛国毛片在线播放| 国产精品人妻久久久影院| 成年人午夜在线观看视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 日韩亚洲欧美综合| 中国美白少妇内射xxxbb| 少妇人妻 视频| 最近手机中文字幕大全| 欧美变态另类bdsm刘玥| 美女主播在线视频| videossex国产| 亚洲av成人精品一区久久| av天堂中文字幕网| 九色成人免费人妻av| a级毛色黄片| 黄色日韩在线| 大片电影免费在线观看免费| 简卡轻食公司| 国产精品.久久久| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 青春草国产在线视频| 大香蕉久久网| 国产成人精品婷婷| 超碰97精品在线观看| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 桃花免费在线播放| 欧美精品亚洲一区二区| 岛国毛片在线播放| 日韩三级伦理在线观看| 超碰97精品在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 精品久久国产蜜桃| 久久久久久人妻| 中文字幕人妻丝袜制服| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 精品人妻一区二区三区麻豆| 婷婷色麻豆天堂久久| 精品少妇内射三级| 午夜视频国产福利| 极品人妻少妇av视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 久久久国产一区二区| 成人二区视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久青草综合色| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 纵有疾风起免费观看全集完整版| 免费观看无遮挡的男女| 99久久精品一区二区三区| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 亚洲精品456在线播放app| 精品国产露脸久久av麻豆| av天堂久久9| 欧美成人午夜免费资源| 日韩av在线免费看完整版不卡| 91精品国产国语对白视频| 久久婷婷青草| 国产一区二区在线观看av| 99热6这里只有精品| 三级经典国产精品| 成人特级av手机在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 一级,二级,三级黄色视频| 国产精品久久久久久av不卡| 午夜免费观看性视频| 看非洲黑人一级黄片| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 中文在线观看免费www的网站| 久久久午夜欧美精品| 一级毛片我不卡| 人妻一区二区av| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲综合精品二区| 久久鲁丝午夜福利片| 深夜a级毛片| 日韩亚洲欧美综合| 黑丝袜美女国产一区| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 另类亚洲欧美激情| 女人精品久久久久毛片| 一级av片app| 最近中文字幕2019免费版| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 日本91视频免费播放| 欧美日韩视频精品一区| 乱系列少妇在线播放| 久久久久久久久久人人人人人人| 黄色怎么调成土黄色| 美女中出高潮动态图| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 97精品久久久久久久久久精品| 免费av不卡在线播放| 日韩强制内射视频| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲美女视频黄频| 99热这里只有是精品在线观看| 永久网站在线| 男男h啪啪无遮挡| 久久久欧美国产精品| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 久热久热在线精品观看| 这个男人来自地球电影免费观看 | 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲精品aⅴ在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 久久久久久久久久成人| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 亚洲av福利一区| 青春草国产在线视频| 边亲边吃奶的免费视频| 最后的刺客免费高清国语| 久久鲁丝午夜福利片| 伦理电影免费视频| 黄色欧美视频在线观看| 七月丁香在线播放| 纯流量卡能插随身wifi吗| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产精品.久久久| 免费大片18禁| 国产av一区二区精品久久| 日日撸夜夜添| av线在线观看网站| 最黄视频免费看| 秋霞在线观看毛片| 久久久久久久久久久久大奶| 一本大道久久a久久精品| 成人免费观看视频高清| 亚洲色图综合在线观看| 欧美人与善性xxx| 国产男女内射视频| tube8黄色片| 国产熟女午夜一区二区三区 | 国产av一区二区精品久久| 69精品国产乱码久久久| 少妇熟女欧美另类| 亚洲av欧美aⅴ国产| 中文字幕精品免费在线观看视频 | kizo精华| 国产精品欧美亚洲77777| 精品久久久噜噜| 国产成人91sexporn| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲精品自拍成人| 女性被躁到高潮视频| 亚洲成色77777| 久久久国产一区二区| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 91久久精品电影网| 国产片特级美女逼逼视频| 大陆偷拍与自拍| 91精品国产国语对白视频| 十八禁网站网址无遮挡 | 免费看光身美女| 男女国产视频网站| 精品视频人人做人人爽| 精品午夜福利在线看| 免费黄频网站在线观看国产| 最新中文字幕久久久久| 久久久久国产精品人妻一区二区| 内射极品少妇av片p| 欧美性感艳星| 久久这里有精品视频免费| 国产成人精品婷婷| 久久狼人影院| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产一区有黄有色的免费视频| 日本wwww免费看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲激情五月婷婷啪啪| a 毛片基地| 国产熟女欧美一区二区| 春色校园在线视频观看| 欧美区成人在线视频| 一区二区三区乱码不卡18| 性高湖久久久久久久久免费观看| 黄色毛片三级朝国网站 | 日韩欧美精品免费久久| av福利片在线观看| av国产精品久久久久影院| 尾随美女入室| 视频中文字幕在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 18禁在线播放成人免费| 一级毛片aaaaaa免费看小| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 十八禁高潮呻吟视频 | 十八禁高潮呻吟视频 | 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 又爽又黄a免费视频| av在线观看视频网站免费| 亚洲人与动物交配视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 色婷婷久久久亚洲欧美| 黑丝袜美女国产一区| 久久午夜福利片| 三级经典国产精品| 美女cb高潮喷水在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 一级毛片我不卡| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 午夜91福利影院| 色网站视频免费| 午夜老司机福利剧场| 国产高清不卡午夜福利| 国产成人免费无遮挡视频| 九草在线视频观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 欧美高清成人免费视频www| 久久ye,这里只有精品| 国产精品不卡视频一区二区| 免费大片18禁| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 精品一区二区免费观看| 久久精品国产a三级三级三级| 日韩精品有码人妻一区| av黄色大香蕉| 亚洲av福利一区| 男女无遮挡免费网站观看| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 在线观看一区二区三区激情| 中国三级夫妇交换| 国产淫语在线视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 又爽又黄a免费视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产爽快片一区二区三区| 一级,二级,三级黄色视频| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲电影在线观看av| 女性被躁到高潮视频| 男的添女的下面高潮视频| 下体分泌物呈黄色| 免费高清在线观看视频在线观看| 91精品国产九色| 又大又黄又爽视频免费| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 一本色道久久久久久精品综合| 日本91视频免费播放| 一区二区三区精品91| 国产精品国产三级国产专区5o| 日本色播在线视频| 国产深夜福利视频在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| av专区在线播放| 97在线视频观看| 18+在线观看网站| 一级毛片久久久久久久久女| 看免费成人av毛片| 欧美日韩国产mv在线观看视频| av.在线天堂| 亚洲精品日本国产第一区| 男的添女的下面高潮视频| 简卡轻食公司| 在线观看免费日韩欧美大片 | 成年人免费黄色播放视频 | 色5月婷婷丁香| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲在久久综合| 最后的刺客免费高清国语| 高清视频免费观看一区二区| 久久影院123| 熟女av电影| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲,欧美,日韩| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 免费看不卡的av| 色哟哟·www| 欧美成人午夜免费资源| 日本免费在线观看一区| 免费观看无遮挡的男女| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 久久久久人妻精品一区果冻| 日本91视频免费播放| 国产成人免费观看mmmm| 99热这里只有精品一区| 亚洲av成人精品一二三区| 人妻系列 视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久久久精品性色| 日韩欧美 国产精品| 欧美精品亚洲一区二区| 日韩欧美 国产精品| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产成人freesex在线| 国产男女内射视频| 国产免费又黄又爽又色| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产熟女午夜一区二区三区 | 简卡轻食公司| 在线看a的网站| 在现免费观看毛片| 日本免费在线观看一区| 一本久久精品| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 91精品国产国语对白视频| 黄色一级大片看看| 亚洲色图综合在线观看| 国产在线视频一区二区| 久久久久久久精品精品| 国产探花极品一区二区| 中国国产av一级| 在线播放无遮挡| 久久ye,这里只有精品| 久久毛片免费看一区二区三区| 丰满乱子伦码专区| 精品一品国产午夜福利视频| 国产亚洲91精品色在线| 精品一区二区三卡| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 国产成人91sexporn| 亚洲精品一区蜜桃| 国产一区二区在线观看日韩| 久久久久久久亚洲中文字幕| 免费大片18禁| 欧美三级亚洲精品| 亚洲av综合色区一区| 深夜a级毛片| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲内射少妇av| 欧美日本中文国产一区发布| 乱系列少妇在线播放| 国产一级毛片在线| 国产精品久久久久久久电影| 久久99热这里只频精品6学生| 99视频精品全部免费 在线| 99热全是精品| 男女边摸边吃奶| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产亚洲欧美精品永久| 久久久久久久亚洲中文字幕| 综合色丁香网| 看免费成人av毛片| 国产精品一区www在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| a级毛色黄片| 中文欧美无线码| av线在线观看网站| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 在线观看免费高清a一片| av有码第一页| 丝袜脚勾引网站| av福利片在线| av线在线观看网站| av天堂久久9| 国产男女超爽视频在线观看| videossex国产| 国产亚洲5aaaaa淫片| 亚洲国产精品国产精品| 中国三级夫妇交换| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲四区av| 欧美精品一区二区大全| 九九爱精品视频在线观看| 丰满乱子伦码专区| 国产伦理片在线播放av一区| 久久国内精品自在自线图片| 国产 一区精品| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 少妇高潮的动态图| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产极品天堂在线| 精品人妻熟女av久视频| 最新中文字幕久久久久| 少妇的逼水好多| 9色porny在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 成人二区视频| 街头女战士在线观看网站| 欧美精品高潮呻吟av久久| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 免费大片黄手机在线观看| 国产淫片久久久久久久久| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 亚洲精品成人av观看孕妇| 少妇人妻久久综合中文| 中文在线观看免费www的网站| 国产综合精华液| av有码第一页| 秋霞在线观看毛片| 91aial.com中文字幕在线观看| 乱人伦中国视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 两个人免费观看高清视频 | 国产伦理片在线播放av一区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 插逼视频在线观看| 人妻人人澡人人爽人人| 哪个播放器可以免费观看大片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 搡老乐熟女国产| 欧美xxⅹ黑人| 欧美精品亚洲一区二区| 女人精品久久久久毛片| 日本欧美视频一区| 国产免费视频播放在线视频| 全区人妻精品视频| 性色av一级| 啦啦啦在线观看免费高清www| 99久久中文字幕三级久久日本| 欧美+日韩+精品| 国产淫片久久久久久久久| 草草在线视频免费看| 观看免费一级毛片| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲成色77777| 国产精品一二三区在线看| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产伦精品一区二区三区四那| 色视频在线一区二区三区|