鈉碘轉(zhuǎn)運(yùn)體報(bào)告基因共表達(dá)對嵌合型受體T細(xì)胞體外增殖及殺傷能力的影響

嵌合型受體（CAR）-T細(xì)胞療法的出現(xiàn)為復(fù)發(fā)或難治性血液瘤患者提供了新的治療選擇，然而仍存在著療效不佳、在實(shí)體瘤中存活時(shí)間短、遷移到腫瘤部位的細(xì)胞數(shù)量有限以及受實(shí)體瘤免疫微環(huán)境抑制等諸多問題。利用核醫(yī)學(xué)報(bào)告基因分子成像技術(shù)實(shí)現(xiàn)CAR-T細(xì)胞體內(nèi)示蹤，有助于明確回輸后CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)的遷移、定位、浸潤和擴(kuò)增的動(dòng)態(tài)過程，預(yù)測可能出現(xiàn)的細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）的嚴(yán)重程度,幫助優(yōu)化治療方案并避免潛在風(fēng)險(xiǎn)。目前用于核醫(yī)學(xué)成像的報(bào)告基因主要有4類，分別為酶報(bào)告基因、鈉碘轉(zhuǎn)運(yùn)體報(bào)告基因（NIS）、受體報(bào)告基因和抗體報(bào)告基因。其中NIS屬于鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)體膜蛋白家族成員，在甲狀腺濾泡基底膜上內(nèi)源性表達(dá)，因具有特異性攝取碘同位素及碘類似物的特性，應(yīng)用于PET/SPECT顯像可高靈敏、高特異性示蹤體內(nèi)細(xì)胞獲得高信噪比圖像，從而在腫瘤細(xì)胞，干細(xì)胞示蹤中得到廣泛應(yīng)用。

農(nóng)機(jī)深松整地技術(shù)推廣是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中的重要任務(wù)，為了促進(jìn)農(nóng)機(jī)推廣工作順利推進(jìn)，必須要對推廣管理體制進(jìn)行完善。由于在傳統(tǒng)的農(nóng)機(jī)推廣過程中對農(nóng)機(jī)深松整地技術(shù)的推廣工作不夠重視，導(dǎo)致一部分推廣人員有所懈怠。對此，相關(guān)部門必須要明確農(nóng)機(jī)深松整地技術(shù)的重要性，加強(qiáng)對農(nóng)機(jī)深松整地技術(shù)推廣工作的安排，需要在原有的工作制度基礎(chǔ)上進(jìn)一步完善。例如要加強(qiáng)對農(nóng)機(jī)深松整地技術(shù)人員的考核，將人員的考核與推廣工作結(jié)合起來，完成推廣任務(wù)的人員可以獲得相應(yīng)的獎(jiǎng)勵(lì)，沒有完成任務(wù)的人員將會(huì)受到一定懲罰，以獎(jiǎng)罰分明的措施帶動(dòng)技術(shù)人員的積極性，使其加深對農(nóng)機(jī)推廣工作的認(rèn)識，深入到基層，對群眾開展教育和引導(dǎo)。

運(yùn)用NIS報(bào)告基因示蹤C(jī)D19 CAR-T細(xì)胞有望為解決目前CAR-T藥物臨床治療存在的問題提供新的思路，然而報(bào)告基因的插入與表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致靶細(xì)胞存在誘變風(fēng)險(xiǎn)因此NIS在CD19 CAR-T細(xì)胞上共表達(dá)對CD19 CAR-T細(xì)胞原本活化增殖能力及殺傷活性可能造成的影響仍有待進(jìn)一步確認(rèn)。目前關(guān)于NIS示蹤C(jī)AR-T細(xì)胞的研究較少，2018年Emami-Shahri等將NIS報(bào)告基因共表達(dá)于靶向前列腺特異膜抗原（PSMA）的CAR-T 細(xì)胞，用TcO作為示蹤劑評估了PAMA CAR-T細(xì)胞的體內(nèi)分布，2020年Volpe等首次報(bào)告了利用NIS報(bào)告基因在乳腺癌模型中對ErbB CAR-T細(xì)胞的PET成像。既往研究均缺乏NIS報(bào)告基因共表達(dá)影響CAR-T細(xì)胞體外增殖的探討，對NIS-PAMA CAR-T細(xì)胞和NIS-ErbB CAR-T細(xì)胞殺傷活性可能存在的變化的研究內(nèi)容不足，缺少對不同效靶比的設(shè)置及較長時(shí)間點(diǎn)的觀測。因此，本研究制備靶向CD19的NIS-CAR-T細(xì)胞，系統(tǒng)性探究NIS共表達(dá)對于CD19 CAR-T細(xì)胞活化增殖和殺傷活性的影響，旨在為實(shí)現(xiàn)核醫(yī)學(xué)技術(shù)監(jiān)測血液瘤患者體內(nèi)CD19 CAR-T細(xì)胞生存-工作狀態(tài)奠定基礎(chǔ)。

⑧柳永《卜算子》(江楓漸老)：雙調(diào)89字，上闋8句45字4仄韻，下闋8句44字5仄韻。句式：4464635346。5544635345。

1 材料和方法

1.1 材料

細(xì)胞株：Nalm6細(xì)胞購于浙江美森細(xì)胞科技有限公司，293T細(xì)胞由重慶醫(yī)科大學(xué)放射醫(yī)學(xué)與腫瘤學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供；T細(xì)胞由已簽署知情同意書的健康成人志愿者提供。慢病毒：CD19 CAR慢病毒質(zhì)粒（愛康得生物科技蘇州有限公司）、NIS 慢病毒質(zhì)粒（漢恒生物技術(shù)上海有限公司）。試劑：RPMI 1640培養(yǎng)液、胎牛血清（FBS）（GIBCO）、T細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基、白介素-2（IL-2）、淋巴細(xì)胞密度梯度分離液、人CD3/CD28/CD2 T細(xì)胞激活劑、人T細(xì)胞分離試劑盒（STEMCELL公司；磷酸鹽緩沖液（PBS緩沖液）（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）、APC抗人EGFR抗體（Biolegend）、臺(tái)盼藍(lán)染液（上海經(jīng)科化學(xué)科技有限公司）、CCK8試劑盒（日本同仁化學(xué)研究所）、乳酸脫氫酶細(xì)胞毒性檢測試劑盒（LDH Cytotoxicity Assay Kit）（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）、ELISA試劑盒（R&D）、I（重慶原子高科醫(yī)藥有限公司）。

1.2 方法

上述方式再次鋪板后每孔細(xì)胞分別加入0.05、0.1、0.2、0.4μCiI，檢測細(xì)胞碘攝取量隨I濃度及孵育時(shí)間的變化。每個(gè)濃度3孔，分別孵育0.5、1、2、3和6 h后測量細(xì)胞的放射性計(jì)數(shù)，操作同前。為了后續(xù)進(jìn)行外排實(shí)驗(yàn),將本次測量時(shí)間點(diǎn)記為0。測量后將細(xì)胞重懸于PBS 緩沖液中,室溫下培養(yǎng)15、30、60、120 min 后用冷PBS緩沖液洗滌3 次，γ計(jì)數(shù)器測量細(xì)胞相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)放射性計(jì)數(shù)。重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)3 次。

1.2.2 CAR-T細(xì)胞、NIS-T細(xì)胞及NIS-CAR-T細(xì)胞的制備 采健康成人志愿者外周血，密度梯度離心法獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），免疫磁珠富集法獲得CD3T細(xì)胞群。1×10CD3T細(xì)胞加入1 mL T細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基（含人CD3/CD28/CD2 T細(xì)胞激活劑25μL、IL-2 500 IU）激活擴(kuò)增?；罨蟮腃D3T 細(xì)胞CAR 慢病毒MOI=7.5、NIS 慢病毒MOI=50感染48 h 分別獲得CAR-T細(xì)胞、NIS-T細(xì)胞及NIS-CAR-T細(xì)胞，細(xì)胞密度維持在1×10/mL 37 ℃、5%CO繼續(xù)培養(yǎng)。

在出租車上，思雨還想再同田詩研究一下回家之后的一些細(xì)節(jié)問題?？商镌姼揪蜎]給他機(jī)會(huì)。田詩就發(fā)生在姐夫身上的長發(fā)絲事件，結(jié)合當(dāng)前的現(xiàn)實(shí)社會(huì)和成功男人等社會(huì)問題，展開了深入細(xì)致的剖析。實(shí)際上也是變相地給思雨敲敲警鐘上上課。雖然大家目前還沒有發(fā)現(xiàn)杜思雨有什么問題，但田詩想的是應(yīng)該讓姐夫思雨的壞思想萌芽胎死腹中，對他要警鐘長鳴。

1.2.4 細(xì)胞體外增殖能力檢測 T細(xì)胞、CAR-T細(xì)胞及NIS-CAR-T細(xì)胞96孔板3000/孔分別鋪板。每孔加入100μL T細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基（含IL-2 50 U），37 ℃、5%CO分別培養(yǎng)24、48、72 h。CCK-8 細(xì)胞增殖毒性檢測試劑盒進(jìn)行增殖能力檢測，酶標(biāo)儀測定，計(jì)算各孔增殖率，增殖率（%）=（-）÷（-）×100%。每組設(shè)3 個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

1.2.5 體外殺傷活性檢測 CD19表達(dá)陽性的急性B淋巴細(xì)胞白血病Nalm6細(xì)胞株RPMI 1640（1%青霉素/鏈霉素10%胎牛血清）37 ℃5%CO培養(yǎng)，定期進(jìn)行支原體污染檢測。

徑流量數(shù)據(jù)具有非線性和不確定性等特征，并且與時(shí)間相關(guān)，因此，對徑流量的預(yù)測也可以看作是時(shí)間序列的預(yù)測問題。求和自回歸移動(dòng)平均(ARIMA)模型是一種基于時(shí)間序列的預(yù)測模型，適用于對時(shí)間序列的短期和超短期預(yù)測，

ELISA試劑盒檢測4∶1效靶比72 h共培養(yǎng)上清中IFN-γ、TNF-β濃度。每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

T細(xì)胞培養(yǎng)24、48、72 h增殖率（%）分別為111.82±11.72、150.46±6.20、313.20±6.39；CAR-T細(xì)胞培養(yǎng)24、48、72 h 增殖率（%）分別為112.37±8.6、152.09±13.6、323.52±16.92；NIS-CAR-T細(xì)胞培養(yǎng)24、48、72 h增殖率（%）分別為97.35±8.12、149.61±17.75、312.49±12.10。3組細(xì)胞都具有良好的體外增殖性，增殖率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05，圖3）。

1.2.1 CAR慢病毒、NIS慢病毒制備 CD19 CAR慢病毒由愛康得生物科技蘇州有限公司合成，NIS慢病毒由漢恒生物技術(shù)上海有限公司合成并經(jīng)DNA測序驗(yàn)證。慢病毒分裝保存于-80 ℃。

仿真采用文獻(xiàn)[21-24]中的方法，建立DELTA機(jī)器人的雅可比矩陣，以及運(yùn)動(dòng)學(xué)、動(dòng)力學(xué)模型，然后求出軌跡的坐標(biāo)、速度、加速度以及力矩的值，仿真中DELTA機(jī)器人平臺(tái)的參數(shù)如表1所示。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

每個(gè)客戶、每個(gè)區(qū)域都不一樣。比如，在吉林三岔河庫、蔡家?guī)欤r(nóng)民更需要農(nóng)資和農(nóng)機(jī)服務(wù)；在遼寧，農(nóng)民對貸款的需求呼聲更高；在內(nèi)蒙古，訂單農(nóng)業(yè)連片種植業(yè)務(wù)開展更快。根據(jù)不同地理環(huán)境、農(nóng)民實(shí)際需求和市場趨勢，“糧圈兒”可以把服務(wù)做到每戶農(nóng)民家里，不再“大水漫灌”。

2 結(jié)果

2.1 慢病毒載體構(gòu)建

CD19 CAR慢病毒質(zhì)粒采用的是第3代CAR，胞外CD19 scFV 連接胞內(nèi)2個(gè)共刺激分子CD8 與4-1BB，再與CD3ζ 串聯(lián)，末端自我剪切肽2A連接一個(gè)EGFR標(biāo)簽，用于檢測CD19-CAR的轉(zhuǎn)染效率。NIS慢病毒質(zhì)粒中包括目的基因NIS和綠色熒光蛋白（GFP），末端2A連接一個(gè)嘌呤霉素（Puromycin）抗性基因（圖1A）。GFP用于檢測NIS的轉(zhuǎn)染效率，經(jīng)測序與預(yù)期相符。帶有GFP的NIS慢病毒感染293T包裝細(xì)胞后熒光顯微鏡下可見NIS-293T細(xì)胞表達(dá)綠色熒光（圖1B）。

流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)采用FlowJo軟件進(jìn)行分析，其余實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用GraphPad Prism 8.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，樣本兩兩比較使用LSD-檢驗(yàn)，多組總體差異比較采用單因素方差分析。＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2.3 慢病毒轉(zhuǎn)染率檢測 CAR-T細(xì)胞、NIS-T細(xì)胞及NIS-CAR-T細(xì)胞培養(yǎng)3 d，流式細(xì)胞儀（BD Biosciences）檢測轉(zhuǎn)染效率，F(xiàn)lowJo軟件分析數(shù)據(jù)。

2.2 CAR-T細(xì)胞、NIS-T細(xì)胞及NIS-CAR-T細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率檢測

CD19 CAR慢病毒攜帶EFGR標(biāo)簽，NIS慢病毒攜帶GFP。APC-抗人EGFR抗體對感染后T細(xì)胞染色后，檢測APC 通道熒光和GFP 熒光占比即可得到CAR、NIS感染率。CAR-T細(xì)胞、NIS-CAR-T細(xì)胞的CAR轉(zhuǎn)染率和NIS-T細(xì)胞、NIS-CAR-T細(xì)胞的NIS轉(zhuǎn)染率（%）分別為91.91、99.41、47.83、50.24（圖2A～C）。

我國的改革開放和市場經(jīng)濟(jì)發(fā)展歷程，實(shí)際上也是我國政府職能逐步轉(zhuǎn)換的過程。2018年3月修訂了新的政府綜合財(cái)務(wù)報(bào)告編制指南，這一制度的提出有利于不斷改進(jìn)政府會(huì)計(jì)的制度管理，推進(jìn)政府會(huì)計(jì)改革，更加科學(xué)地反映政府整體運(yùn)行成本狀況和運(yùn)營績效水平，從而建立健全政府會(huì)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)體系。目前已有20多個(gè)省、自治區(qū)、直轄市、計(jì)劃單列市以及20個(gè)中央部門成為我國權(quán)責(zé)發(fā)生制政府綜合財(cái)務(wù)報(bào)告改革的試點(diǎn)區(qū)域。本文以浙江省溫州市為案例進(jìn)行分析，通過分析近年來溫州市在編制政府綜合財(cái)務(wù)報(bào)告過程中出現(xiàn)的難點(diǎn)和問題，提出合理的建議和解決措施。

2.3 CAR-T細(xì)胞與NIS-CAR-T細(xì)胞的體外增殖

1.2.6 體外攝碘能力檢測 T 細(xì)胞、NIS-T 細(xì)胞、NISCAR-T細(xì)胞12孔板2×10/孔分別鋪板。每孔分別用PBS緩沖液洗滌3次，其中6孔加入新鮮培養(yǎng)基（100 μL/孔），剩余6孔加入KI（10 mmol/L）100 μL/孔，37 ℃孵育30 min，每孔加入100 μL 含有I（0.2μCi）的新鮮培養(yǎng)基孵育30 min。冷PBS緩沖液洗滌細(xì)胞3次，γ測量儀（PerkinElmer，WIZARD2）測量每孔細(xì)胞的放射性計(jì)數(shù)。重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)3次。

2.4 CAR-T細(xì)胞與NIS-CAR-T細(xì)胞對Nalm6細(xì)胞的體外殺傷活性

各組殺傷活性隨共培養(yǎng)時(shí)長及效靶比的增加而升高（圖4A～D），CAR-T、NIS-CAR-T細(xì)胞組殺傷活性明顯強(qiáng)于對照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05，表1）。比較CAR-T與NIS-CAR-T細(xì)胞對Nalm6細(xì)胞殺傷率發(fā)現(xiàn)，不同效靶比（0.5∶1、1∶1、2∶1 和4∶1）作用24 h 時(shí)，CAR-T細(xì)胞組殺傷率高于NIS-CAR-T細(xì)胞組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）；作用48、72 h兩組細(xì)胞殺傷率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05）。

5×10靶細(xì)胞（Nalm6細(xì)胞）中按照效靶比為0.5∶1、1∶1、2∶1和4∶1分別加入效應(yīng)細(xì)胞（T細(xì)胞、CAR-T細(xì)胞和NIS-CAR-T細(xì)胞），分別培養(yǎng)24、48、72 h。LDH法酶標(biāo)儀測定值檢測殺傷活性，計(jì)算各孔殺傷率。殺傷率（%）=（--）÷（-）×100%。

CAR-T、NIS-CAR-T兩組IFN-γ、TNF-β釋放水平（pg/mL）均高于T細(xì)胞組（1495.77±1.1，1366.76±69.2587.14±0.85；675.43±2.93，601.30±11.3365.10±8.85，＜0.05，圖4E），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.5 NIS-T細(xì)胞與NIS-CAR-T細(xì)胞的攝碘能力

體外攝碘實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，無競爭性抑制劑KI存在的情況下，0.2μCiI孵育30 min后，NIS-T細(xì)胞與NISCAR-T細(xì)胞每分鐘放射性計(jì)數(shù)（cpm）明顯高于對照組T細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（7851±837，7231±481721±29，＜0.05，圖5A）；KI存在時(shí)NIS-T細(xì)胞與NISCAR-T 細(xì)胞I 攝?。╟pm）被明顯抑制，與對照組相比無明顯變化，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（986±65，972±66938±50，＞0.05，圖5A）。其中NIS-T細(xì)胞、NIACAR-T細(xì)胞攝碘水平呈濃度依賴性增高（圖5B），攝碘3 h 達(dá)到峰值（圖5C），去除I 后細(xì)胞內(nèi)I 快速流出并在30 min后cpm值趨于穩(wěn)定。NIS-CAR-T細(xì)胞攝碘水平與NIS-T細(xì)胞相比差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05，圖5D）。

3 討論

CAR-T療法的出現(xiàn)改變了血液性腫瘤治療的格局，但目前依然存在著細(xì)胞因子風(fēng)暴（CRS）和免疫效應(yīng)細(xì)胞神經(jīng)毒性綜合征（ICANS）等并發(fā)癥問題。利用NIS報(bào)告基因成像策略提高對CAR-T細(xì)胞體內(nèi)行為的認(rèn)識與了解有助于推動(dòng)解決目前CAR-T細(xì)胞治療所存在的一系列問題。然而NIS作為報(bào)告基因，其插入與表達(dá)是否存在導(dǎo)致靶細(xì)胞誘變、原本功能受抑制等風(fēng)險(xiǎn)是一個(gè)十分值得關(guān)注的問題。目前有研究將NIS用于示蹤C(jī)AR-T 細(xì)胞在前列腺腫瘤和乳腺癌腫瘤模型中的分布，但均未對NIS報(bào)告基因共表達(dá)是否影響CAR-T細(xì)胞體外增殖和殺傷活性進(jìn)行系統(tǒng)探討。因此區(qū)別于前兩項(xiàng)報(bào)道，本研究選擇CD19 CAR-T細(xì)胞作為示蹤對象，通過慢病毒感染法制備CAR-T細(xì)胞與NISCAR-T細(xì)胞，探究NIS是否適用于示蹤C(jī)D19 CAR-T在血液性腫瘤中的“工作-生存”狀態(tài)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示CD19 CAR與NIS表達(dá)陽性證明制備成功，并且兩組細(xì)胞CAR轉(zhuǎn)染率相近，表明NIS共表達(dá)對CAR的表達(dá)無抑制現(xiàn)象。

制備出的CAR-T細(xì)胞、NIS-CAR-T細(xì)胞參照T細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行體外培養(yǎng)，通過對比共表達(dá)NIS與CD19 CAR蛋白的T細(xì)胞與只表達(dá)CD19 CAR蛋白的T細(xì)胞體外24、48、72 h的細(xì)胞增殖率差異，以研究NIS基因的插入與表達(dá)對CD19 CAR-T細(xì)胞的增殖活性是否存在影響。CCK8結(jié)果顯示二者體外增殖率無差異，均具有良好增殖能力。隨后本研究將CAR-T細(xì)胞、NIS-CART細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞與Nalm6腫瘤細(xì)胞按不同效靶比共培養(yǎng)，對表達(dá)不同蛋白的T細(xì)胞的腫瘤殺傷率進(jìn)行對比。LDH結(jié)果顯示各組殺傷活性隨共培養(yǎng)時(shí)長及效靶比的增加而升高，CAR-T、NIS-CAR-T細(xì)胞組殺傷活性明顯強(qiáng)于對照組。不同效靶比作用24 h時(shí)，CAR-T細(xì)胞組殺傷率高于NIS-CAR-T細(xì)胞組，48、72 h兩組細(xì)胞殺傷率無差異。提示隨著共培養(yǎng)時(shí)間的延長，兩者對腫瘤細(xì)胞殺傷作用差異也趨近于無，NIS-CAR-T細(xì)胞與CAR-T細(xì)胞一樣具有良好的殺瘤活性。說明NIS共表達(dá)不影響CAR-T細(xì)胞體外增殖活性和對腫瘤細(xì)胞識別與殺傷功能。ELISA法檢測效靶比4∶1作用72 h CART、NIS-CAR-T 兩組共培養(yǎng)上清均存在明顯IFN-γ、TNF-β釋放再次表明NIS-CAR-T細(xì)胞與CAR-T細(xì)胞均能夠特異性識別CD19抗原分泌細(xì)胞因子并發(fā)揮殺傷作用。這與評價(jià)共表達(dá)其他報(bào)告基因（如HSV1-tk、eDHFR、SSTR2受體以及PSMA等）CAR-T細(xì)胞腫瘤殺傷活性的研究結(jié)果一致。

報(bào)告基因在靶細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄、翻譯、表達(dá)的成功是其在成像過程中發(fā)揮功能的基礎(chǔ)，因此為了進(jìn)一步探究NIS與CAR共表達(dá)時(shí)CAR蛋白是否影響NIS的表達(dá)與功能,確保NIS能實(shí)現(xiàn)細(xì)胞體內(nèi)示蹤作用，我們對比了NIS-CAR-T與NIS-T兩組細(xì)胞NIS轉(zhuǎn)染率與攝碘能力，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明NIS-CAR-T與NIS-T兩組細(xì)胞NIS轉(zhuǎn)染率相似提示NIS轉(zhuǎn)染率不受影響，碘攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明共表達(dá)NIS蛋白具有特異性攝碘功能。這與Emami-Shahri等以TcO作為示蹤劑得到的NISPSMA CAR-T細(xì)胞SPET/CT成像結(jié)果和Volpe等報(bào)告的乳腺癌模型中NIS-ErbB CAR-T細(xì)胞的PET成像結(jié)果相符。

綜上所述，本研究通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)NIS 共表達(dá)對CD19 CAR-T細(xì)胞增殖、殺傷活性無明顯抑制作用，其本身表達(dá)與攝碘能力均未受影響，證明NIS有作為理想的報(bào)告基因用于CD19 CAR-T細(xì)胞體內(nèi)示蹤的潛質(zhì)，為后續(xù)利用NIS 介導(dǎo)放射性核素在血液癌模型中實(shí)現(xiàn)CAR-T細(xì)胞可視化研究奠定了基礎(chǔ)。