高 慧,何秋梅,白燕遠(yuǎn), 4,李耀燕, 4,閆國躍, 4,姚涵雅,天 亮,劉 博,蘇宏新,阿里穆斯*,謝陽姣, 4*
金花茶UPLC指紋圖譜的建立及親緣關(guān)系分析
高 慧1, 2, 3,何秋梅2,白燕遠(yuǎn)2, 4,李耀燕2, 4,閆國躍2, 4,姚涵雅2,天 亮1, 3,劉 博1,3,蘇宏新3,阿里穆斯1, 3*,謝陽姣2, 4*
1. 中央民族大學(xué) 民族醫(yī)藥教育部重點實驗室,北京 100081 2. 廣西中醫(yī)藥大學(xué),廣西 南寧 530001 3. 南寧師范大學(xué) 北部灣環(huán)境演變與資源利用教育部重點實驗室,廣西 南寧 530001 4. 廣西壯瑤醫(yī)藥與醫(yī)養(yǎng)結(jié)合人才小高地,廣西 南寧 530200
建立不同種類金花茶UPLC指紋圖譜,結(jié)合其表型特征和化學(xué)成分差異分析其親緣關(guān)系,為金花茶品種分類和應(yīng)用提供依據(jù)。采用UPLC法建立22種金花茶的指紋圖譜,采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2012版)對金花茶UPLC指紋圖譜進行相似度評價,并采用SPSS24.0軟件進行主成分分析、聚類分析。選取了3個色譜共有峰,指認(rèn)了11個已知化學(xué)成分。不同種金花茶共有峰相似度在0.247~0.740。主成分分析篩選出弄崗、檸檬黃、龍州、隴瑞、細(xì)葉、隆安、頂生、天峨、中東、毛瓣10種金花茶的化學(xué)成分含量較高。聚類分析結(jié)果顯示龍州亞類單獨聚為一類;凹脈、頂生、天峨、顯脈、弄崗、倒卵葉、檸檬黃、薄葉、中東、東興、防普金花茶聚為一類;隴瑞、龍州亞種、細(xì)葉金花茶為一類;淡黃、扶綏、毛瓣、四季、恩城、隆安、武鳴金花茶聚為一類。金花茶種類繁多,不同種金花茶所含化學(xué)成分存在較大差異,結(jié)合表型特征,根據(jù)成分差異可基本獲得種間親緣關(guān)系。
金花茶;金花茶組;指紋圖譜;親緣關(guān)系;沒食子酸;綠原酸;牡荊素;蘆丁;金絲桃苷;異槲皮苷;染料木苷;水楊酸;槲皮苷;木犀草素;芹菜素
金花茶為山茶科、山茶屬金花茶組小喬木。金花茶的分布極其狹窄,但品種豐富,現(xiàn)全世界已發(fā)現(xiàn)的金花茶組植物有42個種5個變種[1],主要分布于我國廣西南部以及越南北部[2],我國產(chǎn)30多個種和5個變種,僅廣西就有28個種;越南發(fā)現(xiàn)金花茶品種22個,與我國金花茶主產(chǎn)區(qū)廣西接壤的越南北部地區(qū),是越南金花茶主要分布中心[3]。此外,還有個別金花茶種零星分布或栽培于我國云南、貴州和福建[1, 4]及緬甸、泰國、馬來西亞和日本等國家[5]。由于資源的珍貴與稀缺,目前對金花茶品種的使用率并不高,受氣候和地域因素限制,目前使用和研究最多的為廣西防城港本地金花茶,且研究多集中在其有效成分和藥理作用方面[6-11],對其品種和親緣關(guān)系的研究較為少見。本課題組采用UPLC法,建立不同種金花茶UPLC指紋圖譜,分析不同種金花茶之間的化學(xué)成分差異,并進行相似度檢驗、主成分分析和聚類分析,以期為金花茶品種分類、探討其進化關(guān)系及對其進行有效應(yīng)用提供參考。
所用金花茶均來源于廣西防城港市東興市江平鎮(zhèn)大壢村沖峰金花茶種植基地,引種于2013年,由原南寧市金花茶公園基因庫主管黃連冬高級園林工程師鑒定為山茶科山茶屬金花茶組植物。2019年1月,項目主要基于基因庫原有品種分類對植株進行掛牌,計入項目分析的共21個種,所有金花茶均為正常生長、無明顯病蟲害的成熟植株。21個種原產(chǎn)地各異,株型、葉的大小等表型特征差異明顯,各原產(chǎn)地及其表型特征信息見表1。
表1 21種供試金花茶產(chǎn)地和表型信息
Table 1 Origin and phenotype information of 21 varieties of C. nitidissima
編號中文名拉丁名原產(chǎn)地株高/m冠幅/m葉長/寬葉面積/cm2 GAM凹脈金花茶C. impressinervis廣西龍州、大新縣1.861.922.21101.58 GBY薄葉金花茶C. chrysanthoides廣西龍州縣1.671.552.29 51.21 GDH淡黃金花茶C. flavida廣西龍州縣、武鳴縣1.341.262.55 31.81 GDLY倒卵葉金花茶C. limonia f. obovata廣西扶綏縣1.731.562.15 16.35 GDS頂生平果金花茶C. pingguoensis var. terminalis廣西天等縣1.841.832.55 24.07 GDX東興金花茶C. tunghinensis廣西防城縣1.501.412.34 20.46 GEC恩城金花茶C. enchengensis廣西大新縣1.741.722.39 86.15 GFP防普金花茶C. niridissima廣西防城縣1.861.892.46 63.87 GFS扶綏金花茶C. fsuiens廣西扶綏縣1.921.792.32 50.90 GLZ龍州金花茶C. long zhouensis廣西龍州縣1.521.432.66 37.19 GLA隆安金花茶C. longanensis廣西隆安縣1.861.762.33 61.26 GLR隴瑞金花茶C. longruiensis廣西寧明縣1.991.942.42 60.38 GMB毛瓣金花茶C. pubipetala廣西隆安、大新縣2.121.982.61129.17 GNMH檸檬黃金花茶C. limonia廣西龍州、寧明縣1.461.342.06 19.97 GNG弄崗金花茶C. longgangensis廣西龍州縣1.801.762.48 72.93 GSJ四季金花茶C. ptilosperma廣西崇左市1.241.262.07 22.98 GTE天峨金花茶C. tianeensis廣西天峨縣1.471.392.23 37.78 GWM武鳴金花茶C. wumingensis廣西武鳴縣0.920.812.53 20.78 GXY細(xì)葉金花茶C. parvifolia廣西龍州縣1.411.382.64 42.23 GXM顯脈金花茶C. euphlebia 廣西防城縣2.422.402.44114.51 GZD扶綏中東金花茶C. fusuien 廣西扶綏縣1.921.75 2.23 37.76
21種金花茶中,株型最大的為顯脈金花茶,最小為武鳴金花茶。葉面積最大的為毛瓣金花茶,葉面積最小的為倒卵葉金花茶。對掛牌植株,取最外層分枝上已成熟轉(zhuǎn)綠的葉片,凍干后粉碎,過藥典3號篩用于化學(xué)成分分析。
超高效液相色譜儀(美國Waters公司,包括Waters FIN樣品管理器、QSM四元溶劑管理器、TUV Detector檢測器、Empower色譜工作站),色譜柱ACQUITY UPLC HSS T3(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),KQ-500E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),密理博超純水機(蘇州賽恩斯儀器有限公司)。
乙腈(色譜純)、磷酸(色譜純)、乙醇(分析純)、水(超純水,自制)。對照品綠原酸(批號wkq19010201)、牡荊素(批號wkq19031111)、金絲桃苷(批號wkq19040913)、染料木苷(批號wkq19051702)、槲皮苷(批號wkq19031304)、木犀草素(批號wkq19031213)、異槲皮苷(批號wkq-00269),以上均購自四川省維克奇生物科技有限公司,質(zhì)量分?jǐn)?shù)均為98%;沒食子酸(批號18032703,質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%)購自成都普非德生物技術(shù)有限公司;蘆丁(批號100080-201811,質(zhì)量分?jǐn)?shù)91.7%)、水楊酸(批號100106-201605,質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.3%)、芹菜素(批號111901-201603,質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.2%),以上均購自中國食品藥品鑒定研究院。
分別稱取對照品適量,根據(jù)溶解性選擇乙醇、甲醇或水,制成含綠原酸0.050 mg/mL、牡荊素0.030 mg/mL、金絲桃苷0.100 mg/mL、染料木苷0.210 mg/mL、槲皮苷0.028 mg/mL、木犀草素0.030 mg/mL、異槲皮苷0.110 mg/mL、沒食子酸0.043 mg/mL、蘆丁0.100 mg/mL、水楊酸 0.100 mg/mL、芹菜素0.017 mg/mL的混合對照品溶液,即得。
精密稱取0.5 g樣粉,加50%乙醇25 mL,超聲提取30 min,定量濾紙濾過后,用0.2 μm微孔濾膜濾過,即得。
ACQUITY UPLC HSS T3(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)為色譜柱;流動相為乙腈(A)-0.3%甲酸水溶液(B);柱溫35 ℃;體積流量0.2 mL/min,檢測波長260 nm;梯度洗脫,0~2 min,14%~15%乙腈;2~12.5 min,15%~22%乙腈;12.5~15 min,22%~22.5%乙腈;15~28 min,22.5%~25%乙腈;28~33 min,25%~60%乙腈;33~37 min,60%乙腈。
2.4.1 精密度試驗 取GAM樣品粉末,按照“2.2”項下方法制備供試品溶液適量,按照“2.3”項下色譜條件進行檢測,連續(xù)進樣6次。記錄色譜圖,以沒食子酸為參照峰(S),計算各共有峰相對保留時間RSD值均小于1%,相對峰面積RSD值均小于5%,表明儀器精密度良好。
2.4.2 重復(fù)性試驗 制備同一供試品溶液6份進樣測定,以樣品峰面積的平均值計算RSD,根據(jù)沒食子酸、綠原酸、牡荊素、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、染料木苷、水楊酸、槲皮苷、木犀草素、芹菜素的峰面積分別計算RSD,測得所有RSD值均小于2.00%,表明樣品重復(fù)性良好。
2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液,分別于0、2、4、6、8、10、12和24 h進樣測定,根據(jù)沒食子酸、綠原酸、牡荊素、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、染料木苷、水楊酸、槲皮苷、木犀草素、芹菜素的峰面積分別計算RSD值,測得RSD值均小于2.00%,表明建立的UPLC方法穩(wěn)定性良好。
2.5.1 UPLC指紋圖譜的構(gòu)建 取各金花茶樣品粉末,按照“2.2”項下方法制備供試品溶液適量,按照“2.3”項下色譜條件進樣測定,建立UPLC指紋圖譜,見圖1。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》(2012版),對所有種類金花茶進行分析,共有峰為3個,峰號為12、13、14,均為未知峰。通過將所有種類金花茶的所有峰與對照品進行比對,指認(rèn)出11個峰,分別為沒食子酸(1號峰)、綠原酸(2號峰)、牡荊素(3號峰)、蘆?。?號峰)、金絲桃苷(5號峰)、異槲皮苷(6號峰)、染料木苷(7號峰)、水楊酸(8號峰)、槲皮苷(9號峰)、木犀草素(10號峰)、芹菜素(11號峰),就已知化學(xué)成分來看,各種類金花茶未見共有峰。在前期的數(shù)據(jù)整理過程中發(fā)現(xiàn),原掛牌為龍州金花茶的品種,可分成明顯的2個亞類,故后續(xù)分析,將龍州金花茶分為2個亞類進行研究,設(shè)置編號分別為GLZ、GLZYZ,種類增加為22個,金花茶對照指紋圖譜、混合對照品、指紋圖譜共有模式及疊加圖見圖1。
2.5.2 相似度分析 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》(2012版),以對照圖譜的UPLC圖譜為對照,進行整體相似度評價,見表2。以S1樣品色譜圖作為參照圖譜,按中位數(shù)法、設(shè)置時間窗寬度為0.1,經(jīng)多點校正后進行色譜峰匹配生成對照圖。結(jié)果表明,22種金花茶的相似度在0.247~0.740間,說明每一種金花茶中所含化學(xué)成分種類存在較大差異,其藥用功效相應(yīng)的具有較大差異。
1-沒食子酸 2-綠原酸 3-牡荊素 4-蘆丁 5-金絲桃苷 6-異槲皮苷 7-染料木苷 8-水楊酸 9-槲皮苷 10-木犀草素 11-芹菜素
表2 不同種金花茶指紋圖譜相似度
Table 2 Similarity of fingerprints of different kinds of
種類相似度種類相似度 GAM0.299GLA0.247 GBY0.618GLR0.465 GDH0.658GLZ0.483 GDLY0.291GLZYZ0.371 GDS0.514GMB0.672 GDX0.672GNMH0.639 GEC0.567GTE0.525 GFP0.407GWM0.528 GFD0.455GXM0.560 GNG0.639GXY0.456 GSJ0.324GZD0.740
根據(jù)22種金花茶各色譜峰面積的大小,采用SPSS做因子分析,最后方差大于1的因子有8個,可被作為主成分進行分析,8個因子的總特征值和方差貢獻(xiàn)率見表3。根據(jù)表3,第1主成分特征值為5.669,占總方差的25.768%,8個主成分累積方差占總方差的75.321%。根據(jù)8個主成分的因子得分,乘以相應(yīng)方差的算術(shù)平方根計算出主成分的得分;利用每個樣品各主成分得分乘以該主成分的貢獻(xiàn)率(方差/8個因子的總方差)之和,計算各樣品得分順序,以評價樣品基于化學(xué)成分含量指標(biāo)的優(yōu)劣,各樣品綜合得分值見圖2。從圖2可知,GNG、GNMH、GLZ、GLR、GXY、GLA、GDS、GTE、GZD、GMB主成分綜合評分排前10位,說明該10種金花茶的化學(xué)成分含量較高,如果以化學(xué)成分的含量為評價指標(biāo),該10種較為優(yōu)質(zhì)。
采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2012版),以22個品種(亞種)的金花茶UPLC對照指紋圖譜為研究對象,基于種間相似系數(shù),采用聚類分析法,分析各種金花茶間親緣關(guān)系,得聚類分析結(jié)果見圖3。聚類結(jié)果顯示,遺傳距離為40時,22個品種金花茶可以分為4個大的類群,其中第1類群僅含龍州亞種(GLZYZ),原產(chǎn)地為龍州縣。該種已批認(rèn)化學(xué)成分有沒食子酸、槲皮苷。第2類群含11個品種,分別為凹脈、頂生、天峨、顯脈、弄崗、倒卵葉、檸檬黃、薄葉、中東、防普金花茶,產(chǎn)地分布在龍州、大新、天等、天峨、防城、扶綏、寧明各縣。該類群的金花茶多含有蘆丁、異槲皮苷、槲皮苷、牡荊素、芹菜素、金絲桃苷。第3個類群含3個品種,為隴瑞、龍州(GLZ)、細(xì)葉金花茶,產(chǎn)地分別為寧明、龍州縣。該類群的金花茶多含有牡荊素、金絲桃苷、槲皮苷。第4個類群含7個品種,分別為淡黃、扶綏、毛瓣、四季、恩城、隆安、武鳴金花茶,產(chǎn)地分布在龍州、武鳴、扶綏、隆安、大新、崇左各市縣。該類群的金花茶多含有牡荊素、蘆丁、異槲皮苷、槲皮苷、沒食子酸、木犀草素、染料木苷、水楊酸。
表3 峰面積主成分分析特征值與方差貢獻(xiàn)率
Table 3 Eigenvalues and variance contribution rates of peak area PCA
主成分被提取載荷平方和 1總特征值方差貢獻(xiàn)率/%累積方差貢獻(xiàn)率/% 25.66925.76825.768 33.15914.36040.128 41.810 8.22848.357 51.474 6.70255.059 61.226 5.57260.631 71.134 5.15465.785 81.084 4.92970.715 91.013 4.60775.321
圖2 基于峰面積主成分分析金花茶綜合得分
金花茶歷史悠遠(yuǎn),品種繁多。自1975年有金花茶文獻(xiàn)記載至今,人們對金花茶的研究已經(jīng)持續(xù)了40余年之久。但由于其生長環(huán)境的特殊性和成分含量的多樣性,其質(zhì)量評價目前尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。近幾年對于金花茶的研究不斷得到人們的重視,文獻(xiàn)報道金花茶含有多酚、多糖、黃酮、皂苷及揮發(fā)性物質(zhì)[12-15],但基于其化學(xué)成分的研究仍未成體系,且對于其品種的研究也鮮為少見。本研究構(gòu)建了不同種類金花茶的指紋圖譜,并經(jīng)過主成分分析和聚類分析,結(jié)合其表型特征對金花茶的種間差異和親緣關(guān)系進行了分析。實驗最終選取乙腈-0.1%磷酸水溶液,50%乙醇超聲30 min為最佳提取方法,320 nm波長為最佳檢測波長,且試驗的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性均為良好。同時研究發(fā)現(xiàn)不同種間UPLC指紋圖譜的相似度極低,表明每種金花茶在化學(xué)成分上具有較大差異,其藥理和藥效方面應(yīng)具有各自獨特的作用,在臨床應(yīng)用當(dāng)中應(yīng)根據(jù)實際情況進行選擇。由于目前實驗條件有限,并不能檢測出金花茶含有的所有化學(xué)成分,課題組將在日后的工作中進行完善。
圖3 不同種金花茶聚類分析
藥材化學(xué)成分的差異,主要受基因的影響,表型性狀則是基因的外在反應(yīng),研究表型性狀與化學(xué)成分的關(guān)系,可以為品種分類和篩選優(yōu)良種質(zhì)提供更為簡單有效的方法[16]。聚類分析結(jié)果表明,22種金花茶明顯聚為不同的類群,各類群含有的化學(xué)成分相似,在表型性狀上也有一定的相似度。其中,第一類群只有1個種即龍州亞種(GLZYZ),這與劉付永清[17]所研究的結(jié)果一致,因為金花茶植物葉表皮形態(tài)結(jié)構(gòu)研究結(jié)果表明,龍州金花茶的葉表皮結(jié)構(gòu)與其他金花茶間有較大的差異,故將其作為一個獨立的種處理。該種株型和葉面積較小,葉長寬比最大,葉形為流線形。從已知成分來看,該種含有沒食子酸、槲皮苷等成分,且化學(xué)成分含量得分較低。第2類凹脈、頂生、天峨、顯脈、弄崗、倒卵葉、檸檬黃、薄葉、中東、防普金花茶11個種,雖聚為一類,但由聚類圖可以看出,在這11種中,凹脈金花茶與其他金花茶在形態(tài)上存在較大的差異,故獨作一支,頂生、天峨金花茶;顯脈、東興、防普金花茶明顯各自聚為一類,這一結(jié)果與劉付永清基于SSC序列的金花茶親緣關(guān)系相一致。總體來看,該種群株型最大,葉面積居中,葉長寬比最小。從已知成分來看,該類群的金花茶多含有蘆丁、異槲皮苷、槲皮苷、牡荊素、芹菜素、金絲桃苷等化學(xué)成分,其中頂生、天峨、弄崗、檸檬黃、薄葉、中東總得分位于前10,總屬已知化學(xué)成分多且含量高種群。第3個類群隴瑞、龍州、細(xì)葉金花茶株型、葉長寬、葉面積與一、二類群相比較大。從已知成分來看,該類群的金花茶多含有牡荊素、金絲桃苷、槲皮苷,且這3種金花茶總得分均位于前十,屬優(yōu)質(zhì)種群。第4個類群淡黃、扶綏、毛瓣、四季、恩城、隆安、武鳴金花茶7種,株型相對較大,葉面積最大,葉長寬比相對較大。從已知成分來看,該類群的金花茶多含有牡荊素、蘆丁、異槲皮苷、槲皮苷、沒食子酸、木犀草素、染料木苷、水楊酸,其中扶綏、隆安化學(xué)成分含量排名較高,總屬已知化學(xué)成分種類多但含量較低種群。根據(jù)成分差異和遺傳背景獲得的種間親緣關(guān)系具有一定的差異性,主要考慮化學(xué)成分為基因表達(dá)的產(chǎn)物,可以隨氣候、地域、溫度、海拔等環(huán)境因素而產(chǎn)生變化,而基因所表達(dá)的親緣關(guān)系由遺傳因素決定,因此二者在一定程度上存在不一致性。由上可見,就表型性狀和化學(xué)成分來看,每個種群都有其各自的特征,可以幫助對金花茶進行鑒別使用。由于各個種所分布的產(chǎn)地比較廣泛,并不具有一定的特征,所以不能用作判斷品種差異和親緣關(guān)系的依據(jù)。綜合以上,22個金花茶種間存在較大差異,表型性狀和化學(xué)成分差異可以作為判斷其親緣關(guān)系的重要依據(jù),實際生產(chǎn)中可根據(jù)以上進行種質(zhì)分類和篩選應(yīng)用。
利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突
[1] 洪永輝,陳天增, 林能慶. 金花茶種質(zhì)資源收集保存與評價 [J]. 防護林科技, 2020(3): 75-78.
[2] 洪永輝, 陳天增, 王如均, 等. 金花茶組植物品種選擇與評價 [J]. 林業(yè)勘察設(shè)計, 2018, 38(2): 1-7.
[3] 王坤, 黃曉露, 梁曉靜, 等. 11種金花茶組植物葉片活性成分含量對比 [J]. 經(jīng)濟林研究, 2018, 36(1): 110-114.
[4] 張宏達(dá), 任善湘. 中國植物志(第49卷第3分冊)[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 1998: 103-112.
[5] FU L K, JIN J M. China plant red data book-rare and endanger red plants: Volume 1 [M]. Beijing: Science Press, 1992.
[6] 王梓靈, 郭瑜婕, 朱蕓蕓, 等. 金花茶有效部位抑制表皮生長因子受體(EGFR)抗非小細(xì)胞肺癌的作用機制研究 [J]. 中國中藥雜志, 2021, 46(20): 5362-5371.
[7] 龔雯, 唐婕, 韋雅淵, 等. 金花茶多糖分離純化、結(jié)構(gòu)表征及其體外抗氧化性 [J]. 食品與機械, 2021, 37(6): 184-190.
[8] 龔雯, 唐婕, 韋雅淵, 等. 金花茶多糖的體外消化及酵解特性研究 [J]. 食品工業(yè)科技, 2021, 42(24): 31-39.
[9] 秦健峰, 蘇梓霞, 郝二偉, 等. 善清金花茶對高脂血癥小鼠的降脂作用 [J]. 現(xiàn)代食品科技, 2021, 37(8): 30-35.
[10] 程傳景, 叢龍飛, 李振強, 等. 金花茶葉中沖山茶苷的篩查、制備及抗腫瘤活性考察 [J]. 天津中醫(yī)藥, 2020, 37(12): 1425-1430.
[11] 陳瑤, 龔蘇曉, 徐旭, 等. 金花茶化學(xué)成分和藥理作用研究進展[J]. 藥物評價研究, 2022, 45(3): 575-582.
[12] 劉夢舒, 張力圖. 金花茶不同部位提取物化學(xué)成分、提取工藝、抗腫瘤作用研究進展 [J]. 中成藥, 2018, 40(5): 1135-1138.
[13] 喻軍. 金花茶葉多酚類化合物分析研究 [D]. 南寧: 廣西中醫(yī)藥大學(xué), 2017.
[14] 周潔潔. 長柱金花茶化學(xué)成分及總黃酮提取分離工藝的研究 [D]. 南寧: 廣西中醫(yī)藥大學(xué), 2016.
[15] 周潔潔, 莫建光, 陳秋虹, 等. 長柱金花茶化學(xué)成分研究 [J]. 廣西科學(xué), 2015, 22(6): 637-640.
[16] 趙孟良, 王麗慧, 任延靖, 等. 257份菊芋種質(zhì)資源表型性狀的遺傳多樣性 [J]. 作物學(xué)報, 2020, 46(5): 712-725.
[17] 劉付永清. 基于葉綠體SSC序列的金花茶植物系統(tǒng)發(fā)育研究 [D]. 桂林: 廣西師范大學(xué), 2015.
Analysis of UPLC fingerprint and genetic relationships of different Sect.
GAO Hui1, 2, 3, HE Qui-mei2, Bai Yan-yuan2, 4, LI Yao-yan2, 4, YAN Guo-yue2, 4, YAO Han-ya2, TIAN Liang1,3, LIU Bo1,3, SU Hong-xin3, BORJIGIDAI Almaz1,3, XIE Yang-jiao2, 4
1. Key Laboratory of Ethnic Medicine, Ministry of Education, Central University for Nationalities, Beijing 100081, China 2. Guangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanning 530001, China 3. Beibu Gulf Key Laboratory of Environmental Evolution and Resource Utilization , Ministry of Education, Nanning Normal University, Nanning 530001, China 4. Guangxi Small Highland of Zhuang Medicine and Medical Care Combined Talents, Nanning 530200, China
To establish of UPLC fingerprints of different kinds of,and analyze the genetic relationship combined with its phenotypic characteristics and chemical composition differences, so as to provide the basis for the classification and application ofvarieties.The fingerprints of 22 batches ofwere established by UPLC gradient elution, and the similarity evaluation of the UPLC fingerprints ofmedicinal materials was carried out using the traditional Chinese medicine chromatographic fingerprint similarity evaluation system (2012 version), and SPSS24.0 software was used for clustering and PCA analysis.Three common chromatographic peaks were selected, and 11 known chemical constituents were identified. The common peak similarity of different kinds ofranged from 0.247—0.740. Principal component analysis screened out GNG, GNMH, GLZ, GLR, GXY, GLA, GDS, GTE, GZD, GMB of 10 kinds ofwith relatively high chemical components. The results of cluster analysis showed that the subcategories ofwere clustered into one group alone. GAM, GDS, GTE, GXM, GNG, GDLY, GNMH, GBY, GZD, GDX, GFP were clustered into one group. GLR, GLZYZ and GXY clustered into one group. GDH, GFS, GMB, GSJ, GEC, GLA, GWM were clustered into one group.There are many kinds ofand the chemical components contained in different kinds ofare quite different. According to the phenotypic characteristics and the composition differences, their interspecies genetic relationship can be basically obtained.
Chi; Sect.Chang Tax. Gen. Camellia; fingerprint;genetic relationship; gallic acid; chlorogenic acid; vitexin; rutin; hyperoside; isoquercitrin; genistein; salicylic acid; quercitrin; luteolin; apigenin
R286.2
A
0253 - 2670(2022)13 - 4119 - 06
10.7501/j.issn.0253-2670.2022.13.025
2021-12-06
廣西創(chuàng)新驅(qū)動發(fā)展專項資金項目(桂科AA18118049-7);廣西自然科學(xué)基金重點項目(2020GXNSFDA297029);中藥學(xué)廣西一流學(xué)科(桂教科研[2018]12號);民族醫(yī)藥教育部重點實驗室自主課題資助(KLEM-ZZ201805);北部灣環(huán)境演變與資源利用教育部重點實驗室(南寧師范大學(xué))開放基金資助項目(NNNU-KLOP2003);廣西中醫(yī)藥大學(xué)研究生創(chuàng)新課題(YCXJ2021029)
高 慧,博士研究生,研究方向為民族藥資源保護與可持續(xù)發(fā)展。E-mail: 804204252@qq.com
謝陽姣,研究員,碩士生導(dǎo)師,研究方向為中藥、民族藥資源開發(fā)與利用。E-mail: xieyangjiao@163.com
阿里穆斯,教授,博士生導(dǎo)師,研究方向為民族藥資源保護與可持續(xù)發(fā)展。E-mail: almaz_b@muc.edu.cn
[責(zé)任編輯 時圣明]