小檗堿通過激活Nrf2-HO-1/GPX4 通路抑制小鼠海馬神經(jīng)元HT22細(xì)胞的鐵死亡

細(xì)胞死亡的類型根據(jù)細(xì)胞形態(tài)可以分為3種：自噬、凋亡以及細(xì)胞壞死。鐵死亡是區(qū)別于以上3種細(xì)胞形態(tài)的新的細(xì)胞形態(tài)，它與鐵離子水平相關(guān)，是由于脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)生而發(fā)生的。它的實(shí)質(zhì)是氧化損傷，即主要為依賴鐵離子的脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)生過量并積累，隨后產(chǎn)生線粒體變化。線粒體功能障礙和異常的能量代謝是許多急性和慢性神經(jīng)退行性疾病的常見上游介質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，多種疾病與鐵死亡的關(guān)聯(lián)緊密，如阿爾茨海默病、帕金森病等神經(jīng)退行性疾病。

神經(jīng)退行性疾病是由神經(jīng)元結(jié)構(gòu)和功能的漸進(jìn)性喪失或神經(jīng)元死亡引起的疾病。大多數(shù)神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，但越來越多的證據(jù)表明，神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)制與興奮毒素和氧化應(yīng)激有關(guān)。HO-1是一種應(yīng)激蛋白，參與抗氧化損傷的防御機(jī)制，其激活是許多神經(jīng)退行性疾病的共同特征。HO-1蛋白的轉(zhuǎn)錄受Nrf2調(diào)控?？寡趸鞍缀丸F代謝蛋白等與鐵中毒有關(guān)的重要蛋白可提高Nrf2蛋白水平，促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄。研究表明，當(dāng)Nrf2及其靶基因被敲除時(shí)，Erastin或sorafenib會(huì)被激活，從而導(dǎo)致人肝細(xì)胞癌發(fā)生鐵死亡。

為了更好的理解鐵死亡在神經(jīng)退行性疾病中的機(jī)制，我們研究了小檗堿在Erastin誘導(dǎo)HT22細(xì)胞鐵死亡中的作用。小檗堿（BBR）是一種從天然植物黃連的根莖中提取出生物堿，含有抗氧化應(yīng)激、降血糖、抗炎等藥理作用，對(duì)包括腦缺血、多發(fā)性硬化癥、各種神經(jīng)退行性疾病在內(nèi)的多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病具有神經(jīng)保護(hù)作用。研究證實(shí)，Aβ能夠?qū)е略ｑR神經(jīng)元的損傷和凋亡，而小檗堿能夠?qū)勾朔N損傷和凋亡。然而，對(duì)于小檗堿確切的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制還不夠清楚。小檗堿的神經(jīng)保護(hù)作用與鐵死亡之間是否存在關(guān)聯(lián)尚未有相關(guān)研究。因此本實(shí)驗(yàn)將小檗堿用于誘導(dǎo)鐵死亡后的HT22小鼠海馬細(xì)胞，觀察其保護(hù)作用，并進(jìn)一步探究其可能的作用機(jī)制，為阿爾茨海默病的治療提供新的思路和靶點(diǎn)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 Erastin、小檗堿（MCE）；細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8（CCK-8）、HDCFH-DA溶液（非標(biāo)記性的氧化敏感的熒光探針）（碧云天）；DAPI（Thermo fishe）；HO-1、GPX4、Nrf2和β-actin抗體（abcam）；BCA 試劑盒（碧云天）；TRIzol試劑盒購（Invitrogen）；兩步法逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Vazyme）；SYBR qPCR試劑盒（Vazyme）。

1.1.2 細(xì)胞 HT22小鼠海馬細(xì)胞（武漢賽諾普生命科技有限公司）由蚌埠醫(yī)學(xué)院科研中心凍存。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 將小鼠海馬細(xì)胞HT22放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，胎牛血清在培養(yǎng)基所占的比例為10%，并且同時(shí)加100 U/ml青霉素和100 mg/L鏈霉素于DMEM培養(yǎng)基中。傳代用到的胰蛋白酶溶液的體積分?jǐn)?shù)為0.25%，進(jìn)行消化傳代，比例約1∶2。

1.2.2 藥物配制及處理 將Erastin 溶于DMSO，使其配為100 μmol/L 的溶液，實(shí)驗(yàn)使用時(shí)的最終濃度為0.5 μmol/L。相同方法使小檗堿配為1 mmol/L的溶液，實(shí)驗(yàn)使用時(shí)的最終濃度為30 μmol/L、60 μmol/L。ML385配置成2μmol/L。將實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分，第1部分設(shè)置4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，分別為完全培養(yǎng)基組、Erastin組、Erastin+30 μmol/L BBR組、Erastin+60 μmol/L BBR組，小檗堿預(yù)處理2 h，再加入0.5 μmol/L Erastin誘導(dǎo)8 h后進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。第2部分設(shè)置4個(gè)實(shí)驗(yàn)組：對(duì)照組、Erastin模型組、Erastin+60 μmol/L BBR組、Erastin+60 μmol/L BBR+2 μmol/L ML385組，ML385預(yù)處理1 h，小檗堿預(yù)處理2 h，再加入0.5 μmol/L Erastin誘導(dǎo)8 h進(jìn)行后序驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 CCK-8 實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞存活率 96 孔板中種入7000個(gè)HT22細(xì)胞/孔，設(shè)置空白對(duì)照組（blank），正常對(duì)照組以及不同濃度的Erastin損傷模型組（0.05、0.1、0.5、1 μmol/L）作用細(xì)胞8 h。設(shè)置空白對(duì)照組，正常對(duì)照組，小檗堿（30、60 μmol/L）+0.5 μmol/L Erastin組，小檗堿預(yù)處理2 h，再加入Erastin作用8 h。隨后每孔加入10 μL CCK-8溶液，隨后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)30 min，每孔450 nm地方的吸光度數(shù)在酶標(biāo)儀上讀取。算出每組的細(xì)胞存活率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次。

H2DCFH-DA測定細(xì)胞內(nèi)ROS含量結(jié)果顯示，和對(duì)照組相較，Erastin損傷模型組細(xì)胞內(nèi)ROS含量增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。和Erastin損傷模型組相較，小檗堿組可以減弱Erastin損傷下細(xì)胞內(nèi)的ROS生成，60 μmol/L的小檗堿組的作用強(qiáng)于30 μmol/L組（圖4）。

1.2.4 DAPI染色檢測細(xì)胞凋亡水平 在24孔板里每孔種入5×10HT22細(xì)胞，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，隨后依次加入培養(yǎng)基、小檗堿預(yù)處理2 h后，0.5 μmol/L Erastin作用8 h，顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡情況并拍照后吸除上清液，再加入PBS洗2遍。每孔加入200 μL 4%多聚甲醛，避光孵育30 min 后吸除4%多聚甲醛，且加入PBS 洗2遍。每孔加入100 μl DAPI溶液，避光孵育10 min，吸除DAPI溶液，再加入PBS洗2遍。將熒光顯微鏡調(diào)整參數(shù)后拍攝圖片。最后分析各組結(jié)果。實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次。

1.2.5 菲羅嗪法檢測細(xì)胞內(nèi)活性鐵含量 按照上述藥物配制及處理的分組分別分別對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同處理后用胰酶消化以收集細(xì)胞，離心后取處理好的細(xì)胞，加入合適體積的RIAP裂解液在冰上裂解30 min，離心后提取細(xì)胞總蛋白。將上清液加入96孔板，并于每個(gè)加入上清液的孔里都加等體積的鹽酸，室溫放置30 min?？字刑砑予F探針后，室溫避光放置1 h。讀取562 nm處吸光度數(shù)在酶標(biāo)儀上。最后分析各組活性鐵含量的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次。

1.2.8 Western blot法檢測蛋白表達(dá) 胰酶消化收集細(xì)胞，離心后棄去上清液，添加進(jìn)去合適體積的RIAP裂解液在冰上裂解30 min，離心后以提取細(xì)胞總蛋白，根據(jù)BCA試劑盒，加入200 μL BCA溶液、19 μL NS和1 μL蛋白溶液，37°烘箱放置30 min，用酶標(biāo)儀測定570 nm處的吸光度，加入RIAP裂解液進(jìn)一步蛋白定量上清液，再添加5×SDS，95 ℃煮5 min。根據(jù)蛋白分子量配制不同濃度的分離膠，隨后通過十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離等量蛋白的蛋白樣品，用甲醇激活PVDF膜，隨后把蛋白轉(zhuǎn)換至PVDF膜，用快速封閉液處理30 min后，數(shù)遍洗滌后，添加進(jìn)去HO-1、GPX4、Nrf2、β-actin 抗體（按比例配制至所需濃度），4 ℃過夜，數(shù)遍洗滌后，加入二抗（按比例配制至所需濃度）并且在室溫放置2 h 30 min，數(shù)遍洗滌后，ECL法使PVDF膜顯影，曝光，以β-actin為內(nèi)參基因，分析各組結(jié)果。實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次。

夕陽無聲地穿窗而入。鵝黃的冷光蒙在林強(qiáng)信蠟灰的臉上，像古銅色的面具。林老板的手掌又粗又厚，像個(gè)飛機(jī)場，飛機(jī)落在上面，似乎也能握碎。

1.2.6 H2DCFH-DA檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）含量 在12孔板里種入約1×10/孔HT22細(xì)胞，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，隨后按照上述藥物配制及處理的分組分別進(jìn)行不同處理后吸除藥物，用無血清培養(yǎng)液清洗細(xì)胞2次，然后每孔添加進(jìn)去用不加血清的培養(yǎng)基稀釋至10 μmol/L的500 μL H2DCFH-DA溶液（非標(biāo)記性的氧化敏感的熒光探針），放置在培養(yǎng)箱里30 min，用無血清培養(yǎng)液清洗細(xì)胞2次，隨后將熒光顯微鏡調(diào)整參數(shù)后拍攝圖片，最后分析各組結(jié)果。實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次。

1.2.7 RNA提取及RT-qPCR法檢測mRNA表達(dá) 用胰酶消化以收集細(xì)胞，離心后棄去上清液，每孔加入1 mL Trizol裂解細(xì)胞5 min后放置在-80 ℃冰箱。按照RNA提取步驟提取RNA，檢測其濃度和純度后，按RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒的進(jìn)程逆轉(zhuǎn)錄；立即用于實(shí)驗(yàn)或-20 ℃保存。取稀釋后cDNA用實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒的進(jìn)程檢測細(xì)胞內(nèi)HO-1、GPX4、Nrf2的mRNA表達(dá)。融解曲線為：95 ℃15 s，60 ℃60 s，95 ℃15 s。所用PCR引物如下：ACSL4：Forward Primer：CCTGAGGGGCTTGAA ATTCAC，Reverse Primer：GTTGGTCTACTTGGAG GAACG；PTGS2：Forward Primer TGCACTATGGTT ACAAAAGCTGG，Reverse Primer TCAGGAAGCTC CTTATTTCCCTT；Nrf2：Forward Primer：CTCCTGG ACGGGACTATTGA，Reverse Primer:TGGGTCTCC GTAAATGGAAG；HO-1：Forward Primer：CACGCAT ATACCCGCTACCT，Reverse Primer：CCAGAGTGTT CATTCGAGCA；GPX4：Forward Primer：TGTGCATC CCGCGATGATT，Reverse Primer：CCCTGTACTTAT CCAGGCAGA。每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，運(yùn)用2的方法分析各組結(jié)果。實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次。

課堂結(jié)構(gòu)發(fā)生變革，學(xué)習(xí)與智能評(píng)測在前，教師依據(jù)課前評(píng)測分析，以學(xué)定教、分層教學(xué)，通過話題、小組討論、課堂精講等方式組織更加個(gè)性化的課堂教學(xué)在后。通過隨堂練習(xí)及評(píng)測系統(tǒng)，進(jìn)行實(shí)時(shí)測評(píng)、統(tǒng)計(jì)，快速分析與反饋學(xué)生的課堂學(xué)習(xí)效果，及時(shí)調(diào)整課堂教學(xué)進(jìn)度與內(nèi)容，體現(xiàn)了教師的教學(xué)機(jī)智，展示教師的教學(xué)藝術(shù)。[4]

菲羅嗪法檢測細(xì)胞內(nèi)活性鐵含量結(jié)果顯示，與對(duì)照組相較，Erastin損傷模型組里細(xì)胞內(nèi)活性鐵含量增加，為（68.34±4.16），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。和Erastin 損傷模型組相較，小檗堿組鐵含量降低為（38.98±3.85）（圖3）。

與正常組相比，0.5 μmol/L Erastin誘導(dǎo)8 h能明顯抑制細(xì)胞增殖（＜0.05），細(xì)胞存活率為（59±2.9）%，即在半數(shù)致死率IC附近（圖1A）。因此選取最佳濃度是0.5 μmol/L Erastin造模。為探究小檗堿對(duì)Erastin誘導(dǎo)鐵死亡的抑制作用，不同濃度小檗堿（30、60 μmol/L）預(yù)處理2 h后加入0.5 μmol/L Erastin，數(shù)據(jù)表明60 μmol/L小檗堿起到顯著的保護(hù)作用（＜0.05），細(xì)胞存活率為（82.21±7.35）%（圖1B）。

2 結(jié)果

2.1 小檗堿抑制Erastin誘導(dǎo)HT22細(xì)胞發(fā)生鐵死亡

1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)分析使用GraphPad Prism 8軟件，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示所有數(shù)據(jù)，兩組數(shù)據(jù)相較采取檢驗(yàn)分析，多組數(shù)據(jù)相較采取單因素方差分析（Oneway ANOVA），＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 小檗堿降低Erastin誘導(dǎo)的HT22細(xì)胞凋亡

接下來要說的是仿生學(xué)問題。正如前面所述，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)本質(zhì)上仍然只是一個(gè)數(shù)學(xué)模型，是將思維活動(dòng)簡化為一種數(shù)據(jù)/信息處理過程的結(jié)果，這種簡化不僅不符合認(rèn)知科學(xué)對(duì)于延展認(rèn)知乃至“泛”認(rèn)知的理論假設(shè)，也同腦科學(xué)的最新發(fā)現(xiàn)不完全吻合。盡管信息處理仍然是認(rèn)知科學(xué)的核心共識(shí)，但關(guān)于注意、記憶和行為控制方面的研究已經(jīng)逐漸偏離了經(jīng)典信息理論的框架。在人腦比較底層的對(duì)外界刺激的反映層面，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)能夠證實(shí)的情況較多，而在高級(jí)思維活動(dòng)如推理、概括等方面神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)就顯出不足。此外，人腦的神經(jīng)元體系本身也是一個(gè)不斷重建的結(jié)構(gòu)，每時(shí)每刻都不斷有神經(jīng)元死去和出生，神經(jīng)元之間的鏈接也在不斷改變，這一過程無法完全由現(xiàn)有模型復(fù)制出來。

2.3 小檗堿降低Erastin損傷HT22細(xì)胞內(nèi)活性鐵含量

訪談對(duì)象是西北民族大學(xué)2012級(jí)藏語言文學(xué)專業(yè)個(gè)別同學(xué)和2011級(jí)藏語言文學(xué)3班（師范類）部分同學(xué)，通過滾雪球的方式選擇了10位同學(xué)，由于訪談資料中有些問題涉及個(gè)人隱私，因此在訪談前，筆者首先與被訪者進(jìn)行了接觸，取得信任后才正式進(jìn)入到訪談階段，而且還利用了網(wǎng)絡(luò)聊天工具（QQ聊天平臺(tái)）進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)訪談，每位參與者在了解研究的性質(zhì)后自愿參加，能夠?qū)ψ约核值幕閼賾B(tài)度及對(duì)婚姻的認(rèn)識(shí)給予合理的解釋。訪談地點(diǎn)一般選在無人的教室或食堂內(nèi)，時(shí)間不定。訪談時(shí)若被訪者已有戀愛對(duì)象，則選擇其戀愛對(duì)象不在場，以免影響被訪者真實(shí)想法的表達(dá)。

DAPI染色前，普通顯微鏡觀察不同組細(xì)胞凋亡情況發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相較，Erastin損傷模型組里細(xì)胞凋亡明顯增加（＜0.05），同時(shí)，不同濃度的小檗堿均降低Erastin誘導(dǎo)的凋亡（圖2A）。DAPI染色后，熒光顯微鏡拍攝圖片并且統(tǒng)計(jì)各個(gè)組內(nèi)凋亡水平，結(jié)果顯示，0.5μmol/L Erastin誘導(dǎo)8 h凋亡率為（25.77±2.05）%，而60 μmol/L小檗堿保護(hù)后凋亡率為（10.72±1.93）%（圖2B）。

2.4 小檗堿降低Erastin損傷HT22細(xì)胞內(nèi)ROS含量

從主管部門的未來水權(quán)改革設(shè)想來看，似乎設(shè)想的所謂水權(quán)交易也不過是取水許可的交易，仍不是真正的水權(quán)交易，因?yàn)槿∷S可是一種暫時(shí)的行政許可，既不是產(chǎn)權(quán)，也有時(shí)效限制。

2.5 小檗堿影響Erastin損傷HT22細(xì)胞中Nrf2-HO-1/GPX4/ACSL4/PTGS2 mRNA表達(dá)

和對(duì)照組相較，Erastin組中表達(dá)量下調(diào)的有HO-1、GPX4、Nrf2 mRNA，表達(dá)量上調(diào)的有ACSL4、PTGS2 mRNA，而與Erastin組比較，Erastin+BBR組的HO-1、GPX4、Nrf2 mRNA 表達(dá)量增高，尤其是60 μmol/L小檗堿組；ACSL4、PTGS2 mRNA 表達(dá)量降低，尤其是60 μmol/L小檗堿組（＜0.05，圖5）。

2.6 小檗堿對(duì)Erastin 損傷HT22 細(xì)胞中Nrf2-HO-1/GPX4蛋白表達(dá)的影響

與對(duì)照組相較，Erastin組的Nrf2、HO-1、GPX4蛋白的表達(dá)量減少，而與Erastin 組比較，Erastin+BBR組的HO-1、GPX4與Nrf2蛋白的表達(dá)量增加，特別是60 μmol/L小檗堿組（＜0.05，圖6）。

“旅游、建設(shè)、發(fā)展”3個(gè)詞匯的占比較之其他高出許多，且近3年呈現(xiàn)逐年大幅增長的趨勢(shì)，說明歷史文化村鎮(zhèn)的建設(shè)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展受到專家的關(guān)注的程度越來越高。較之“資源保護(hù)”，“活化利用”在歷史文化村鎮(zhèn)保護(hù)工作中占比越來越大?！奥糜巍币辉~熱度居于首位，說明旅游成為歷史文化村鎮(zhèn)近年來發(fā)展的一個(gè)重要方向。

2.7 Nrf-2 抑制劑逆轉(zhuǎn)小檗堿對(duì)HT22細(xì)胞的保護(hù)作用

在60 μmol/L小檗堿的基礎(chǔ)上增加了Nrf2抑制劑組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Nrf2抑制劑ML385可以抑制Nrf2-HO-1/GPX4/通路的激活，并且使HT22細(xì)胞內(nèi)活性鐵含量和ROS含量增加，逆轉(zhuǎn)了小檗堿對(duì)HT22細(xì)胞的保護(hù)作用（＜0.05，圖7）。

3 討論

小檗堿具有抗炎、抗氧化、保護(hù)神經(jīng)等作用。小檗堿作為一種中藥單體臨床使用安全有效。研究證明其對(duì)慢性腦灌注不足大鼠的CBF降低和認(rèn)知功能障礙有良好的改善作用。本實(shí)驗(yàn)中，我們首先使用不同濃度的Erastin觀察對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)0.5 μmol/L Erastin顯著抑制HT22細(xì)胞增殖，而給與小檗堿保護(hù)后，Erastin抑制HT22細(xì)胞增殖作用降低。在細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中觀察到了同樣的結(jié)果。Stockwell等發(fā)現(xiàn)鐵死亡是一種新的死亡形式，與多種疾病密切相關(guān)。其中四個(gè)關(guān)鍵因素，鐵、PUFAs、氧氣、抗氧化劑的減少是誘發(fā)鐵死亡的必要因素。因此，我們檢測了藥物小檗堿處理后Erastin損傷HT22細(xì)胞內(nèi)活性鐵含量以及ROS的水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小檗堿能夠降低Erastin損傷HT22細(xì)胞內(nèi)活性鐵含量以及ROS水平。

GPX4 是鐵死亡標(biāo)志蛋白，鐵死亡發(fā)生時(shí)GPX4表達(dá)減少。長鏈酯酰輔酶A 合成酶家族（ACSLs）是負(fù)責(zé)機(jī)體內(nèi)脂肪代謝的關(guān)鍵酶，是代謝相關(guān)疾病的重要調(diào)控因子。近期研究發(fā)現(xiàn)ACSL4可以促進(jìn)花生四烯醇（AA）和腎上腺素醇的酯化生成PE，這一過程與鐵死亡密切相關(guān)。Cheng等的研究發(fā)現(xiàn)，ACSL4通過激活鐵死亡抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖。在鐵死亡過程中伴隨ACSL4表達(dá)增加，因此通常作為鐵死亡的標(biāo)志物。前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2（PTGS2），又稱環(huán)氧化酶2（COX-2），也是公認(rèn)的鐵死亡標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)表明，小檗堿降低Erastin誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞HT22的鐵死亡標(biāo)志物ACSL4、PTGS2的表達(dá)，增加GPX4的表達(dá)。以上結(jié)果說明小檗堿可以降低Erastin在HT22細(xì)胞中誘發(fā)的鐵死亡。這與關(guān)等人之前的研究，小檗堿緩解高糖狀態(tài)下足細(xì)胞發(fā)生鐵死亡一致。

Nrf2-HO-1/GPX4通路與抗氧化作用密切相關(guān)，轉(zhuǎn)錄因子Nrf2是抗氧化系統(tǒng)的主要調(diào)控因子，在介導(dǎo)鐵/金屬代謝、脂質(zhì)代謝和谷胱甘肽合成方面也發(fā)揮著關(guān)鍵作用，GPX4，and HO-1，受Nrf2調(diào)控，從而發(fā)揮抗氧化作用，以上因子都涉及鐵死亡的發(fā)生。本研究實(shí)驗(yàn)表明，小檗堿增高Nrf2-HO-1/GPX4通路相關(guān)基因與蛋白的表達(dá)，說明小檗堿能夠抑制HT22細(xì)胞鐵死亡，其機(jī)制可能與Nrf2-HO-1/GPX4信號(hào)通路的調(diào)節(jié)有關(guān)。為進(jìn)一步驗(yàn)證這一結(jié)論，又使用了Nrf2抑制劑來觀察對(duì)小檗堿保護(hù)作用的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Nrf2抑制劑可以抑制Nrf2-HO-1/GPX4通路的激活，并且增加了HT22細(xì)胞內(nèi)鐵離子和ROS含量。

(1) 由鋼管塔的模態(tài)分析可以看出,鋼管塔的上橫擔(dān)和地線橫擔(dān)容易發(fā)生扭轉(zhuǎn)變形,地線橫擔(dān)發(fā)生的變形尤為嚴(yán)重.

綜上所述，本研究結(jié)果證實(shí)了小檗堿對(duì)神經(jīng)元HT22細(xì)胞中Erastin誘導(dǎo)的鐵死亡具有明顯的抑制作用，而機(jī)制可能作用于Nrf2-HO-1/GPX4通路實(shí)現(xiàn)。