柴胡桂枝湯加減方聯(lián)合卡培他濱抑制三陰性乳腺癌裸鼠皮下移植瘤的生長：基于抑制IL-6/STAT3信號通路

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，根據(jù)全球癌癥統(tǒng)計(jì)，2020年乳腺癌發(fā)病率在新增癌癥病例中占11.7%，已超越肺癌成為全球癌癥發(fā)病率最高的癌種。三陰性乳腺癌（TNBC）是其中一種亞型，病理表現(xiàn)為雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）和人表皮生長因子受體2（HER2）均呈陰性，由于缺乏內(nèi)分泌治療和靶向治療的靶點(diǎn)，具有復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率高、惡性程度高、侵襲性強(qiáng)等特點(diǎn)。目前，手術(shù)和化療仍是TNBC患者最主要的治療方式，但化療耐藥、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及藥物不良反應(yīng)大大影響了其治療效果?？ㄅ嗨麨I是一種氟尿嘧啶類藥物，是臨床上治療腫瘤常用的化療藥物，有較好的抗腫瘤作用，但其不良反應(yīng)多，預(yù)后較差。中醫(yī)藥因增強(qiáng)免疫，抗癌效果好，副作用小的優(yōu)勢，在腫瘤的預(yù)防和治療中發(fā)揮著不可替代的作用。柴胡桂枝湯出自張仲景《傷寒論》，在治療乳腺癌方面具有良好的臨床療效。已有研究證實(shí)柴胡劑聯(lián)合化療藥物能有效的抑制乳腺癌細(xì)胞生長，促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡，然而柴胡桂枝湯聯(lián)合卡培他濱治療三陰性乳腺癌的機(jī)制研究尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。

IL-6/STAT3信號通路在炎癥、腫瘤疾病中發(fā)揮著重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)，抑制IL-6/STAT3信號通路可抑制多種惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。乳腺腫瘤微環(huán)境中的炎癥因子白細(xì)胞介素-6（IL-6）與受體結(jié)合后，引起轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）的磷酸化激活，并進(jìn)入細(xì)胞核，使癌癥驅(qū)動基因異常表達(dá)，造成“炎-癌”轉(zhuǎn)化，因此，IL-6/STAT3 信號通路可能是治療三陰性乳腺癌的重要靶標(biāo)。為了探究柴胡桂枝湯聯(lián)合卡培他濱對三陰性乳腺癌細(xì)胞生長及凋亡作用與IL-6/STAT3信號通路的相關(guān)性，本研究通過建立MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞裸鼠移植瘤模型，檢測IL-6、STAT3 mRNA的表達(dá)，及IL-6/STAT3信號通路相關(guān)蛋白IL-6、STAT3，磷酸化（p）-STAT3 及其下游促凋亡蛋白B 細(xì)胞淋巴瘤-2 相關(guān)X（Bax），抗凋亡蛋白B細(xì)胞淋巴瘤-2（Bcl-2），細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）表達(dá)的影響，討論其作用機(jī)制，為相關(guān)臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞株與動物

人三陰性乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231，購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究所。健康SPF級BALB/c-nu雌性裸鼠60只，4～5周齡，體質(zhì)量（18±2）g，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司，許可證號:SCXK（湘）2019-0004，經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心（許可證號:SYXK（渝）2018-0003）IVC級動物房飼養(yǎng)。標(biāo)準(zhǔn)裸鼠飼料，自由攝食和攝水，裸鼠適應(yīng)環(huán)境1 周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本研究動物實(shí)驗(yàn)獲得重慶醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)研究倫理委員會審查批準(zhǔn)。

（3）STA通過信道1（AP1使用的信道）向AP1發(fā)送802.11解除關(guān)聯(lián)信息，解除STA與AP1間的關(guān)聯(lián)。

1.2 藥物

柴胡桂枝湯加減方（CHGZD）：柴胡24 g，桂枝9 g，黃芩9 g，炙甘草6 g，清半夏15 g，白芍9 g，蒲公英12 g，夏枯草12 g，生麥芽12 g，預(yù)知子12 g，生姜9 g，大棗6枚。購于重慶醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房。中藥飲片經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥研究室何先元教授鑒定均為正品。加入10倍藥材質(zhì)量的水浸泡2 h，武火燒開后轉(zhuǎn)文火1 h，煎液用雙層紗布過濾，重新加水煎第2次，操作同前。把兩次煎液混合后加熱濃縮至含生藥量2 g/mL?？ㄅ嗨麨I片（希羅達(dá)），上海羅氏制藥有限公司生產(chǎn)，批號：H20073024。

1.4.5 ELISA檢測血清中細(xì)胞因子IL-6水平 用3%戊巴比妥鈉麻醉裸鼠后從眼眶取血，靜置30 min，再以3000 r/min離心20 min，取上層血清。參考試劑盒說明書，用ELISA檢測血清中IL-6水平。

1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑及儀器

特級胎牛血清、DMEM 高糖培養(yǎng)基（Vivacell）；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒、BCA蛋白濃度測試盒（碧云天）；HE染液、多聚甲醛固定液、磷酸化蛋白抑制劑（賽維爾）；小鼠白細(xì)胞介素6 ELISA 試劑盒（江蘇晶美）；RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和Real-time反應(yīng)試劑盒（Promega）；兔抗STAT3抗體、兔抗p-STAT3抗體（針對705位酪氨酸磷酸化位點(diǎn)）、兔抗GAPDH抗體（SAB）；兔抗IL-6抗體、兔抗Bax抗體、兔抗Bcl-2抗體、兔抗CyclinD1 抗體、山羊抗兔IgG（CST）；Realtime PCR 引物序列由北京擎科公司合成，見表1；Synergy HTX 全型自動酶標(biāo)儀（Thermo Fisher Scientific）；CFX96型Touch Real-time PCR儀（Bio-Rad）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 動物造模 用含10%胎牛血清DMEM完全培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)MDA-MB-231細(xì)胞（培養(yǎng)條件為5%CO、37 ℃）。收集對數(shù)生長期MDA-MB-231細(xì)胞，胰蛋白酶消化后用預(yù)冷的無血清培養(yǎng)基重懸制備成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度至4×10/mL，在超凈臺內(nèi)對60只裸鼠進(jìn)行接種。細(xì)胞吹打均勻后用1 mL空針將細(xì)胞懸液原位注射于裸鼠右側(cè)第4乳房墊下，每只0.1 mL。3～5 d后探查腫塊情況，以造模后第5天小鼠接種部位可觸摸到結(jié)節(jié)為造模成功標(biāo)準(zhǔn)。

模型對照組裸鼠出現(xiàn)體質(zhì)量明顯下降，攝食量減少，精神狀態(tài)較差，反應(yīng)遲鈍，活動量減少等虛弱狀態(tài)。柴胡桂枝湯加減方低劑量組和卡培他濱組出現(xiàn)不同程度的體質(zhì)量下降、攝食量減少等情況，整體狀態(tài)好于模型對照組。柴胡桂枝湯加減方中、高劑量組及聯(lián)合組飲食良好，精神狀態(tài)較好，反應(yīng)靈敏，體質(zhì)量有所增加。

1.4.3 觀察荷瘤鼠一般狀態(tài)、測瘤體積、稱瘤質(zhì)量并計(jì)算抑瘤率 給藥期間觀察荷瘤鼠的一般生長狀況，如飲食狀況、精神狀態(tài)、活動狀況以及腫瘤生長情況。腫瘤組織取出后，測瘤體積：用游標(biāo)卡尺分別測量瘤體的最長徑（a）和最短徑（b），依據(jù)公式：V=ab/2計(jì)算腫瘤體積，稱瘤質(zhì)量并按照公式計(jì)算抑瘤率，抑瘤率（%）=（對照組平均瘤質(zhì)量－給藥組平均瘤質(zhì)量）/對照組平均瘤質(zhì)量×100%。

1.4.2 分組及給藥 60只裸鼠全部成瘤，成瘤率100%。將60只荷瘤鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別是：模型對照組（MO），CHGZD低、中、高劑量組（CL，CM，CH），卡培他濱組（CP），聯(lián)合組（CH+CP）。待皮下移植瘤瘤體積達(dá)75～100 mm時(shí)開始給藥治療，給藥劑量根據(jù)《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》折算。成人體質(zhì)量按60 kg估算，成人向小鼠的用藥換算系數(shù)為9.01，每劑含生藥量141 g，以此換算出中藥低劑量組小鼠生藥用量為10.62 g/kg/d，相當(dāng)于成人等效劑量的一半，中藥中劑量組小鼠生藥用量為21.23 g/（kg·d），相當(dāng)于成人等效劑量，中藥高劑量組小鼠生藥用量為42.46 g/（kg·d），相當(dāng)于成人等效劑量的兩倍。成人卡培他濱的用藥劑量2 mg/d，換算出陽性藥物組小鼠卡培他濱每日用量為0.2 mg/kg體質(zhì)量。模型組給予等體積雙蒸水，各組按0.1 mL/10 g折算給藥體積。每組均連續(xù)給藥21 d。末次給藥后禁食過夜，3%戊巴比妥鈉麻醉下采血供血液生化檢測用，處死動物，迅速取出腫瘤組織，拍照稱質(zhì)量后切成約3 mm×5 mm×5 mm的瘤塊，大部分裝入凍存管，置于-80 ℃冰箱保存，另外一部分用4%多聚甲醛固定48 h后石蠟包埋。

1.4.4 蘇木素-伊紅（HE）染色觀察各組腫瘤組織病理學(xué)變化 將部分腫瘤組織置于4%多聚甲醛溶液中固定，石蠟包埋、切片，常規(guī)HE染色，切片脫水、透明、封片，顯微鏡觀察腫瘤組織細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)變化。

The aim of this study was to determine whether the interval time between preoperative neoadjuvant CRT and surgery affected the rates of pCR, perioperative surgical complications, sphincter-saving surgery, DFS and OS in locally advanced mid-or distal rectal cancer.

1.4.6 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time PCR）檢測各組腫瘤組織中IL-6、STAT3、Bax、Bcl-2和CyclinD1 mRNA的表達(dá) 取凍存腫瘤組織30 mg于RNA裂解液中，用組織勻漿器研磨組織成勻漿，提取總RNA，使用超微量分光光度計(jì)測量總RNA的純度和濃度。按照試劑盒說明書將上述提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，逆轉(zhuǎn)錄程序?yàn)橥嘶?5 ℃，5 min；延伸42 ℃，1 h；逆轉(zhuǎn)錄酶失活70 ℃，15 min。進(jìn)行PCR 擴(kuò)增反應(yīng)，擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火1 min，60 ℃延伸15 s，40個循環(huán)，于60～95 ℃生成溶解曲線，以GAPDH為內(nèi)參，采用2法計(jì)算。

與模型對照組比較，卡培他濱組、柴胡桂枝湯加減方低、中、高劑量組及聯(lián)合組IL-6、STAT3、Bcl-2 和CyclinD1 mRNA 顯著降低（＜0.05，＜0.01），Bax mRNA顯著升高（＜0.01）；與卡培他濱組比較，柴胡桂枝湯加減方低、中、高劑量組及聯(lián)合組IL-6、STAT3、Bcl-2和CyclinD1 mRNA顯著降低（＜0.05，＜0.01），柴胡桂枝湯加減方高劑量組及聯(lián)合組Bax mRNA顯著升高（＜0.01，表4）。

1.4.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 24.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析，隨后的兩兩比較采用LSD-檢驗(yàn)。＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

教學(xué)手段包括課本、演示文稿、講座、文章研讀、在線學(xué)習(xí)單元模塊、做項(xiàng)目、同學(xué)間進(jìn)行小組討論、在線參與班級討論并對至少兩位同學(xué)的發(fā)言進(jìn)行點(diǎn)評、回復(fù)等，還有案例分析。每周至少要就該門課投入九小時(shí)以上的學(xué)習(xí)時(shí)間。教學(xué)模式是以學(xué)生為中心的教師引領(lǐng)輔助型，充分發(fā)揮學(xué)生的主動性、責(zé)任心和創(chuàng)造力。要求學(xué)生每周登錄教學(xué)軟件（Canvas），完成在線學(xué)習(xí)任務(wù)并提交作業(yè),教師線上線下對學(xué)生的提問、討論和問題解決方案給出積極正面的反饋意見。

2 結(jié)果

2.1 對各組裸鼠一般情況的影響

莫穎寧（1975-），女，廣西柳州人，經(jīng)濟(jì)學(xué)博士，山東中醫(yī)藥大學(xué)副教授，研究方向：醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)與藥事管理。

2.2 對各組裸鼠腫瘤體積、皮下移植瘤瘤重及抑瘤率的影響

與模型對照組比較，柴胡桂枝湯加減方低、中、高劑量組，卡培他濱組及聯(lián)合組腫瘤體積與皮下移植瘤瘤質(zhì)量均降低（＜0.01）；與卡培他濱組比較，柴胡桂枝湯加減方低、中、高劑量組及聯(lián)合組腫瘤體積與皮下移植瘤瘤質(zhì)量均降低（＜0.01），柴胡桂枝湯加減方中、高劑量組及聯(lián)合組抑瘤率顯著升高（＜0.01），且柴胡桂枝湯加減方低劑量組、卡培他濱組、柴胡桂枝湯加減方中劑量組、柴胡桂枝湯加減方高劑量組、聯(lián)合組的腫瘤抑制率依次升高（圖1，表2）。

2.3 對各組裸鼠腫瘤組織病理形態(tài)的影響

模型對照組中，腫瘤組織細(xì)胞密集，形態(tài)各異，未見明顯腫瘤壞死灶。柴胡桂枝湯加減方低劑量組和模型對照組差別不大；中、高劑量組及聯(lián)合組腫瘤組織出現(xiàn)了不同程度的腫瘤細(xì)胞退變，腫瘤細(xì)胞密度明顯減少，并可見細(xì)胞核碎片，其中聯(lián)合組組腫瘤細(xì)胞退變變化最顯著；卡培他濱組也出現(xiàn)一定程度的腫瘤細(xì)胞退變，密度變?。▓D2）。

2.4 對各組裸鼠血清中IL-6水平的影響

與模型對照組相比，柴胡桂枝湯加減方各給藥組IL-6蛋白水平顯著降低（＜0.01），高劑量組及聯(lián)合組STAT3、p-STAT3、p-STAT3/STAT3、Bcl-2和Cyclin D1蛋白水平顯著降低（＜0.05，＜0.01），高劑量組及聯(lián)合組Bax 蛋白水平顯著升高（＜0.05）；與卡培他濱組相比，柴胡桂枝湯加減方各給藥組IL-6蛋白水平顯著降低（＜0.05，＜0.01），聯(lián)合組STAT3、p-STAT3、p-STAT3/STAT3、Bcl-2和Cyclin D1蛋白水平顯著降低（＜0.05，＜0.01），聯(lián)合組Bax蛋白水平顯著升高（＜0.05，圖3～5）。

2.5 對各組裸鼠腫瘤組織中IL-6、STAT3、Bax、Bcl-2和CyclinD1 mRNA表達(dá)的影響

1.4.7 Western blot檢測各組腫瘤組織中IL-6、STAT3、p-STAT3、Bax、Bcl-2和CyclinD1蛋白的相對表達(dá)水平快速剪取50 mg于-80 ℃凍存的瘤組織，加入含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液，置于研磨器中研磨組織成勻漿，4 ℃下以12 000 r/min離心10 min，提取組織總蛋白。BCA蛋白質(zhì)檢測試劑盒用于測量蛋白質(zhì)濃度。用10%SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠分離等量的蛋白質(zhì)，然后轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。TBST沖洗后用脫脂牛奶常溫封閉2 h，一抗4 ℃搖床過夜，加二抗常溫孵育2 h。通過ECL化學(xué)發(fā)光試劑檢測蛋白質(zhì)信號，并使用Image J軟件分析條帶灰度值，GAPDH作為內(nèi)參，計(jì)算各蛋白相對表達(dá)水平。

2.6 對各組裸鼠腫瘤組織中IL-6、STAT3、p-STAT3、p-STAT3/STAT3、Bax、Bcl-2和CyclinD1蛋白表達(dá)的影響

與模型對照組比較，柴胡桂枝湯加減方低劑量IL-6水平降低（＜0.05），卡培他濱組、柴胡桂枝湯加減方中、高劑量組及聯(lián)合組IL-6水平顯著降低（＜0.01）；與卡培他濱組比較，柴胡桂枝湯加減方低、中、高劑量組及聯(lián)合組IL-6水平顯著降低（＜0.01，表3）。

但無論如何必須尊重科學(xué)，因?yàn)樵诳茖W(xué)中也有可怕的“瘙癢”，人極為強(qiáng)烈地喜歡給科學(xué)“搔癢”，因此毫無辦法，需要這種科學(xué)，也需要這種評論，需要您所如此鄙視的“扳著指頭計(jì)算”，讓科學(xué)參與生活和“舒適的角落”的建造，讓生活坐在椅子上，但椅子只是一條腿而非全部四條腿都支撐在科學(xué)上。 那時(shí)，“世界的理智之光”就突然放出光芒，這光芒來自這種謙遜的、對人很溫和的科學(xué)……[2]494

3 討論

乳腺癌在中醫(yī)屬于“乳巖”“乳石癰”等范疇。在TNBC中，只有1/5的侵襲腫瘤類型表現(xiàn)出化療敏感性，而現(xiàn)代研究表明，中藥在逆轉(zhuǎn)腫瘤化療耐藥性、改善調(diào)養(yǎng)機(jī)體以及化療藥物所致的機(jī)體傷害、抑制乳腺癌的轉(zhuǎn)移和增殖，阻滯乳腺癌細(xì)胞周期以及誘導(dǎo)癌細(xì)胞發(fā)生凋亡方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢。柴胡桂枝湯原方由小柴胡湯和桂枝湯相加而成，不僅具有小柴胡湯和解少陽、疏肝解郁的作用，還兼具桂枝湯調(diào)和營衛(wèi)、氣血、陰陽的作用。本實(shí)驗(yàn)在原方的基礎(chǔ)上去人參避免補(bǔ)益太過，閉門留寇；加入蒲公英清熱解毒；夏枯草清肝瀉火；生麥芽消食健胃；預(yù)知子疏肝理氣，軟堅(jiān)散結(jié)，合為柴胡桂枝湯加減方，以加強(qiáng)其調(diào)和氣血，抗炎解毒及抗腫瘤的功效。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，在NACT中，應(yīng)用紫杉醇與（或）蒽環(huán)類藥物沒有實(shí)現(xiàn)P CR的HER2陰性乳腺癌患者，行卡培他濱輔助化療，可獲得理想療效，并且在安全性方面具備可控性，同時(shí)能夠使OS以及DFS得到大幅改善。因此，本研究將柴胡桂枝湯加減方與卡培他濱聯(lián)合，并研究其作用機(jī)制。

導(dǎo)游韓語教材的首要職能是滿足本土旅游市場需求，為地方社會培養(yǎng)合格的韓語導(dǎo)游人才。這就決定了該類教材要結(jié)合本土文化特點(diǎn)，收集真實(shí)、準(zhǔn)確的語料信息，融入更多具有代表性的本土文化元素，為學(xué)習(xí)者提供真實(shí)的語言環(huán)境，使之成為能夠彰顯地域文化的優(yōu)秀本土教材，從而強(qiáng)化學(xué)生對本土文化知識的儲備，激發(fā)其傳播本土文化的熱情。

本研究結(jié)果表明，中藥組和聯(lián)合組乳腺癌荷瘤裸鼠在進(jìn)食狀況，精神狀態(tài)和活動量上均好于模型對照組，體質(zhì)量也有所增加；與模型對照組比較，柴胡桂枝湯加減方低、中、高劑量組，卡培他濱組及聯(lián)合組腫瘤體積與皮下移植瘤瘤重均降低；此外，柴胡桂枝湯加減方低劑量組、卡培他濱組、柴胡桂枝湯加減方中劑量組、柴胡桂枝湯加減方高劑量組、聯(lián)合組的腫瘤抑制率依次升高。腫瘤組織病理學(xué)顯示，柴胡桂枝湯中、高劑量組及聯(lián)合組腫瘤組織出現(xiàn)了不同程度的腫瘤細(xì)胞退變，腫瘤細(xì)胞密度明顯減少，并可見細(xì)胞核碎片，其中聯(lián)合組組腫瘤細(xì)胞退變變化最顯著，表明柴胡桂枝湯加減方能抑制腫瘤的生長，與卡培他濱聯(lián)用，具有協(xié)同抗腫瘤的作用，效果更佳。

L-6/STAT3信號通路在炎癥、腫瘤疾病中發(fā)揮著重要作用。IL-6是一種炎癥因子，主要作用為誘導(dǎo)T、B細(xì)胞的分化及促進(jìn)造血功能等，但I(xiàn)L-6亦可抑制免疫系統(tǒng)，刺激腫瘤細(xì)胞新生血管的形成，參與了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。IL-6促使腫瘤發(fā)生發(fā)展最主要的方式是激活STAT3表達(dá)，STAT3通常以非活化形式存在于細(xì)胞質(zhì)中，當(dāng)細(xì)胞受到刺激時(shí)，IL-6等炎性因子可通過與細(xì)胞膜受體結(jié)合，作用于gp130蛋白，激活非受體酪氨酸激酶（JAK），進(jìn)而磷酸化修飾STAT3 蛋白分子；p-STAT3以二聚體形式轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，調(diào)控癌基因表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)細(xì)胞受到異常的信號刺激下，STAT3的酪氨酸基團(tuán)被激活成P-STAT3，P-STAT3離開受體通過分子間的SH2區(qū)與酪氨酸磷酸化位點(diǎn)Y705的相互作用，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)相互兩兩結(jié)合形成二聚體，隨后P-STAT3蛋白二聚體迅速轉(zhuǎn)位入核，結(jié)合并誘導(dǎo)與細(xì)胞凋亡等密切相關(guān)的下游基因異常表達(dá)。IL-6/STAT3信號通路與肺癌、乳腺癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)，IL-6介導(dǎo)的STAT3活化后能夠明顯上調(diào)惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、分化，抑制Bcl-xl、Survivin、CyclinD1等細(xì)胞凋亡基因的表達(dá)，發(fā)揮抗細(xì)胞凋亡的生物學(xué)作用。Bax、Bcl-2、CyclinD1是近年來研究發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞凋亡進(jìn)程明顯相關(guān)的基因，其中Bax發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用，Bcl-2和CyclinD1發(fā)揮抗細(xì)胞凋亡的作用。本研究結(jié)果顯示，與模型對照組相比，中藥組和聯(lián)合組腫瘤組織IL-6、STAT3 mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯降低（＜0.05，＜0.01），其中p-STAT3/STAT3表達(dá)水平的降低說明柴胡桂枝湯能夠降低三陰性乳腺癌裸鼠磷酸化STAT3的表達(dá)。其下游基因Bcl-2和CyclinD1 mRNA和蛋白表達(dá)在中、高劑量組及聯(lián)合組中顯著降低（＜0.01），Bax mRNA和蛋白表達(dá)在高劑量組及聯(lián)合組中顯著升高（＜0.01），這可能與藥物的量效關(guān)系相關(guān)，此外，細(xì)胞凋亡同時(shí)受NF-kB等多個信號通路調(diào)節(jié)，藥物低濃度時(shí)Bcl-2、CyclinD1和Bax沒有明顯改變還可能與其他信號通路調(diào)節(jié)相關(guān)。這提示柴胡桂枝湯加減方聯(lián)合卡培他濱可以通過調(diào)節(jié)IL-6/STAT3信號通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞生長。

綜上所述，柴胡桂枝湯加減方與卡培他濱聯(lián)用可明顯抑制三陰性乳腺癌裸鼠體內(nèi)腫瘤的生長，其作用機(jī)制可能為抑制IL-6/STAT3信號通路，調(diào)控Bax、Bcl-2 和CyclinD1基因表達(dá)抑制細(xì)胞的增殖和分化，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。這為臨床上采用中藥復(fù)方治療三陰性乳腺癌更好地提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為中西醫(yī)結(jié)合防治惡性腫瘤提供新思路、新方法。