變應(yīng)性鼻炎患兒血清IL-33，ST2水平及IL-33基因rs3939286 G/A位點(diǎn)多態(tài)性與疾病程度相關(guān)性分析

林李娜，何 微，劉國(guó)棟，凌秀婷，王小青，梁玉玲，王晶晶，梁丕鳳

（深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院 a.全科門診；b.檢驗(yàn)科，廣東深圳 518109）

變應(yīng)性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是機(jī)體接觸變應(yīng)原后主要由免疫球蛋白E（(immunoglobulin E，IgE）介導(dǎo)所引起的一種鼻黏膜非感染性炎性疾病[1-2]。有研究表明，AR是由基因與環(huán)境互相作用而誘發(fā)的一種多因素疾病，其中基因多態(tài)性在AR發(fā)病中發(fā)揮了重要的作用[3]。白細(xì)胞介素-33（interleukin-33，IL-33）是最新發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞調(diào)控因子，多種組織及細(xì)胞中廣泛存在。同時(shí)有研究表明，IL-33基因多個(gè)位點(diǎn)存在多態(tài)性，與過敏性、自身免疫性及多種炎性等疾病的發(fā)生有關(guān)[4-6]。特異性受體腫瘤發(fā)生抑制蛋白2（specific receptor suppression of tumorigenicity 2，ST2）是IL-33的一種特異性跨膜受體，主要存在于輔助型T細(xì)胞2(T helper 2 cell, Th2)、肥大細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞中，與 IL-33 結(jié)合后可導(dǎo)致細(xì)胞活化，從而參與過敏性和自身免疫性等多種疾病的發(fā)生與發(fā)展[7-9]。AR患者血清IL-33水平表達(dá)情況已見少數(shù)報(bào)道[10]，但其基因多態(tài)性在AR發(fā)病中的作用機(jī)制及與IL-33水平的相關(guān)性未見報(bào)道。為此，本研究對(duì)AR患兒和健康兒童IL-33及ST2水平及IL-33基因rs3939286G/A位點(diǎn)SNP與疾病程度進(jìn)行了對(duì)比分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2020年3月～2021年6月深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院AR確診患兒135例作為AR組，年齡5～12歲，平均年齡7.16±2.39歲；其中男性79例，女性56例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①AR患兒均符合《兒童過敏性鼻炎診療-臨床實(shí)踐指南》[11]診斷標(biāo)準(zhǔn)，并根據(jù)病情程度分為輕度AR患兒（n=56）和中-重度AR患兒（n=79）；②患兒及家屬均知情同意；③變應(yīng)原點(diǎn)刺實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性或特異性IgE陽(yáng)性者；④1個(gè)月以上未服抗組胺、激素等藥物者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有其它鼻部疾病者；②伴有嚴(yán)重實(shí)質(zhì)器官疾病者；③伴有其它免疫系統(tǒng)疾病者；④不自愿參與者。同時(shí)選取體檢健康兒童116例作為對(duì)照組，年齡4～13歲，平均年齡6.85±2.78歲，體檢均未見明顯異常；其中男性69例，女性47例。確保兩組的年齡、男女人數(shù)比例等一般性資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑 IL-33和ST2酶聯(lián)免疫試劑盒（上海江萊生物科技有限公司），AE275酶聯(lián)免疫分析儀（深圳市愛康生物科技有限公司），脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）全血基因組提取試劑盒（深圳亞能生物科技有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 IL-33和ST2水平測(cè)定：采集2.0～3.0ml不抗凝靜脈血，室溫30min后分離血清，3 500r/min離心5min，采用酶聯(lián)免疫吸附法（(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）對(duì)IL-33和ST2水平檢測(cè)。所有操作按儀器和試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.2 DNA提?。撼槿?.0～3.0ml乙二胺四乙酸二鉀（ethylenediamine tetraacetic acid dipotassium，EDTA-2K）抗凝靜脈全血，運(yùn)用DNA提取試劑盒提取全血基因組DNA，并將合格的DNA提取物儲(chǔ)于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 IL-33基因rs3939286 G/A位點(diǎn)SNP分析：利用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性-聚合酶鏈反應(yīng)（restriction fragment length polymor-phism-polymerase chain reaction，RFlP-PCR）法對(duì)IL-33基因rs3939286 G/A位點(diǎn)SNP進(jìn)行分析，具體操作參照文獻(xiàn)[5, 12]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS20.0軟件。計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)；遺傳平衡采用Hardy-Weinberg檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組IL-33和ST2水平比較 AR組IL-33和ST2水平分別為251.67±39.15pg/ml, 5.23±0.29pg/ml,明顯高于對(duì)照組（108.24±20.63pg/ml，2.06±0.11 pg/ml），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.3416, 8.0197，P=0.0295, 0.0273）。

2.2 不同程度AR患兒IL-33和ST2水平比較 中-重度AR患兒IL-33和ST2水平分別為374.95±58.32pg/ml，7.98±0.54pg/ml，明顯高于輕度AR患兒（164.28±30.37pg/ml，3.28±0.17pg/ml），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.6027，8.3150，P=0.0274，0.0251）。

2.3 電泳圖 見圖1。AR組和對(duì)照組IL-33基因rs3939286 G/A位點(diǎn)SNP均出現(xiàn)GG，GA和AA三種基因型，經(jīng)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.203 8，P=0.065 4），表明抽樣具有樣本代表性。

圖1 IL-33基因rs3939286 G/A位點(diǎn)電泳圖

2.4 AR組與對(duì)照組、不同程度AR患兒IL-33基因rs3939286G/A位點(diǎn)SNP比較 見表1。AR組IL-33基因rs3939286 G/A位點(diǎn)AA基因型和A等位基因頻率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。中-重度AR患兒IL-33基因rs3939286 G/A位點(diǎn)AA基因型和A等位基因頻率明顯高于輕度AR患兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 兩組及不同程度IL-33基因rs3939286 G/A位點(diǎn)SNP比較 [n（%）]

2.5 不同基因型AR患兒IL-33水平比較 AA基因型AR患兒IL-33水平（303.12±41.60pg/ml）明顯高于AG基因型（214.38±33.15pg/ml），而AG基因型明顯高于GG基因型（129.06±23.78pg/ml），不同基因型之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.505 4，P=0.039 4）。

3 討論

變應(yīng)性鼻炎（AR）是兒童最常見的過敏性疾病之一，不僅出現(xiàn)噴嚏、鼻涕及鼻塞等癥狀，還常伴有頭痛、惡心及記憶力減退，且治愈后若再次接觸過敏原后易引起復(fù)發(fā)，嚴(yán)重影響學(xué)習(xí)，若癥狀控制不佳還可導(dǎo)致睡眠障礙和哮喘，嚴(yán)重影響患兒身體健康和生活質(zhì)量[13-14]。隨著大氣污染、SO2濃度增高、飲食結(jié)構(gòu)及生活方式的改變，AR 發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。有研究表明，工業(yè)化國(guó)家兒童AR發(fā)病率可高達(dá)40%[15]，但AR發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，目前尚未完全明確，且過敏原種類繁多，對(duì)AR預(yù)防和治療造成很大困難。因此，探索AR發(fā)病機(jī)制對(duì)AR的預(yù)防和治療具有重要的指導(dǎo)意義。

有研究表明，輔助性T細(xì)胞1/輔助性T細(xì)胞2（helper T cell 1/helper T cell 2，Th1/Th2）比例失衡引起細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)平衡失調(diào)是導(dǎo)致AR患兒發(fā)生和發(fā)展的重要因素之一。IL-33是一種具有多種生物學(xué)效應(yīng)的細(xì)胞調(diào)控因子，一方面可通過與ST2受體結(jié)合，打破Th1/Th2比例平衡，增強(qiáng)效應(yīng)Th2細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)地位，導(dǎo)致IL-4，IL-5及IL-13等細(xì)胞因子分泌增加。另一方面可促進(jìn)肥大細(xì)胞脫顆粒釋放IL-4，IL-5及IL-13，從而在哮喘、AR，炎性腸病、糖尿病、自身免疫性疾病、腦炎及心腦血管等多種疾病中發(fā)揮重要的作用[9，16-18]。本研究結(jié)果顯示，AR患兒IL-33和ST2水平比健康兒童明顯升高，且以中-重度AR患兒升高更為明顯（P＞ 0.05），與有關(guān)報(bào)道基本一致[10]，這說明IL-33和ST2可能參與AR的發(fā)生和進(jìn)程，這可能與IL-33通過IL-33/ST2信號(hào)通路活化核因子κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB），促進(jìn)炎性細(xì)胞增殖、活化及脫顆粒釋放Th2炎性細(xì)胞因子，誘導(dǎo)鼻黏膜中杯狀細(xì)胞的不可逆性增生和慢性炎癥等有關(guān)。此外，還可能與IL-4和IL-5促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞表達(dá)有關(guān)[9，17，19]。

AR病因和發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，至今尚未完全闡明。但有研究表明，AR患兒具有特應(yīng)性體質(zhì)，有家族聚集性，是由遺傳、免疫及環(huán)境等多種因素共同作用所導(dǎo)致的一種疾病，其中遺傳基因多態(tài)性在AR的發(fā)病中發(fā)揮了重要的作用，已有研究發(fā)現(xiàn)多種基因突變與AR發(fā)生和進(jìn)展有關(guān)[20-21]。IL-33是最新發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞調(diào)控因子，其基因多個(gè)位點(diǎn)存在多態(tài)性，與過敏性、自身免疫性及炎性等疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)[4-6]。本研究結(jié)果顯示，AR患兒IL-33基因rs3939286 G/A位點(diǎn)AA基因型和A等位基因頻率比健康兒童明顯升高，且以中-重度AR患兒升高更為突出（P＜ 0.05），這表明AR發(fā)生和進(jìn)展可能與IL-33基因rs3939286 G/A位點(diǎn)多態(tài)性有關(guān)，其中AA基因型可能與AR發(fā)病和疾病程度有密切關(guān)系。此外，不同IL-33基因rs3939286 G/A基因型AR患兒IL-33水平存在很大差異（P＜ 0.05），其中以AA基因型AR患兒含量最高，這說明IL-33基因rs3939286 G/A位點(diǎn)多態(tài)性可能是通過影響IL-33水平而在AR發(fā)病中發(fā)揮作用的，但具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，AR患兒血清IL-33和ST2水平明顯升高，與疾病嚴(yán)重程度有關(guān)。同時(shí)AR患兒IL-33基因rs3939286 G/A位點(diǎn)呈多態(tài)性，其中AA基因型和等位基因頻率升高明顯，以中-重度AR升高更為突出，且不同基因型IL-33水平存在差異，可能與AR的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系。