冠心病患者血清VASP和PAPP-A的表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈病變程度的相關(guān)性研究

李 歡，焦峰軍，蘇顏平（咸陽(yáng)市第一人民醫(yī)院.心內(nèi)科；.藥劑科，陜西咸陽(yáng) 712000）

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。╟oronary heart disease, CHD）是一種由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化引發(fā)血管管腔狹窄或閉塞等，從而導(dǎo)致心肌缺血缺氧或壞死的心臟疾病[1]，CHD極易引發(fā)急性冠狀動(dòng)脈事件，是威脅人類生命健康的主要心血管疾病之一，且具有較高的致殘率和致死率[2]。因此，對(duì)冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度早期診斷和評(píng)估，幫助臨床篩選出高風(fēng)險(xiǎn)患者，及早給予針對(duì)性的干預(yù)和診治，對(duì)預(yù)防急性心血管事件的發(fā)生、提高患者生活質(zhì)量和延長(zhǎng)生命具有至關(guān)重要的意義。既往研究[3]表明，血管擴(kuò)張刺激磷蛋白（vasodilator stimulated phosphoprotein, VASP）是一種血小板細(xì)胞骨架蛋白，與血小板的聚集程度、血管內(nèi)皮細(xì)胞及脂肪細(xì)胞表型的變化等均密切相關(guān)，可影響CHD的形成和進(jìn)展。妊娠相關(guān)血漿蛋白A（pregnancy associated plasma protein-A, PAPP-A）為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊所產(chǎn)生的金屬螯合蛋白酶，為斑塊不穩(wěn)定的標(biāo)志物之一，可能參與了CHD的發(fā)生發(fā)展[4]。然而兩者與CHD患者冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度是否有關(guān)，目前鮮有報(bào)道。故本研究旨在探究CHD患者血清VASP和PAPP-A的表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度的關(guān)系，為臨床及早發(fā)現(xiàn)及早診治提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 納入2017年12月～2019年12月期間咸陽(yáng)市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科收治的200例CHD患者作為研究對(duì)象，其中穩(wěn)定性心絞痛（stable angina pectoris, SAP）65例、不穩(wěn)定性心絞痛（unstable angina pectoris, UAP）74例、急性心肌梗死（acute myocardial infarction, AMI）61例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①參照歐洲心臟病學(xué)會(huì)（European Society of Cardiology,ESC）發(fā)布的指南中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，并結(jié)合冠狀動(dòng)脈造影（coronary arteriography, CAG）確診為CHD患者；②無(wú)CHD以外的其他心血管系統(tǒng)疾?。虎劢跓o(wú)大手術(shù)史或嚴(yán)重創(chuàng)傷。排除標(biāo)準(zhǔn)：①并發(fā)嚴(yán)重急慢性感染或自身免疫系統(tǒng)疾病；②妊娠或哺乳期女性；③嚴(yán)重肝腎功能不全；④惡性腫瘤患者。

另納入同期健康體檢受試者100例作為對(duì)照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①既往無(wú)冠心病史；②經(jīng)CAG檢查未見(jiàn)斑塊或狹窄；③凝血功能正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①并發(fā)炎性疾病者；②妊娠或哺乳期女性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)，符合赫爾辛基宣言相關(guān)要求，所有受試者均了解本研究方案，并簽署知情同意書(shū)。

研究組：男性132例，女性68例，年齡63.18±3.76歲，BMI 24.96±4.02kg/m2，吸煙史40例，酗酒史33例，高血壓史109例，腦卒中史22例；對(duì)照組：男性61例，女性39例，年齡64.01±5.65歲，BMI 24.34±3.34 kg/m2，吸煙史18例，酗酒史13例，高血壓史45例，腦卒中史 9例，兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t/χ2=0.171 ～ 2.408，均P＞0.05）。

1.2 儀器與試劑 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA)試劑盒（美國(guó)BioTSZ公司），全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀（美國(guó)RND systems公司），ADVIA CENTAUR化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（德國(guó)西門子股份公司），高效液相色譜儀（上海儀電分析儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 生化指標(biāo)：采集各受試者清晨空腹外周靜脈血10ml，4 000r/min離心10min，取上層血清，采用葡萄糖氧化酶（glucose oxidase method, GOD）法測(cè)定空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）值，采用化學(xué)發(fā)光法（chemiluminescence, CL）檢測(cè)空腹胰島素（fasting insulin, FINS）值，采用離子交換高效液相色譜（high performance liquid chromatography, HPLC）法檢測(cè)糖化血紅蛋白（glycosylated hemoglobin, HbA1c）值，以酶學(xué)終點(diǎn)比色法檢測(cè)低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoproteincholesterol,LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoproteincholesterol, HDL-C），以比濁法檢測(cè)總膽固醇（total cholesterol, TC）和三酰甘油（triglyceride,TG）。

1.3.2 血清VASP和PAPP-A的表達(dá)水平：采集各受試者清晨空腹外周靜脈血4ml，4 000r/min離心10min，取上層血清，采用ELISA試劑盒檢測(cè)VASP和PAPP-A的表達(dá)水平，所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.3 冠狀動(dòng)脈病變程度評(píng)價(jià)：以標(biāo)準(zhǔn)Judkins法[6]行冠狀動(dòng)脈造影（coronary Angrography, CAG）術(shù)，參照心臟外科與介入治療狹窄冠狀動(dòng)脈研究（SYNTAX）積分[7]評(píng)價(jià)冠脈病變嚴(yán)重程度：積分0～22分為輕度病變，23～32分為中度病變，≥33分為重度病變。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率[n(%)]表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用方差分析（ANOVA），兩兩比較采用dunnett-t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson和偏相關(guān)性分析，多因素分析采用Logistic回歸分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對(duì)照組受試者血清生化指標(biāo)比較 見(jiàn)表1。兩組受試者LDL-C，HDL-C，TC和TG水平相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。與對(duì)照組相比，研究組患者FBG，F(xiàn)INS，HbA1c和PAPP-A的水平均顯著升高（t=11.208, 13.296,23.657, 16.000）；血清VASP的表達(dá)水平顯著降低（t=12.667），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

表1 研究組和對(duì)照組受試者血清生化指標(biāo)比較（±s）

表1 研究組和對(duì)照組受試者血清生化指標(biāo)比較（±s）

項(xiàng) 目 研究組(n=200)對(duì)照組(n=100) t P FBG(mmol/L) 6.55±1.33 4.92±0.83 11.208 ＜0.001 FINS(mIU/L) 9.92±3.11 5.34±2.09 13.296 ＜0.001 HbA1c(%) 8.50±1.30 6.24±0.26 23.657 ＜0.001 LDL-C(mmol/L) 2.73±0.56 2.63±0.57 1.449 0.148 HDL-C(mmol/L) 1.42±0.36 1.48±0.54 1.005 0.317 TC(mmol/L) 4.53±0.50 4.49±0.59 0.582 0.561 TG(mmol/L) 1.35±0.36 1.27±0.32 1.881 0.061 VASP(ng/L) 290.77±57.88 406.64±81.81 12.667 ＜0.001 PAPP-A(mIU/L) 17.93±5.14 10.43±2.96 16.000 ＜0.001

2.2 SAP組、UAP組和AMI組受試者血清生化指標(biāo)比較 見(jiàn)表2。與SAP組相比，UAP組和AMI組患者血清VASP的表達(dá)水平較低、而PAPP-A的表達(dá)水平較高（均P＜0.05）；與UAP組相比，AMI組患者血清VASP的表達(dá)水平較低、而PAPP-A的表達(dá)水平較高（均P＜0.05）；三組其余指標(biāo)相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

表2 SAP組，UAP組和AMI組受試者血清VASP和PAPP-A表達(dá)水平比較（±s）

表2 SAP組，UAP組和AMI組受試者血清VASP和PAPP-A表達(dá)水平比較（±s）

項(xiàng) 目 SAP組(n=65) UAP組(n=74) AMI組(n=61) F P FBG(mmol/L) 6.48±1.13 6.78±1.33 6.36±1.34 1.988 0.140 FINS(mIU/L) 10.12±3.13 9.89±2.93 9.78±3.01 0.210 0.811 HbA1c(%) 8.50±1.30 8.02±1.27 8.35±1.45 2.363 0.097 LDL-C(mmol/L) 2.71±0.56 2.74±0.55 2.75±0.59 0.795 0.498 HDL-C(mmol/L) 1.39±0.33 1.41±0.39 1.43±0.33 0.703 0.551 TC(mmol/L) 4.56±0.53 4.54±0.51 4.50±0.43 0.296 0.828 TG(mmol/L) 1.36±0.36 1.33±0.33 1.37±0.41 1.373 0.251 VASP(ng/L) 352.22±66.12 286.21±59.78 225.85±54.09 69.261 ＜0.001 PAPP-A(mIU/L) 13.23±3.14 18.01±4.52 26.71±5.59 144.405 ＜0.001

2.3 不同冠脈病變程度患者血清VASP和PAPP-A的表達(dá)水平比較 見(jiàn)表3。SYNTAX積分23～32分患者組的血清VASP表達(dá)水平顯著低于、PAPP-A顯著高于0～22分患者組（均P＜0.05）；SYNTAX積分≥33分患者組的血清VASP表達(dá)水平顯著低于、PAPP-A顯著高于0～22分以及23～32分患者組（均P＜0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表3 不同冠脈病變程度患者血清VASP和PAPP-A的表達(dá)水平比較（±s）

表3 不同冠脈病變程度患者血清VASP和PAPP-A的表達(dá)水平比較（±s）

項(xiàng)目SYNTAX積分 F P 0～22（n=63） 23～32(n=78) ≥33(n=59)VASP(ng/L) 350.46±65.13 289.55±57.40 230.46±50.79 67.098 ＜0.001 PAPP-A(mIU/L) 13.55±4.06 19.43±4.68 27.51±5.35 139.984 ＜0.001

2.4 VASP和PAPP-A的表達(dá)水平與病變嚴(yán)重程度的關(guān)系 Pearson相關(guān)性分析顯示，受試者年齡與SYNTAX積分呈正相關(guān)（r=0.310,P＜0.001），受試者血清VASP的表達(dá)水平與SYNTAX積分呈負(fù)相關(guān)（r=-0.391,P＜0.05），PAPP-A的表達(dá)水平與SYNTAX積分呈正相關(guān)（r=0.363,P＜0.05）；校正受試者的年齡后，血清VASP的表達(dá)水平仍與SYNTAX積分呈負(fù)相關(guān)（r=-0.208,P=0.037），PAPP-A的表達(dá)水平仍與SYNTAX積分呈正相關(guān)（r=0.233,P=0.019）。

將上述變量納入多元線性回歸分析，結(jié)果顯示，血 清VASP（β=0.620,P=0.008）和PAPP-A（β=0.884,P=0.005）的表達(dá)水平是SYNTAX積分的獨(dú)立影響因素，見(jiàn)表4。

表4 多元線性回歸分析

3 討論

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病（CHD）為臨床常見(jiàn)的威脅人類生命健康的主要心血管疾病之一，呈現(xiàn)慢性長(zhǎng)期病程，往往反復(fù)發(fā)作，預(yù)后較差，且即使積極介入治療后仍可能再發(fā)心肌梗死或心源性死亡等心臟不良終點(diǎn)事件[8-9]。因此，探究與CHD患者冠脈病變嚴(yán)重程度相關(guān)的血清學(xué)指標(biāo)，及早干預(yù)和診治，對(duì)改善患者預(yù)后、減少心血管不良事件的發(fā)生具有重要的意義。

血管擴(kuò)張刺激磷蛋白（VASP）為肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白（actin binding protein, ABP），可與Profiilin，Vinculin，Zyxin等蛋白相結(jié)合而作為cGMP信號(hào)通路的下游底物，發(fā)揮調(diào)節(jié)血小板聚集、T細(xì)胞的遷移、細(xì)胞間黏附、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、形態(tài)改變及增殖等的作用[10]。研究[11]表明，在動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程中，白色脂肪組織通過(guò)分泌白介素-1β（interluekin-1β,IL-1β），IL-6等炎癥因子，與受體結(jié)合后而激活轉(zhuǎn)錄激活因子（janus-activated kinase singal transducers and activators of transcriprion, JAK-STAT）通路及Janus激酶信號(hào)傳導(dǎo)，從而使心外膜脂肪組織由棕色表型轉(zhuǎn)變?yōu)榘咨硇?，促進(jìn)局部粥樣硬化斑塊的形成；而敲除VASP基因后，發(fā)現(xiàn)小鼠體內(nèi)cGMP信號(hào)顯著增強(qiáng)，棕色脂肪細(xì)胞的分化及其功能亦得以增強(qiáng)，并促進(jìn)了白色脂肪組織向棕色脂肪組織的轉(zhuǎn)化，因此VASP可作為評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化病情變化的重要指標(biāo)之一。

既往研究[12]認(rèn)為，CHD的病變程度與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性密切相關(guān)。妊娠相關(guān)血漿蛋白A（PAPP-A）是一種由冠狀動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊產(chǎn)生的金屬螯合蛋白酶，可降低斑塊的穩(wěn)定性。PAPP-A與胰島素樣生長(zhǎng)因子（insulin-like growth factor, IGF）組成信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的增殖、遷移、泡沫細(xì)胞和炎性細(xì)胞的增加、細(xì)胞外基質(zhì)的合成等，當(dāng)斑塊破裂時(shí)，成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞即可釋放其中的PAPP-A入血，導(dǎo)致血清PAPP-A的表達(dá)水平升高[13]。國(guó)外學(xué)者的研究[14]認(rèn)為，PAPP-A表達(dá)水平的高低可獨(dú)立預(yù)測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂的風(fēng)險(xiǎn)。國(guó)內(nèi)亦有學(xué)者研究[15]發(fā)現(xiàn)，多支病變患者的PAPP-A表達(dá)水平顯著高于單支病變和健康人群，故PAPP-A可作為識(shí)別CHD患者是否存在易損斑塊的重要預(yù)測(cè)因子。

本研究結(jié)果顯示：VASP和PAPP-A的表達(dá)可能與CHD的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，同時(shí)也可能與冠脈病變嚴(yán)重程度有關(guān)。進(jìn)一步的Pearson相關(guān)性分析顯示，SYNTAX積分與受試者年齡、PAPP-A的表達(dá)呈正相關(guān)、與VASP的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；校正受試者的年齡后，SYNTAX積分仍與受試者PAPP-A的表達(dá)呈正相關(guān)，與VASP的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，證實(shí)了CHD患者血清VASP和PAPP-A的表達(dá)水平與冠脈病變嚴(yán)重程度密切相關(guān)；多元線性回歸分析發(fā)現(xiàn)，血清VASP和PAPP-A的表達(dá)水平是SYNTAX積分的獨(dú)立影響因素。

本研究結(jié)果顯示，年齡與SYNTAX積分呈正相關(guān)，這可能與高齡導(dǎo)致的血管內(nèi)皮損傷、內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙、凝血和抗凝系統(tǒng)失衡等有關(guān)，而上述因素均為引發(fā)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)鍵影響因素[16]，同時(shí)高齡亦會(huì)導(dǎo)致機(jī)體對(duì)外界各項(xiàng)刺激的耐受性降低有關(guān)，從而影響其預(yù)后[17]。雷新宇等[18]學(xué)者的研究認(rèn)為，年齡與冠脈損傷和狹窄的風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)，是心血管不良事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。校正年齡后，SYNTAX積分仍與受試者PAPP-A的表達(dá)呈正相關(guān)，與VASP的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，CHONG等[19]的研究表明，VASP可通過(guò)NO/sGC/cGMP，RhoA/ROCK以及Rac1/PAK/cRaf/ERK1/2等多種信號(hào)通路參與動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程；劉靜等[20]的研究同樣表明，PAPP-A可降低冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性，可能與CHD患者的冠脈病變程度呈正相關(guān)。本研究不足之處在于未對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)兩組患者血清VASP和PAPP-A水平變化進(jìn)行檢測(cè)和比較，將在后續(xù)研究中展開(kāi)深入分析。

綜上所述，CHD患者血清VASP和PAPP-A的表達(dá)水平與冠脈病變嚴(yán)重程度密切相關(guān)，可作為早期診斷和評(píng)估病情的重要生物學(xué)指標(biāo)。