鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預(yù)混劑質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)研究

趙春蕊，張素卿，吉利偉，董玲玲

(山東魯抗舍里樂藥業(yè)有限公司，山東 濟(jì)寧 272000)

0 引言

鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預(yù)混劑(商品名:利高)是碩騰公司開發(fā)的豬用復(fù)方預(yù)混劑，用于防治豬赤痢、沙門氏菌病、大腸桿菌性腸炎及支原體肺炎，具有廣譜、高效、安全、低耐藥等優(yōu)點(diǎn)，臨床應(yīng)用前景廣闊[1-2]。目前，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部將其列為參比制劑，收入《獸藥比對(duì)試驗(yàn)?zāi)夸洝?農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第192號(hào))，國內(nèi)仿制藥申報(bào)需要進(jìn)行比對(duì)研究。

腸炎與肺炎是養(yǎng)豬業(yè)中危害嚴(yán)重的常見疾病[3-4]，為了防控上述疾病，依據(jù)《獸用化學(xué)藥物制劑研究基本技術(shù)指導(dǎo)原則》《獸用化學(xué)藥物穩(wěn)定性技術(shù)指導(dǎo)原則》《獸藥比對(duì)試驗(yàn)產(chǎn)品藥學(xué)研究等資料要求》的通知要求，開發(fā)了鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預(yù)混劑，文中對(duì)研制的仿制藥與利高的各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)(如性狀、粒度、干燥失重、有關(guān)物質(zhì)、含量)及樣品穩(wěn)定性進(jìn)行了全面的比對(duì)研究，以確定仿制藥與利高質(zhì)量的一致性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津液相色譜儀LC-20A(包括DGU-20A5R脫氣機(jī)、LC-20AT四元泵、SLA-20AXR自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO-20A柱溫箱、SPD-20A檢測(cè)器、Labsolution色譜工作站)；ZY-300IV 多功能微生物自動(dòng)測(cè)量分析儀:北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開發(fā)公司；SPX-250 B型生化培養(yǎng)箱:上海佳勝實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；HPP260型藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱，德國美墨爾特有限公司。

1.2 試藥

鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預(yù)混劑(規(guī)格:100 g，林可霉素2.2 g與大觀霉素2.2 g，山東魯抗舍里樂藥業(yè)有限公司高新區(qū)分公司，批號(hào)1808001、1808002、1808003；利高，碩騰(蘇州)動(dòng)物保健品公司，批號(hào)18070493A；林可霉素對(duì)照品:中國獸藥監(jiān)察所，批號(hào)K0101503，純度84.6%；大觀霉素對(duì)照品:中國獸藥監(jiān)察所，批號(hào)K0261705，每1 mg相當(dāng)于644 IU大觀霉素。甲醇為色譜純；硼砂、磷酸為分析純；水為雙蒸水。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 林可霉素含量測(cè)定

采用高效液相色譜法測(cè)定。色譜條件:色譜柱為YMC-Triart C18(250×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為0.05 mol/L硼砂溶液(用85%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至6.1)-甲醇(1:1)；流速為0.9 mL/min；柱溫為40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為214 nm；進(jìn)樣濃度0.8 mg/mL，進(jìn)樣量為10 μL。

2.1.1 干擾試驗(yàn)

分別將稀釋液、林可霉素對(duì)照品溶液、空白輔料溶液、供試品溶液過濾，取10 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖(見圖1)，結(jié)果表明，稀釋液、空白輔料均不干擾林可霉素的含量測(cè)定。

圖1 稀釋液(A)、空白輔料溶液(B)、對(duì)照品溶液(C)、供試品溶液(D)色譜圖

2.1.2 線性和范圍考察

分別配制濃度為0.603 mg/mL(75%)、0.724 mg/mL(90%)、0.804 mg/mL(100%)、0.885 mg/mL(110%)、1.005 mg/mL(125%)的林可霉素對(duì)照品溶液，過濾，取10 μL進(jìn)樣，每個(gè)濃度重復(fù)3次，記錄色譜圖。以林可霉素峰面積對(duì)濃度線性回歸，得其回歸方程Y=2E+06X+9 187.7(R2=0.999 4)，表明林可霉素濃度在0.603～1.005 mg/mL與峰面積的線性關(guān)系良好。

2.1.3 精密度測(cè)定

依法配制6份供試品溶液(批號(hào)1808001)，同時(shí)制備2份對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣，以外標(biāo)法計(jì)算含量，得平均含量為104.11%，RSD為0.40%(n=6)。由不同分析人員在不同日期制備6份供試品溶液及2份對(duì)照品溶液進(jìn)樣測(cè)定，平均含量為104.03%，RSD為0.29%(n=6)，重復(fù)性與中間精密度12次檢測(cè)中，平均含量為104.07%，RSD為0.33%(n=12)，表明此法精密度高，符合定量分析的要求。

2.1.4 準(zhǔn)確度測(cè)定

分別稱取林可霉素對(duì)照品約76 mg(相當(dāng)于80%)、95 mg(相當(dāng)于100%)、113 mg(相當(dāng)于120%)與一定量的空白輔料，配制成混粉，每個(gè)重量3份并測(cè)定含量計(jì)算回收率。平均回收率為100.42%，回收率在99.0%～101.0%，RSD為0.46%，表明該方法回收率穩(wěn)定，變異系數(shù)小，符合試驗(yàn)要求。

2.2 大觀霉素含量測(cè)定

照抗生素微生物測(cè)定法測(cè)定[5-6]。1 000 IU大觀霉素相當(dāng)于1mgC14H24N2O7。

2.2.1 線性和范圍考察

制備濃度約為49 IU/mL、70 IU/mL、100 IU/mL、142.86 IU/mL、204.08 IU/mL、291.55 IU/mL的大觀霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，采用一劑量法測(cè)定，以抑菌圈直徑為橫坐標(biāo)，以濃度的對(duì)數(shù)LgC為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程為:Y=2.077 5+0.133 5(X-18.031 4)(r=0.999 1)，表明大觀霉素含量測(cè)定方法在49～291.55 IU/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.2 精密度測(cè)定

依法配制6份供試品溶液(批號(hào)1808001)，按抗生素微生物檢定法測(cè)定，計(jì)算樣品效價(jià)，得平均含量為103.76%，RSD為0.20%(n=6)。由不同分析人員在不同日期制備6份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，得平均含量為102.49%，RSD為0.29%(n=6)，重復(fù)性與中間精密度12次檢測(cè)中，平均含量為103.12%，RSD為0.67%(n=12)，表明此法精密度高，符合定量分析的要求。

2.2.3 準(zhǔn)確度測(cè)定

取供試品(1808001，大觀霉素測(cè)定效價(jià)22.9 IU/mg)約1 091 mg，精密稱定，分別加入大觀霉素標(biāo)準(zhǔn)品約23 mg、39 mg、54 mg，每個(gè)重量3份，配制成濃度為(80、160)IU/mL、(100、200)IU/mL、(120、240)IU/mL的溶液，按抗生素微生物檢定法測(cè)定，計(jì)算樣品效價(jià)及回收率。平均回收率為98.44%，其RSD為2.00%，表明此法準(zhǔn)確度符合方法學(xué)驗(yàn)證的要求。

2.3 樣品質(zhì)量比對(duì)及穩(wěn)定性考察

按照鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預(yù)混劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合《中國獸藥典》對(duì)原研藥與仿制藥樣品含量、性狀、干燥失重等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)比考察。結(jié)果(見表1)表明，原研藥與仿制藥的各項(xiàng)質(zhì)控指標(biāo)均無明顯差異。

將仿制藥及原研樣品，按市售包裝，進(jìn)行加速試驗(yàn)(40℃±2℃、相對(duì)濕度75%±5%)、長(zhǎng)期試驗(yàn)(25℃±2℃、相對(duì)濕度60%±10%)，分別于不同時(shí)間點(diǎn)取樣，考察樣品的穩(wěn)定性?？疾祉?xiàng)目包括性狀、干燥失重、有關(guān)物質(zhì)、林可霉素含量、大觀霉素含量。結(jié)果顯示(見表1):兩者均為淡褐色粉末，自研樣品林可霉素B在3.2%～3.5%，林可霉素含量下降不高于1.59%，大觀霉素含量下降不高于1.08%，變化不顯著；原研樣品林可霉素在2.5%左右，林可霉素含量下降2.02%，大觀霉素含量下降1.02%，變化不顯著。仿制藥與原研藥在各考察時(shí)間點(diǎn)上均無明顯變化，說明兩者在不同試驗(yàn)條件下的樣品穩(wěn)定性一致。

表1 鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預(yù)混劑質(zhì)量穩(wěn)定性考察 單位：%

3 結(jié)論

文中對(duì)鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預(yù)混劑原研藥與仿制藥進(jìn)行了質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)，結(jié)果二者在各對(duì)比條件下，質(zhì)量無明顯差異，穩(wěn)定性均良好，初步說明仿制藥與原研藥的質(zhì)量具有一致性。文中結(jié)果為鹽酸林可霉素硫酸大觀霉素預(yù)混劑及類似劑型藥物質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)工作的開展提供了依據(jù)。