番薯葉多酚提取工藝優(yōu)化及其生物活性研究

吳衛(wèi)成，忻曉庭，張程程，劉大群，盧立志，胡宏海，章檢明，張治國(guó)，郭 陽(yáng)

（1 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食品科學(xué)研究所 杭州 310021 2 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 杭州 310021 3 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 北京 100193）

番薯【Ipomoea batatas （L.） Lam.】，又名紅薯、甘薯、甜薯等，屬管狀花目旋花科植物，是一種高產(chǎn)且適應(yīng)能力強(qiáng)的糧食作物，在世界各地區(qū)廣泛種植[1]。傳統(tǒng)番薯品種主要以塊根作為食用部分，其莖葉常被作為畜禽飼料或者廢棄，造成資源浪費(fèi)。近年來(lái)隨著葉菜型番薯市場(chǎng)份額的不斷擴(kuò)大，對(duì)葉菜型番薯的研究也越來(lái)越多[2]。番薯葉具有很高的食用價(jià)值，口感脆嫩，營(yíng)養(yǎng)豐富[3]，且具有多種醫(yī)療保健功能，備受人們的關(guān)注與喜愛(ài)。羅丹等[4]通過(guò)對(duì)西蒙1 號(hào)甘薯研究發(fā)現(xiàn)其莖葉多酚具有降血糖功效。吳憶微等[5]研究表明紅薯葉富含綠原酸、多糖、多肽、黃酮等多種功效成分，具有抗腫瘤的功效。

多酚在植物食品中廣泛存在，主要包括酚酸、類黃酮、花色苷類等化合物[6]，是植物自身次生代謝而產(chǎn)生的一類酚羥基化合物。多酚結(jié)構(gòu)多樣，除了優(yōu)良的抗氧化活性[7]，還具有其它多種生物活性。例如：降血糖[8]、抑菌[9]、降血脂[10]、抗炎[11]、防治阿爾茨海默病[12]等。番薯葉中多酚含量較為豐富，目前有部分研究報(bào)道番薯葉多酚的提取工藝[13-14]，然而番薯品種繁多，種植地區(qū)廣泛以及提取方法不同，番薯葉多酚的提取量有明顯的差異。超聲波輔助提取設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便提取得率高，廣泛應(yīng)用于植物活性成分的提取[15-16]。

本文針對(duì)浙菜薯726，采用超聲輔助提取研究番薯葉多酚提取的優(yōu)化工藝，分析最佳提取條件下番薯葉多酚的體外抗氧化能力及對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制能力，初步探究番薯葉多酚的體外降糖能力，為菜葉番薯的開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

番薯葉，品種為浙菜薯726，來(lái)自浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物與核技術(shù)利用研究所薯類育種與栽培研究室，冷凍干燥后，超微粉碎備用。

無(wú)水乙醇、冰乙酸、氯化鐵、酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉、3，5-二硝基水楊酸、結(jié)晶酚、亞硫酸鈉、可溶性淀粉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、二甲基亞砜（DMSO）、碳酸鈉，中國(guó)藥品生物制品檢定所；色譜級(jí)甲酸、甲醇，阿拉丁試劑（上海）有限公司；福林酚試劑、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2，4，6-三吡啶基三嗪 （TPTZ）、奎諾二甲基丙烯酸酯（Trolox），美國(guó)sigma 公司；沒(méi)食子酸、3-咖啡?？鼘幩帷?-咖啡?？鼘幩?、5-咖啡?？鼘幩帷?，4-咖啡酰奎寧酸、3，5-咖啡?？鼘幩?、4，5-咖啡?？鼘幩帷?，4，5-三咖啡酰奎寧酸、α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG），上海源葉生物科技有限公司。

1.2 設(shè)備與儀器

SCIENTZ-18N 冷凍干燥機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司；KQ5200DE 數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；RE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；HH-1 數(shù)顯恒溫水浴鍋，上海力辰邦西儀器科技有限公司；Spectramax190 酶標(biāo)儀，美谷分子儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 番薯葉多酚提取 稱取1 g 番薯葉凍干粉末，按一定料液比加入不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇提取液，在一定溫度下超聲輔助提取，提取完成后5 000 r/min 離心15 min，取上清液定容至25 mL，得樣品溶液備用。

1.3.2 番薯葉多酚的測(cè)定 番薯葉多酚測(cè)定采用福林酚法，以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，準(zhǔn)確稱取0.04 g沒(méi)食子酸，用10 mL 乙醇溶解，用水定容至100 mL，得400 mg/L 沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別取1，2，3，4，5，6 mL 定容至10 mL，得40，80，120，160，200，240 mg/L 沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別吸取沒(méi)食子酸與番薯葉提取液，加入1 mL 福林酚試劑，充分震蕩后靜置3～4 min，再分別加入5 mL 7.5%碳酸鈉溶液，用蒸餾水定容至25 mL，混勻，40 ℃水浴30 min，以空白試劑調(diào)零，于波長(zhǎng)765 nm 處測(cè)定吸光值，以吸光值為縱坐標(biāo)，沒(méi)食子酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。多酚含量計(jì)算按下式，結(jié)果表示為mg GAE/g：

式中，m1——從標(biāo)曲中查得的沒(méi)食子酸的含量，mg；V1——提取液總體積，mL；V——測(cè)量時(shí)所取樣品體積，mL；m——樣品質(zhì)量，g。

1.3.3 單因素實(shí)驗(yàn)

1.3.3.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)（A）對(duì)多酚提取的影響選取料液比1∶20（稱取1 g 番薯葉凍干粉，加入提取液20 mL），分別用40%，50%，60%，70%，80%，90%和100%的乙醇進(jìn)行提取，在50 ℃下，超聲輔助提取30 min。提取時(shí)間到后，5 000 r/min 離心15 min，取上清液定容至25 mL，取定容后的液體測(cè)定多酚的含量。

1.3.3.2 提取溫度（B）對(duì)多酚提取的影響 選取料液比1∶20（稱取1 g 番薯葉凍干粉，加入提取液20 mL），分別在30，40，50，60，70，80 ℃下，用80%乙醇進(jìn)行超聲輔助提取30 min。提取時(shí)間到后，5 000 r/min 離心15 min，取上清液定容至25 mL，取定容后的液體測(cè)定多酚的含量。

1.3.3.3 料液比（C）對(duì)多酚提取的影響 選取料液比1∶5，1∶10，1∶15，1∶20，1∶25，1∶30 （稱取1 g番薯葉凍干粉，分別加入提取液5，10，15，20，25，30 mL），用80%乙醇在50 ℃下，超聲輔助提取30 min。提取時(shí)間到后，5 000 r/min 離心15 min，，取上清液定容至25 mL，取定容后的液體測(cè)定多酚的含量。

1.3.3.4 提取時(shí)間（D）對(duì)多酚提取的影響 選取料液比1∶20（稱取1 g 番薯葉凍干粉，加入提取液20 mL） 用80%乙醇，在50 ℃下，超聲輔助提取10，20，30，40，50，60 min。提取時(shí)間到后，5 000 r/min 離心15 min，取上清液定容至25 mL 并測(cè)定多酚含量。

1.3.4 Box-Behnken 響應(yīng)面優(yōu)化 以單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，采用Box-Behnken 中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理進(jìn)行番薯葉多酚提取的優(yōu)化設(shè)計(jì)試驗(yàn)。以番薯葉多酚的含量為響應(yīng)值，進(jìn)行四因素三水平的響應(yīng)面分析（表1）。

表1 四因素三水平的響應(yīng)面分析表Table 1 The four-factor，three-level response surface analysis table

1.3.5 番薯葉多酚主要成分鑒定 采用高效液相色譜法測(cè)定番薯葉多酚含量[17]，色譜條件：色譜柱：ZORBAX SB-C18 分析柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液（A）和甲醇（B）；進(jìn)樣速度：1 mL/min；進(jìn)樣體積：10 μL；柱溫：35 ℃；梯度洗脫程序：0～6 min，10%～25% B；6～15 min，25% ～35% B；15 ～23 min，35% ～40% B；23 ～30 min，40%～80% B；30～34 min，80%～100% B；34～38 min，100%～10% B；38～45 min，10% B；檢測(cè)波長(zhǎng)：320 nm。番薯葉多酚采用外標(biāo)法定量。

1.3.6 番薯葉多酚抗氧化能力的測(cè)定 根據(jù)響應(yīng)面法分析確定的番薯葉多酚的最佳提取工藝對(duì)番薯葉多酚進(jìn)行提取，提取液經(jīng)濃縮并冷凍干燥，得到番薯葉多酚凍干粉。將該凍干粉配制成不同質(zhì)量濃度的番薯葉多酚溶液，配制質(zhì)量濃度分別為125，250，500，1 000，2 000，4 000 μg/mL 的番薯葉多酚溶液，對(duì)其進(jìn)行DPPH 自由基清除能力、FRAP 總還原能力測(cè)定，測(cè)定方法參照文獻(xiàn)[18]略作修改。

1.3.7 番薯葉多酚體外降糖試驗(yàn) 根據(jù)響應(yīng)面法分析確定的番薯葉多酚的最佳提取工藝對(duì)番薯葉多酚進(jìn)行提取，提取液經(jīng)濃縮并冷凍干燥，得到番薯葉多酚凍干粉。將該凍干粉配制成不同質(zhì)量濃度的番薯葉多酚溶液，配制質(zhì)量濃度分別為125，250，500，1 000，2 000，4 000 μg/mL 的番薯葉多酚溶液，對(duì)其進(jìn)行α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制試驗(yàn)。測(cè)定方法參照文獻(xiàn)[19]稍作修改。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)均重復(fù)3 次，取平均值。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用IBM SPSS Statistics 21 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。作圖采用Origin 2017 進(jìn)行，響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)采用Design Expert 10 軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)番薯葉多酚提取的影響如圖1所示，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)（40%～90%）的增加，番薯葉多酚提取量呈逐步上升趨勢(shì)。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到90%時(shí)，番薯葉多酚提取量最大，達(dá)到14.62 mg GAE/g。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)大于90%時(shí)多酚提取量顯著下降。多酚以游離態(tài)、酯化態(tài)和結(jié)合態(tài)等形式存在于植物體內(nèi)，結(jié)合態(tài)多酚部分以與植物蛋白質(zhì)結(jié)合形式存在。乙醇體積分?jǐn)?shù)過(guò)高會(huì)使蛋白質(zhì)變性，從而不利于部分多酚的溶出[20]。綜上，確定乙醇體積分?jǐn)?shù)考察范圍為80%～100%。

圖1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)番薯葉多酚提取的影響Fig.1 Effects of ethanol volume fraction on the extraction of polyphenols from sweet potato leaves

2.1.2 提取溫度對(duì)番薯葉多酚多酚提取的影響如圖2所示，提取溫度對(duì)番薯葉多酚提取量的影響呈現(xiàn)一定的不規(guī)則性。隨著提取溫度的升高，分子運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)，提取液與番薯葉充分接觸，多酚溶出量增加，提取溫度為50 ℃時(shí)，番薯葉多酚提取量達(dá)到最大，為15.47 mg GAE/g。提取溫度在50～70℃時(shí)，隨著溫度的升高乙醇易蒸發(fā)，實(shí)際參與提取的溶劑減少[21]，因此多酚提取量降低。而當(dāng)提取溫度為80 ℃時(shí)，提取量再次升高，可能是由于過(guò)高的溫度破壞了番薯葉細(xì)胞壁從而增加了多酚的溶出。出于節(jié)約能源考慮，選擇提取溫度考察范圍為40～60 ℃。

圖2 溫度對(duì)番薯葉多酚提取提取的影響Fig.2 Effect of temperature on the extraction of polyphenols from sweet potato leaves

2.1.3 料液比對(duì)番薯葉多酚提取的影響 由圖3可知，隨著料液比的增加，番薯葉多酚提取量增加，當(dāng)料液比為1∶15 時(shí)，番薯葉中多酚提取量達(dá)到最高，為15.36 mg GAE/g。料液比超過(guò)1∶15 后，隨著料液比的增加，番薯葉多酚提取量逐漸下降但不明顯，可能是由于此時(shí)多酚的溶出已經(jīng)達(dá)到飽和，提高料液比會(huì)增加其它雜質(zhì)的溶出[22]。從節(jié)約溶劑考慮，選擇料液比考察范圍為1∶10～1∶20。

圖3 料液比對(duì)番薯葉多酚提取的影響Fig.3 Effect of solid-liquid ratio on the extraction of polyphenols from sweet potato leaves

2.1.4 提取時(shí)間對(duì)番薯葉多酚提取的影響 理論上隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，多酚溶出量增加。本研究發(fā)現(xiàn)番薯葉多酚提取時(shí)間為20 min 時(shí)，其多酚提取量達(dá)最高值，為14.74 mg GAE/g。當(dāng)番薯葉提取時(shí)間大于20 min 時(shí)，其多酚提取量呈下降趨勢(shì)，可能原因是隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，溶出的多酚易被氧化或者結(jié)構(gòu)被破壞而導(dǎo)致其含量下降[23]。因此，確定提取時(shí)間的考察范圍為10～30 min。

圖4 時(shí)間對(duì)番薯葉多酚提取的影響Fig.4 Effects of time on the extraction of polyphenols from sweet potato leaves

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化

2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 本研究以乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、料液比、提取時(shí)間為變量參數(shù)，應(yīng)用Box-Benhnken 中心組合原理設(shè)計(jì)四因素三水平試驗(yàn)，以番薯葉多酚提取量為響應(yīng)值，對(duì)提取過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化，試驗(yàn)方案及番薯葉多酚提取結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 響應(yīng)面設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Response surface design test results

將番薯葉多酚含量輸入Design Expert 軟件進(jìn)行分析與擬合，計(jì)算獲得番薯葉多酚提取量（Y）的回歸方程如下：

Y=14.12-2.00A+0.56B+0.72C+0.17D+0.76AB+0.39AC+0.18AD+0.29BC-0.13BD+0.026CD-2.11A2-0.40B2-0.36C2+0.022D2。

響應(yīng)面分析模型的方差分析如表4所示，失擬項(xiàng)P 值為0.0956，大于0.05，說(shuō)明模型擬合好，穩(wěn)定可靠，可用本試驗(yàn)的二次回歸方程對(duì)響應(yīng)值進(jìn)行預(yù)測(cè)。模型的確定系數(shù)與校正系數(shù)分別為R2=0.9716 和Radj2=0.9432，變異系數(shù)CV=3.39 較小，表明番薯葉多酚提取量的理論值與實(shí)際值擬合良好。乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取溫度、提取時(shí)間的F 值分別為250.77，32.48，19.44，1.90，各因素影響番薯葉多酚提取量順序?yàn)椋阂掖俭w積分?jǐn)?shù)（A）＞料液比（C）＞提取溫度（B）＞提取時(shí)間（D）。因素A、B、C，以及交互項(xiàng)AB、A2對(duì)番薯葉多酚提取量的影響極顯著（P＜0.01），因素B2對(duì)番薯葉多酚提取量的影響顯著（P＜0.05），因素D，以及交互項(xiàng)AC、AD、BC、BD、CD、C2、D2沒(méi)有顯著影響 （P＞0.05）。

乙醇體積分?jǐn)?shù)、溫度、料液比、時(shí)間4 個(gè)因素兩兩交互對(duì)番薯葉多酚提取量影響的響應(yīng)面如圖5所示，各因素兩兩交互的響應(yīng)面開(kāi)口均向下，表明多酚提取量隨乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、料液比和提取時(shí)間的增加而呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)。其中，乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)多酚提取量影響最大，表現(xiàn)曲面最為陡峭，而提取時(shí)間對(duì)多酚提取量影響最小，表現(xiàn)曲面平緩。從響應(yīng)曲面以及等高線看，響應(yīng)面坡面陡峭順序?yàn)锳B＞AC＞BC＞AD＞BD＞CD，即乙醇體積分?jǐn)?shù)與提取溫度交互作用的響應(yīng)曲面最陡峭，表明乙醇體積分?jǐn)?shù)與提取溫度的交互作用對(duì)番薯葉多酚提取量的影響最為明顯；而料液比與提取時(shí)間交互作用響應(yīng)曲面最平緩，表明料液比與提取時(shí)間的交互作用對(duì)番薯葉多酚提取量的影響相對(duì)較小。結(jié)果與表中結(jié)果相符，說(shuō)明該模型可以較好的描述乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、料液比和提取時(shí)間4 個(gè)因素對(duì)番薯葉多酚提取量的影響。

圖5 乙醇體積分?jǐn)?shù)、溫度、料液比、時(shí)間4 因素兩兩交互響應(yīng)面Fig.5 Pairwise interactive response surface of four factors including ethanol volume fraction，temperature，solid-liquid ratio and time

表3 模型方差分析表Table 3 Model analysis of variance

2.2.2 響應(yīng)面優(yōu)化與驗(yàn)證 采用Design expert 10 軟件進(jìn)行響應(yīng)面模型分析，結(jié)果表明番薯葉多酚的最優(yōu)提取工藝為：乙醇體積分?jǐn)?shù)87.85%，提取溫度56.99 ℃，料液比1∶20，提取時(shí)間30 min，此時(shí)理論上番薯葉總酚酸含量為15.11 mg GAE/g。為了操作便利性，調(diào)整為：乙醇體積分?jǐn)?shù)88%，提取溫度57 ℃，料液比1∶20，提取時(shí)間30 min。按此工藝進(jìn)行3 次平行試驗(yàn)，測(cè)得番薯葉的平均多酚提取量為（15.34±0.19）mg GAE/g，番薯葉多酚含量與預(yù)測(cè)的理論相近，表明模型擬合良好，模型準(zhǔn)確可靠。此提取量結(jié)果與田燕楠等[24]研究結(jié)果相似，存在差異可能是由于試驗(yàn)條件以及番薯葉品種的不同。

2.3 番薯葉多酚主要成分以及生物活性分析

2.3.1 番薯葉主要成分分析 為進(jìn)一步探究番薯葉多酚物質(zhì)的主要成分，本研究通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定了番薯葉多酚7 種主要單體酚，如圖6為番薯葉多酚的液相色譜圖。通過(guò)與混合標(biāo)準(zhǔn)品的色譜峰保留時(shí)間做對(duì)比，分析鑒定出了7 種主要單體酚，分別為5-咖啡?？鼘幩?、3-咖啡?？鼘幩?、4-咖啡酰奎寧酸、3，4-咖啡?？鼘幩?、3，5-咖啡?？鼘幩?、4，5-咖啡?？鼘幩?、3，4，5-咖啡?？鼘幩帷Ｓ蓤D7可知，番薯葉多酚中含量最高的單體酚為3-咖啡?？鼘幩岷?，5-咖啡?？鼘幩?，分別為10.40 mg/g 和7.72 mg/g，此結(jié)果與Suárez 等[25]的研究結(jié)果相似。Sun 等[26]的研究表明番薯葉多酚比抗壞血酸、茶多酚和葡萄籽多酚等具有更高的抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)3-咖啡?？鼘幩岬腄PPH 自由基清除能力最強(qiáng)。盡管3，4，5-咖啡酰奎寧酸等含量較低，但這些化合物仍然是主要的抗氧化活性物質(zhì)。因此，番薯葉是生物活性多酚類物質(zhì)的良好來(lái)源，在食品、保健產(chǎn)品、藥品和化妝品的開(kāi)發(fā)中具有多種用途。

圖6 番薯葉多酚樣品中主要單體酚的HPLC 色譜圖Fig.6 HPLC chromatogram of main monomers in polyphenols from sweet potato leaves

圖7 番薯葉多酚中主要單體酚的含量Fig.7 Content of main monomers in polyphenols from sweet potato leaves

2.3.2 番薯葉多酚抗氧化能力分析 近年來(lái)研究報(bào)道，番薯葉多酚含量比許多其它常見(jiàn)蔬菜更高，且具有更強(qiáng)的抗氧化活性[27-28]。番薯葉多酚對(duì)DPPH 自由基清除能力如圖8a所示，隨著番薯葉多酚質(zhì)量濃度的增大，其清除DPPH 自由基的能力隨之增強(qiáng)。當(dāng)番薯葉多酚的質(zhì)量濃度為0.125 mg/mL 時(shí)，其DPPH 自由基清除能力為0.69 mg TE/g；當(dāng)多酚質(zhì)量濃度增加至為2 mg/mL 時(shí)，自由基清除能力迅速增加到9.56 mg TE/g，而后緩慢增加。番薯葉多酚FRAP 總抗氧化能力由圖8b 可見(jiàn)，隨質(zhì)量濃度增加，F(xiàn)RAP 總抗氧化能力變化與DPPH 自由基清除能力基本一致。質(zhì)量濃度為4 mg/mL 時(shí)，番薯葉多酚的DPPH 自由基清除能力和FRAP 總抗氧化能力最高，分別為11.57 mg TE/g 和12.30 mg TE/g。

圖8 番薯葉多酚抗氧化能力Fig.8 Antioxidant capacity of polyphenols from sweet potato leaves

2.3.3 番薯葉多酚體外降血糖能力分析 食物中的碳水化合物的代謝先在α-淀粉酶作用下生成麥芽糖、糊精等，然后在α-葡萄糖苷酶的作用下分解成葡萄糖、果糖等小分子物質(zhì)，再由腸道吸收利用。抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性可以延緩碳水化合物在胃腸道內(nèi)的分解，從而控制餐后血糖，對(duì)糖尿病患者血糖穩(wěn)定具有重要意義[29]，是植物降血糖活性重要的體外指標(biāo)。由圖9可見(jiàn)，番薯葉多酚的α-淀粉酶抑制活性隨著質(zhì)量濃度的增加而增加，在質(zhì)量濃度為1 mg/mL 前抑制率增加迅速，達(dá)到78.41%，而后緩慢增加。番薯葉多酚的α-葡萄糖苷酶抑制活性隨著質(zhì)量濃度的增加而呈線性緩慢增加。在質(zhì)量濃度為0.125 mg/mL時(shí)，番薯葉多酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制大于對(duì)α-淀粉酶的抑制，而隨著質(zhì)量濃度的升高番薯葉多酚對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制總體小于對(duì)α-淀粉酶的抑制。質(zhì)量濃度為4 mg/mL 時(shí)，番薯葉多酚對(duì)α-淀粉酶與α-葡萄糖苷酶的抑制率最高，分別為89.94%和22.28%。

圖9 番薯葉多酚體外降糖能力Fig.9 Hypoglycemic effects of polyphenols from sweet potato leaves in vitro

3 結(jié)論

本文通過(guò)響應(yīng)面法優(yōu)化超聲輔助提取番薯葉（浙菜薯726）中的多酚，得到的最佳提取工藝為：乙醇體積分?jǐn)?shù)88%，提取溫度57 ℃，料液比1∶20，提取時(shí)間30 min，在此條件下番薯葉多酚的提取量為（15.34±0.19）mg GAE/g，與理論值接近。采用高效液相色譜法測(cè)定出番薯葉多酚中主要的7 種單體酚分別為5-咖啡?？鼘幩?、3-咖啡?？鼘幩?、4-咖啡?？鼘幩帷?，4-咖啡?？鼘幩?、3，5-咖啡?？鼘幩帷?，5-咖啡酰奎寧酸、3，4，5-咖啡?？鼘幩幔渲泻孔罡叩姆謩e為3-咖啡?？鼘幩岷?，5-咖啡?？鼘幩幔謩e為10.40 mg/g 和7.72 mg/g。番薯葉多酚具有較強(qiáng)的DPPH 自由基清除能力和FRAP 總抗氧化能力，在質(zhì)量濃度為4 mg/mL 時(shí)，番薯葉多酚的DPPH 自由基清除能力和FRAP 總抗氧化能力達(dá)11.57 mg TE/g 和12.30 mg TE/g。此外番薯葉多酚還有很好的體外降糖活性，質(zhì)量濃度為4 mg/mL 時(shí)，番薯葉多酚對(duì)α-淀粉酶與α-葡萄糖苷酶的抑制率最高，分別為89.94%和22.28%。本研究對(duì)番薯葉中多酚的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，并對(duì)番薯葉多酚主要成分及主要生物活性進(jìn)行了分析，為番薯葉多酚類物質(zhì)在食品、保健產(chǎn)品、藥品和化妝品的中開(kāi)發(fā)提供了理論基礎(chǔ)，為番薯資源的有效利用提供了參考。