miR-155在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其對(duì)HCT116、SW480細(xì)胞增殖與凋亡的影響

朱邢超，樂(lè)紅琴

鹽城市第三人民醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇鹽城 224000

結(jié)腸癌是臨床常見(jiàn)癌癥疾病之一，國(guó)內(nèi)較常見(jiàn)，好發(fā)于中老年人群，多數(shù)患者早期無(wú)明顯癥狀或僅有部分輕微癥狀，不易發(fā)現(xiàn)，容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，會(huì)給患者身心健康和生活質(zhì)量帶來(lái)許多不利的影響，同時(shí)也會(huì)帶來(lái)一定的家庭經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1-2]。劉黎等[3]的研究指出，微小RNA-155（miR-155）的下調(diào)能夠增加細(xì)胞放射的敏感性，抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。microRNAs（miRNAs）是一類(lèi)22～25 nt內(nèi)源性的非編碼的單鏈小分子RNA，參與動(dòng)植物轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控，其與腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4]。如在甲狀腺乳頭狀癌[5]中，其表達(dá)水平與腫瘤TNM分期、病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)；其在乳腺癌[6]疾病中，miR-155表達(dá)水平與雌激素受體、孕激素受體有相關(guān)性。miR-155與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，并能對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)形成產(chǎn)生影響，其能為臨床治療結(jié)腸癌提供新的治療策略。該次研究收集2020年6月—2021年6月鹽城市第三人民醫(yī)院內(nèi)鏡中心結(jié)腸鏡檢查病理標(biāo)本提示為結(jié)腸癌，且符合入組條件的78例結(jié)腸癌活檢組織，分析結(jié)腸癌組織中miR-155表達(dá)，并明確其對(duì)細(xì)胞增殖與凋亡的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集鹽城市第三人民醫(yī)院內(nèi)鏡中心結(jié)腸鏡檢查病理標(biāo)本提示為結(jié)腸癌，且符合入組條件的78例結(jié)腸癌活檢組織納入結(jié)腸癌組織組，另外選取距離癌組織邊緣＞5 cm對(duì)應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本為對(duì)照組。78例患者男50例，女28例；年齡34～78歲，平均（49.36±2.74）歲；病程7個(gè)月～3年，平均（1.26±0.39）年；體質(zhì)指數(shù)23～30 kg/m2，平均（25.39±1.39）kg/m2；分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期19例、Ⅱ期20例、Ⅲ期29例、Ⅳ期10例；組織分化程度：高分化40例、中分化17例、低分化21例。研究并獲院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究所納入的研究對(duì)象符合世界衛(wèi)生組織（WHO）關(guān)于結(jié)腸癌的定義[7]；②經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)；③手術(shù)前均未接受任何放化療及免疫治療；④病灶無(wú)明顯壞死區(qū)；⑤患者均在該院建檔立卡，個(gè)人信息建檔立卡齊全；⑥患者對(duì)該次研究?jī)?nèi)容充分了解，并在知情同意書(shū)上簽字。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并存在嚴(yán)重電解質(zhì)紊亂者；②妊娠或哺乳期女性者；③具有明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)癌旁組織者；④臨床資料不全者；⑤合并其他惡性腫瘤疾病患者。

1.2 方法

選取自患者的病灶組織標(biāo)本，人結(jié)腸癌HCT116、SW480細(xì)胞購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)，細(xì)胞培養(yǎng)液購(gòu)自美國(guó)GIBCO公司，miR-155抑制劑購(gòu)自上海邦景實(shí)業(yè)有限公司。

使用qRT-PCR方法檢測(cè)結(jié)腸癌組織和癌旁組織標(biāo)本miR-155表達(dá)水平，按照Trizol試劑盒說(shuō)明書(shū)操作提取總RNA，后根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作步驟進(jìn)行實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶反應(yīng)，miR-155所用引物和內(nèi)源性對(duì)照均購(gòu)自上海邦景實(shí)業(yè)有限公司。

結(jié)腸癌細(xì)胞增殖率檢測(cè)，將HCT116、SW480細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后進(jìn)行細(xì)胞傳代，并分為空白對(duì)照組，不進(jìn)行干預(yù)；miR-155抑制劑作用組，每組再分為24、36、48、72 h觀(guān)察組，相應(yīng)作用時(shí)間完成后，加入CCK8溶液，并繼續(xù)培養(yǎng)3 h，后使用酶標(biāo)儀（山東恒美電子科技有限公司，HM-SY96）讀取數(shù)值。使用流式細(xì)胞儀（貝克曼庫(kù)爾特國(guó)際貿(mào)易有限公司，CytoFLEX-LX）檢測(cè)空白對(duì)照組和miR-155抑制劑作用組結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡率。

1.3 觀(guān)察指標(biāo)

①對(duì)比癌旁組織與結(jié)腸癌組織miR-155表達(dá)水平差異。

②觀(guān)察miR-155抑制劑對(duì)人結(jié)腸癌HCT166、SW480細(xì)胞增殖的影響。

③觀(guān)察miR-155抑制劑對(duì)人結(jié)腸癌HCT116、SW480細(xì)胞凋亡的影響。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用（±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)；采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌旁組織與結(jié)腸癌組織miR-155表達(dá)水平比較

經(jīng)檢查發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌組織miR-155水平（2.41±0.12）、癌旁組織（1.01±0.09），結(jié)腸癌組織miR-155水平較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 癌旁組織與結(jié)腸癌組織miR-155表達(dá)水平差異比較（±s）

表1 癌旁組織與結(jié)腸癌組織miR-155表達(dá)水平差異比較（±s）

組織miR-155表達(dá)水平結(jié)腸癌組織組（n=78）對(duì)照組（n=78）t值P值2.41±0.12 1.01±0.09 82.430<0.001

2.2 miR-155抑制劑對(duì)HCT116、SW480細(xì)胞增殖率的影響

miR-155抑制劑對(duì)人結(jié)腸癌HCT116、SW480細(xì)胞作用后發(fā)現(xiàn)，其能有效降低HCT116、SW480細(xì)胞增速度，見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 miR155抑制劑對(duì)HCT116細(xì)胞增殖率的影響

圖2 miR-155抑制劑對(duì)SW480細(xì)胞增殖率的影響

2.3 miR-155抑制劑對(duì)人結(jié)腸癌HCT116、SW480細(xì)胞凋亡的影響

miR-155抑制劑對(duì)HCT116、SW480細(xì)胞作用后發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組相比，能明顯增加結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 miR-155抑制劑的使用對(duì)結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞和SW480細(xì)胞凋亡的影響（±s）

表2 miR-155抑制劑的使用對(duì)結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞和SW480細(xì)胞凋亡的影響（±s）

組別細(xì)胞凋亡率幅度 凋亡率空白對(duì)照組mi R-155抑制劑作用組HCT116（4.05±0.47）SW480（3.77±0.29）HCT116（4.09±0.46）SW480（3.75±0.27）t/P HCT-116值t/P SW480值2.84±0.94 3.64±1.13 21.43±3.29 17.24±2.59 47.983/<0.001 42.506/<0.001

3 討論

結(jié)腸癌是全球常見(jiàn)的惡性腫瘤，隨著生活方式、膳食習(xí)慣改變，人口老齡化加劇等因素的影響，其發(fā)病率逐漸呈上升趨勢(shì)。疾病與多種因素有關(guān)，涉及多方面，如生活環(huán)境、遺傳以及藥物不合理使用等，疾病的發(fā)生、發(fā)展與腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化密切相關(guān)，需要加強(qiáng)對(duì)疾病分子生物學(xué)深入研究。結(jié)腸癌具有很強(qiáng)的環(huán)境關(guān)聯(lián)性和遺傳風(fēng)險(xiǎn)因素，手術(shù)治療雖能有效消除病灶，但術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移會(huì)影響整體治療效果，患者的生存質(zhì)量仍舊受到威脅[8-9]。結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制，涉及原癌基因激活、抑癌基因突變、細(xì)胞異常增殖、染色體缺失等。miRNAs在惡性腫瘤發(fā)生過(guò)程中會(huì)發(fā)揮癌基因或抑癌基本功效，其很有可能會(huì)成為惡性腫瘤診斷與判斷患者預(yù)后的預(yù)期靶點(diǎn)[10]。miR-155位于人21號(hào)染色體，其能夠促使細(xì)胞周?chē)w維母細(xì)胞轉(zhuǎn)化為腫瘤相關(guān)性纖維細(xì)胞，進(jìn)而會(huì)促使惡性腫瘤疾病進(jìn)展[11]。另外其還會(huì)抑制TP53INPI mRNA功能，降低其表達(dá)水平，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖[12]。

該次研究結(jié)果指出，相較于癌旁組織（1.01±0.09），結(jié)腸癌組織miR-155水平（2.41±0.12）較高（P＜0.05），表示其在一定程度上促進(jìn)結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展。此外在常占國(guó)等[13]的研究中提到，miR-155在結(jié)腸癌組表達(dá)水平（3.09±0.23）高于正常組（1.02±0.15），與該次研究結(jié)果相似，且其表達(dá)水平還與與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織分化程度以及浸潤(rùn)深度密切相關(guān)。另外其低表達(dá)時(shí)，無(wú)進(jìn)展生存期、總體生存時(shí)間均較高，提示通過(guò)miR-155表達(dá)水平能夠判斷患者預(yù)后[14]。

關(guān)于miR-155在細(xì)胞增殖以及凋亡中的作用，研究結(jié)果表示，miR-155抑制劑能有效降低結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞、SW480細(xì)胞增速度，增加結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡率（P＜0.05），提示結(jié)腸癌細(xì)胞增殖與凋亡中，miR-155具有重要的調(diào)控作用。miR-155可能在結(jié)腸癌的遷移中發(fā)揮重要作用，可通過(guò)上調(diào)其表達(dá)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力，從而影響患者預(yù)后[15]。除卻細(xì)胞增殖外，關(guān)于腫瘤細(xì)胞凋亡臨床也需加強(qiáng)重視，其是細(xì)胞內(nèi)普遍存在的生物學(xué)過(guò)程，一定程度上能夠反映抗癌藥物使用的有效性[16-17]。線(xiàn)粒體凋亡信號(hào)通路是最為常見(jiàn)的腫瘤細(xì)胞通路，且線(xiàn)粒體凋亡信號(hào)也在腫瘤細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要作用[18-19]。Bcl-2家族蛋白在線(xiàn)粒體凋亡信號(hào)通路中具有重要價(jià)值，Bcl-2家族蛋白，特別是Bax，能促進(jìn)細(xì)胞凋亡發(fā)生。在李濤等[20]的研究中提到，miR-155抑制劑使用后，線(xiàn)粒體凋亡相關(guān)蛋白Bax呈高表達(dá)狀態(tài)，提示線(xiàn)粒體凋亡信號(hào)通路活化，誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡。

綜上所述，在結(jié)腸癌組織中，miR-155表達(dá)水平較高，對(duì)其進(jìn)行抑制能夠降低HCT116細(xì)胞、SW480細(xì)胞增殖率，促使細(xì)胞凋亡，其有望能成為結(jié)腸癌患者治療靶點(diǎn)，以期能夠改善患者預(yù)后。