手術(shù)創(chuàng)傷對在體口腔黏膜細(xì)胞狀態(tài)的影響研究

賈江

【摘 要】目的：探討手術(shù)創(chuàng)傷對在體口腔黏膜細(xì)胞狀態(tài)的影響。方法：回顧性分析性了12例保乳術(shù)患者以及15例乳腺癌根治術(shù)患者的臨床資料，于手術(shù)前后分別采用亞G1峰法以及Ki-67法分別對其口腔黏膜凋亡率以及增殖率進(jìn)行檢測、分析，并對兩組手術(shù)前后口腔黏膜細(xì)胞狀態(tài)以及組間細(xì)胞狀態(tài)進(jìn)行比較。結(jié)果：兩組患者在年齡、性別、營養(yǎng)狀態(tài)等方面的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；保乳術(shù)組手術(shù)前后口腔黏膜凋亡率分別為（27.49±2.27）%及（26.97±1.78）%，保乳術(shù)組患者手術(shù)前后增殖率分別為（16.02±2.19）%及（16.32±2.38）%；根治術(shù)組手術(shù)前后口腔黏膜凋亡率分別為（27.28±2.08）%及（27.44±2.17）%，根治術(shù)組手術(shù)前后口腔增殖率分別為（16.11±1.28）%及（16.35±1.30）%；兩組手術(shù)前后口腔黏膜凋亡率及增殖率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），且兩組術(shù)后口腔黏膜凋亡率及增殖率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：手術(shù)創(chuàng)傷對在體口腔黏膜細(xì)胞狀態(tài)不產(chǎn)生顯著性影響。

【關(guān)鍵詞】手術(shù)創(chuàng)傷；在體口腔黏膜；凋亡率；增殖率

【中圖分類號】R318 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1672-3783（2018）06-03--01

外科營養(yǎng)在臨床上受到了廣泛地關(guān)注，尤其對于圍術(shù)期患者，營養(yǎng)支持已經(jīng)被提升至營養(yǎng)治療的地位[1]。所以，如何及時以及有效地對單個機(jī)體的營養(yǎng)狀態(tài)加以評價，具有十分重要的意義與價值，以往關(guān)于外科營養(yǎng)的評價標(biāo)準(zhǔn)還存在著時間滯后以及特異度低下等方面的缺陷，已完全不能滿足指導(dǎo)臨床營養(yǎng)治療[2]。因此，探索一種及時、特異度高以及高效的營養(yǎng)評價標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)逐漸發(fā)展成為人們的迫切需求。

之前，我們的研究團(tuán)隊(duì)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，口腔黏膜細(xì)胞狀態(tài)受到人體營養(yǎng)狀態(tài)的影響，營養(yǎng)不良患者的口腔黏膜凋亡率以及增殖率顯著低于正常人，且提出可通過檢測口腔黏膜細(xì)胞凋亡率以及增殖率來對機(jī)體的營養(yǎng)狀況加以評價[3-4]。然而，圍術(shù)期患者機(jī)體口腔黏膜細(xì)胞的凋亡率以及增殖率除了受到營養(yǎng)等因素的影響以外，是否同樣也會受到手術(shù)創(chuàng)傷等方面因素的影響呢？本研究帶著這個問題進(jìn)行逐一探討，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年12月至2013年12月入住我院的12例保乳術(shù)患者以及15例乳腺癌根治術(shù)患者作為研究對象，術(shù)前采用患者總體主觀評價法PG-SGA進(jìn)行營養(yǎng)評定，結(jié)果顯示均無營養(yǎng)不良。采用ELSIA法對各項(xiàng)生化營養(yǎng)指標(biāo)均顯示正常；年齡23～54歲，平均（38.90±2.33）歲；無肝腎功能不良、無惡液質(zhì)以及無代謝性疾病；無口腔局部性疾?。粐g(shù)期基本可進(jìn)行正常的飲食。

1.2 口腔黏膜細(xì)胞的收集及處理 分別于手術(shù)前1、2d，術(shù)后1、2d，于晨起洗漱以及進(jìn)食之前，采用經(jīng)消毒的生理鹽水將口腔清潔干凈之后，再用經(jīng)消毒的醫(yī)用棉簽搔刮擦拭雙側(cè)口頰黏膜，每側(cè)擦拭次數(shù)各為3次，然后用棉簽放入約為15mL的生理鹽水的清潔容器之中進(jìn)行緩緩地震蕩，以500目的篩網(wǎng)進(jìn)行過濾，再經(jīng)轉(zhuǎn)速為800rpm的離心機(jī)離心5min，制作成細(xì)胞懸浮液，將上清液棄去，后用質(zhì)量濃度為80%的C2H5OH溶液加以固定，最后置于-20℃溫度的冰箱中放置24h備用[5]。

1.3 亞G1峰法檢測口腔黏膜細(xì)胞凋亡率 首先取已經(jīng)固定好的口腔黏膜細(xì)胞液，按照轉(zhuǎn)速為800rpm離心5min，將上清液棄去，使用磷酸鹽緩沖溶液（PBS）將細(xì)胞洗滌2次之后于80μL PC緩沖液于冰上孵育半小時；然后再使用PBS溶液將細(xì)胞洗滌2-3次，用10mg/L碘化丙錠（PI）以及濃度為0.1%的RNA酶于室溫條件下避光行DNA染色20min；經(jīng)上述方法處理的細(xì)胞使用FACSort流式細(xì)胞儀檢測分析。然后采用波長為488nm的激光進(jìn)行激發(fā)，被標(biāo)記的細(xì)胞發(fā)射紅色熒光被FACSort流式細(xì)胞儀透鏡接收；最后使用Cellquest軟件對上述所測細(xì)胞的熒光強(qiáng)度加以處理[6]。

1.4 Ki-67/DNA雙參數(shù)法檢測口腔黏膜細(xì)胞增殖率 首先取已經(jīng)固定好的口腔黏膜細(xì)胞液，按照轉(zhuǎn)速為800rpm離心5min；經(jīng)固定的細(xì)胞采用PBS洗滌2次，濃度為0.25%的Triton X-100 BSA稀釋的鼠抗人Ki-67單克隆抗體于溫度為4℃的條件下孵育24h；第二天再使用PBS將細(xì)胞洗滌2-3次之后，再加入標(biāo)有熒光標(biāo)記的FITC的羊抗鼠IgG抗體，于室溫條件下避光孵育半小時；PBS溶液洗滌2-3次之后，再采用濃度為10mg/L的PI以及濃度為0.1%的Rnase A于避光、室溫條件下用細(xì)胞核DNA染色約20min；使用FACSort流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測分析，經(jīng)波長為488nm的激光進(jìn)行激發(fā)，檢測被標(biāo)記的細(xì)胞發(fā)射的熒光，最后使用Cellquest軟件對上述所測細(xì)胞的熒光強(qiáng)度加以處理[7]。

1.5 觀察指標(biāo) 對兩組手術(shù)前后口腔黏膜細(xì)胞狀態(tài)以及組間細(xì)胞狀態(tài)進(jìn)行比較。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)均采用SPSS14.0軟件加以統(tǒng)計(jì)及處理，計(jì)量資料均以均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（）的形式進(jìn)行表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組手術(shù)前后口腔黏膜細(xì)胞凋亡率及增殖率對比分析 見表1。由下表可知，兩組手術(shù)前后口腔黏膜細(xì)胞凋亡率及增殖率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且兩組術(shù)后上述兩個指標(biāo)的差異也均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 兩組手術(shù)前后營養(yǎng)指標(biāo)對比分析 見表2。由下表可知，兩組手術(shù)前后營養(yǎng)指標(biāo)（包括前白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白及視黃醇蛋白）水平相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），且兩組術(shù)后上述指標(biāo)差異也均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3 討論

近代營養(yǎng)學(xué)發(fā)展日新月異，目前營養(yǎng)支持已成為臨床綜合治療重要的措施之一，它已經(jīng)由既往的輔助治療，發(fā)展為現(xiàn)代臨床治療中重要部分之一，臨床營養(yǎng)的角色從既往的營養(yǎng)支持正轉(zhuǎn)變?yōu)闋I養(yǎng)治療[8]?，F(xiàn)代外科營養(yǎng)被認(rèn)為是20 世紀(jì)后半葉醫(yī)學(xué)發(fā)展的重要里程碑，據(jù)研究顯示，住院病人中約有15﹪-60﹪的患者存在營養(yǎng)不良，并且有約50﹪為嚴(yán)重營養(yǎng)不良[9]。營養(yǎng)不良可導(dǎo)致疾病并發(fā)癥發(fā)生率和醫(yī)療費(fèi)用增加、住院時間延長、疾病恢復(fù)緩慢，而合理的營養(yǎng)支持有利于改善上述情況。特別在圍手術(shù)期應(yīng)用營養(yǎng)支持能減少手術(shù)并發(fā)癥和病死率，縮短住院時間，減少醫(yī)療費(fèi)用；在危重癥患者給予積極的營養(yǎng)支持能改善預(yù)后，使機(jī)械通氣時間、住ICU 時間、MODS 發(fā)生率及病死率明顯下降。本研究主要對如下觀察指標(biāo)進(jìn)行了探討與分析：對兩組手術(shù)前后口腔黏膜細(xì)胞狀態(tài)以及組間細(xì)胞狀態(tài)進(jìn)行比較。結(jié)果顯示：保乳術(shù)與乳房根治術(shù)組手術(shù)前后口腔黏膜細(xì)胞凋亡率及增殖率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且兩組術(shù)后上述兩個指標(biāo)的差異也均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；保乳術(shù)與乳房根治術(shù)組手術(shù)前后營養(yǎng)指標(biāo)（包括前白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白及視黃醇蛋白）水平相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），且兩組術(shù)后上述指標(biāo)差異也均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。綜上所述，手術(shù)創(chuàng)傷對在體口腔黏膜細(xì)胞狀態(tài)不產(chǎn)生顯著性影響。

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