犢牛大腸桿菌分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

李國(guó)良 吉春花

摘要：犢牛腹瀉通常是由致病性的大腸桿菌侵染引發(fā)的一種威脅嚴(yán)重的消化道疾病，短時(shí)間內(nèi)引發(fā)大量的新生犢牛死亡，造成的經(jīng)濟(jì)損失不可估量。犢牛出生后由于機(jī)體的抗病能力較差，身體抵抗能力不足，胃腸道消化功能不完善，再加上養(yǎng)殖管理不當(dāng)，面臨較多應(yīng)激因素刺激，會(huì)給致病性大腸桿菌的侵染提供條件。2周齡內(nèi)的哺乳犢牛受大腸桿菌危害較為嚴(yán)重，感染后常會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的腹瀉和敗血癥，死亡率達(dá)30%以上。為了了解青海省海西州大腸桿菌病的發(fā)生情況，針對(duì)海西州某養(yǎng)殖場(chǎng)的發(fā)病情況進(jìn)行了大腸桿菌病的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)，篩選出幾種敏感藥物，為大腸桿菌病的防治治療奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)，避免了不科學(xué)用藥造成的大腸桿菌產(chǎn)生耐藥性的問(wèn)題。

關(guān)鍵詞：犢牛腹瀉;大腸桿菌病;分離鑒定;藥敏試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：S858.23文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2022.01.026

Isolation，Identification and Drug Sensitivity Test of Calf Diarrheal Escherichia coli LI Guoliang，JI Chunhua

（Datong Cattle Breeding Farm，Qinghai Province，Datong Qinghai 810102，China）

Abstract：Calf diarrhea is usually a serious gastrointestinal disease caused by pathogenic Escherichia coli infection. It will cause a large number of newborn calves to die in a short period of time，and the economic loss is immeasurable. After the calf is born，due to poor disease resistance，insufficient body resistance，imperfect digestive function of the gastrointestinal tract，and improper breeding management，it will face more stress and stimulation，which will infect pathogenic E.coli provide conditions .Suckling calves within 2 weeks of age are more severely affected by E.coli，and severe diarrhea and sepsis often occur after infection，and the mortality rate is as high as 30%.In order to understand the occurrence of colibacillosis in cattle breeding farms in HaiXi County，Qinghai Province，the isolation and identification of colibacillosis and drug sensitivity test were carried out for the incidence of a breeding farm and several sensitive drugs were screened for the prevention and treatment of colibacillosis.The work laid a solid foundation and avoided unscientific use of drugs，which caused E. coli to develop drug resistance.

Keywords：calf diarrhea ，colibacillosis，isolation and identification，drug sensitivity test

0引言

犢牛腹瀉性大腸桿菌病是新生犢牛群體中發(fā)病流行率較高的一類細(xì)菌性傳染性疾病，有時(shí)發(fā)病率高達(dá)90%，致死率高達(dá)30%。犢牛腹瀉性大腸桿菌病主要表現(xiàn)為嚴(yán)重的腹瀉和敗血癥，機(jī)體嚴(yán)重脫水，短時(shí)間內(nèi)死亡，即便是能夠渡過(guò)急性期，也會(huì)表現(xiàn)為生長(zhǎng)發(fā)育不良，甚至停止生長(zhǎng)，使?fàn)倥５奶蕴曙@著升高，危及到養(yǎng)殖場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。隨著牛養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，需要養(yǎng)殖戶高度重視犢牛腹瀉性大腸桿菌病的針對(duì)性防控，及時(shí)采取措施做好有效的病原分離鑒定，并篩選出敏感的藥物，確保短時(shí)間內(nèi)將病情控制住，避免病原產(chǎn)生耐藥性，保證防治的針對(duì)性、合理性。

1養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)病情況

青海省海西州的某種牛場(chǎng)以養(yǎng)殖牦牛為主，2020年3月13日，在新生犢牛群體中出現(xiàn)一類腹瀉疾病，患病牛表現(xiàn)為嚴(yán)重的腹瀉，排出的腹瀉物中夾雜很多沒(méi)有消化的凝乳塊和飼料，身體迅速脫水，眼球向內(nèi)凹陷，并表現(xiàn)出不同程度的敗血癥癥狀，短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)了死亡病例。發(fā)病后種牛場(chǎng)的獸醫(yī)按照細(xì)菌性腹瀉開(kāi)展抗生素治療，選擇青霉素、鏈霉素、慶大霉素等藥物進(jìn)行治療，沒(méi)有取得很好的效果，隨后將病情上報(bào)上級(jí)的獸醫(yī)站，獸醫(yī)到達(dá)養(yǎng)殖場(chǎng)后結(jié)合整體的發(fā)病情況和典型的病理解剖，初步判定犢牛為大腸桿菌引發(fā)的腹瀉，隨后采集了病死牛的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、淋巴結(jié)組織進(jìn)行病原分離鑒定。

2病原分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

大腸桿菌分離鑒定主要涉及到營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、革蘭氏染色液、恒溫培養(yǎng)箱、載玻片、藥敏試驗(yàn)紙片、光學(xué)顯微鏡、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基、高壓滅菌蒸汽鍋、全自動(dòng)微生物生化分析儀、藥敏鑒定儀、無(wú)菌超凈工作臺(tái)。

將上述采集到的病變組織充分研磨之后，劃線接種到營(yíng)養(yǎng)組織培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基上，37 ℃放置在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，持續(xù)培養(yǎng)24h。小心挑取分離得到的菌落制作成涂片后，選擇使用革蘭氏染色液進(jìn)行全面的染色處理，然后放置在顯微鏡下觀察病原的染色情況[1]。再將分離得到的病原菌放置在鑒定管道中編碼處理，持續(xù)培養(yǎng)24 h進(jìn)行生化鑒定。

藥敏試驗(yàn)過(guò)程中，將分離得到的致病菌選擇使用14 種臨床常用的藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。抑菌圈的直徑越大，表示該抗生素對(duì)大腸桿菌的敏感性較強(qiáng)，分別判定為高敏、中敏和低敏。

3結(jié)果

3.1病原形態(tài)分析

通過(guò)將采集到的病料經(jīng)過(guò)研磨處理后，劃線接種到營(yíng)養(yǎng)組織培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基上，持續(xù)培養(yǎng)24 h后，能夠發(fā)現(xiàn)在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出灰白色露珠狀表面光滑的菌落，在SS瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出粉紅色的致病菌菌落，在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出了圓形、邊緣整齊、中間凸起、表面光滑并攜帶有紫黑色金屬光澤的菌落。在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出了圓形、整齊、扁平、光滑、濕潤(rùn)、中心呈深紅色的致病菌菌落，結(jié)合上述菌落的特征，可以初步判定致病原為大腸桿菌。

3.2染色結(jié)果

小心挑取分離得到的致病菌菌落將其涂抹在載玻片上，充分固定之后，選擇使用革蘭氏染色液對(duì)涂片進(jìn)行全面的染色處理，干燥之后放置在顯微鏡下觀察，能夠發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性染色短小棒狀、兩端鈍圓的桿菌，成對(duì)排列或單個(gè)存在。

3.3生化鑒定結(jié)果

將分離得到的病原在生化培養(yǎng)箱中進(jìn)行生化鑒定，能夠發(fā)現(xiàn)分離得到的大腸桿菌對(duì)乳糖、麥芽糖、蕈糖、精氨酸雙水解酶、山梨醇呈陽(yáng)性，對(duì)乙酰普胺、尿素、木糖醇、硝酸鹽呈陰性，結(jié)合生化鑒定，可以判定病原為大腸桿菌[2]。

3.4藥敏試驗(yàn)結(jié)果

從藥敏試驗(yàn)結(jié)果能夠看出，14種臨床常用的抗生素中，高敏類的抗生素?cái)?shù)量較少，大多呈低敏或者中敏，其中頭抱他啶、米諾環(huán)素、頭抱曲松、頭孢唑啉對(duì)大腸桿菌敏感，呈高敏反應(yīng)。詳細(xì)情況見(jiàn)表1。

4討論

犢牛腹瀉性大腸桿菌病的治療應(yīng)結(jié)合藥敏試驗(yàn)結(jié)果，選擇頭抱他啶、米諾環(huán)素、頭抱曲松，頭抱唑啉等幾種抗生素輪換交替使用。避免長(zhǎng)時(shí)間使用一種抗生素，否則很容易產(chǎn)生耐藥性，使得抗生素的使用種類越來(lái)越少，給疾病的防控工作帶來(lái)很大難題。在進(jìn)行抗菌治療的同時(shí)，還應(yīng)加強(qiáng)補(bǔ)液和電解質(zhì)治療，對(duì)于癥狀相對(duì)較輕并出現(xiàn)輕度脫水的病牛，可以口服補(bǔ)液鹽，癥狀較為嚴(yán)重的應(yīng)該靜脈注射葡萄糖和生理鹽水。還應(yīng)該采用強(qiáng)心、利尿、解毒的安鈉咖、磺胺類藥物、維生素類藥物進(jìn)行聯(lián)合治療[3]。在臨床診治中有條件的養(yǎng)殖場(chǎng)一定要進(jìn)行嚴(yán)格的病原分離鑒定，并在此基礎(chǔ)上篩選出敏感的抗生素，然后再進(jìn)行治療，避免盲目用藥造成不必要的經(jīng)濟(jì)損失。

5結(jié)束語(yǔ)

臨床上由于大腸桿菌病的血清型較多，不同血型的致病性存在很大差異性，且不存在交叉免疫保護(hù)，預(yù)防該種疾病的難度較大，應(yīng)結(jié)合該地區(qū)的疾病發(fā)生情況及時(shí)血清型鑒定結(jié)果，選擇符合血清型的疫苗進(jìn)行針對(duì)性的免疫接種，這樣能提高疫苗免疫接種的針對(duì)性和科學(xué)性。日常養(yǎng)殖管理中，應(yīng)該將“預(yù)防為主”的理念全面融入到犢牛養(yǎng)殖環(huán)節(jié)，加強(qiáng)對(duì)新生犢牛的有效護(hù)理，常發(fā)地區(qū)應(yīng)該每年進(jìn)行疫苗免疫接種，提高牲畜的身體抵抗能力。一旦出現(xiàn)患病病例，做好徹底的隔離清理和衛(wèi)生消毒，加強(qiáng)養(yǎng)殖管理，做好環(huán)境衛(wèi)生調(diào)控，營(yíng)造不利于大腸桿菌傳播流行的環(huán)境，確保牛養(yǎng)殖安全。

參考文獻(xiàn)

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