外周血中微RNA-16和微RNA-124表達(dá)水平對(duì)抑郁癥患者治療效果的影響

邵秋靜，冀紫陽(yáng)，董 嬌，王長(zhǎng)虹

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院精神科，河南 新鄉(xiāng) 453002)

抑郁癥是一種臨床上常見(jiàn)的以情緒低落、快感缺失、思維遲緩、意志活動(dòng)減退為主的心境障礙，近年來(lái)其發(fā)生率逐年升高[1]。5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)與抑郁癥的發(fā)生、進(jìn)展有關(guān)，5-HT具有神經(jīng)調(diào)控作用，參與睡眠、焦慮、情感控制等多種腦功能活動(dòng)[2]。目前，臨床治療抑郁癥多采用艾司西酞普蘭、米氮平等藥物，其中艾司西酞普蘭可選擇性抑制5-HT再攝取，有效提高中樞神經(jīng)系統(tǒng)外5-HT水平，起到抗抑郁效果[3]。米氮平可拮抗α2受體，促進(jìn)5-HT釋放，且可協(xié)同中樞神經(jīng)系統(tǒng)5-HT受體，發(fā)揮抗焦慮、抗抑郁作用[4]。但有臨床研究發(fā)現(xiàn)，30%～40%的抑郁癥患者抗抑郁治療效果不佳，可能會(huì)出現(xiàn)抑郁復(fù)發(fā)、癥狀殘留等情況[5]。SI等[6]研究發(fā)現(xiàn)，微RNA(microRNA，miRNA)與抑郁癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。miR-16、miR-124是miRNA家族的成員，其中miR-16相應(yīng)堿基序列可匹配5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體的3′端非翻譯區(qū)，上調(diào)5-HT表達(dá)，抑制抑郁癥的發(fā)生；而miR-124可調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞再生，促進(jìn)神經(jīng)元分化，下調(diào)5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)，促進(jìn)抑郁癥的發(fā)生[7-8]。結(jié)合miR-16、miR-124作用機(jī)制，推測(cè)二者可能與抑郁癥患者接受艾司西酞普蘭、米氮平治療的臨床療效有關(guān)，但具體關(guān)系尚未明確。鑒于此，本研究探討了抑郁癥患者外周血中miR-16、miR-124的表達(dá)水平與臨床療效的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2020年5月至2021年3月新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院收治的60例抑郁癥患者為研究對(duì)象。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《精神病診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)(第5版)》抑郁癥[9]相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)經(jīng)臨床癥狀(自我評(píng)價(jià)低、有自傷或自殺觀念、注意力低等)、病史等確診為抑郁癥；(3)入院時(shí)漢密爾頓焦慮量表(Hamilton anxiety scale，HAMA)[10]≥14分，入院時(shí)漢密爾頓抑郁量表(Hamilton depression scale，HAMD)[11]≥17分；(4)首次發(fā)病，且首次接受抑郁癥相關(guān)治療；(5)受教育程度為初中及以上；(6)依從性好，可配合臨床研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)分裂情感性精神障礙、精神發(fā)育遲滯、廣泛性發(fā)育障礙、譫妄、癡呆、記憶障礙或其他認(rèn)知障礙者；(2)物質(zhì)(酒、藥物等)濫用所致精神障礙；(3)患有嚴(yán)重或不穩(wěn)定的軀體疾病者、糖尿病、甲狀腺疾病、高血壓病、心臟病等；(4)患有閉角型青光眼；(5)有癲癇病史(高熱驚厥者除外)者；(6)符合《精神疾病的診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè)》2000年修訂版酒藥依賴(lài)(尼古丁依賴(lài)除外)診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者；(7)患有或曾患有藥源性惡性綜合征、嚴(yán)重遲發(fā)性運(yùn)動(dòng)障礙者；(8)妊娠期、哺乳期、計(jì)劃妊娠者。本研究60例患者中，男27例，女33例；年齡24～38(31.63±2.07)歲；病程3～11(7.15±1.12)個(gè)月；入院時(shí)HAMA評(píng)分14～21(17.12±1.21)分；入院時(shí)HAMD評(píng)分17～24(20.13±1.04)分。本研究獲新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)[XYEFYLL-(科研)-2020-26]，所有患者及家屬知情同意并簽署研究知情同意書(shū)。

1.2 治療方法所有患者接受米氮平片[華裕(無(wú)錫)制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20100103]口服治療，起始劑量為15 mg·d-1，服用2周后增加至30 mg·d-1，并維持此劑量服用；若服用2周后治療效果不明顯，可增加至45 mg·d-1(最大劑量不得超過(guò)45 mg·d-1)，或調(diào)整為聯(lián)合口服艾司西酞普蘭(山東京衛(wèi)制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H2008059)，艾司西酞普蘭起始劑量為10 mg·d-1，可根據(jù)患者病情變化適當(dāng)調(diào)整用藥劑量，最大劑量不得超過(guò)20 mg·d-1，注意米氮平不可掰開(kāi)服用。治療周期為3個(gè)月。

1.3 基線(xiàn)資料采集設(shè)計(jì)基線(xiàn)資料填寫(xiě)表，詢(xún)問(wèn)并記錄患者相關(guān)基線(xiàn)資料，包括：性別、年齡、病程、入院時(shí)HAMA評(píng)分、入院時(shí)HAMD評(píng)分、受教育程度(高中或中專(zhuān)、專(zhuān)科及以上)、婚姻情況(已婚、未婚/離異/喪偶)等。

1.4 臨床療效評(píng)估治療3個(gè)月后，參照文獻(xiàn)[12]方法，采用HAMA、HAMD評(píng)估臨床療效。HAMA包括14個(gè)項(xiàng)目，各項(xiàng)目均采用0～4分的5級(jí)評(píng)分法，總分0～56分，得分越高表示焦慮癥狀越嚴(yán)重。HAMD包括17個(gè)項(xiàng)目，其中第1～3、7～11、15、17項(xiàng)采用0～4分的5級(jí)評(píng)分法，第4～6、12～14、16項(xiàng)采用0～2分的3級(jí)評(píng)分法，總分0～54分，得分越高表示焦慮癥狀越嚴(yán)重。HAMA≥7分或HAMD≥8分表示臨床療效不佳，反之則為臨床療效良好。

1.5 外周血中miR-16、miR-124相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)治療前，采集患者空腹靜脈血3 mL，使用低速離心機(jī)(湖南赫西儀器裝備有限公司)3 000 r·min-1離心10 min，離心半徑為10 cm，分離血漿，置于-20 ℃環(huán)境下貯存、待檢。取200 μL標(biāo)本，使用TRIzol總RNA試劑盒(美國(guó)Thermo Scientific公司)提取樣本總RNA，使用反轉(zhuǎn)錄儀(美國(guó)Thermo Scientific公司)將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,反應(yīng)體系共20 μL：1.2 μL引物、0.2 μL反轉(zhuǎn)錄酶、10 μL 2×反轉(zhuǎn)錄緩沖液、2 μL RNA模板，6.6 μL 焦碳酸二乙酯水；反應(yīng)程序： 26 ℃變性30 min、42 ℃退火30 min、85 ℃延伸10 min。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)結(jié)束后，使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)分析儀(山東博科科學(xué)儀器有限公司)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR，反應(yīng)體系共20 μL：2 μL cDNA模板，0.4 μL Taq DNA聚合酶，0.08 μL上、下游引物、17.44 μL 雙蒸水；反應(yīng)條件：95 ℃變性3 min、95 ℃退火30 s、62 ℃延伸40 s，共40個(gè)循環(huán)。采用2-△△Ct法計(jì)算miR-16、miR-124相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 抑郁癥患者臨床療效60例抑郁癥患者經(jīng)3個(gè)月治療后，19例(31.67%)患者臨床療效不佳(療效不佳組)，HAMA評(píng)分8～15(9.34±1.02)分，HAMD評(píng)分9～18(11.36±1.20)分；41例(68.33%)患者臨床療效良好(療效良好組)，HAMA評(píng)分2～7(3.13±0.76)分，HAMD評(píng)分1～8(4.25±0.97)分。

2.2 2組患者基線(xiàn)資料比較2組患者的性別、年齡、病程、受教育程度、婚姻狀況比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 2組患者基線(xiàn)資料比較

2.3 2組患者外周血中miR-16、miR-124相對(duì)表達(dá)量比較療效不佳組和療效良好組患者外周血中miR-16相對(duì)表達(dá)量分別為0.03(0.03，0.04)、0.06(0.04，0.07)，miR-124相對(duì)表達(dá)量分別為5.22(4.25，5.96)、4.00(3.40，4.60)。療效良好組患者外周血中miR-16相對(duì)表達(dá)量顯著高于療效不佳組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.288，P<0.05)；療效良好組患者外周血中miR-124相對(duì)表達(dá)量顯著低于療效不佳組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.450，P<0.05)。

2.4 抑郁癥患者外周血中miR-16、miR-124相對(duì)表達(dá)量與臨床療效的關(guān)系結(jié)果見(jiàn)表2。將患者外周血中miR-16、miR-124相對(duì)表達(dá)量作為自變量，抑郁癥患者臨床預(yù)后情況作為因變量進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析，結(jié)果顯示，miR-16是抑郁癥患者臨床療效的保護(hù)因子(OR<1，P<0.05)，miR-124是抑郁癥患者臨床療效的危險(xiǎn)因子(OR>1，P<0.05)。

表2 抑郁癥患者外周血中miR-16、miR-124相對(duì)表達(dá)量與臨床療效的關(guān)系

2.5 外周血中miR-16、miR-124相對(duì)表達(dá)量預(yù)測(cè)抑郁癥患者臨床療效的價(jià)值分析結(jié)果見(jiàn)圖1和表3。將抑郁癥患者外周血中miR-16、miR-124相對(duì)表達(dá)量作為檢驗(yàn)變量，抑郁癥患者臨床療效情況作為狀態(tài)變量，繪制ROC曲線(xiàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，外周血中miR-16、miR-124相對(duì)表達(dá)量單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)抑郁癥患者臨床療效不佳風(fēng)險(xiǎn)的AUC分別為0.843、0.849、0.909。外周血中miR-16、miR-124相對(duì)表達(dá)量單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)抑郁癥患者臨床療效的AUC、敏感度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。miR-16和miR-124相對(duì)表達(dá)量聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)抑郁癥患者臨床療效的特異度顯著高于miR-16相對(duì)表達(dá)量單獨(dú)檢測(cè)，顯著低于miR-124相對(duì)表達(dá)量單獨(dú)檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表3 外周血中miR-16、miR-124相對(duì)表達(dá)量預(yù)測(cè)抑郁癥患者臨床療效的價(jià)值

圖1 外周血中miR-16、miR-124水平預(yù)測(cè)抑郁癥患者臨床療效的ROC

3 討論

抑郁癥作為精神科常見(jiàn)疾病，病因尚未明確，多認(rèn)為與生物、環(huán)境等因素交互作用有關(guān)，疾病早期患者主要有心境低落、思維遲緩等表現(xiàn)，但隨著疾病進(jìn)展，約1/5的抑郁癥患者可能會(huì)產(chǎn)生自殺觀念或行為[13]。研究發(fā)現(xiàn)，大部分抑郁癥患者經(jīng)抗抑郁治療后臨床癥狀可緩解，且能夠恢復(fù)病前狀態(tài)，但也有部分患者臨床療效不佳，會(huì)出現(xiàn)疾病反復(fù)發(fā)作情況[14]。因此，明確可能與抑郁癥患者臨床療效有關(guān)的指標(biāo)，對(duì)指導(dǎo)臨床早期干預(yù)尤為重要。

miRNA是一種由22～25個(gè)核苷酸序列組成的非編碼小分子RNA，具有基因調(diào)控作用，在腦組織中表達(dá)豐富，可維持神經(jīng)元功能，調(diào)節(jié)神經(jīng)可塑性，促進(jìn)神經(jīng)再生[15]。有研究指出，miRNA通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞分化與蛋白質(zhì)合成及重塑神經(jīng)元結(jié)構(gòu)，參與抑郁癥發(fā)生與發(fā)展過(guò)程[16]。據(jù)報(bào)道，5-HT表達(dá)異常是抑郁癥發(fā)生的關(guān)鍵，5-HT具有調(diào)節(jié)情緒、調(diào)控神經(jīng)纖維生長(zhǎng)等作用，其表達(dá)降低會(huì)影響情緒調(diào)控，繼而導(dǎo)致抑郁癥發(fā)生[17]。miR-16、miR-124是與5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體有關(guān)的miRNA基因，抗抑郁藥物通過(guò)作用于中縫核，可增加miR-16表達(dá)，減少5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)，且直接將miR-16用于中縫核，可抑制5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體生成，發(fā)揮抗抑郁作用[18]。李桂萍等[19]研究也表明，通過(guò)降低大鼠腦脊液miR-16水平，會(huì)增加5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)，加重抑郁樣行為，推進(jìn)疾病發(fā)展。miR-124作為腦組織中豐富表達(dá)的miRNA，其通過(guò)降低糖皮質(zhì)激素受體活性，可阻止Lim激酶1干擾樹(shù)突生長(zhǎng)，抑制腦源性生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)[20]。同時(shí)，miR-124可重塑海馬神經(jīng)結(jié)構(gòu)，影響5-HT釋放，繼而引發(fā)抑郁癥[21]。相關(guān)研究表明，首發(fā)抑郁癥患者miR-124表達(dá)顯著增加，且miR-124表達(dá)與患者治療效果密切相關(guān)，可作為抑郁癥診斷、療效評(píng)估的有效生物學(xué)指標(biāo)[22]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，療效良好組患者外周血中miR-16相對(duì)表達(dá)量顯著高于療效不佳組，miR-124相對(duì)表達(dá)量顯著低于療效不佳組，說(shuō)明miR-16、miR-124可能與抑郁癥患者臨床療效有關(guān)。

本研究logistic回歸分析結(jié)果顯示，miR-16是抑郁癥患者臨床療效的保護(hù)因子，miR-124是抑郁癥患者臨床療效的危險(xiǎn)因子，說(shuō)明隨著miR-16表達(dá)降低、miR-124表達(dá)增加，患者療效不佳風(fēng)險(xiǎn)增加，這進(jìn)一步驗(yàn)證了miR-16、miR-124與抑郁癥患者臨床療效有關(guān)。分析原因可能為：外周血中miR-16表達(dá)水平降低、miR-124表達(dá)水平升高，會(huì)促進(jìn)5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生，抑制5-HT生成，繼而加重抑郁癥患者焦慮、抑郁情緒，影響抗抑郁治療效果，導(dǎo)致臨床療效不佳[23-24]。本研究繪制ROC曲線(xiàn)發(fā)現(xiàn)，外周血中miR-16、miR-124相對(duì)表達(dá)量預(yù)測(cè)抑郁癥患者臨床療效均有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值，二者截?cái)嘀捣謩e取0.045、4.240時(shí)，可獲得最佳預(yù)測(cè)價(jià)值。因此，對(duì)于治療前外周血中miR-16表達(dá)降低、miR-124表達(dá)增加的抑郁癥患者，臨床可考慮在抗抑郁藥物治療基礎(chǔ)上增加經(jīng)顱直流電刺激、心理干預(yù)等，以提高整體干預(yù)效果，改善患者預(yù)后。同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)，外周血中miR-16和miR-124相對(duì)表達(dá)量聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)抑郁癥患者臨床療效的AUC、敏感度與各項(xiàng)單獨(dú)檢測(cè)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而特異度顯著高于miR-16相對(duì)表達(dá)量單獨(dú)檢測(cè)，未來(lái)臨床可考慮將二者結(jié)合起來(lái)觀察，提高抑郁癥患者整體獲益。但本研究并未分析抑郁癥患者外周血中miR-16與miR-124的相關(guān)性，研究存有局限，未來(lái)仍需展開(kāi)前瞻性研究加以驗(yàn)證。

綜上所述，抑郁癥患者臨床療效不佳可能受外周血miR-16水平降低、miR-124水平升高影響，臨床可于抑郁癥患者藥物治療前檢測(cè)外周血中miR-16、miR-124表達(dá)水平，從而輔助評(píng)估抑郁癥患者臨床療效不佳風(fēng)險(xiǎn)。