Toll樣受體在慢性乙型肝炎患者免疫損傷中的作用研究進展

楊 鑫，楊道坤

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院感染科，河南 衛(wèi)輝 453100)

慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染呈全球性流行，全世界約有2.57億慢性HBV感染患者，每年約有88.7萬人死于HBV感染相關(guān)性疾病[1]。應(yīng)用核苷(酸)類似物[nucleoside (acid) analogs，NAs]和干擾素(interferon，IFN)-α抗病毒治療是目前HBV感染患者的一線治療策略[2]，其可以有效地抑制HBV復(fù)制，但是不能徹底清除共價閉合的環(huán)狀DNA(covalently closed circular deoxyribonucleic acid，cccDNA)。HBV可通過多種策略逃避宿主的先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)，從而在人體內(nèi)長期存在。慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)患者的自身免疫狀態(tài)大多通過病毒復(fù)制而被激活[3]。但有研究表明，CHB患者T淋巴細胞上存在多種抑制性受體，HBV可以抑制先天性免疫反應(yīng)，而非特異性免疫應(yīng)答仍然發(fā)揮重要作用；在HBV感染初期、出現(xiàn)可檢測的肝臟特異性免疫反應(yīng)之前，大部分HBV可從血清和肝臟中被清除，從而啟動后續(xù)特異性免疫應(yīng)答[4-5]。Toll樣受體(toll-like receptors，TLRs)是機體病原體的傳感器，可以介導(dǎo)肝臟的非特異性免疫反應(yīng)，參與病毒感染的免疫防御[6-7]。在TLRs中，TLR3是病毒感染的關(guān)鍵傳感器，參與病毒介導(dǎo)的非特異性免疫反應(yīng)，在肝病中的功能仍是目前研究的熱點[8-9]。因此，本文針對TLRs在CHB發(fā)展中的作用以及TLRs在CHB抗病毒免疫治療的作用研究進展進行綜述，并著重對TLR3在HBV中的免疫調(diào)節(jié)作用以及其抑制HBV相關(guān)肝細胞癌的作用進行闡述，以期為臨床研究更有效的抗HBV方案提供依據(jù)。

1 TLRs在HBV感染中的作用研究概況

在已發(fā)現(xiàn)的人類TLRs中，非實質(zhì)肝細胞(如單核細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞、星狀細胞)表達TLRs整個模式識別受體，而肝細胞主要表達TLR2、TLR3、TLR4和視黃酸(維甲酸)誘導(dǎo)基因蛋白Ⅰ(retinoic acid-inducible gene Ⅰ，RIG-1)等模式識別受體，而TLR7、TLR8、TLR9和TLR10表達水平非常低；但有研究發(fā)現(xiàn)，HBV轉(zhuǎn)基因小鼠接受1次靜脈注射TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7和TLR9特異性配體后，除TLR2外，其余配體均以IFN-α、IFN-β依賴方式抑制肝臟HBV復(fù)制[10]。BROERING等[11]研究發(fā)現(xiàn)，與乙型肝炎E抗原(hepatitis B e antigen，HBeAg)陰性患者相比，HBeAg陽性患者新鮮肝臟活檢組織肝細胞和庫普弗細胞中TLR2表達降低。以上這些研究結(jié)果均說明TLRs家族成員參與了機體非特異性免疫。

2015年臨床前研究結(jié)果顯示，TLR7、TLR8和TLR9的小分子激動劑在Ⅰ期和Ⅱ期的臨床試驗中安全性較高[12-13]，其中以TLR9配體作為輔助劑所生產(chǎn)的乙肝病毒疫苗療效優(yōu)于常規(guī)乙肝病毒疫苗，而且已獲批準(zhǔn)用于臨床[14]。隨后研究證明，TLRs配體有較強的抗病毒能力，而且TLR7激動劑正在進行慢性HBV感染治療的臨床試驗，如2020年有研究指出，在HBV感染小鼠模型中，TLR7配體可打破小鼠的免疫耐受性，持續(xù)誘導(dǎo)乙型肝炎抗原(hepatitis B antigen,HBAg)特異性抗體和T細胞反應(yīng)，有助于清除HBV病毒[15]；BERTOLETTI等[16]研究也證明，微調(diào)TLR7激動劑有助于CHB的功能性治愈。HU等[17]于2021年發(fā)現(xiàn)一種新型的選擇性TLR7激動劑TQ-A3334，其在人體內(nèi)能夠被快速吸收，且研究過程中未發(fā)生嚴(yán)重的不良事件，未來可以用于治療CHB。

2 TLR3在HBV中的免疫調(diào)節(jié)作用

TLR3基因在人體主要表達于原代肝細胞、Kupffer細胞、肝樹突狀細胞、肝星狀細胞[18]。TLR3可通過激活Kupffer細胞和肝竇內(nèi)皮細胞抑制HBV基因組復(fù)制；TLR3配體polyI:C能激活肝星狀細胞，誘導(dǎo)干擾素調(diào)節(jié)因子 (interferon regulatory factor，IRF) 3、IRF7的表達與磷酸化，從而使IFN-β、IFN-λ表達增加，進而顯著抑制人肝癌HepG2細胞中HBV復(fù)制[19-20]，這也證明了肝星狀細胞不僅僅參與肝損傷的修復(fù)，也參與HBV感染者的天然免疫。KAYESH等[21]研究發(fā)現(xiàn)，HBV感染者體內(nèi)TLR3及其信號分子表達水平明顯低于健康人群，認為TLR3表達受損可能是導(dǎo)致免疫應(yīng)答異常的原因，上調(diào)TLR3及其信號分子的表達并應(yīng)用TLR3激動劑可能是重新激活CHB患者的免疫應(yīng)答和清除HBV的關(guān)鍵途徑。有研究發(fā)現(xiàn)，將小鼠TLR3基因敲除后，其體內(nèi)不再表達IL-8、其他激活抗HBV免疫反應(yīng)所必需的免疫分子，并認為上調(diào)TLR3及其信號分子的表達是重新激活機體先天免疫反應(yīng)和清除乙肝病毒的關(guān)鍵[22]。機體免疫激活的自然殺傷細胞也可介導(dǎo)IFN-λ的表達，進而抑制HepG2細胞中HBV的復(fù)制[23]。TLR3還可以識別細胞內(nèi)的病毒雙鏈RNA(double-strand RNA，dsRNA)，通過β干擾素TIR結(jié)構(gòu)域銜接蛋白(TIR-domain-containing adaptor inducing interferon-β，TRIF)途徑激活核因子-κB、RIF3和(或)RIF7；除了病毒dsRNA，TLR3還可以識別內(nèi)源性dsRNA、內(nèi)源性mRNA及外源性mRNA，進而通過HBV RNA與dsRNA結(jié)合蛋白結(jié)合，誘導(dǎo)機體免疫應(yīng)答，從而有助于清除病毒；Riboxxol是已發(fā)現(xiàn)的激活TLR3合成的雙鏈dsRNA，在體外培養(yǎng)的原代人肝細胞中具有持久性的抗病毒作用，可抑制HBV復(fù)制并降低cccDNA水平[24-25]。

有研究報道，CHB患者肝內(nèi)基因表達譜顯示抗病毒效應(yīng)子、干擾素刺激基因、TLRs和病原體識別受體途徑均被顯著下調(diào)，但與HBV復(fù)制沒有直接關(guān)系[26]。THOMPSON等[27]和MANESIS等[28]研究發(fā)現(xiàn)，宿主先天性免疫反應(yīng)的損害與HBeAg(+)患者中常見的血清或肝內(nèi)HBV DNA水平升高無關(guān)，而較高水平的乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)通過下調(diào)Ⅰ/Ⅲ型IFN信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和炎癥反應(yīng)，抑制TLR3表達，進而抑制免疫反應(yīng)，因此，HBsAg水平較低的患者體內(nèi)固有免疫基因有較高表達。REAL等[29]反向證明了在缺乏HBsAg的情況下，HBV復(fù)制能觸發(fā)依賴TLR3的IFN反應(yīng)，而TLR3高表達可進一步抑制肝臟中病毒復(fù)制。因此，降低HBsAg水平可部分恢復(fù)患者的肝內(nèi)先天性免疫，恢復(fù)機體對病毒的免疫應(yīng)答。同時ASADI-ASADABAD等[23]研究報道，TLR3配體可顯著抑制HBSAg和HBeAg表達。這些研究結(jié)果均支持TLR3免疫調(diào)節(jié)劑可以作為CHB功能性治愈的策略。

3 TLR3抑制HBV相關(guān)肝細胞癌發(fā)展

TLR3與HBV相關(guān)的肝細胞癌息息相關(guān)，研究報道，與癌旁組織相比，肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC )組織中TLR3表達顯著降低，證明了TLR3可促進肝癌細胞凋亡，抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-2的表達及內(nèi)皮祖細胞和血管的生成[30]。有研究報道，TLR3激動劑雙鏈RNA(BM-06)可激活TLR3通路調(diào)節(jié)機體的先天免疫反應(yīng)，進而抑制肝癌細胞增殖[31]。有研究發(fā)現(xiàn)， TLR3激動劑聚丙烯酸和索拉非尼聯(lián)合治療可以抑制小鼠體內(nèi)蛋白激酶B、絲裂原活化蛋白激酶和細胞信號調(diào)節(jié)激酶的磷酸化，增強局部自然殺傷細胞、T細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞的活化，進而增加腫瘤細胞凋亡和腫瘤微環(huán)境中的宿主免疫反應(yīng)，達到對HCC控制的目的[32]。BONNIN等[33]研究報道，TLR3在人類和小鼠肝癌細胞中的表達均明顯下降，TLR3低表達是肝癌細胞凋亡的逃避機制。在一項關(guān)于HCC患者TLR3基因的研究中發(fā)現(xiàn)，TLR3基因多態(tài)性可能是HBV相關(guān)HCC的危險因素，TLR3和TLR4基因多態(tài)性是檢測HBV感染相關(guān)癌癥的標(biāo)志物[34]。最近有研究報道，TLR3缺乏會減少肝細胞凋亡，加速HCC的發(fā)生，且HCC患者TLR3表達與預(yù)后相關(guān)，TLR3可成為HCC的治療靶點[33]。但目前尚無TLR3激動劑類藥物進入臨床?？傊?，TLR3在HBV感染及HBV相關(guān)肝細胞癌中均發(fā)揮著重要作用，TLR3的免疫調(diào)節(jié)作用在HCC診療中有很大的研究前景。

4 結(jié)語與展望

HBV感染人群先天性免疫受抑制，先天性免疫相關(guān)受體表達受損，適應(yīng)性免疫細胞功能下降，特別是HBV特異性T細胞功能衰竭，這些仍是CHB治愈面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。目前核苷(酸)類似物和IFN-α雖可以有效地抑制HBV復(fù)制，但不能清除肝內(nèi)cccDNA。近年來免疫療法是肝臟疾病的研究熱點，適應(yīng)性免疫應(yīng)答在HBV清除中發(fā)揮主要作用，HBV感染與肝臟天然免疫之間的相互作用在疾病發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，未來CHB的治療可能更側(cè)重于免疫治療。TLRs在CHB的發(fā)展和抗病毒免疫治療中發(fā)揮著重要作用，特別是TLR3為病毒感染的關(guān)鍵傳感器，參與病毒介導(dǎo)的非特異性免疫反應(yīng)，TLR3有可能成為CHB及HBV相關(guān)肝細胞癌治療的潛在靶點。