基于傳統(tǒng)知識調(diào)查和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的土家藥天珠散增藥組方抗腦卒中效益評價研究

祝娜　張豐榮　田華詠　李晴晴　黃秀蘭　李志勇

〔摘要〕 目的 構(gòu)建土家族方劑天珠散增藥組方并探討其抗腦卒中的效益性。方法 圍繞疾病腦卒中，首先通過區(qū)域性問卷調(diào)查方法確定候選增藥范圍，然后利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對候選藥物與疾病靶點(diǎn)進(jìn)行分析，確定最佳新組方，再依據(jù)土家族的“主幫客信”配伍理論，對新方展開合理性評析，最后利用分子對接方法，對新方治療腦卒中的機(jī)制進(jìn)行初步探究。結(jié)果 土家醫(yī)推薦與天珠散配伍抗腦卒中的藥物中，八角楓、三角風(fēng)、頭暈草排名靠前;對比各候選藥物預(yù)測靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，確定了天珠散加頭暈草為新方最佳配伍，其中天麻為主藥，延齡草為幫藥，頭暈草可兼為幫、客、信藥;新方可通過參與一氧化氮生物合成過程調(diào)控、磷酸化的正調(diào)控、對含氧化合物的反應(yīng)、神經(jīng)元投射維持等生物過程，對腦卒中疾病癥狀進(jìn)行干預(yù);分子對接結(jié)果顯示，該組方成分26-chloro-26-deoxycryptogenin、β-ecdysterone、ecdysterone、gastrodin、4-hydroxycinnamic acid分別與蛋白APP、IL-6、MTOR、JAK2、TLR4具有良好的結(jié)合活性。結(jié)論 天珠散配伍頭暈草具有合理性與效益性，其或可增加原方天珠散抗腦卒中效果。

〔關(guān)鍵詞〕 天珠散;腦卒中;組方優(yōu)化;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);問卷調(diào)查;分子對接;土家藥

〔中圖分類號〕R285.5? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ? 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2022.04.020

Benefit evaluation of Tujia medicine Tianzhusan added medicine prescription based on

traditional knowledge investigation and network pharmacology

ZHU Na ZHANG Fengrong TIAN Huayong LI Qingqing HUANG Xiulan LI Zhiyong

（1. School of Pharmacy， Minzu University of China， Beijing 100081， China; 2. Institute of Chinese Materia Medica， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China; 3. Institute of Ethnic Medicine of Xiangxi Prefecture， Jishou， Hunan 416000， China; 4. School of Traditional Chinese Medicine， Shandong University of Traditional Chinese Medicine， Jinan， Shandong 250355， China）

〔Abstract〕 Objective To construct Tujia medicine Tianzhusan added medicine prescription and explored its effectiveness in anti stroke. Methods Focusing on stroke， firstly， the scope of candidate herbals was determined by regional questionnaire survey， and network pharmacology was used to analyze the candidate herbals and disease targets to determine the best new prescription. Then， according to the compatibility theory "Zhu Bang Ke Xin" of Tujia doctors， the new prescription was rationally evaluated. Molecular docking technology was used to explore the mechanism of the new prescription in the treatment of stroke preliminarily. Results Among the herbals recommended by Tujia doctors for the treatment of stroke with Tianzhusan， Bajiaofeng （Alangium Chinense）， Sanjiaofeng （Hedera Nepalensis） and Touyuncao （Geum Japonicum Thunb） were top ranked. By comparing the topological parameters of each candidate herbal prediction targets and disease targets network， it was determined that Tianzhusan plus Touyuncao （Geum Japonicum Thunb） was the best compatibility of the new prescription， in which Tianma （Gastrodiae Rhizoma） was the “Zhu” herbal， Yanlingcao （Trillium Tschonoskii） was the “Bang” herbal， and Touyuncao （Geum Japonicum Thunb） might act as the “Bang”， “Ke” and “Xin” herbal at the same time. The new prescription might intervene the symptoms of stroke by participating in the regulation of nitric oxide biosynthesis， the positive regulation of phosphorylation， the response to oxygenates， the maintenance of neuronal projection and other biological processes. The results of molecular docking showed that the constituents of 26-chloro-26-deoxycryptogenin， β-ecdysterone， ecdysterone， gastrodin and 4-Hydroxycinnamic acid had good binding activities with proteins APP， IL6， mTOR， JAK2 and TLR4 respectively. Conclusion Tianzhusan combined with Touyuncao （Geum Japonicum Thunb） is reasonable and effective， which may increase the effect of the original prescription Tianzhusan in the treatment of stroke.

〔Keywords〕 Tianzhusan; stroke; formula optimization; network pharmacology; questionnaire survey; molecular docking; Tujia medicine

腦卒中又稱中風(fēng)或腦血管意外，是全球第二大死亡原因和第三大致殘原因[1]。據(jù)《中國卒中報告2019》報道，2019年，我國腦卒中的死亡人數(shù)約占全球腦卒中死亡人數(shù)的1/3，已經(jīng)成為腦卒中終身風(fēng)險最高和疾病負(fù)擔(dān)最重的國家[2]。目前，國內(nèi)腦卒中的防治方法以西醫(yī)為主，同時多數(shù)卒中患者還接受中草藥或針灸治療。

天珠散由天麻（Gastrodia elata Bl.）與延齡草（Trillium techonoskii Maxim.）配伍組成，具有補(bǔ)虛強(qiáng)體、鎮(zhèn)靜安神、祛風(fēng)散痰、補(bǔ)腦安神的功效，是土家族常用補(bǔ)腦方劑。研究表明，天珠散具有一定的抗卒中作用，能通過減輕腦組織神經(jīng)細(xì)胞損傷、促進(jìn)神經(jīng)遞質(zhì)合成，改善腦缺血大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力[3-4]。但作為少數(shù)民族地區(qū)的民間經(jīng)驗方，天珠散在口耳傳承過程當(dāng)中可能存在一些配伍信息的遺漏，從而影響了其真實的藥用價值[5]。

在尊重少數(shù)民族醫(yī)藥理論經(jīng)驗特征的前提下，理清配伍關(guān)系，合理增減組成以優(yōu)化民族藥方劑是促進(jìn)民族藥未來繁榮發(fā)展的重要方面[6]。少數(shù)民族傳統(tǒng)醫(yī)藥知識的挖掘和利用，需在集成已有技術(shù)、方法的基礎(chǔ)上創(chuàng)新研究思路與策略。在天然藥物研發(fā)中，以傳統(tǒng)醫(yī)藥知識為指引的藥物篩選模式明顯優(yōu)于隨機(jī)發(fā)現(xiàn)模式[7]。本文采用傳統(tǒng)知識調(diào)查方法，挖掘整理天麻、延齡草配伍規(guī)律，嘗試在遵循土家醫(yī)藥理論經(jīng)驗、原方主藥地位不變等原則[8]基礎(chǔ)上，構(gòu)建天珠散治療腦卒中疾病的增藥新方，結(jié)合現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法與分子對接技術(shù)，確定最佳配伍，并對新方進(jìn)行合理性與效益性評析。

1 資料與方法

1.1? 基于問卷調(diào)查的天麻、延齡草配伍規(guī)律研究

1.1.1? 調(diào)查對象的確定? 2019年6月28日至2019年6月30日，前往湘西吉首發(fā)放調(diào)查問卷。為保證問卷調(diào)研結(jié)果的可靠性，設(shè)置被調(diào)查者篩選條件如下：（1）所屬民族需為土家族;（2）在土家族聚居地區(qū)居住、行醫(yī);（3）具有行醫(yī)資格證書。

1.1.2? 調(diào)查問卷的設(shè)計? 問卷總體分為兩個部分，第一部分統(tǒng)計被調(diào)查者基本信息，主要包括被調(diào)查者性別、民族、居住地址、受教育程度、行醫(yī)工作情況等;第二部分調(diào)查土家醫(yī)對天麻和延齡草的臨床使用情況、土家族習(xí)用藥材情況等，調(diào)查問卷納入藥材來自《醫(yī)療機(jī)構(gòu)處方常用土家藥手冊》[9]，并包含天麻、延齡草。

1.2? 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的新方構(gòu)建與評價

根據(jù)問卷調(diào)查結(jié)果，選擇配伍頻率排名前3的藥物構(gòu)建新方。為降低研究的復(fù)雜性，選擇“天珠散+1”模式構(gòu)建新方，但并不排除其他模式組合效果更佳的可能性。利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法評選出最佳配伍，并對新方進(jìn)行合理性與效益評價。

1.2.1? 藥物成分的獲取和篩選? 通過HERB（http：//herb.ac.cn/）、TCMID（http：//119.3.41.228：8000/tcmid/）、TCMIP（http：//www.tcmip.cn/）、BATMAN-TCM（http：//bionet.ncpsb.org/）、化學(xué)專業(yè)數(shù)據(jù)庫（http：//www.organchem.csdb.cn/）以及文獻(xiàn)搜集藥物相關(guān)化學(xué)成分。利用PubChem（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）數(shù)據(jù)庫獲取藥物成分的“Canonical SMILES”格式，其中未能通過直接搜索找到的成分可通過PubChem的“Draw Structure”功能繪制出化學(xué)結(jié)構(gòu)生成SMILES。再通過SwissADME（http：//swissadme.ch/）在線平臺對成分進(jìn)行成藥性篩選，篩選標(biāo)準(zhǔn)為GI absorption（腸吸收）為“High”，Druglikeness（類藥性）通過“Lipinski”類藥五原則，成藥性較好的藥物成分被認(rèn)為是潛在活性成分。

1.2.2? 潛在活性成分靶點(diǎn)的預(yù)測? 利用Swiss TargetPrediction（http：//www.swisstargetprediction.ch/）（篩選Probability>0）與TCMSP（https：//tcmspw.com/）數(shù)據(jù)庫預(yù)測并搜集潛在活性成分作用靶點(diǎn)，并進(jìn)行合并、除重處理。

1.2.3? 疾病相關(guān)靶點(diǎn)蛋白的收集? 通過GeneCards（https：//www.genecards.org/）（篩選relevance score>10.0）、DrugBank（https：//go.drugbank.com/）（篩選approved targets）、TTD（http：//db.idrblab.net/ttd/）數(shù)據(jù)庫，以“stroke”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，收集腦卒中疾病相關(guān)靶點(diǎn)蛋白。

1.2.4? 新方最佳配伍的確定? 利用Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建腦卒中相關(guān)靶點(diǎn)蛋白相互作用（protein protein interaction， PPI）網(wǎng)絡(luò)，導(dǎo)出蛋白節(jié)點(diǎn)拓?fù)鋽?shù)據(jù)。計算每個靶點(diǎn)度中心性（betweenness centrality）、緊密中心性（closeness centrality）以及度（Degree）3個參數(shù)的Z值，將參數(shù)進(jìn)行歸一化處理。再分別將新方所含藥物靶點(diǎn)與腦卒中相關(guān)靶點(diǎn)取交集，計算各自交集靶點(diǎn)的總Z值，依此排序確定最佳配伍新方。

1.2.5? 基于土家藥“主幫客信”配伍原則的新方效益評析? “主幫客信”原則為土家族藥物配伍常用法則，其中主藥，方中必不可少;幫藥，幫助主藥或治療兼病;客藥，一是克制主藥過火，二是治療兼病之“客氣”藥;信藥，即藥引子[10]。主主相伍，功效相加;主幫相輔，增加功力;主客相敬，減少反應(yīng);主迎信達(dá)，暢通經(jīng)脈[11]。遵循“主幫客信”配伍原則，分析新方配伍關(guān)系，評價其效益性。

腦卒中主要癥狀為半身不遂、口舌歪斜、言語謇澀和猝然昏仆等，次要癥狀包括頭痛、眩暈等[12]。SymMap數(shù)據(jù)庫（http：//www.symmap.org/search/）為中醫(yī)藥證候關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)庫，通過該數(shù)據(jù)庫分別檢索“半身不遂”“口舌歪斜”“言語謇澀”“猝然昏仆”“頭痛”“眩暈”，收集癥狀靶點(diǎn)。分別將癥狀靶點(diǎn)與所收集的腦卒中相關(guān)靶點(diǎn)取交集，剔除其中非交集靶點(diǎn)部分，余下的即是腦卒中疾病相關(guān)癥狀靶點(diǎn)。將腦卒中疾病相關(guān)癥狀靶點(diǎn)分別與最佳新方藥材的潛在靶點(diǎn)取交集，交集靶點(diǎn)分別導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫，利用其“Analysis”功能對靶點(diǎn)參與的生物過程進(jìn)行富集分析。

1.3? 分子對接與通路富集分析

構(gòu)建新方與腦卒中癥狀交集靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)，利用iGEMDOCK 2.1軟件對網(wǎng)絡(luò)關(guān)鍵靶點(diǎn)與其對應(yīng)成分進(jìn)行分子對接。PubChem數(shù)據(jù)庫下載小分子化合物結(jié)構(gòu)，通過Open Babel 3.1.1軟件對化合物進(jìn)行格式轉(zhuǎn)換，保存為mol2格式文件;RCSB PDB（https：//www.rcsb.org/search）數(shù)據(jù)庫獲取蛋白結(jié)構(gòu)，蛋白的種屬來源為“Homo sapiens”，且要求分辨率較高，保存蛋白為pdb格式文件。對接參數(shù)設(shè)置為默認(rèn)。利用Metasacpe數(shù)據(jù)庫（https：//metascape.org/gp/）對交集靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路富集分析，構(gòu)建中藥成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)。

2 結(jié)果

2.1? 問卷調(diào)查結(jié)果

共發(fā)放調(diào)查問卷60份，收回問卷47份，回收率78.3%。根據(jù)問卷填寫情況，被調(diào)查對象均具有行醫(yī)資格證書，剔除來自非土家族醫(yī)生的問卷后，最后得到有效問卷28份。

2.1.1? 被調(diào)查對象基本情況? 被調(diào)查者多數(shù)來自我國土家族聚居地區(qū)，分別是湖南省湘西土家族苗族自治州（吉首市保靖縣、龍山縣、永順縣）、長沙市、張家界市、懷化市71.43%;貴州省銅仁市7.15%;湖北省恩施市10.71%（咸豐縣、鶴峰縣、來鳳縣）;重慶市10.71%（秀山縣、黔江區(qū)）。被調(diào)查者行醫(yī)時間多為30年及以上（42.86%），教育程度為本科居多（67.86%），行醫(yī)場所多在州級醫(yī)院（35.71%）。

2.1.2? 天麻、延齡草的臨床使用情況? 初步調(diào)查結(jié)果顯示，在治療腦卒中方面，天麻常與延齡草、八角楓、頭暈草、三角風(fēng)、三百棒等配伍使用（圖1）;延齡草則常與天麻、三角風(fēng)、八角楓、三百棒、五爪龍等配伍使用（圖2）。各自配伍頻率排名前3的藥物信息見表1。

2.2? 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究結(jié)果

2.2.1? 最佳配伍的確定? 根據(jù)問卷調(diào)查結(jié)果，初步構(gòu)建新方“天珠散+八角楓”（TZS-B）、“天珠散+三角風(fēng)”TZS-S）、“天珠散+頭暈草”（TZS-T）。土家藥在配伍禁忌上主要遵守“草藥十四反”“生藥十三反”原則[13]，所構(gòu)建的新方不違背土家族藥物傳統(tǒng)配伍禁忌。藥物成分的搜集、篩選以及靶點(diǎn)預(yù)測結(jié)果見表2。其中，天麻成分天麻素雖沒有通過篩選，但由于該成分屬于文獻(xiàn)[14]報道的活性成分，故納入后續(xù)分析。從GeneCards、DrugBank、TTD數(shù)據(jù)庫中共搜集得到449個腦卒中相關(guān)靶點(diǎn)蛋白。計算各新方與腦卒中疾病交集靶點(diǎn)相關(guān)拓?fù)鋮?shù)的總Z值，Z（109.90）>Z（89.93）>Z（72.08），因而將TZS-T作為本研究中抗腦卒中的最佳配伍新方。

2.2.2? 基于土家藥“主幫客信”配伍原則的新方合理性評析? 通過SymMap數(shù)據(jù)庫分別得到半身不遂、言語謇澀、口舌歪斜、猝然昏仆、頭痛、眩暈癥狀靶點(diǎn)76個、27個、47個、116個、104個、58個。分別與所收集的腦卒中相關(guān)靶點(diǎn)取交集，剔除其中非腦卒中相關(guān)靶點(diǎn)后，各癥狀依次剩下靶點(diǎn)30個、13個、38個、50個、59個、29個。靶點(diǎn)參與的生物過程富集分析結(jié)果見圖3。天麻作為配伍的主藥，通過作用于MTOR、AR、JAK2、NR3C1等靶點(diǎn)，在對抗腦卒中疾病的主要癥狀方面發(fā)揮重要作用。延齡草通過作用于MTOR、NR3C1、APP、CCR1等與天麻素相同或不同的靶點(diǎn)發(fā)揮其幫藥作用。頭暈草與天麻的共同作用靶點(diǎn)較多，配伍中納入頭暈草或可降低天麻在方劑中的用量，從而減輕天麻的副作用，同時頭暈草也存在其獨(dú)有作用靶點(diǎn)，可能同時充當(dāng)幫藥與客藥角色。頭暈是患者在服用天麻素片的過程中常見的副作用15]，頭暈草在民間使用中便有治療頭目眩暈的作用，也因此得名“頭暈”草，這也說明頭暈草可能作為客藥角色，克服天麻服用過程中所導(dǎo)致的頭暈反應(yīng)。信藥可引導(dǎo)其他藥物的藥力到達(dá)病變部位或某一經(jīng)脈。在分子層面，如果某藥物的成分能通過作用于某些靶點(diǎn)，幫助其他藥物分子或藥物相關(guān)蛋白實現(xiàn)跨膜運(yùn)轉(zhuǎn)，則該藥物充當(dāng)信藥角色。在對抗腦卒中猝然昏仆癥狀中，頭暈草靶點(diǎn)KCNH2、INSR、KCNJ11參與了跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)正調(diào)控的生物過程，則此時頭暈草充當(dāng)了信藥角色。綜上，天麻、延齡草、頭暈草配伍或可增加藥物效應(yīng)，減輕藥物副作用，新方TZS-T配伍合理。

2.3? 分子對接與通路富集分析

新方TZS-T藥物靶點(diǎn)與腦卒中癥狀靶點(diǎn)取交集得到31個靶點(diǎn)，在PPI網(wǎng)絡(luò)中Degree值排名前5的關(guān)鍵靶點(diǎn)分別是APP、IL-6、JAK2、MTOR、TLR4。分子對接結(jié)果見表3。圖4展示了各關(guān)鍵靶點(diǎn)與其藥物潛在活性成分的結(jié)合位點(diǎn)，并突出展示靶點(diǎn)與其最高結(jié)合活性成分的結(jié)合模式。天麻成分gastrodin與JAK2蛋白具有較高的結(jié)合活性，延齡草成分26-chloro-26-deoxycryptogenin、β-ecdysterone、ecdysterone分別與蛋白APP、IL6、MTOR具有較高的結(jié)合活性，頭暈草成分4-hydroxycinnamic acid與TLR4蛋白具有良好的結(jié)合活性。31個交集靶點(diǎn)主要涉及HIF-1信號通路、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、NOD樣受體信號通路、NF-κB信號通路、PI3K-Akt信號通路、Toll樣受體信號通路、Jak-STAT信號通路等68條信號通路（P<0.05），圖5為中藥成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)。

3 討論

少數(shù)民族醫(yī)藥中蘊(yùn)藏著巨大寶藏，但目前其大量經(jīng)驗方仍散落于民間、深藏于民間，由于缺乏系統(tǒng)的挖掘、整理與研究，一些療效獨(dú)特的民間驗方使用日趨減少，部分配方信息遺缺，難以發(fā)揮其應(yīng)有的作用。對于土家族醫(yī)藥文獻(xiàn)的收集、發(fā)掘與整理工作始于20世紀(jì)70年代末或80年代初期[16]，天珠散收載于《鄂西藥物志》（對1978—1980年恩施地區(qū)衛(wèi)生局組織的中草藥資源普查成果的匯總），其以“天珠散”為方名，首見于《土家醫(yī)方劑學(xué)》，為“神衰癥風(fēng)痰型而設(shè)，臨床以頭暈?zāi)垦?、失眠多夢、疲乏無力、舌胖大、苔白為治療要點(diǎn)”。但在土家醫(yī)描述疾病癥候的“三十六經(jīng)癥”“七十二癥疾”中并未有“神衰癥”病癥名，據(jù)其臨床癥狀表述，可能與“頭風(fēng)癥”“偏頭風(fēng)”“虛陽灌頂癥”（相當(dāng)于頭痛）等相關(guān)[17]。由上可知，源于當(dāng)時區(qū)域性中藥資源調(diào)查獲得的“天珠散”及其傳統(tǒng)應(yīng)用知識，在由口傳經(jīng)驗向公共知識轉(zhuǎn)化的過程中，其土家醫(yī)傳統(tǒng)癥候與現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)背景下的適應(yīng)癥有所關(guān)聯(lián)但卻并不一致。鑒于此，我們課題組提出并形成了適用于民族民間驗方的組方優(yōu)化模式，即基于關(guān)鍵藥物評價的組方優(yōu)化，將“理清配伍關(guān)系、合理增減組成、核準(zhǔn)配伍劑量、明確臨床適應(yīng)癥”為優(yōu)化目標(biāo)，其基本原則[18]包括：（1）遵循醫(yī)藥理論經(jīng)驗原則;（2）原方主藥地位不變原則;（3）基于主藥關(guān)系的藥物增減原則;（4）主治范圍不脫離原方傳統(tǒng)功效原則;（5）組方藥物之間不沖突（安全性）原則;（6）經(jīng)濟(jì)優(yōu)效原則。通過整合數(shù)據(jù)，以基原清楚的共用藥物為線索，挖掘有效藥物組合作為原方增減依據(jù)，進(jìn)行民族藥方劑的建構(gòu)與優(yōu)化。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)以系統(tǒng)生物學(xué)的理論為基礎(chǔ)，建立系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò)模型，可從整體上考察藥物對疾病的干預(yù)與影響，揭示藥物、疾病、靶點(diǎn)與通路之間的復(fù)雜關(guān)系，有助于闡釋方劑配伍規(guī)律、預(yù)測中藥作用靶點(diǎn)、辨識中藥活性成分以及解析中藥作用機(jī)制[19]，已應(yīng)用于中藥組方優(yōu)化設(shè)計并取得了良好的成效。LI等[20]運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，建立了可識別眾多草藥配方中草藥之間有用關(guān)系的基于距離的互信息模型，并以六味地黃丸配方為例，提出了跨中藥-生物分子-疾病多層網(wǎng)絡(luò)的“共模塊”概念，探討中藥配方潛在組合機(jī)制。LI等[21]提出了一種系統(tǒng)藥理學(xué)的集成平臺，用于揭示口服給藥、藥物半衰期和靶點(diǎn)相互作用如何影響草藥的藥理功能，并以小柴胡湯、大柴胡湯兩個經(jīng)典方劑為例，進(jìn)一步剖析了中藥加減法理論。張伏芝[22]運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選優(yōu)化了治療糖尿病周圍神經(jīng)病變氣虛血瘀證的候選組方。本文運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法篩選新藥以優(yōu)化天珠散組方并探究其分子機(jī)制。

本研究最佳新方由天麻、延齡草、頭暈草組成，天麻具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗驚厥、改善記憶、神經(jīng)保護(hù)、增強(qiáng)免疫等藥理作用[23];延齡草在鎮(zhèn)靜催眠、抗癌、抗炎和防治心肌缺血等方面表現(xiàn)出較強(qiáng)的藥理活性[24];頭暈草具有抗氧化、抗凝血、抗心肌梗死、提高機(jī)體抗應(yīng)激能力等作用[25]。本文研究結(jié)果提示，新方或可通過參與一氧化氮生物合成過程調(diào)控、磷酸化的正調(diào)控、對含氧化合物的反應(yīng)、神經(jīng)元投射維持等眾多生物過程對抗腦卒中。缺血性腦卒中發(fā)生后，細(xì)胞因子IL-6、TNF-α以及APP蛋白等表達(dá)異常升高[26-27]，參與機(jī)體腦組織損傷過程。本研究發(fā)現(xiàn)，天麻素可能通過影響體內(nèi)JAK2和NOS2蛋白的表達(dá)水平，參與神經(jīng)遞質(zhì)水平的調(diào)節(jié)、細(xì)胞因子產(chǎn)生的正調(diào)控等生物過程;延齡草成分bethogenin等可能通過作用于APP蛋白，參與炎癥反應(yīng)、離子穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)等生物過程，干預(yù)腦卒中的頭痛和口舌歪斜癥狀;頭暈草富含鞣質(zhì)，其水提醇沉物能促進(jìn)大腦供血供氧，延長動物的存活時間[28-29]。

文章采用傳統(tǒng)知識調(diào)查方法對土家族民間驗方天珠散的配伍信息進(jìn)行了重新挖掘，結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果，天珠散配伍頭暈草用于治療疾病腦卒中與原方相比可能具有更好的療效，再遵循土家族醫(yī)“主幫客信”的配伍原則，對新方進(jìn)行了組方合理性評析，最后通過分子對接技術(shù)對新方抗卒中機(jī)制做了初步探討。文章內(nèi)容或能為當(dāng)前民間驗方的挖掘工作提供一些新的研究思路。不足之處在于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法還無法解決配伍用藥劑量問題，研究結(jié)果還有待于藥效及分子機(jī)制實驗的進(jìn)一步驗證。

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