烏藥湯揮發(fā)性成分提取工藝的優(yōu)化

程媛 孫吳倩 劉明松 鄧亞偉 段續(xù)紅 李春花

中圖分類號(hào) R282 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2022）06-0712-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.06.11

摘 要 目的 優(yōu)化經(jīng)典名方烏藥湯揮發(fā)性成分的提取工藝。方法 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以有效成分乙酸龍腦酯、香附烯酮、α-香附酮、藁本內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯含量及揮發(fā)油提取率的綜合評(píng)分為指標(biāo)，以提取時(shí)間、浸泡時(shí)間、液料比為響應(yīng)因素，采用Box-Behnken設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法優(yōu)化烏藥湯揮發(fā)性成分的提取工藝并驗(yàn)證。在此基礎(chǔ)上，再對(duì)藥液的提取狀態(tài)進(jìn)行量化。結(jié)果 最優(yōu)提取工藝為液料比13 ∶ 1（mL/g），浸泡時(shí)間0.5 h，暴沸狀態(tài)下提取6 h。3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的綜合評(píng)分分別為0.948 7、0.948 4、0.948 6（RSD=0.02%，n=3），與預(yù)測(cè)值（0.947 9）的偏差均不超過1%。以180 ℃油浴下藥液的沸騰狀態(tài)作為暴沸狀態(tài)。結(jié)論 所得烏藥湯揮發(fā)性成分最優(yōu)提取工藝穩(wěn)定、可行。

關(guān)鍵詞 烏藥湯;揮發(fā)性成分;提取工藝;Box-Behnken設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法

Optimization of the extraction technology of volatile components from Wuyao decoction

CHENG Yuan1，SUN Wuqian1，LIU Mingsong1，DENG Yawei1，DUAN Xuhong1，LI Chunhua1，2，3（1. College of Pharmacy， Hebei University of Traditional Chinese Medicine， Shijiazhuang 050090， China; 2. Hebei Higher Education Institute Applied Technology Research Center on TCM Formula Preparation/Hebei Technology Innovation Center of TCM Formula Preparation， Shijiazhuang 050090， China; 3. Hebei Industrial Technology Institute for Traditional Chinese Medicine Preparation， Shijiazhuang 050033， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE To optimize the extraction technology of volatile components from Wuyao decoction. METHODS On the basis of single factor investigation， the extraction technology of volatile components from Wuyao decoction was optimized and validated by Box-Behnken design-response surface technology using the contents of bomyl acetate， cyperotundone， α-cyperone， ligustilide and dehydrocostuslactone， extraction rate of volatile oil as indexes， with extraction time， soaking time and liquid-material ratio as factors. On this basis， the extraction state of the decoction was quantified. RESULTS The optimal extraction technology was as followed： the ratio of liquid-material was 13 ∶ 1 （mL/g）， soaking time was 0.5 h， and the extraction time was 6 h in the boiling state. The comprehensive scores of the three validation experiments were 0.948 7， 0.948 4 and 0.948 6 respectively （RSD=0.02%， n=3）， and the deviation from the predicted value （0.947 9） was no more than 1%. The boiling state of the decoction in 180 ℃ oil bath was taken as the sudden boiling state. CONCLUSIONS The optimized extraction technology is stable and feasible.

KEYWORDS? ?Wuyao decoction; volatile components; extraction technology; Box-Behnken design-response surface technology

經(jīng)典名方烏藥湯由烏藥、香附、木香、當(dāng)歸、甘草5味藥組成，主治婦人血海疼痛[1]。現(xiàn)代研究表明，烏藥湯中的烏藥、香附、木香、當(dāng)歸均含有揮發(fā)性成分，對(duì)全方活血疏經(jīng)作用的貢獻(xiàn)較大[2-4]。傳統(tǒng)湯劑可保留藥材中揮發(fā)性成分的療效，但也有研究指出，烏藥湯水煎液中揮發(fā)性成分的含量較低，在制備成制劑的過程中，揮發(fā)性成分不斷損失，難以發(fā)揮傳統(tǒng)湯劑的療效[5]。因此，本課題組考慮將該類藥材單獨(dú)提取后將所得揮發(fā)性成分包合入藥，以最大程度地保留藥效。

揮發(fā)性成分的有效收集和保留對(duì)提高烏藥湯療效和推動(dòng)其現(xiàn)代研究至關(guān)重要。目前，水蒸餾法是收集揮發(fā)性成分的常用方法，其設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低廉，是工業(yè)上最常用的提取方法[6]。本研究在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以有效成分乙酸龍腦酯、香附烯酮、α-香附酮、藁本內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯含量及揮發(fā)油提取率的綜合評(píng)分為指標(biāo)，以提取時(shí)間、浸泡時(shí)間、液料比為因素，結(jié)合Box-Behnken設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法優(yōu)化烏藥湯揮發(fā)性成分的提取工藝，旨在為該方的開發(fā)利用提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括7890B型氣相色譜儀（美國(guó)Agilent公司），SPH-300型氫氣發(fā)生器、SPB-3型全自動(dòng)空氣源（北京中惠普分析技術(shù)研究所），LQ-A10002型電子天平（上海樂祺精密電子廠），98-1B型電子調(diào)溫電熱套（天津市泰斯特儀器有限公司），YP2002型電子分析天平（上海津平科學(xué)儀器有限公司），DF-101S型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

烏藥飲片（批號(hào)20010301）、香附飲片（批號(hào)200501）、當(dāng)歸飲片（批號(hào)200601c155）、木香飲片（批號(hào)20100501）、甘草飲片（批號(hào)20092201）均購(gòu)自河北安國(guó)藥材市場(chǎng)，經(jīng)河北中醫(yī)學(xué)院侯芳潔副教授鑒定，分別為樟科植物烏藥Lindera aggregata（Sims） Kosterm.的干燥塊根、莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根莖、傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis（Oliv.） Diels的干燥根、菊科植物木香Aucklandia lappa Decne.的干燥根、豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根，均符合2020年版《中國(guó)藥典》（一部）標(biāo)準(zhǔn)[7]。

乙酸龍腦酯對(duì)照品（批號(hào)MUST-20081605，純度97%）購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所;去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品（批號(hào)MUST-19101209，純度≥98%）、α-香附酮對(duì)照品（批號(hào)MUST-20052102，純度≥98%）均購(gòu)自成都曼斯特生物科技有限公司;香附烯酮對(duì)照品（批號(hào)Z1705241，純度≥98%）購(gòu)自成都草源康生物科技有限公司;藁本內(nèi)酯對(duì)照品（批號(hào)RFS-G01001901005，純度≥98%）購(gòu)自成都瑞芬斯生物科技有限公司;甲醇（色譜純）購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司;其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油提取率的測(cè)定

按照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則“2204揮發(fā)油測(cè)定法（甲法）”[8]提取揮發(fā)油：按處方比例稱取烏藥20 g，當(dāng)歸、甘草、木香各10 g，香附40 g，粉碎為最粗粉，置于2 000 mL圓底燒瓶中，加入12倍量水浸泡0.5 h，加熱，暴沸提取6 h后停止加熱，靜置30 min，精密讀取烏藥湯揮發(fā)油提取量，計(jì)算提取率：提取率（%）=提取量（mL）/全粉質(zhì)量（g）×100%。

2.2 乙酸龍腦酯、香附烯酮、α-香附酮、藁本內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量測(cè)定

參考文獻(xiàn)[9]，采用氣相色譜法測(cè)定乙酸龍腦酯、香附烯酮、α-香附酮、藁本內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量。

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent HP-5毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）;檢測(cè)器為氫火焰離子化檢測(cè)器，程序升溫（起始溫度為60 ℃;以10 ℃/min升溫至110 ℃，保持1 min;以1 ℃/min升溫至132 ℃，保持5 min;以0.2 ℃/min升溫至133 ℃，保持5 min;以0.2 ℃/min升溫至134 ℃，保持3 min;以5 ℃/min升溫至220 ℃）;檢測(cè)器溫度為260 ℃;載氣為氮?dú)?進(jìn)樣口溫度為250 ℃;進(jìn)樣量為1 μL，分流比為25 ∶ 1。

2.2.2 混合對(duì)照品溶液的制備 分別稱取α-香附酮、香附烯酮、乙酸龍腦酯、去氫木香內(nèi)酯、藁本內(nèi)酯對(duì)照品，精密稱定，用甲醇制成質(zhì)量濃度分別為1.125、3.360、0.954、0.369、0.900 mg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 按照“2.1”項(xiàng)下方法提取揮發(fā)油，以4 000 r/min離心6 min，上清液加入適量無水硫酸鈉干燥，得到不含水分的揮發(fā)油。取上述揮發(fā)油，用甲醇定容于10 mL量瓶中，精密量取2 mL置于5 mL量瓶中，再用甲醇定容，過0.22 μm微孔濾膜，即得供試品溶液。

2.2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白對(duì)照溶液（甲醇），按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖（圖1）。結(jié)果顯示，供試品溶液在對(duì)照品溶液的相應(yīng)位置有相同的色譜峰，各色譜峰與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，空白對(duì)照溶液對(duì)測(cè)定無干擾（圖略），表明本方法系統(tǒng)適用性良好。

2.2.5 線性關(guān)系考察 稱取α-香附酮、香附烯酮、乙酸龍腦酯、去氫木香內(nèi)酯、藁本內(nèi)酯對(duì)照品適量，以甲醇配制成α-香附酮質(zhì)量濃度分別為5.625、2.250、1.125、0.563、0.113 mg/mL，香附烯酮質(zhì)量濃度分別為16.800、6.720、3.360、1.680、0.336 mg/mL，乙酸龍腦酯質(zhì)量濃度分別為2.385、0.954、0.477、0.239、0.048 mg/mL，去氫木香內(nèi)酯質(zhì)量濃度分別為3.710、1.484、0.742、0.371、0.074 mg/mL，藁本內(nèi)酯質(zhì)量濃度分別為4.500、1.800、0.900、0.450、0.090 mg/mL的系列混合對(duì)照品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)成分質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，結(jié)果見表1。由表1可見，5種待測(cè)成分在各自線性范圍內(nèi)均與峰面積成良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 取“2.2.5”項(xiàng)下相應(yīng)質(zhì)量濃度（α-香附酮1.125 mg/mL、香附烯酮3.360 mg/mL、乙酸龍腦酯0.477 mg/mL、去氫木香內(nèi)酯0.742 mg/mL、藁本內(nèi)酯0.900 mg/mL）的混合對(duì)照品溶液適量，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，α-香附酮、香附烯酮、乙酸龍腦酯、去氫木香內(nèi)酯、藁本內(nèi)酯峰面積的RSD分別為0.97%、0.65%、0.35%、0.65%、0.31%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液適量，分別在室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并代入回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果顯示，α-香附酮、香附烯酮、乙酸龍腦酯、去氫木香內(nèi)酯、藁本內(nèi)酯含量的RSD分別為0.28%、0.27%、0.54%、0.41%、0.25%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并代入回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果顯示，α-香附酮、香附烯酮、乙酸龍腦酯、去氫木香內(nèi)酯、藁本內(nèi)酯含量的RSD分別為0.35%、0.45%、1.38%、0.38%、0.42%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率考察 取已知待測(cè)成分含量的供試品溶液6份，精密加入一定量相應(yīng)質(zhì)量濃度（α-香附酮1.125 mg/mL、香附烯酮3.360 mg/mL、乙酸龍腦酯0.477 mg/mL、去氫木香內(nèi)酯0.742 mg/mL、藁本內(nèi)酯0.900 mg/mL）的混合對(duì)照品溶液，按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，α-香附酮、香附烯酮、乙酸龍腦酯、去氫木香內(nèi)酯、藁本內(nèi)酯的平均加樣回收率分別為98.75%、98.21%、98.41%、98.19%、99.79%，RSD均小于3%（n=6），表明本方法準(zhǔn)確度好。

2.3 單因素實(shí)驗(yàn)初步篩選揮發(fā)性成分提取工藝

參考文獻(xiàn)[10]，本課題組通過初步篩選影響烏藥湯揮發(fā)油提取率的因素發(fā)現(xiàn)，提取狀態(tài)、粉碎粒度、浸泡時(shí)間、液料比、提取時(shí)間5個(gè)因素對(duì)烏藥湯揮發(fā)油提取率的影響較大。因此，本研究以揮發(fā)油提取率為指標(biāo)，以提取狀態(tài)（微沸、適中沸、暴沸）、粉碎粒度（飲片、最粗粉、粗粉、細(xì)粉，參照2020年版《中國(guó)藥典》（一部）“凡例”要求[7]）、浸泡時(shí)間（0、1.0、2.0、3.0、4.0 h）、液料比（8 ∶ 1、10 ∶ 1、12 ∶ 1、14 ∶ 1、16 ∶ 1，mL/g）、提取時(shí)間（3、4、5、6、7 h）為因素，在固定其余4個(gè)因素的條件下進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見圖2。

2.3.1 提取狀態(tài) 圖2A顯示，在固定其他因素提取烏藥湯揮發(fā)油時(shí)，火力越大，揮發(fā)油提取率越高，故選擇暴沸作為提取狀態(tài)。

2.3.2 粉碎粒度 圖2B顯示，在固定其他因素提取烏藥湯揮發(fā)油時(shí)，隨著粉碎粒度逐漸變小，揮發(fā)油提取率呈先升高后穩(wěn)定再下降的趨勢(shì);當(dāng)粒度為最粗粉時(shí)，揮發(fā)油提取率達(dá)到峰值。筆者推測(cè)，這可能是因?yàn)橹兴幉谋环鬯楹?，其油室受到了破壞，有利于提高提取效率，但粉碎越?xì)藥材越容易結(jié)塊，且越不利于蒸餾[6]。故選擇最粗粉作為粉碎粒度。

2.3.3 浸泡時(shí)間 圖2C顯示，在固定其他因素提取烏藥湯揮發(fā)油時(shí)，隨著浸泡時(shí)間延長(zhǎng)，揮發(fā)油提取率呈先升高后下降再平穩(wěn)的趨勢(shì);當(dāng)浸泡時(shí)間為1.0 h時(shí)，揮發(fā)油提取率達(dá)到峰值，故選擇1.0 h作為浸泡時(shí)間。

2.3.4 液料比 圖2D顯示，在固定其他因素提取烏藥湯揮發(fā)油時(shí)，隨著液料比增加，揮發(fā)油提取率呈先升高后平穩(wěn)的趨勢(shì);當(dāng)液料比為12 ∶ 1（mL/g）時(shí)，揮發(fā)油提取率達(dá)到峰值，故選擇12 ∶ 1（mL/g）作為液料比。

2.3.5 提取時(shí)間 圖2E顯示，在固定其他因素提取烏藥湯揮發(fā)油時(shí)，隨著提取時(shí)間延長(zhǎng)，揮發(fā)油提取率呈先增加后平穩(wěn)的趨勢(shì);當(dāng)提取時(shí)間為5 h時(shí)，揮發(fā)油提取率達(dá)到峰值，故選擇5 h作為提取時(shí)間。

2.4 Box-Behnken設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法優(yōu)化揮發(fā)性成分提取工藝

2.4.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果 上述單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，揮發(fā)油提取率在最粗粉、暴沸狀態(tài)下均可達(dá)到峰值，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，本研究將粉碎粒度固定為最粗粉，提取狀態(tài)固定為暴沸[11]。以液料比[A/（mL/g）]、浸泡時(shí)間（B/h）、提取時(shí)間（C/h）為響應(yīng)因素，以烏藥湯有效成分乙酸龍腦酯、香附烯酮、α-香附酮、藁本內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯含量及揮發(fā)油提取率為響應(yīng)值，采用Design-Expert V8.0.6.1軟件，運(yùn)用Box-Behnken設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法設(shè)計(jì)3因素3水平17個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的工藝優(yōu)化實(shí)驗(yàn)（包括12個(gè)析因?qū)嶒?yàn)和5個(gè)中心實(shí)驗(yàn)）。烏藥湯揮發(fā)性成分提取工藝優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素與水平見表2，實(shí)驗(yàn)方案與結(jié)果見表3。

2.4.2 權(quán)重系數(shù)與綜合評(píng)分的計(jì)算 應(yīng)用信息熵法對(duì)表3中各組指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行權(quán)重分析，計(jì)算權(quán)重系數(shù)（Wi）。規(guī)定在某一評(píng)價(jià)指標(biāo)系統(tǒng)中，有m個(gè)評(píng)價(jià)對(duì)象、n個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)，形成的原始指標(biāo)數(shù)據(jù)矩陣為X=（xij）mn（i、j分別表示矩陣的行、列）;將原始評(píng)價(jià)指標(biāo)矩陣（X）轉(zhuǎn)化為概率矩陣（Pij），計(jì)算公式為Pij=Xij/∑Xij，再計(jì)算熵值（Hi值，Hi=-1/lnη×[∑][j=1][n]Pij×lnPij，η表示待評(píng)項(xiàng)目）[12-13]。結(jié)果顯示，乙酸龍腦酯、香附烯酮、藁本內(nèi)酯、α-香附酮、去氫木香內(nèi)酯含量及揮發(fā)油提取率的Hi值分別為0.996 9、0.998 4、0.997 7、0.994 5、0.996 7、0.997 4。隨后，計(jì)算各評(píng)價(jià)指標(biāo)的Wi值[Wi=（1-Hi）÷[∑][i=1][m]（1-Hi）][12-13]。結(jié)果顯示，乙酸龍腦酯、香附烯酮、藁本內(nèi)酯、α-香附酮、去氫木香內(nèi)酯含量及揮發(fā)油提取率的Wi值分別為0.169 8、0.088 3、0.121 9、0.298 3、0.181 1、0.140 6。按下式計(jì)算綜合評(píng)分：綜合評(píng)分=（乙酸龍腦酯含量/乙酸龍腦酯含量最大值）×W1+（香附烯酮含量/香附烯酮含量最大值）×W2+（藁本內(nèi)酯含量/藁本內(nèi)酯最大值）×W3+（α-香附酮含量/α-香附酮含量最大值）×W4+（去氫木香內(nèi)酯含量/去氫木香內(nèi)酯最大值）×W5+（提取率/提取率最大值）×W6，結(jié)果見表3。

2.4.3 數(shù)據(jù)處理與分析 采用Design-Expert V8.0.6.1軟件對(duì)綜合評(píng)分進(jìn)行多元擬合分析，得A、B、C 3個(gè)變量對(duì)綜合評(píng)分的二次多項(xiàng)回歸模型，即綜合評(píng)分=0.860+7.428×10-3A-0.018B+0.13C-6.058×10-3AB-1.890×10-3AC+2.910×10-3BC-6.250×10-5A 2-5.909×10-3B 2-0.057C 2。烏藥湯揮發(fā)性成分提取工藝優(yōu)化的方差分析結(jié)果見表4。

表4顯示，模型的P值<0.000 1，表明該實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ驼鎸?shí)可靠;失擬項(xiàng)的P值為0.219 0（>0.05），表明未知因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾小。由F值可知，各因素影響程度大小依次為C>B>A;由各因素單一項(xiàng)對(duì)應(yīng)P值可知，B、C均有顯著影響（P<0.05）;由各因素交互項(xiàng)對(duì)應(yīng)P值可知，各因素交互作用均無顯著影響（P>0.05）;由各因素二次項(xiàng)對(duì)應(yīng)P值可知，C 2有顯著影響（P<0.05）;擬合方程的相關(guān)系數(shù)（R 2）為0.988 8，調(diào)整后的相關(guān)系數(shù)（R 2adj）為0.974 3，表明該模型可解釋97.43%響應(yīng)值的變化，模型擬合程度較好、誤差較小。

本研究采用Design-Expert V8.0.6.1軟件繪制各因素交互作用對(duì)綜合評(píng)分影響的響應(yīng)面圖，結(jié)果見圖3。

響應(yīng)面圖的陡峭程度可直接反映各因素交互作用的強(qiáng)弱[9]。圖3顯示，各因素交互作用的響應(yīng)面圖均不陡峭，與表5中AB、AC、BC交互作用的影響不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)果一致。通過求解回歸模型方程得到最優(yōu)提取工藝參數(shù)為：液料比12.99 ∶ 1（mL/g），浸泡時(shí)間0.62 h，提取時(shí)間6 h，綜合評(píng)分的預(yù)測(cè)值為0.947 9。結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，本研究對(duì)上述提取工藝參數(shù)進(jìn)行修正，得到最優(yōu)提取工藝參數(shù)為：藥材取最粗粉，液料比13 ∶ 1（mL/g），浸泡時(shí)間0.5 h，提取時(shí)間6 h。

2.4.4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 按照“2.4.3”項(xiàng)下最優(yōu)提取工藝進(jìn)行3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，綜合評(píng)分分別為0.948 7、0.948 4、0.948 6（RSD=0.02%，n=3），與預(yù)測(cè)值（0.947 9）的偏差均不超過1%，表明優(yōu)化的提取工藝穩(wěn)定、可行。

2.5 提取狀態(tài)的量化

參考文獻(xiàn)[14]，按照“2.4.3”項(xiàng)下最優(yōu)提取工藝進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，采用油浴控溫裝置分別在120、150、170、180、190 ℃下提取烏藥湯揮發(fā)性成分，每個(gè)溫度條件平行操作3次，觀察6 h提取過程中藥液的沸騰狀態(tài)，并計(jì)算提取6 h時(shí)的提取率。結(jié)果顯示，在120 ℃下藥液沸騰狀態(tài)為微沸，平均提取率為0.56%;在150 ℃下藥液沸騰狀態(tài)為適中沸，平均提取率為0.72%;在170 ℃下藥液沸騰狀態(tài)為適中沸，平均提取率為0.78%;在180 ℃和190 ℃下藥液沸騰狀態(tài)為暴沸且180 ℃下的提取率更高，平均提取率為0.89%。故以180 ℃油浴下藥液的沸騰狀態(tài)作為暴沸狀態(tài)。

3 討論

本課題組預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，烏藥湯提取過程中烏藥、香附、木香、當(dāng)歸、甘草揮發(fā)油不存在分層現(xiàn)象，表明處方中藥材揮發(fā)油密度相近，可同時(shí)提取。本研究采用Box-Behnken設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法與熵權(quán)法相結(jié)合的方式優(yōu)化了烏藥湯揮發(fā)性成分的提取工藝。Box-Behnken設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法能綜合考察多個(gè)提取因素的影響，具有實(shí)驗(yàn)次數(shù)少、精度高、預(yù)測(cè)值精準(zhǔn)的優(yōu)點(diǎn);熵權(quán)法可在多指標(biāo)篩選最優(yōu)工藝時(shí)科學(xué)地賦予各指標(biāo)相應(yīng)的權(quán)重系數(shù)，以避免人為主觀因素的影響[12]。利用熵權(quán)法賦予各指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)計(jì)算綜合評(píng)分，再通過對(duì)綜合評(píng)分進(jìn)行分析，從而篩選最優(yōu)工藝，所得結(jié)果較為嚴(yán)謹(jǐn)[12-13，15]。

3.1 提取狀態(tài)的量化表征

外在的傳熱效率對(duì)揮發(fā)油提取的影響十分顯著，外在的加熱溫度或熱的傳遞效率會(huì)直接影響揮發(fā)油的蒸發(fā)量與蒸發(fā)速度，充分的蒸發(fā)量能保證揮發(fā)油提取完全[6]。中藥傳統(tǒng)理論多用“文火”“武火”表示，現(xiàn)多用“微沸”“暴沸”表示，均只能用操作者的主觀經(jīng)驗(yàn)來判斷，存在主觀性的弊端，因此尋找量化指標(biāo)對(duì)提取狀態(tài)進(jìn)行表征對(duì)工藝參數(shù)的完善有重要價(jià)值。本研究利用溫度對(duì)藥液提取狀態(tài)進(jìn)行表征，結(jié)果顯示，在180 ℃和190 ℃油浴下提取狀態(tài)均為暴沸，但在180 ℃下提取率達(dá)到峰值，而在190 ℃下藥液沸騰過于劇烈，導(dǎo)致藥液不斷涌入揮發(fā)油收集器，不利于揮發(fā)油的收集。但是僅用溫度表征提取狀態(tài)還不夠全面，本課題組后期將考慮模擬實(shí)際大生產(chǎn)設(shè)備，深入研究可控參數(shù)，以達(dá)到提取狀態(tài)的精準(zhǔn)化。

3.2 指標(biāo)成分的選擇

在中藥產(chǎn)品的現(xiàn)代化工藝開發(fā)過程中，應(yīng)基于有效成分的含量及其藥理活性進(jìn)行綜合考慮。乙酸龍腦酯具有抗炎、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)、改善肝損傷的藥理作用，是烏藥的有效成分之一[16-18]。香附烯酮、α-香附酮存在于香附藥材中，成分特有性強(qiáng)，且在烏藥湯中的含量高[19-20]。藁本內(nèi)酯是當(dāng)歸揮發(fā)油的主要成分，具有解痙鎮(zhèn)痛、抗炎、緩解胃腸平滑肌痙攣的作用[21-22]。去氫木香內(nèi)酯是木香的主要有效成分，且是2020年版《中國(guó)藥典》（一部）規(guī)定的含量指標(biāo)成分。因此，本研究選擇乙酸龍腦酯、香附烯酮、α-香附酮、藁本內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯作為評(píng)價(jià)烏藥湯的指標(biāo)成分，并建立了測(cè)定其含量的氣相色譜法。方法學(xué)考察結(jié)果顯示，所建方法符合2020年版《中國(guó)藥典》（四部）的要求[8]。

綜上所述，本研究確定了經(jīng)典名方烏藥湯揮發(fā)性成分的最優(yōu)提取工藝，可為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

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（收稿日期：2021-09-27 修回日期：2022-02-24）

（編輯：鄒麗娟）