• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    急支糖漿一板多藥味HPTLC鑒別和HPLC含量測(cè)定方法的研究

    2022-03-16 22:11:35丁浩然劉峰陳艷王夢(mèng)月李曉波
    中國(guó)藥房 2022年5期
    關(guān)鍵詞:含量測(cè)定高效液相色譜法

    丁浩然 劉峰 陳艷 王夢(mèng)月 李曉波

    中圖分類(lèi)號(hào) R286.0;R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408(2022)05-0555-08

    DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.05.08

    摘 要 目的 優(yōu)化急支糖漿現(xiàn)有薄層色譜鑒別和含量測(cè)定方法。方法 采用高效薄層色譜(HPTLC)法鑒別急支糖漿方中的四季青、魚(yú)腥草、前胡、枳殼和甘草5種藥材,采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定原兒茶酸、鹽酸麻黃堿和柚皮苷的含量。結(jié)果 HPTLC法結(jié)果顯示,具棲冬青苷、白花前胡甲素、柚皮苷、甘草苷4種對(duì)照品和魚(yú)腥草對(duì)照藥材的薄層斑點(diǎn)均顯示清晰,比移值均在0.2~0.8范圍內(nèi);經(jīng)驗(yàn)證,方法專(zhuān)屬性、耐用性和批次重復(fù)性良好。HPLC法結(jié)果顯示,原兒茶酸、鹽酸麻黃堿和柚皮苷的線(xiàn)性范圍分別為4.32~431.67、1.14~114.17、7.02~702.33 μg/mL(r均大于0.996);平均加樣回收率分別為100.61%、100.40%、99.22%(RSD均小于2.00%);精密度(n=6)、穩(wěn)定性(24 h,n=7)、重復(fù)性(n=6)試驗(yàn)的RSD均小于2.00%。原兒茶酸等3種活性成分在10批急支糖漿中的平均含量依次為623.3、152.1、1 213.9 μg/mL(RSD均小于10.00%)。結(jié)論 本研究建立了急支糖漿一板多藥味HPTLC鑒別方法,使用1種樣品前處理方法、2個(gè)薄層色譜條件,實(shí)現(xiàn)了對(duì)處方中5種藥材的快速鑒別;建立了HPLC含量測(cè)定方法,實(shí)現(xiàn)了對(duì)急支糖漿中3種活性成分的快速定量,可用于優(yōu)化急支糖漿現(xiàn)有法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的鑒別項(xiàng)和含量測(cè)定項(xiàng)。

    關(guān)鍵詞 急支糖漿;一板多藥味;高效薄層色譜法;高效液相色譜法;含量測(cè)定;整體鑒別

    Study on HPTLC identification of one-plate multi-drug and HPLC content determination method for Jizhi syrup

    DING Haoran,LIU Feng,CHEN Yan,WANG Mengyue,LI Xiaobo(School of Pharmacy, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200240, China)

    ABSTRACT? ?OBJECTIVE To optimize the existing thin layer chromatography (TLC) identification and content determination methods of Jizhi syrup. METHODS High performance thin-layer chromatography (HPTLC) was used to identify five medicinal materials in Jizhi syrup, such as Ilex chinensis, Houttuynia cordata, Peucedanum praeruptorum, Citrus aurantium, Glycyrrhiza uralensis. High performance liquid chromatography (HPLC) was used to determine the contents of procatechuic acid, ephedrine hydrochloride and naringin in Jizhi syrup. RESULTS HPTLC results showed that the identification spots of pedunculoside, praeruptorin A, naringin, and liquiritin were clearly displayed, and the retention factors were in the range of 0.2 to 0.8. After validation, the method had been proved to be strongly specific, robust and repeatable. HPLC results showed that the linear ranges of protocatechuic acid, ephedrine hydrochloride and naringin were 4.32-431.67, 1.14-114.17 and 7.02-702.33 μg/mL (all r>0.996), respectively. The average recoveries were 100.61%, 100.40% and 99.22%, and RSDs were all less than 2.00%. RSDs of precision (n=6), stability (24 h, n=7) and repeatability (n=6) were all less than 2.00%. The average contents of the three components in 10 batches were 623.3, 152.1, 1 213.9 μg/mL (RSD<10.00%), respectively. CONCLUSIONS In this study, HPTLC method of one-plate multi-drug is established for the identification of Jizhi syrup. One sample pretreatment method and two TLC conditions are used to realize the rapid identification of five kinds of medicinal materials. An HPLC method is established to determine the content of Jizhi syrup, which realizes the fast quantification of three active components in Jizhi syrup, and can be used to optimize the identification and content determination items in the existing legal quality standards of Jizhi syrup.

    KEYWORDS? ?Jizhi syrup; one-plate multi-drug; HPTLC; HPLC; content determination; overall identification

    急支糖漿處方是來(lái)源于復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院沈自尹院士的臨床經(jīng)驗(yàn)方,目前收載于2020年版《中國(guó)藥典》(一部)[1],也被收入《四川省新型冠狀病毒肺炎中醫(yī)藥防控技術(shù)指南(第五版)》[2]。急支糖漿由四季青、魚(yú)腥草、金蕎麥、紫菀、前胡、麻黃、枳殼、甘草8味中藥制成,具有清熱宣肺、理氣化痰的功效[3]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),急支糖漿對(duì)急性支氣管炎和慢性支氣管炎急性發(fā)作引發(fā)咳嗽的臨床總有效率大于92%[4],在與抗生素聯(lián)用治療支氣管炎及外感風(fēng)熱咳嗽方面也有顯著療效[5]。2020年版《中國(guó)藥典》鑒別項(xiàng)對(duì)急支糖漿中的鹽酸麻黃堿(來(lái)源于麻黃)、柚皮苷(來(lái)源于枳殼)、原兒茶酸和阿魏酸進(jìn)行了薄層色譜鑒別[1]。該鑒別項(xiàng)使用3種展開(kāi)條件,共鑒別4種成分,但各展開(kāi)條件所對(duì)應(yīng)的樣品前處理方法不一致,操作繁瑣;且所鑒別的原兒茶酸和阿魏酸是來(lái)源于處方中四季青、金蕎麥、紫菀等多味藥材的酚酸類(lèi)成分[6-9],專(zhuān)屬性差。另外,2020年版《中國(guó)藥典》中急支糖漿的含量測(cè)定項(xiàng)僅對(duì)柚皮苷進(jìn)行測(cè)定,對(duì)于成分復(fù)雜的中藥復(fù)方僅選擇單一藥材的特征成分進(jìn)行質(zhì)量控制,具有一定局限性,不能滿(mǎn)足質(zhì)量日益提升的要求[10]。

    基于中藥復(fù)方制劑組成藥味多,單味藥逐一鑒別操作復(fù)雜,“整體鑒別”的思路被提出——在首選君藥、貴重藥、毒性藥鑒別的基礎(chǔ)上,盡可能多地對(duì)制劑中的有效成分、專(zhuān)屬性成分進(jìn)行鑒別[11-12]。一板多藥味鑒別法是“整體鑒別”思路的直接應(yīng)用,可以節(jié)省人工及材料成本,最大程度地提高檢測(cè)效率[13-14]。為保證急支糖漿在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中原料的可追溯性,簡(jiǎn)化操作步驟,節(jié)省材料,有必要建立一種基于專(zhuān)屬性成分的一板多藥味高效薄層色譜(high performance thin-layer chromatography,HPTLC)鑒別方法。在優(yōu)化含量測(cè)定項(xiàng)方面,質(zhì)量標(biāo)志物為質(zhì)量控制研究提供了新思路,物質(zhì)存在性、特有性、可測(cè)性、功效關(guān)聯(lián)性和溯源傳遞性“五原則”已成為選擇質(zhì)量控制指標(biāo)的重要判斷依據(jù)[15];同時(shí)新方法的高效性、實(shí)用性、耐用性,是否能為實(shí)際產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供便利,也是優(yōu)化含量測(cè)定方法需考慮的重要因素。所以,本研究建立了一種一板多藥味HPTLC鑒別法,通過(guò)1種樣品前處理方法、2個(gè)薄層色譜條件,實(shí)現(xiàn)對(duì)急支糖漿中君藥四季青和魚(yú)腥草、臣藥前胡、佐藥枳殼、使藥甘草的同時(shí)鑒別[3];建立了一種高效液相色譜(HPLC)含量測(cè)定方法,實(shí)現(xiàn)對(duì)原兒茶酸、鹽酸麻黃堿和柚皮苷3種活性成分的快速定量。兩種方法均簡(jiǎn)單高效,擬用于優(yōu)化2020年版《中國(guó)藥典》中急支糖漿的鑒別項(xiàng)和含量測(cè)定項(xiàng),提升該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

    1 材料

    1.1 主要儀器

    本研究所使用的主要儀器有PWN85ZH型十萬(wàn)分之一電子分析天平[奧豪斯儀器(常州)有限公司],HPTLC系統(tǒng)(包括Automatic TLC Sampler 4型自動(dòng)點(diǎn)板儀、Automatic Developing Chamber 2型自動(dòng)展開(kāi)儀、TLC Visualizer 2型自動(dòng)成像儀,瑞士CAMAG公司),1290 Infinity型HPLC系統(tǒng)(包括G4226A型自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316C型柱溫箱、G4212A DAD型檢測(cè)器、G4220A型二元超高壓梯度泵,美國(guó)Agilent公司),Research plus型手動(dòng)移液器(量程100~1 000 μL)、Centrifuge 5417R型離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)等。

    1.2 主要藥品與試劑

    無(wú)水乙醇、甲醇、三氯甲烷、乙醚、石油醚、環(huán)己烷、氯化鈉均購(gòu)自上海泰坦科技股份有限公司,乙酸乙酯、硫酸、六水合氯化鎂均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,均為分析純;乙腈購(gòu)自北京百靈威科技有限公司,磷酸購(gòu)自上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司,均為色譜純;實(shí)驗(yàn)用水使用Millipore Milli-Q型超純水系統(tǒng)制備。高效薄層板HSGF254購(gòu)自煙臺(tái)江友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司,高效薄層板G購(gòu)自青島海洋化工有限公司,高效薄層板HSG60購(gòu)自德國(guó)Merck公司。

    甘草苷對(duì)照品(批號(hào)wkq18040902,純度≥98%)購(gòu)自四川省維克奇生物科技有限公司;柚皮苷對(duì)照品(批號(hào)DST191011-099,純度≥98%)、具棲冬青苷對(duì)照品(批號(hào)DST19032-034,純度≥98%)、白花前胡甲素對(duì)照品(批號(hào)DST190214-020,純度≥98%)、原兒茶酸對(duì)照品(批號(hào)DST180428-081,純度≥98%)、四季青對(duì)照藥材(批號(hào)DST190808-046)均購(gòu)自成都德思特生物技術(shù)有限公司;鹽酸麻黃堿對(duì)照品(批號(hào)171241-201809,純度≥99%)、甘草對(duì)照藥材(批號(hào)120904-201620)、枳殼對(duì)照藥材(批號(hào)120981-201605)、前胡對(duì)照藥材(批號(hào)120951-201706)、魚(yú)腥草對(duì)照藥材(批號(hào)121046-201607)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。10批急支糖漿(批號(hào)分別為19040073、19040074、19040075、19040077、19040086、19040097、19040098、19040101、19040114、19040116)、6批缺方陰性樣品(分別為缺甘草、枳殼、四季青、前胡、魚(yú)腥草、麻黃的陰性樣品,廠家未提供生產(chǎn)批號(hào))均由太極集團(tuán)重慶涪陵制藥廠有限公司生產(chǎn)。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 一板多藥味HPTLC法鑒定急支糖漿中的5種藥材

    2.1.1 供試品溶液制備

    取本品30 mL,置分液漏斗中,用石油醚振搖提取2次,每次30 mL;棄去石油醚液,水液加乙醚振搖提取2次,每次30 mL;合并乙醚提取液,蒸干,殘?jiān)蛹状? mL使溶解,作為急支糖漿供試品一溶液。水液再加乙酸乙酯振搖提取2次,每次45 mL;合并乙酸乙酯提取液,蒸干,殘?jiān)蛹状? mL使溶解,作為急支糖漿供試品二溶液。

    2.1.2 對(duì)照品溶液、單味對(duì)照藥材溶液和缺方陰性樣品溶液制備

    精密稱(chēng)取甘草苷、柚皮苷、具棲冬青苷、白花前胡甲素對(duì)照品,分別加甲醇制成每毫升各含0.25 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。分別稱(chēng)取5種對(duì)照藥材各1 g,加30 mL水,加熱回流2.5 h,重復(fù)提取2次,4 000 r/min離心10 min,合并2次上清液,濃縮至30 mL,得對(duì)照藥材濃縮液;取對(duì)照藥材濃縮液,按照“2.1.1”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備單味對(duì)照藥材溶液(前胡、魚(yú)腥草參照供試品一溶液;甘草、枳殼、四季青參照供試品二溶液)。分別取缺甘草、枳殼、四季青、前胡、魚(yú)腥草的陰性樣品按“2.1.1”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備缺方陰性樣品溶液。

    2.1.3 甘草、枳殼和四季青藥材的HPTLC鑒別

    吸取“2.1.1” “2.1.2”項(xiàng)下急支糖漿供試品二溶液、3種對(duì)照品溶液(甘草苷、柚皮苷、具棲冬青苷)、3種單味對(duì)照藥材溶液及對(duì)應(yīng)陰性樣品溶液各2 μL,分別點(diǎn)于同一高效薄層板HSGF254上,以三氯甲烷-甲醇-水(體積比16 ∶ 10 ∶ 3,4 ℃靜置12 h取下層液)為展開(kāi)劑,預(yù)飽和20 min后,以展距70 mm、溫度(24±2) ℃、相對(duì)濕度(50±5)%的條件展開(kāi);取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,105 ℃加熱顯色至斑點(diǎn)清晰,在日光下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖1。供試品二溶液色譜在與甘草苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯示相同的黃色熒光斑點(diǎn),比移值(Rf)為0.56;在與柚皮苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯示相同的棕色熒光斑點(diǎn),Rf為0.39;在與具棲冬青苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯示相同的紫色熒光斑點(diǎn),Rf為0.70。甘草、枳殼和四季青對(duì)照藥材色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置顯示相同顏色熒光斑點(diǎn)。各缺方陰性樣品色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置無(wú)干擾,表明該方法專(zhuān)屬性良好。4批急支糖漿供試品二溶液色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯示相同顏色熒光斑點(diǎn),說(shuō)明該方法在不同批次的急支糖漿樣品間重復(fù)性良好。

    2.1.4 前胡和魚(yú)腥草藥材的HPTLC鑒別

    吸取“2.1.1” “2.1.2”項(xiàng)下急支糖漿供試品一溶液、白花前胡甲素對(duì)照品溶液、2種單味對(duì)照藥材溶液及對(duì)應(yīng)陰性樣品溶液各5 μL,分別點(diǎn)于同一高效薄層板HSGF254上,以環(huán)己烷-乙酸乙酯(體積比9 ∶ 5)為展開(kāi)劑,預(yù)飽和15 min后,以展距75 mm、溫度(24±2) ℃、相對(duì)濕度(50±5)%的條件展開(kāi);取出,晾干,在紫外光366 nm下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖2。供試品一溶液色譜在與魚(yú)腥草對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯示2個(gè)相同的淡黃色熒光斑點(diǎn),Rf分別為0.21和0.63;在與白花前胡甲素對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯示相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn),Rf為0.52。前胡對(duì)照藥材色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯示相同顏色熒光斑點(diǎn)。各缺方陰性樣品色譜在指定對(duì)照品色譜相應(yīng)位置無(wú)干擾,表明該方法專(zhuān)屬性良好。4批急支糖漿供試品一溶液色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯示相同顏色熒光斑點(diǎn),說(shuō)明該方法在不同批次的急支糖漿樣品間重復(fù)性良好。

    2.1.5 一板多藥味HPTLC的耐用性驗(yàn)證

    (1)不同廠家的薄層板考察:以“2.1.3” “2.1.4”項(xiàng)下色譜參數(shù)進(jìn)行試驗(yàn),考察不同廠家的薄層板(煙臺(tái)江友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司、青島海洋化工有限公司、德國(guó)Merck公司)對(duì)展開(kāi)效果的影響。結(jié)果顯示,采用HPTLC法鑒定甘草、枳殼、四季青藥材時(shí),日光下3種薄層板均呈現(xiàn)了較好的分離效果,符合耐用性原則,詳見(jiàn)圖3;采用HPTLC法鑒定前胡、魚(yú)腥草藥材時(shí),在紫外光366 nm下,3種薄層板均呈現(xiàn)了較好的分離效果,符合耐用性原則,詳見(jiàn)圖4。

    (2)溫濕度聯(lián)合考察:以“2.1.3”“2.1.4”項(xiàng)下色譜參數(shù)進(jìn)行試驗(yàn),考察不同溫濕度的展開(kāi)缸環(huán)境對(duì)展開(kāi)效果的影響。以800 mL飽和氯化鈉溶液控制薄層展開(kāi)系統(tǒng)的高相對(duì)濕度為(75±5)%,分別在室內(nèi)偏低溫度(20±2) ℃和室內(nèi)偏高溫度(28±2) ℃條件下展開(kāi);以800 mL飽和六水合氯化鎂溶液控制薄層展開(kāi)系統(tǒng)的低相對(duì)濕度為(38±5)%,分別在室內(nèi)偏低溫度(20±2) ℃和室內(nèi)偏高溫度(28±2) ℃條件下展開(kāi)。甘草、枳殼和四季青藥材的HPTLC結(jié)果顯示,除室內(nèi)偏高溫度、低相對(duì)濕度條件下Rf偏高外,整體展開(kāi)效果較好,該方法耐用性良好,詳見(jiàn)圖5。前胡和魚(yú)腥草藥材的HPTLC結(jié)果顯示,除室內(nèi)偏高溫度、高相對(duì)濕度條件下斑點(diǎn)整體Rf偏高外,其他溫濕度條件下整體展開(kāi)效果較好,該方法耐用性良好,詳見(jiàn)圖6。

    2.2 HPLC法測(cè)定急支糖漿中3種活性成分的含量

    2.2.1 供試品溶液制備

    將瓶裝急支糖漿充分搖勻,精密量取1 mL置10 mL量瓶中,加入80%甲醇定容,搖勻,12 000 r/min離心10 min,取上清液,用0.22 μm微孔濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

    2.2.2 混合對(duì)照品溶液和缺方陰性樣品溶液制備

    取鹽酸麻黃堿、原兒茶酸、柚皮苷對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,分別加80%甲醇溶解得0.913 mg/mL的鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液、1.233 mg/mL的原兒茶酸對(duì)照品溶液、2.007 mg/mL的柚皮苷對(duì)照品溶液。分別吸取上述3種對(duì)照品溶液250、700、700 μL,置于同一2 mL量瓶中,加入80%甲醇定容,搖勻,配制成上述成分質(zhì)量濃度分別為0.114、0.432、0.702 mg/mL的混合對(duì)照品溶液。分別取缺麻黃、枳殼陰性樣品按照“2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備缺方陰性樣品溶液。

    2.2.3 色譜條件

    以ZORBAX Eclipse Plus C18(150 mm × 4.6 mm,3.5 μm)為色譜柱,以0.1%磷酸溶液(A)-乙腈(B)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫(0~4 min,11%B;4~7 min,11%B→18%B;7~18 min,18%B→21%B);檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm;流速為1.0 mL/min;柱溫為40 ℃;進(jìn)樣量為5 μL。

    2.2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

    分別取上述供試品溶液、混合對(duì)照品溶液和缺方陰性樣品溶液適量,按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖。結(jié)果顯示,各待測(cè)成分色譜峰峰形好,且分離度均大于1.5,理論板數(shù)均不低于10 000,缺麻黃陰性樣品溶液對(duì)鹽酸麻黃堿的測(cè)定無(wú)干擾,缺枳殼陰性樣品溶液對(duì)柚皮苷的測(cè)定無(wú)干擾,結(jié)果見(jiàn)圖7。

    2.2.5 線(xiàn)性關(guān)系考察及定量限、檢測(cè)限測(cè)定

    取“2.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量,用80%甲醇分別稀釋2、5、10、25、50、100倍,將混合對(duì)照品溶液及系列稀釋混合對(duì)照品溶液按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積。以對(duì)照品濃度(x)為橫坐標(biāo),以峰面積(y)為縱坐標(biāo),計(jì)算得回歸方程;以峰高信號(hào)為基線(xiàn)噪音信號(hào)的10倍確定定量限,以峰高信號(hào)為基線(xiàn)噪音信號(hào)的3倍確定檢測(cè)限,結(jié)果見(jiàn)表1。

    2.2.6 精密度考察

    取一份供試品溶液(批號(hào)19040075),按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積。結(jié)果顯示,原兒茶酸、鹽酸麻黃堿、柚皮苷峰面積的RSD分別為0.16%、0.71%、0.09%(n=6),表明儀器精密度良好。

    2.2.7 重復(fù)性考察

    取同一批急支糖漿樣品(批號(hào)19040075),按“2.2.1”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液,按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積,并代入線(xiàn)性回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果顯示,原兒茶酸、鹽酸麻黃堿、柚皮苷含量的RSD分別為1.50%、1.30%、1.45%(n=6),表明供試品溶液制備方法的重復(fù)性良好。

    2.2.8 穩(wěn)定性考察

    取一份供試品溶液(批號(hào)19040075),分別于室溫放置0、2、4、6、8、12、24 h時(shí)按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積。結(jié)果顯示,原兒茶酸、鹽酸麻黃堿、柚皮苷峰面積的RSD分別為0.33%、1.10%、0.26%(n=7),表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

    2.2.9 加樣回收率試驗(yàn)

    基于實(shí)測(cè)1 mL急支糖漿(批號(hào)19040075)中含原兒茶酸679.3 μg、鹽酸麻黃堿151.6 μg、柚皮苷1 170.8 μg,精密量取該批次急支糖漿1 mL置于10 mL量瓶中,加入1.280 mg/mL的原兒茶酸對(duì)照品溶液500 μL、0.770? ? mg/mL的鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液200 μL、2.314 mg/mL的柚皮苷對(duì)照品溶液500 μL,加入80%甲醇定容,搖勻,12 000 r/min離心10 min,取上清液,用0.22 μm微孔濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液,即得加樣回收樣品溶液。平行制備6份樣品溶液,按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示,原兒茶酸、鹽酸麻黃堿、柚皮苷的平均回收率分別為100.61%、100.40%、99.22%,RSD分別為1.21%、1.82%、1.58%(n=6),表明該方法準(zhǔn)確可靠。結(jié)果見(jiàn)表2。

    2.2.10 急支糖漿樣品含量測(cè)定

    取10批急支糖漿樣品,按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,再按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積,并代入線(xiàn)性回歸方程計(jì)算樣品中原兒茶酸、鹽酸麻黃堿和柚皮苷的含量。每批樣品平行測(cè)定2次,取平均值,結(jié)果見(jiàn)表3。

    3 討論

    3.1 HPTLC鑒別和HPLC含量測(cè)定指標(biāo)成分的選擇

    基于“整體鑒別”思路,為實(shí)現(xiàn)一板多藥味鑒別,本研究選擇甘草、枳殼、四季青藥材中的黃酮類(lèi)成分甘草苷、柚皮苷、具棲冬青苷進(jìn)行同板鑒別,選擇前胡藥材中的香豆素類(lèi)成分白花前胡甲素和魚(yú)腥草對(duì)照藥材進(jìn)行同板鑒別;使用魚(yú)腥草對(duì)照藥材鑒別雖無(wú)法指認(rèn)具體成分,但2個(gè)特征性斑點(diǎn)仍可保證鑒別的準(zhǔn)確性。薄層鑒別指標(biāo)成分的選擇均參照2020年版《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn):柚皮苷、具棲冬青苷(又名長(zhǎng)梗冬青苷)、白花前胡甲素均為鑒別枳殼、四季青、前胡藥材的特征成分,甘草苷是甘草藥材含量測(cè)定的特征成分,滿(mǎn)足專(zhuān)屬性條件。本研究較2020年版《中國(guó)藥典》,去除了非專(zhuān)屬性成分原兒茶酸和阿魏酸成分的鑒別,增加專(zhuān)屬性成分甘草苷(來(lái)源于甘草)、具棲冬青苷(來(lái)源于四季青)及魚(yú)腥草對(duì)照藥材特征斑點(diǎn)的鑒別。專(zhuān)屬性成分的鑒別可以實(shí)現(xiàn)工業(yè)生產(chǎn)中原料藥材的可追溯性;而非專(zhuān)屬性成分由于來(lái)源于多個(gè)藥材,即便檢出也無(wú)法準(zhǔn)確判定該批次急支糖漿的質(zhì)量,所以專(zhuān)屬性成分鑒別是中藥復(fù)方制劑薄層鑒別的發(fā)展趨勢(shì)。對(duì)于麻黃、金蕎麥、紫菀3種處方藥材,麻黃中的代表性成分為生物堿類(lèi)成分,樣品制備條件和展開(kāi)系統(tǒng)條件均要求偏堿性條件[16],不適宜與其他成分進(jìn)行同板鑒別,所以仍沿用藥典方法;目前金蕎麥、紫菀的水提液中可檢出特征成分表兒茶素和紫菀酮,但在急支糖漿中無(wú)法檢出,推測(cè)與這2種成分水溶性差、工業(yè)化生產(chǎn)未粉碎藥材等因素相關(guān)[17],筆者推薦使用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)金蕎麥和紫菀的特征成分進(jìn)行鑒別。

    結(jié)合質(zhì)量標(biāo)志物篩選“五原則”中的可測(cè)性、特有性和功效關(guān)聯(lián)性原則,本研究的含量測(cè)定選擇原兒茶酸、鹽酸麻黃堿和柚皮苷3種活性成分進(jìn)行含量測(cè)定。原兒茶酸、鹽酸麻黃堿、柚皮苷在10批急支糖漿中的平均含量分別為623.3、152.1、1 213.9 μg/mL,且其色譜峰分離度均大于1.5,滿(mǎn)足可測(cè)性原則[15]。原兒茶酸來(lái)源于四季青、金蕎麥、魚(yú)腥草等多味藥材,雖非專(zhuān)屬性成分,卻是復(fù)方中的代表性酚酸類(lèi)成分,具有調(diào)節(jié)機(jī)體氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)等作用[18];鹽酸麻黃堿是麻黃藥材的特征性生物堿成分,有解熱、發(fā)汗、止咳、抗哮喘等功效[19];柚皮苷是枳殼藥材的特征性二氫黃酮類(lèi)成分,有抗氧化、抗炎、抗凋亡、抗?jié)兊茸饔肹20]。以上3種活性成分均與急支糖漿的功效作用相關(guān),是潛在的質(zhì)量標(biāo)志物。

    3.2 HPTLC前處理方法及薄層色譜條件考察

    在HPTLC方法建立過(guò)程中,對(duì)甘草、枳殼、四季青藥材的鑒別,考察了不同樣品前處理方法(直接萃取、5%氫氧化鈉溶液調(diào)至pH11~12再萃取、稀鹽酸調(diào)至pH2~3再萃取),不同展開(kāi)劑[正丁醇-乙醇-水(體積比? 4 ∶ 1 ∶ 5,取上層)、正丁醇-乙酸乙酯-水(體積比4 ∶ 1 ∶ 5,取上層)、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(體積比15 ∶ 40 ∶ 22 ∶ 15,4 ℃靜置取下層)、三氯甲烷-甲醇-水(體積比16 ∶ 10 ∶ 3,4 ℃靜置取下層)],不同顯色劑(10%硫酸乙醇溶液、5%香草醛硫酸溶液、2%三氯化鋁甲醇溶液),不同檢視條件(日光、紫外光254 nm和366 nm)以及不同展距(60、70、80 mm)。對(duì)急支糖漿中前胡和魚(yú)腥草藥材的鑒別,考察了不同樣品前處理方法(考察項(xiàng)同上),不同展開(kāi)劑[二氯甲烷-丙酮(體積比15 ∶ 1)、環(huán)己烷-乙酸乙酯(體積比4 ∶ 1)、三氯甲烷-甲醇(體積比19 ∶ 1)、三氯甲烷-乙酸乙酯-丙酮(體積比5 ∶ 1 ∶ 4)、環(huán)己烷-乙酸乙酯(體積比? ?9 ∶ 5)],不同顯色劑(10%硫酸乙醇溶液、5%磷鉬酸乙醇溶液、2,4-二硝基苯腈鹽酸乙醇溶液),不同檢視條件(考察項(xiàng)同上)和不同展距(65、75、85 mm)等各因素對(duì)展開(kāi)效果的影響。最終所選擇的樣品前處理方法和薄層色譜條件均為各項(xiàng)考察下的最優(yōu)結(jié)果,經(jīng)后期各項(xiàng)方法學(xué)考察證實(shí),專(zhuān)屬性、耐用性、批次重復(fù)性良好。

    3.3 HPLC前處理方法及色譜條件考察

    在采用HPLC法測(cè)定含量過(guò)程中,考察了不同溶劑(60%甲醇、80%甲醇、甲醇、80%乙醇、乙醇)制備供試品溶液的效果,考察了水相添加劑0.1%磷酸、0.1%甲酸和0.1%冰醋酸的分離效果,考察了柱溫30、35、40、45 ℃的分離效果,也考察了不同檢測(cè)波長(zhǎng)、進(jìn)樣量、流速等多個(gè)色譜條件,選擇了最優(yōu)的樣品制備方法和色譜條件作為本實(shí)驗(yàn)條件。其中,鹽酸麻黃堿僅在210 nm下有末端吸收,當(dāng)使用0.1%磷酸作為添加劑時(shí),在210 nm波長(zhǎng)下整體基線(xiàn)平穩(wěn),所以本色譜條件對(duì)于僅有末端吸收的化合物成分檢測(cè)非常適用。經(jīng)驗(yàn)證,本研究所建立的HPLC含量測(cè)定方法同樣適用于1200型HPLC系統(tǒng)(美國(guó)Agilent公司),耐用性好。

    綜上,本研究建立了急支糖漿的一板多藥味HPTLC鑒別法和HPLC含量測(cè)定法。HPTLC法采用1種樣品前處理方法、2個(gè)薄層色譜條件,實(shí)現(xiàn)了對(duì)急支糖漿中5種藥材的快速鑒別,并同時(shí)覆蓋君、臣、佐、使4類(lèi)配伍藥材,專(zhuān)屬性、耐用性、批次重復(fù)性良好;HPLC法實(shí)現(xiàn)了對(duì)急支糖漿中3種活性成分原兒茶酸、鹽酸麻黃堿和柚皮苷的快速定量,方法便捷高效,精密度、穩(wěn)定性、耐用性好。本研究為優(yōu)化《中國(guó)藥典》中急支糖漿的鑒別項(xiàng)和含量測(cè)定項(xiàng)、提升其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

    參考文獻(xiàn)

    [ 1 ] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典:一部[S]. 2020年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2020:1372-1373.

    [ 2 ] 紅星新聞.趕快收藏!四川新冠肺炎中醫(yī)藥防控技術(shù)指南(第五版)來(lái)了[EB/OL].[2021-10-10]. https://sichuan.scol.com.cn/sczh/202012/57978238.html.

    [ 3 ] 張婭.急支糖漿研究概述[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2019,15(8):182-184.

    [ 4 ] 張前進(jìn),崔海燕,黎巍威,等.“清肺止咳化痰湯”治療急性氣管-支氣管炎及慢性支氣管炎急性發(fā)作149例臨床研究[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2017,23(2):237-239,265.

    [ 5 ] 陳延軍,郝東偉,楊立波.急支糖漿或抗生素治療單純急性氣管-支氣管炎的隨機(jī)對(duì)照臨床研究[J].中藥藥理與臨床,2015,31(1):262-264.

    [ 6 ] 潘娓婕,劉琳,劉曉星,等.高效液相色譜-電化學(xué)法測(cè)定四季青葉中4種化合物的含量[J].藥物分析雜志,2007,27(6):870-873.

    [ 7 ] 李敏,郭青,張瀟. HPLC法同時(shí)測(cè)定金蕎麥片中6個(gè)多酚類(lèi)成分[J].藥物分析雜志,2015,35(4):644-648.

    [ 8 ] 萬(wàn)昶宸,劉艷艷,楊浩天,等. HPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定紫菀中9種化學(xué)成分[J].中草藥,2016,47(14):2534-2539.

    [ 9 ] VERARDO V,GLICERINA V,COCCI E,et al. Determination of free and bound phenolic compounds and their antioxidant activity in buckwheat bread loaf,crust and crumb[J]. LWT,2018,87:217-224.

    [10] 閆凱莉,尹程程,劉夢(mèng)瑤,等.芩連潤(rùn)肺湯的HPLC指紋圖譜建立、含量測(cè)定及多元統(tǒng)計(jì)分析[J].中國(guó)藥房,2021,32(16):1956-1963.

    [11] 周躍華,路金才,周娟,等.關(guān)于中藥新藥復(fù)方制劑“整體鑒別”新模式的思考[J].中草藥,2021,52(8):2199-2204.

    [12] 張子龍,李雯珊,滕菲,等.絞股藍(lán)總苷提取物及總苷片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)中藥雜志,2020,45(24):5976- 5981.

    [13] LIU F,WANG M Y,LI X B. Simultaneous qualitative characterization of four herbs in Weikangling capsules by a validated high-performance thin-layer chromatography method[J]. JPC-J Planar Chromatogr-Mod TLC,2020,33(5):449-455.

    [14] MEIER B,SPRIANO D. Modern HPTLC:a perfect tool for quality control of herbals and their preparations[J]. J AOAC Int,2010,93(5):1399-1409.

    [15] 劉昌孝.中藥質(zhì)量標(biāo)志物(Q-marker):提高中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及質(zhì)量控制理論和促進(jìn)中藥產(chǎn)業(yè)科學(xué)發(fā)展[J].中草藥,2019,50(19):4517-4518.

    [16] 李紅霞,丁明玉,呂琨,等.麻黃、含麻黃中成藥及生物體液中麻黃堿的定量分析方法[J].藥物分析雜志,2001,21(2):142-145.

    [17] 巢穎欣,劉夢(mèng)詩(shī),楊秀娟,等.薄層色譜法快速鑒別廣陳皮與陳皮[J].中成藥,2021,43(7):1937-1940.

    [18] AL OLAYAN E M,ALOUFI A S,ALAMRI O D,et al. Protocatechuic acid mitigates cadmium-induced neuro- toxicity in rats:role of oxidative stress,inflammation and apoptosis[J]. Sci Total Environ,2020,723:137969.

    [19] WU X,ZHANG H B,F(xiàn)AN S S,et al. Quality markers based on biological activity:a new strategy for the quality control of traditional Chinese medicine[J]. Phytomedicine,2018,44:103-108.

    [20] CHEN R,QI Q L,WANG M T,et al. Therapeutic potential of naringin:an overview[J]. Pharm Biol,2016,54(12):3203-3210.

    (收稿日期:2021-10-12 修回日期:2021-12-14)

    (編輯:曾海蓉)

    1590501705214

    猜你喜歡
    含量測(cè)定高效液相色譜法
    香芪生乳合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
    腰痛康膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
    高效液相色譜法用于丙酸睪酮注射液的含量測(cè)定
    HPLC法測(cè)定彝藥火把花根中雷公藤甲素的含量
    HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地爬山虎莖中白藜蘆醇的含量
    山苓祛斑凝膠劑提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
    空氣中氧氣含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)與拓展
    考試周刊(2016年95期)2016-12-21 01:17:51
    藥物含量測(cè)定操作技能考核設(shè)計(jì)的探討
    HPLC法測(cè)定6省各等級(jí)天麻中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的含量
    HPLC法測(cè)定康爾心膠囊中丹參酮ⅡA的含量
    国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产高清激情床上av| 欧美精品啪啪一区二区三区| 久久草成人影院| 国产成人精品久久二区二区91| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 在线观看免费视频日本深夜| 免费观看精品视频网站| 午夜激情福利司机影院| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 美女免费视频网站| 757午夜福利合集在线观看| 精品久久久久久成人av| 国产精华一区二区三区| 90打野战视频偷拍视频| 国产真人三级小视频在线观看| 国产精品免费视频内射| 欧美最黄视频在线播放免费| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 久久久久国内视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美又色又爽又黄视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 一区二区三区精品91| 久久久久久大精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 身体一侧抽搐| 无限看片的www在线观看| 国产高清videossex| 国产欧美日韩一区二区精品| 精品国产乱码久久久久久男人| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲五月天丁香| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产午夜福利久久久久久| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产激情久久老熟女| 男人操女人黄网站| 免费观看人在逋| 国产精品,欧美在线| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 午夜福利免费观看在线| 深夜精品福利| 日本精品一区二区三区蜜桃| 在线看三级毛片| 欧美zozozo另类| 国产三级黄色录像| 久久亚洲精品不卡| 欧美+亚洲+日韩+国产| 美女国产高潮福利片在线看| 久久久久久久久免费视频了| 两人在一起打扑克的视频| 丝袜人妻中文字幕| 免费高清在线观看日韩| 国产精品久久久久久精品电影 | 亚洲无线在线观看| av中文乱码字幕在线| 一夜夜www| 午夜免费观看网址| 国产野战对白在线观看| 一区二区三区激情视频| 亚洲最大成人中文| 成人欧美大片| 欧美另类亚洲清纯唯美| 日韩有码中文字幕| 这个男人来自地球电影免费观看| 天天添夜夜摸| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产三级黄色录像| 久久天堂一区二区三区四区| 97碰自拍视频| 熟女电影av网| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 我的亚洲天堂| 美女扒开内裤让男人捅视频| 午夜激情福利司机影院| 午夜福利视频1000在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲无线在线观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 99re在线观看精品视频| 男人舔奶头视频| 妹子高潮喷水视频| 手机成人av网站| 中文资源天堂在线| 中文字幕av电影在线播放| 天堂影院成人在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 1024视频免费在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 久久久久久大精品| 亚洲久久久国产精品| 久久99热这里只有精品18| 日韩成人在线观看一区二区三区| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产精品免费视频内射| 超碰成人久久| 波多野结衣巨乳人妻| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 免费在线观看成人毛片| 真人一进一出gif抽搐免费| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产伦人伦偷精品视频| videosex国产| 天堂动漫精品| 久久中文看片网| 久热这里只有精品99| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 12—13女人毛片做爰片一| 色在线成人网| 深夜精品福利| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 久久久国产成人精品二区| 亚洲七黄色美女视频| 免费高清在线观看日韩| av电影中文网址| 精品久久蜜臀av无| e午夜精品久久久久久久| bbb黄色大片| 麻豆成人午夜福利视频| 国产成人影院久久av| 国产精品 国内视频| 两个人视频免费观看高清| 国产精品av久久久久免费| 成人三级黄色视频| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 岛国在线观看网站| 两个人看的免费小视频| 高清毛片免费观看视频网站| 大型av网站在线播放| 亚洲九九香蕉| 91成年电影在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 色av中文字幕| 亚洲成国产人片在线观看| e午夜精品久久久久久久| 精品一区二区三区四区五区乱码| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 久久性视频一级片| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 欧美一级毛片孕妇| 国产区一区二久久| 亚洲成a人片在线一区二区| 人人妻人人澡人人看| 在线观看日韩欧美| 久9热在线精品视频| 久久九九热精品免费| 99riav亚洲国产免费| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 精品欧美一区二区三区在线| 少妇的丰满在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲免费av在线视频| 两人在一起打扑克的视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国内精品久久久久久久电影| x7x7x7水蜜桃| av片东京热男人的天堂| av片东京热男人的天堂| 国产亚洲欧美98| 亚洲一区高清亚洲精品| 最新在线观看一区二区三区| 国产97色在线日韩免费| 女人被狂操c到高潮| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲成国产人片在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲一区高清亚洲精品| 成年女人毛片免费观看观看9| av片东京热男人的天堂| 国产成人欧美在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 香蕉国产在线看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 成人国产一区最新在线观看| av电影中文网址| 成人亚洲精品av一区二区| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久热爱精品视频在线9| 天堂影院成人在线观看| 一区二区三区精品91| www.999成人在线观看| 亚洲 国产 在线| 国产伦一二天堂av在线观看| 成人三级做爰电影| 1024视频免费在线观看| 亚洲,欧美精品.| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 看黄色毛片网站| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲国产精品成人综合色| 免费观看人在逋| 宅男免费午夜| 男女床上黄色一级片免费看| 正在播放国产对白刺激| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 精品久久久久久久久久久久久 | 91在线观看av| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲国产精品合色在线| 国产黄片美女视频| 亚洲中文字幕日韩| 国产成人欧美| 午夜福利在线在线| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 婷婷六月久久综合丁香| 黄片小视频在线播放| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲av电影在线进入| 精品免费久久久久久久清纯| 色播亚洲综合网| 又大又爽又粗| 中文字幕人妻熟女乱码| aaaaa片日本免费| 国产v大片淫在线免费观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 黑人欧美特级aaaaaa片| 麻豆一二三区av精品| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美日韩精品网址| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 欧美日韩黄片免| 午夜福利在线在线| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 1024香蕉在线观看| 美女高潮到喷水免费观看| 制服丝袜大香蕉在线| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲一区二区三区色噜噜| 久久久久亚洲av毛片大全| 欧美在线黄色| 亚洲男人天堂网一区| 90打野战视频偷拍视频| av视频在线观看入口| 国产精华一区二区三区| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲av成人av| 波多野结衣av一区二区av| 国产视频一区二区在线看| 国产亚洲精品av在线| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 操出白浆在线播放| 免费搜索国产男女视频| 天堂√8在线中文| 美女免费视频网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国语自产精品视频在线第100页| 国产1区2区3区精品| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 精品无人区乱码1区二区| 嫁个100分男人电影在线观看| 香蕉丝袜av| 亚洲人成77777在线视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 丝袜在线中文字幕| 国产成人系列免费观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 91av网站免费观看| 禁无遮挡网站| av片东京热男人的天堂| 91大片在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲,欧美精品.| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 一本一本综合久久| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲无线在线观看| 欧美黑人巨大hd| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 欧美大码av| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 成人国语在线视频| 怎么达到女性高潮| 国产精品国产高清国产av| 一区二区三区高清视频在线| 一区二区日韩欧美中文字幕| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美不卡视频在线免费观看 | 国语自产精品视频在线第100页| а√天堂www在线а√下载| 久久香蕉激情| www.熟女人妻精品国产| av电影中文网址| 亚洲国产欧美日韩在线播放| avwww免费| 99国产综合亚洲精品| 99在线视频只有这里精品首页| 国产精品久久电影中文字幕| 9191精品国产免费久久| 中文亚洲av片在线观看爽| 精品久久久久久,| 美女高潮到喷水免费观看| 日韩高清综合在线| 精品久久蜜臀av无| 成人精品一区二区免费| 亚洲三区欧美一区| 99re在线观看精品视频| 免费高清在线观看日韩| 真人一进一出gif抽搐免费| www.精华液| 一本大道久久a久久精品| 国产爱豆传媒在线观看 | 午夜福利欧美成人| 国产精品精品国产色婷婷| 真人一进一出gif抽搐免费| 黄色丝袜av网址大全| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 国产伦一二天堂av在线观看| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 免费观看人在逋| 99热6这里只有精品| xxx96com| 麻豆成人av在线观看| 啦啦啦免费观看视频1| 国产精品精品国产色婷婷| 国产极品粉嫩免费观看在线| 观看免费一级毛片| 国产精品99久久99久久久不卡| 午夜福利18| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产人伦9x9x在线观看| 成年版毛片免费区| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 国产av又大| 欧美大码av| 一级黄色大片毛片| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 久久这里只有精品19| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产主播在线观看一区二区| 欧美成人性av电影在线观看| 国产区一区二久久| 久久精品国产综合久久久| 久久精品人妻少妇| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 一本一本综合久久| 人人澡人人妻人| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美午夜高清在线| 亚洲五月天丁香| www.精华液| 精品福利观看| 午夜a级毛片| cao死你这个sao货| 校园春色视频在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 丁香欧美五月| 日本a在线网址| 特大巨黑吊av在线直播 | 国产精品爽爽va在线观看网站 | xxx96com| 久久精品91蜜桃| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久九九热精品免费| 黄片播放在线免费| 999久久久精品免费观看国产| 岛国视频午夜一区免费看| 国产精华一区二区三区| 两个人看的免费小视频| 久久精品91蜜桃| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产av又大| 一级毛片精品| 91字幕亚洲| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲欧美激情综合另类| 国产成人精品久久二区二区免费| 日韩精品青青久久久久久| 嫩草影院精品99| 在线av久久热| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲第一av免费看| 69av精品久久久久久| 99热这里只有精品一区 | 精华霜和精华液先用哪个| 久久精品国产亚洲av高清一级| 色综合欧美亚洲国产小说| 少妇熟女aⅴ在线视频| www日本黄色视频网| 色播亚洲综合网| 中文字幕最新亚洲高清| 久久精品91蜜桃| 哪里可以看免费的av片| 亚洲人成电影免费在线| 精品卡一卡二卡四卡免费| 色在线成人网| 人成视频在线观看免费观看| 在线播放国产精品三级| 在线观看www视频免费| 99在线人妻在线中文字幕| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲av五月六月丁香网| 欧美黑人精品巨大| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲av成人一区二区三| 久久亚洲精品不卡| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产成人欧美| 宅男免费午夜| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 国产成人欧美在线观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 男人的好看免费观看在线视频 | 18禁观看日本| 国产成人影院久久av| 无限看片的www在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 色av中文字幕| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美乱色亚洲激情| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产1区2区3区精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 国产亚洲精品一区二区www| 国产三级黄色录像| 观看免费一级毛片| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 免费在线观看黄色视频的| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产精品1区2区在线观看.| 日韩欧美一区视频在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲国产欧美网| 国产成年人精品一区二区| 国产av一区在线观看免费| 午夜久久久在线观看| 国产成人系列免费观看| aaaaa片日本免费| 国产视频一区二区在线看| cao死你这个sao货| 久久中文字幕一级| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 看片在线看免费视频| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 久久久久久久久中文| 久久天堂一区二区三区四区| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲专区字幕在线| 国产精品久久久人人做人人爽| 操出白浆在线播放| 婷婷亚洲欧美| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲欧美精品综合久久99| 妹子高潮喷水视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 中文在线观看免费www的网站 | 国产99白浆流出| 午夜亚洲福利在线播放| 人人澡人人妻人| 亚洲国产精品sss在线观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| av电影中文网址| 精品乱码久久久久久99久播| 夜夜夜夜夜久久久久| 三级毛片av免费| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久久久久久久久黄片| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲欧美精品综合久久99| 在线观看舔阴道视频| 久久久久久九九精品二区国产 | 老司机深夜福利视频在线观看| 日韩精品青青久久久久久| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 男人操女人黄网站| 男女那种视频在线观看| 午夜两性在线视频| 一进一出好大好爽视频| 国产精品久久视频播放| www.精华液| 老司机在亚洲福利影院| 日韩精品免费视频一区二区三区| 男女之事视频高清在线观看| e午夜精品久久久久久久| 色播在线永久视频| 神马国产精品三级电影在线观看 | 精品国产亚洲在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 99精品在免费线老司机午夜| 男女下面进入的视频免费午夜 | 久久久久久久久免费视频了| 久久久国产欧美日韩av| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧美精品啪啪一区二区三区| av有码第一页| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 欧美黑人精品巨大| 久久九九热精品免费| 动漫黄色视频在线观看| 男女视频在线观看网站免费 | 变态另类成人亚洲欧美熟女| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 观看免费一级毛片| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久99久视频精品免费| 久热爱精品视频在线9| 丝袜美腿诱惑在线| 精品国内亚洲2022精品成人| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产视频内射| 色哟哟哟哟哟哟| 午夜福利在线观看吧| 一本综合久久免费| 国产三级黄色录像| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 热99re8久久精品国产| 日韩中文字幕欧美一区二区| av视频在线观看入口| netflix在线观看网站| 老汉色av国产亚洲站长工具| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 最好的美女福利视频网| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产精品亚洲一级av第二区| 69av精品久久久久久| 91九色精品人成在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 久久久久久久久免费视频了| 男女下面进入的视频免费午夜 | 窝窝影院91人妻| 欧美黄色片欧美黄色片| 成人18禁在线播放| 一a级毛片在线观看| 成人国语在线视频| 日韩精品青青久久久久久| 欧美色视频一区免费| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲精华国产精华精| 婷婷亚洲欧美| 18禁美女被吸乳视频| 国产熟女xx| 90打野战视频偷拍视频| 脱女人内裤的视频| 88av欧美| 精品第一国产精品| 欧美午夜高清在线| 日韩欧美在线二视频| 99re在线观看精品视频| 久久久国产成人精品二区| 波多野结衣高清无吗| 一进一出抽搐动态| 久久婷婷成人综合色麻豆| 91国产中文字幕| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 曰老女人黄片| 69av精品久久久久久| 欧美精品啪啪一区二区三区| 男女之事视频高清在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 淫秽高清视频在线观看| 成人精品一区二区免费| 亚洲中文av在线| 久久 成人 亚洲| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 精品第一国产精品| 久久久久久久久久黄片| xxx96com| 国产成年人精品一区二区| 亚洲人成网站高清观看| 久久中文看片网| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产91精品成人一区二区三区| 午夜久久久久精精品| 18禁国产床啪视频网站| 国产人伦9x9x在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 两个人免费观看高清视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 搡老岳熟女国产| 特大巨黑吊av在线直播 | 色综合站精品国产| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲美女黄片视频|