礬根組培增殖技術(shù)研究

摘要 以礬根（Heuchera micrantha）初代培養(yǎng)獲得的無菌苗切割成莖段作為外植體，對礬根組織培養(yǎng)增殖技術(shù)進行研究。結(jié)果表明，采用MS作為基本培養(yǎng)基，通過6-BA和NAA組合進行試驗篩選，得到最佳培養(yǎng)基配方是MS +NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L，此時礬根增殖系數(shù)為9.76;不同培養(yǎng)方式對礬根增殖影響有明顯差異，采用0.2%瓊脂培養(yǎng)基增殖效果最好;礬根增殖系數(shù)與培養(yǎng)時間呈線性關(guān)系，培養(yǎng)時間以40 d較好;采用0.2%瓊脂培養(yǎng)基對礬根進行培養(yǎng)時，pH為5.0效果最佳。

關(guān)鍵詞 礬根;組織培養(yǎng);快速繁殖;增殖

中圖分類號 S 682.1文獻標識碼 A

文章編號 0517-6611（2022）04-0042-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.04.013

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Study on Multiplication Technology of Heuchera micrantha

ZHU Zhi-guo

（Department of Landscape Architecture and Horticulture，Wuhu Institute of Technology，Wuhu，Anhui241003）

Abstract The tissue culture technique was studied by cutting the sterile seedlings obtained from the primary culture of Heuchera micrantha into stem segments as explants.The results showed that MS was used as the basic medium，and the optimal medium for tissue propagation of Heuchera micranthawas MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L through the combined test of 6-BA and NAA，in which the reproduction coefficient was 9.76.Different culture methods had obvious differences in the propagation of Heuchera micrantha.Among them，the 0.2% agar medium close to the fluid state had the best proliferation effect.In addition，the propagation of Heuchera micrantha had a linear relationship with the culture time，and the culture time was 40 d;when the culture medium close to the fluid state was used to multiply Heuchera micrantha，the effect was best when the pH value was 5.0.

Key words Heuchera micrantha;Tissue culture;Rapid reproduction;Proliferation

基金項目 安徽高校省級自然科學重點研究項目基金（KJ2020A0923）;蕪湖職業(yè)技術(shù)學院科技創(chuàng)新服務平臺培育項目基金（Kjcxpt202007）。

作者簡介 朱志國（1976—），男，安徽肥西人，教授，碩士，從事觀賞植物繁育與栽培研究。

收稿日期 2021-06-23

礬根（Heuchera micrantha）又名珊瑚玲，為虎耳草科（Saxifragaceae）礬根屬（Heuchera）耐寒常綠彩葉宿根花卉[1]，原產(chǎn)美洲中部，在美國園林綠化和景觀建設中應用廣泛。因其品種繁多，葉色亮麗且豐富多彩，花葉兼美，觀賞價值較高，備受人們的關(guān)注[2]，近年來引入我國，被廣泛應用于地被、花壇、花境、庭院美化和立體綠化等，也可以盆栽觀賞[3-4]。目前，礬根在生產(chǎn)中通常采用播種、扦插和分株的方式進行繁殖。種子繁殖發(fā)芽后生長速度很慢，需要半年后才能生長為可移栽的種苗，同時難以保持品種原有特性;扦插因受季節(jié)影響，成活率不高，無法滿足大規(guī)模生產(chǎn)和工廠化生產(chǎn);而采用分株取材困難，繁殖系數(shù)更低。為了提高繁殖系數(shù)，筆者以組培誘導的礬根無菌苗為試材，開展礬根組培增殖技術(shù)研究，旨在探討礬根最佳增殖方法，為礬根的工廠化育苗提供借鑒和技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 供試材料取自蕪湖職業(yè)技術(shù)學院組培實訓中心，經(jīng)過初代培養(yǎng)誘導的無菌苗，切割成帶1～2個節(jié)的莖段作為外植體。

1.2 試驗方法

1.2.1 不同植物激素組合對礬根增殖的影響。將外植體分別接種到不同增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基配方見表1。

1.2.2 不同培養(yǎng)方式對礬根增殖的影響。

將外植體接種到MS +NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L培養(yǎng)基，分別采取不同培養(yǎng)方式（表2）。

1.2.3 不同培養(yǎng)時間對礬根增殖的影響。

將外植體分別接種到接近流體狀態(tài)的0.2%瓊脂增殖培養(yǎng)基：MS +NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L，不同培養(yǎng)時間見表3。

1.2.4 不同培養(yǎng)基pH對礬根增殖的影響。

將外植體分別接種到MS +NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L接近流體狀態(tài)的0.2%瓊脂培養(yǎng)基，不同 pH試驗見表4。

以上試驗方法中，培養(yǎng)基中均加入30 g/L蔗糖，每瓶培養(yǎng)基接4個莖段，每處理接20瓶;分別在培養(yǎng)室中培養(yǎng)40 d，每天培養(yǎng)的光照時間16 h，溫度（25±2） ℃，pH為6.0（不同pH處理試驗除外），觀察并統(tǒng)計增殖情況，增殖系數(shù) =叢生芽增加數(shù)/外植體接種數(shù)[5-6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同植物激素配比對礬根增殖的影響

由表1可知，不同植物激素配比對礬根增殖影響差異顯著，NAA 1.0 mg/L、6-BA 0.5 mg/L組合的培養(yǎng)基增殖系數(shù)最高，達9.76，且苗生長健壯，長勢也較一致，葉片較大，葉色正常。不添加植物激素NAA ，只添加6-BA 0.5 mg/L培養(yǎng)基的增殖系數(shù)次之，達8.94;但在不添加植物激素NAA，僅添加6-BA 1.5 mg/L時，其增殖系數(shù)最差，只有5.14，增殖慢，小苗基部產(chǎn)生細弱根系。由此可知，6-BA濃度0.5 mg/L時，叢生芽增殖較多，增殖系數(shù)較高;但隨著添加6-BA濃度不斷增加，礬根增殖數(shù)量反而減少，增殖系數(shù)越來越小。NAA的濃度超過1.0 mg/L時，增殖系數(shù)就會下降，而濃度在0.5～1.0 mg/L時增殖效果相對較好。

2.2 不同培養(yǎng)方式對礬根增殖的影響

由表2可知，不同培養(yǎng)方式對礬根增殖效果差異顯著。同樣培養(yǎng)條件下，采用接近流體狀態(tài)的0.2%瓊脂培養(yǎng)基增殖效果最好，因外植體及其分化形成的叢生芽能充分接觸培養(yǎng)基，有利于吸收營養(yǎng)成分，在很短時間內(nèi)能產(chǎn)生叢生芽，且產(chǎn)生的叢生芽數(shù)量多，植株生長快，長勢健壯，長勢一致，增殖系數(shù)最高達4.63。但隨著瓊脂濃度的增加，不僅增殖的叢生芽數(shù)量減少，植株的長勢還會減弱。當瓊脂濃度增加到0.6%時，其增殖系數(shù)只有2.28，礬根植株生長緩慢，長勢較弱。但如果在培養(yǎng)過程中完全采用液體培養(yǎng)，即在培養(yǎng)基中不添加瓊脂，增殖的系數(shù)也很低，只有3.42，但植株生長速度相對較快。

2.3 不同培養(yǎng)時間對礬根增殖的影響

由表3可知，培養(yǎng)時間對礬根增殖影響很大，增殖系數(shù)與培養(yǎng)時間呈一定線性相關(guān)。即隨著培養(yǎng)時間的延長，叢生芽數(shù)量不斷增加，增殖系數(shù)逐漸增大。但培養(yǎng)時間過長，玻璃化程度也越來越嚴重。因此，培養(yǎng)時間不宜過長，培養(yǎng)40 d較好，增殖系數(shù)達3.23，試管苗長勢健壯。這不僅能保證一定數(shù)量的叢生苗，同時又可以避免出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。

2.4 不同pH對礬根增殖的影響 由表4可知，不同pH對礬根增殖的影響明顯，當培養(yǎng)基pH為5.0時增殖效果最好，增殖系數(shù)為1.92，且試管苗生長健壯，植株葉片大。其次是pH為5.5，增值系數(shù)為1.71;增殖效果最差的是pH為6.5，增殖系數(shù)只有1.53，植株個體體積也相對很小。

3 結(jié)論與討論

組培育苗效率通常采用計算增殖系數(shù)來衡量，一般情況下，通過添加一定濃度的細胞分裂素來提高增殖系數(shù)，但如果添加的植物激素濃度過高，誘導分化的試管苗容易產(chǎn)生玻璃化現(xiàn)象，使有效芽數(shù)減少。研究表明，礬根組培增殖培養(yǎng)中，單獨添加KT或單獨添加6-BA增殖效果較好，但在KT或6-BA中加入適量的NAA或IAA后，植株的生長狀態(tài)會更佳[7-9]，這表明植物激素組合使用更有利于增殖培養(yǎng)。該研究中，通過6-BA和NAA聯(lián)合試驗篩選得到礬根組培增殖最適培養(yǎng)基是MS +NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L，增殖系數(shù)為9.76，試管苗生長健壯，長勢也較一致，葉片較大，葉色正常。NAA濃度超過1.0 mg/L時增殖系數(shù)減小。

該試驗還比較了不同培養(yǎng)方式對礬根增殖的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用添加0.2%瓊脂濃度的培養(yǎng)基增殖效果最好，原因可能是外植體及其分化形成的叢生芽能充分接觸培養(yǎng)基，有利于吸收營養(yǎng)成分[10]，在很短時間內(nèi)即能產(chǎn)生叢生芽，且產(chǎn)生的叢生芽數(shù)量多，植株生長快，長勢健壯，長勢一致，增殖系數(shù)最高達4.63。但完全采用液體營養(yǎng)液培養(yǎng)，分化的芽器官反而很少，增殖系數(shù)只有3.42。

同時還發(fā)現(xiàn)，礬根增殖系數(shù)與培養(yǎng)時間呈線性關(guān)系，培養(yǎng)超過40 d后，隨著叢生芽數(shù)量的不斷增加，植株生長逐漸減弱，玻璃化程度也越來越嚴重，因此，培養(yǎng)時間不宜過長，為40 d較好。

采用接近流體狀態(tài)培養(yǎng)基對礬根進行培養(yǎng)時，不同pH對礬根叢生芽增殖的影響也不同，結(jié)果表明，pH為5.0時效果最好，增殖快，數(shù)量多，生長健壯，植株葉片大。

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