清腸化濕方通過影響IDO1調(diào)節(jié)Th17/Treg細(xì)胞因子表達(dá)平衡治療潰瘍性結(jié)腸炎

周恩，朱磊，沈洪

（南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210029）

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種持續(xù)時間較長的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，其臨床特征包括腹瀉、腹痛和便血，病理特征包括連續(xù)和彌漫性腸黏膜損傷，涉及結(jié)腸或直腸的黏膜和黏膜下層［1］。UC 作為難治性終身性疾病，發(fā)病率逐年升高。遺傳、環(huán)境、免疫、腸道菌群等多種因素綜合作用是UC 發(fā)病的主要機制。研究顯示，宿主與腸道菌群之間的相互作用會誘導(dǎo)機體產(chǎn)生適應(yīng)性免疫應(yīng)答［2］，Th17/Treg 細(xì)胞因子表達(dá)平衡一旦被打破，便會誘發(fā)一系列免疫炎癥反應(yīng)，參與UC 發(fā)病及進(jìn)展的全過程。吲哚胺2，3-雙加氧酶1（indoleamine 2，3-dioxygenase 1，IDO1）作為主要限速酶參與色氨酸沿犬尿氨酸途徑的分解代謝，IDO1是在炎癥條件下誘導(dǎo)的色氨酸分解代謝酶，可能與體內(nèi)平衡最相關(guān)［3］，有助于免疫反應(yīng)［4］。因此，IDO1 可能是一個重要的分子標(biāo)記［5-6］。大量研究表明，IDO1 在炎癥性腸病、感染和憩室病中的表達(dá)增加［7-8］。通過生物信息學(xué)分析也證實了IDO1 在UC中上調(diào)，主要與細(xì)胞因子分泌、免疫反應(yīng)和癌癥進(jìn)展有關(guān)，其表達(dá)也在UC小鼠模型中得到證實［3］。

清腸化濕方是沈洪教授根據(jù)多年臨床經(jīng)驗、前期課題、實驗等相關(guān)研究優(yōu)化精簡而來，由黃芪、白芍、地榆、白頭翁、白芷、黃芩等6 味藥組成，具有清熱除濕、調(diào)和氣血、涼血止痢之效。課題組前期研究表明，清腸化濕方能夠修復(fù)UC 小鼠受損腸道黏膜，減輕炎癥反應(yīng)，其機制可能與調(diào)節(jié)腸道菌群有關(guān)［9］。

因此，本研究通過葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium，DSS）誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，以期能夠發(fā)現(xiàn)Th17/Treg 細(xì)胞因子表達(dá)平衡與IDO1 的聯(lián)系，進(jìn)一步探討清腸化濕方治療UC的作用機制。

1 材料

1.1 實驗動物

健康SPF 級C57BL6/J 小鼠，雄性，6～8 周齡，體質(zhì)量18～20 g，購于浙江維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，合格證編號：20210526Abzz0619000328，生產(chǎn)許可證號：SCXK（浙）2019-0001。于南京中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心動物房飼養(yǎng)，溫度24～25 ℃，濕度50%～60%，光照時間：每日12 h 光照，12 h 避光。小鼠被允許自由采食和飲水。實驗前，小鼠至少適應(yīng)新環(huán)境7 d。

1.2 藥物制備

組方：生黃芪15 g，炒白芍15 g，生地榆15 g，白頭翁15 g，白芷10 g，黃芩10 g，共80 g/劑，藥物飲片購于江蘇省中醫(yī)院。稱取清腸化濕方藥物，加10 倍水浸泡1 h 后煎煮2 次，合并2 次藥液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，制備成濃度為1.2、2.4 g/mL的清腸化濕方水煎液。

1.3 藥物及試劑

葡聚糖硫酸鈉（DSS，M.W.= 36 000，50 000，CAS：9011-18-1）（美國MP Biomedicals 公司）；HiScript ⅢRT SuperMix for qPCR（貨號：R323-01，南京諾唯贊生物科技股份有限公司）；RNA 抽提液TRIZOL REAGENT［貨號：15596018，英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公司］；ChamQ SYBR qPCR Master Mix（貨號：Q711-02，南京諾唯贊生物科技股份有限公司）；引物合成于上海捷瑞生物工程有限公司；BCA蛋白測定試劑盒（貨號：E112-01/02，南京諾唯贊生物科技股份有限公司）；預(yù)染蛋白Marker［貨號：26617，英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公司］；ECL化學(xué)發(fā)光液（貨號：E412-02，南京諾唯贊生物科技股份有限公司）；抗體IDO1（Proteintech）（貨號：13268-1-AP，南京偉沃生物科技有限公司）；抗體RORγt（Proteintech）（貨號：13205-1-AP，南京偉沃生物科技有限公司）；抗體Foxp3（Proteintech）（貨號：22228-1-AP，南京偉沃生物科技有限公司）；內(nèi)參GAPDH（貨號：bsm-33033 m，北京博奧森生物技術(shù)有限公司）；HRP 標(biāo)記山羊抗小鼠（貨號：GB23301，武漢賽維爾生物科技有限公司）；HRP 標(biāo)記山羊抗兔（貨號：GB23303，武漢賽維爾生物科技有限公司）；4%的多聚甲醛固定液（貨號：G1101，武漢賽維爾生物科技有限公司）。

1.4 儀器

倒置顯微鏡（型號：CKX41，日本Olympus 公司）；PCR 儀（型號：EasyCycler，德國analytikjena）；超微量分光光度計（型號：NANODROP 2000，美國Thermo）；實時熒光定量PCR 儀（型號：LightCycler96，瑞士Roche）；電泳儀（型號：PowerPac Basic，美國Bio-Rad公司）；凝膠成像儀（型號：CHEMIDOC XRS+，美國Bio-Rad公司）。

2 方法

2.1 UC模型建立、分組及給藥

將24只小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后，隨機分為空白組、模型組、清腸化濕方低劑量組和清腸化濕方高劑量組，每組6只。實驗第1～13天，空白組小鼠自由飲用純水作為對照，模型組給予0.2 mL/20 g 純水灌胃，清腸化濕方低劑量組［12 g/（kg·d）］、清腸化濕方高劑量組［24 g/（kg·d）］分別予相應(yīng)濃度中藥按0.2 mL/20 g 灌胃，實驗第4～10 天模型組、清腸化濕方低劑量組、清腸化濕方高劑量組自由飲用2.5% DSS 以制備結(jié)腸炎模型。

2.2 取材

第14 天處死小鼠，用鑷子摘取一側(cè)眼球，取血，6 000 r/min，離心10 min，吸取上層血清，-80 ℃保存，備用。剖開小鼠腹部，充分暴露腹腔，取肛門上2 cm至盲腸的整段結(jié)腸，選取0.5 cm 結(jié)腸組織用4%多聚甲醛固定，用于HE 染色，余結(jié)腸組織放于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

2.3 檢測指標(biāo)及方法

2.3.1 小鼠一般情況、疾病活動指數(shù)評分（DAI）及結(jié)腸長度

實驗過程中，每天觀察小鼠毛色、精神狀態(tài)等一般情況，每天記錄小鼠體質(zhì)量、糞便性狀、便血情況，進(jìn)行小鼠疾病活動指數(shù)評分（disease active index，DAI）。具體見表1。此外，實驗第14 天，剖取結(jié)腸后，用尺子量取結(jié)腸長度，以初步評價藥物治療UC的療效。

表1 小鼠DAI評分標(biāo)準(zhǔn)

DAI=（體質(zhì)量下降/%+大便性狀+血便）/3

2.3.2 小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)檢測

造模給藥后，于第14 天處死小鼠，留取0.5 cm 小鼠結(jié)腸組織于4%福爾馬林中固定，常規(guī)石蠟包埋，切片約4～5μm，行常規(guī)HE染色，光鏡觀察。

2.3.3 RT-qPCR 檢測結(jié)腸組織RORγt、IL-17、IL-22、IL-23、Foxp3、IL-10、TGF-β、IDO1 mRNA表達(dá)水平

每組選15 mg結(jié)腸組織，勻漿，用Trizol試劑提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。PCR 反應(yīng)體系：cDNA 1μL，上下游引物反應(yīng)體系各1μL，DEPC 水4.5μL，2×ChamQ SYBR Qpcr Master Mix 7.5 μL。PCR 反應(yīng)程序：預(yù)變性：95 ℃30 s，進(jìn)行1 個循環(huán)；退火：95 ℃10 s；60 ℃30 s，進(jìn)行40 個循環(huán)；溶解曲線：95 ℃15 s，60 ℃60 s，95 ℃15 s。按照2-△△Ct計算得到相對定量結(jié)果。引物序列參照Gene Bank 數(shù)據(jù)庫中的基因序列，引物合成于上海捷瑞生物工程有限公司。引物序列見表2。

2.3.4 Western Blot 法檢測結(jié)腸組織RORγt、Foxp3、IDO1蛋白表達(dá)水平

取15 mg 組織放入勻漿管，加入200 μL 含PMSF的裂解液，勻漿，置于冰上，裂解30 min；BCA 法定蛋白，算出蛋白上樣量；12%分離膠加3%濃縮膠；電泳（濃縮膠電壓70 V 壓膠，待跑至分離膠處電壓調(diào)至110 V，條帶跑至底部即停止）；濕轉(zhuǎn)，恒壓100 V，60 min；轉(zhuǎn)膜后的PVDF 膜置于5%脫脂牛奶室溫封閉90 min，50 r/min；孵育一抗（1∶1 000），置于搖床4 ℃，50 r/min過夜。次日，TBST洗膜3次，100 r/min，15 min/次；孵育二抗（1∶3 000），室溫孵育1 h，轉(zhuǎn)速50 r/min；TBST洗膜3 次，100 r/min，15 min/次，顯影。采用ECL 液進(jìn)行發(fā)光及條帶分析。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

實驗中的數(shù)據(jù)采用Graphpad Prism8.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理，數(shù)據(jù)先進(jìn)行正態(tài)分布和方差齊性檢驗，若符合正態(tài)分布及方差齊性檢驗，進(jìn)行one-way ANOVA分析；若不符合正態(tài)分布，選擇非參數(shù)檢驗；數(shù)據(jù)用±SEM表示，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組小鼠一般情況

實驗結(jié)束后，空白組小鼠一般狀況良好，毛色正常，精神活躍，飲食及二便正常；模型組小鼠在給予2.5%DSS后，體質(zhì)量下降明顯，精神漸萎靡，毛發(fā)無光澤，飲食攝入明顯減少，出現(xiàn)明顯的稀便和肉眼血便；清腸化濕方低劑量組小鼠體質(zhì)量下降與模型組相似，精神稍萎靡，飲食攝入減少，出現(xiàn)稀便及肉眼血便，但較模型組少；清腸化濕方高劑量組小鼠體質(zhì)量下降不顯，精神狀態(tài)可，毛發(fā)光澤，大便增粗，出現(xiàn)較少稀便及肉眼血便。

3.2 各組小鼠第13 天DAI 評分及各組小鼠平均結(jié)腸長度比較

與空白組比較，模型組小鼠DAI 評分升高（P＜0.01），結(jié)腸長度縮短（P＜0.000 1）。與模型組相比，清腸化濕方低劑量組DAI評分降低，結(jié)腸長度增加，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與模型組相比，清腸化濕方高劑量組DAI 評分明顯降低（P＜0.05），結(jié)腸長度明顯增加（P＜0.05）。見表3。

表3 各組小鼠第13天DAI評分及結(jié)腸長度（±SEM）

表3 各組小鼠第13天DAI評分及結(jié)腸長度（±SEM）

注：與空白組相比，##P ＜0.01，####P ＜0.000 1；與模型組相比，*P ＜0.05。

組別空白組模型組清腸化濕方低劑量組清腸化濕方高劑量組n6 6 6 6 DAI評分（分）0.000±0.000 3.500±0.500##1.889±0.729 0.833±0.601*平均結(jié)腸長度（cm）7.800±0.157 5.433±0.112####6.350±0.154 6.883±0.176*

3.3 各組小鼠結(jié)腸組織病理情況

對各組小鼠結(jié)腸組織進(jìn)行HE 染色，結(jié)果顯示，空白組小鼠結(jié)腸結(jié)構(gòu)完整，隱窩結(jié)構(gòu)完整，無潰瘍形成，未見炎性細(xì)胞浸潤；模型組小鼠可見大片黏膜上皮破壞，隱窩結(jié)構(gòu)破壞，潰瘍形成，黏膜及黏膜下層大量炎性細(xì)胞浸潤；清腸化濕方低劑量組杯狀細(xì)胞和隱窩部分存在，但黏膜層較多炎癥細(xì)胞浸潤。清腸化濕方高劑量組，炎性細(xì)胞浸潤減少，黏膜損傷較少，結(jié)構(gòu)趨于正常，提示清腸化濕方低、高劑量組均能夠減輕結(jié)腸炎癥，減輕結(jié)腸組織損傷，但高劑量組效果更好。見圖1。

3.4 各組小鼠結(jié)腸組織mRNA表達(dá)情況

3.4.1 清腸化濕方對UC 小鼠腸道RORγt 及相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-22、IL-23 mRNA表達(dá)的影響

與空白組相比，模型組UC 小鼠RORγt、IL-17、IL-22、IL-23 mRNA 表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01）。與模型組相比，清腸化濕方低劑量組IL-17、IL-22、IL-23 mRNA 表達(dá)水平降低（P＜0.05）。與模型組相比，清腸化濕方高劑量組RORγt、IL-17、IL-22、IL-23mRNA 表達(dá)水平下降趨勢明顯（P＜0.01，P＜0.001）。見表4。

表4 各組小鼠結(jié)腸組織RORγt、IL-23、IL-17、IL-22 mRNA表達(dá)的比較（±SEM）

表4 各組小鼠結(jié)腸組織RORγt、IL-23、IL-17、IL-22 mRNA表達(dá)的比較（±SEM）

注：與空白組相比，##P ＜0.01；與模型組相比，*P ＜0.05，**P ＜0.01，***P ＜0.001。

組別空白組模型組清腸化濕方低劑量組清腸化濕方高劑量組n4 4 4 4 RORγt 1.014±0.095 2.300±0.349##2.000±0.149 0.793±0.050***IL-17 1.275±0.549 12.276±3.305##4.160±0.423*2.794±0.366**IL-22 1.136±0.261 30.495±7.669##9.465±1.530*6.620±1.362**IL-23 1.051±0.187 13.006±3.645##4.647±0.728*2.258±0.308**

3.4.2 清腸化濕方對UC 小鼠腸道Foxp3 及相關(guān)細(xì)胞因子IL-10、TGF-β mRNA影響

與空白組相比，模型組UC 小鼠Foxp3 mRNA 表達(dá)降低，清腸化濕方低劑量組IL-10、TGF-β mRNA 水平升高（P＜0.01，P＜0.001）。與模型組相比，清腸化濕方高劑量組Foxp3、IL-10、TGF-β mRNA 表達(dá)水平升高明顯（P＜0.05，P＜0.01）。見表5。

表5 各組小鼠結(jié)腸組織Foxp3、IL-10、TGF-β mRNA表達(dá)的比較（±SEM，n=4）

表5 各組小鼠結(jié)腸組織Foxp3、IL-10、TGF-β mRNA表達(dá)的比較（±SEM，n=4）

注：與空白組相比，##P ＜0.01，###P ＜0.001；與模型組相比，*P ＜0.05，**P ＜0.01。

組別空白組模型組清腸化濕方低劑量組清腸化濕方高劑量組Foxp3 1.029±0.143 0.348±0.116 1.469±0.602 1.963±0.331*IL-10 1.138±0.347 3.402±0.467 2.068±0.144###11.949±2.699**TGF-β 1.001±0.025 1.950±0.077 1.479±0.146##6.196±1.468**

3.4.3 清腸化濕方對UC小鼠腸道IDO1 mRNA影響

與空白組相比，模型組UC 小鼠IDO1 mRNA 表達(dá)顯著升高（P＜0.01）。與模型組相比，清腸化濕方低劑量組IDO1 mRNA 表達(dá)水平降低（P＜0.05）。與模型組相比，清腸化濕方高劑量組IDO1 mRNA 表達(dá)下降明顯（P＜0.01）。見表6。

表6 各組小鼠結(jié)腸組織IDO1 mRNA表達(dá)的比較（±SEM）

表6 各組小鼠結(jié)腸組織IDO1 mRNA表達(dá)的比較（±SEM）

注：與空白組相比，##P ＜0.01；與模型組相比，*P ＜0.05，**P ＜0.01。

組別空白組模型組清腸化濕方低劑量組清腸化濕方高劑量組n4 4 4 4 IDO1 1.051±0.192 5.916±1.595##1.355±0.451*1.107±0.246**

3.5 清腸化濕方對UC 小鼠腸道RORγt、Foxp3、IDO1蛋白表達(dá)的影響

與空白組相比，模型組UC小鼠結(jié)腸組織RORγt蛋白表達(dá)增加。與模型組相比，清腸化濕方低劑量組及高劑量組RORγt 蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）。與空白組相比，模型組小鼠結(jié)腸組織Foxp3 蛋白表達(dá)降低明顯。與模型組相比，清腸化濕方低劑量組Foxp3蛋白表達(dá)升高，高劑量組Foxp3蛋白表達(dá)升高明顯（P＜0.05）。與空白組相比，模型組結(jié)腸組織中IDO1蛋白表達(dá)顯著升高。與模型組相比，清腸化濕方低劑量組IDO1蛋白表達(dá)水平降低，清腸化濕方高劑量組IDO1蛋白表達(dá)水平降低明顯（P＜0.05）。見圖2、圖3和表7。

表7 RORγt、Foxp3、IDO1蛋白相對表達(dá)量（±SEM，n=6）

表7 RORγt、Foxp3、IDO1蛋白相對表達(dá)量（±SEM，n=6）

注：與模型組相比，*P ＜0.05。

組別空白組模型組清腸化濕方低劑量組清腸化濕方高劑量組RORγt/GAPDH 0.685±0.034 0.763±0.044 0.564±0.026*0.565±0.051*Foxp3/GAPDH 0.835±0.034 0.669±0.062 0.973±0.078 1.165±0.117*IDO1/GAPDH 0.212±0.056 0.407±0.106 0.165±0.044 0.064±0.025*

4 討論

UC 作為臨床難治性疾病之一，我國UC 的發(fā)病率呈快速上升趨勢［10-11］。根據(jù)其臨床特點，將其歸屬于“久痢”“腸澼”“泄瀉”“便血”等范疇，病機多為濕熱蘊腸、氣血失調(diào)［12］。清腸化濕方集“白頭翁湯”“芍藥湯”“黃芩湯”于一體，方中白頭翁清熱止痢、解毒涼血，白芍健脾柔肝、調(diào)氣和血，黃芩清腸化濕、止痢涼血，白芷排膿消腫，地榆斂瘡涼血，黃芪益氣健脾，共奏清熱除濕、調(diào)和氣血、止痢涼血之效［13］。

目前，UC 的病因尚不清楚，但多項研究顯示，UC的發(fā)病與免疫失調(diào)相關(guān)［14-16］。在UC 的發(fā)展過程中，Th17 細(xì)胞的數(shù)量通常會增加，而Treg 細(xì)胞的數(shù)量會減少，因此，結(jié)腸固有層中的CD4+T細(xì)胞常被認(rèn)為是潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病的關(guān)鍵因素［1］。Th17 細(xì)胞作為CD4+T 細(xì)胞亞群，不僅可以通過保持免疫微環(huán)境的平衡來保護(hù)腸黏膜，還可以通過促炎細(xì)胞因子IL-17、IL-22 和IL-23等加劇腸道炎癥反應(yīng)［14］。RORγt是Th17特有的轉(zhuǎn)錄因子，其表達(dá)控制Th17細(xì)胞的分化及功能變化［17］。Treg細(xì)胞是CD4+T細(xì)胞的另一個亞群，發(fā)揮負(fù)免疫調(diào)節(jié)作用，主要通過分泌抗炎細(xì)胞因子，如TGF-β 和IL-10，抑制免疫細(xì)胞的活性，從而控制炎癥，參與各種免疫疾病［18］，維持免疫耐受和平衡［14］。Foxp3 是Treg關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，控制Treg細(xì)胞的發(fā)育和功能，其表達(dá)水平對于Treg 的功能變化有直接影響［19］。Th17 細(xì)胞促進(jìn)組織炎癥，Treg細(xì)胞抑制自身免疫。因此，Th17/Treg細(xì)胞平衡至關(guān)重要。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組UC 小鼠結(jié)腸中RORγt，及相關(guān)促炎因子IL-17、IL-22、IL-23 mRNA 表達(dá)升高，F(xiàn)oxp3 mRNA 表達(dá)下降，同時通過Western Blot 驗證了在模型組小鼠結(jié)腸組織中RORγt 蛋白表達(dá)升高，F(xiàn)oxp3 蛋白表達(dá)下降，提示抑炎因子降低而促炎因子升高，說明Th17/Treg 平衡被打破，Th17/Treg 及相關(guān)細(xì)胞因子對維持UC 免疫耐受和平衡密切相關(guān)。與模型組比較，清腸化濕方低、高劑量組均降低了RORγt 及相關(guān)促炎因子IL-17、IL-22、IL-23 mRNA 表達(dá)情況，但尤以清腸化濕方高劑量組下調(diào)明顯。與模型組比較，清腸化濕方高劑量組顯著上調(diào)了Foxp3 及抑炎因子IL-10、TGF-β mRNA 表達(dá)，清腸化濕方低劑量組上調(diào)不明顯。同時與模型組相比，清腸化濕方低劑量組Foxp3 蛋白表達(dá)升高，RORγt 蛋白下降。與模型組相比，清腸化濕方高劑量組能有效降低UC 小鼠結(jié)腸組織RORγt 蛋白表達(dá)情況，升高Foxp3 蛋白表達(dá)，提示清腸化濕方能夠有效激活UC 小鼠的Treg 細(xì)胞，抑制Th17 細(xì)胞，從而改善Th17/Treg 細(xì)胞因子表達(dá)平衡，抑制炎癥免疫反應(yīng)，其中尤以清腸化濕方高劑量組效果顯著。

IDO1是一種由先天免疫系統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)的酶，充當(dāng)與適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的界面［20］。通過色氨酸的分解代謝和犬尿氨酸代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生，IDO1在黏膜免疫耐受中發(fā)揮重要作用［21］。IDO1 是Treg 細(xì)胞分化的促成因素之一［22］。這種酶對調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)至關(guān)重要［23］。本實驗發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠結(jié)腸組織中IDO1 mRNA 表達(dá)水平升高，清腸化濕方低、高劑量組IDO1 mRNA 表達(dá)水平較模型組降低；模型組UC 小鼠IDO1 蛋白表達(dá)水平顯著升高，清腸化濕方低劑量組IDO1蛋白表達(dá)水平較模型組降低，清腸化濕方高劑量組IDO1蛋白表達(dá)水平較模型組明顯降低，表明IDO1 的激活與UC 的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而清腸化濕方能夠明顯下調(diào)UC 小鼠結(jié)腸組織中的IDO1 mRNA水平及蛋白表達(dá)水平。

綜上所述，清腸化濕方能促進(jìn)UC 小鼠恢復(fù)，降低UC 小鼠DAI 評分，改善病理損傷，尤以清腸化濕方高劑量組治療作用顯著，其作用機制可能是通過下調(diào)IDO1表達(dá)，下調(diào)RORγt及相關(guān)促炎因子IL-17、IL-22和IL-23，上調(diào)Foxp3及相關(guān)抑炎因子IL-10、TGF-β，維持Th17/Treg 細(xì)胞因子表達(dá)平衡，從而達(dá)到治療作用。本次研究也存在不足之處，如相關(guān)研究顯示犬尿氨酸/色氨酸是腸道中IDO1 激活的指標(biāo)［24］，因此，本研究還應(yīng)當(dāng)評估各組小鼠血漿中犬尿氨酸及色氨酸濃度，以進(jìn)一步證明IDO1被激活等。