青海省海北藏族地區(qū)引起牛腹瀉的大腸桿菌分離以及藥敏試驗(yàn)

馬曉茜

摘要：本文選用青海省海北藏族地區(qū)某奶牛養(yǎng)殖基地的腹瀉病死牛為研究對(duì)象，取其心臟、肝臟、脾臟、肺臟其進(jìn)行大腸桿菌分離鑒定并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。結(jié)果顯示，分離的菌株經(jīng)過(guò)各個(gè)培養(yǎng)基的菌落形態(tài)、革蘭氏染色顯微鏡鏡檢、生化試驗(yàn)結(jié)果可以確定為大腸桿菌;分離的大腸桿菌對(duì)阿米卡星、左氧氟沙星、頭孢曲松鈉、慶大霉素藥物敏感;對(duì)氨芐青霉素、阿莫西林、卡那霉素、阿奇霉素、氟苯尼考藥物中度敏感;對(duì)恩諾沙星、四環(huán)素、鏈霉素藥物產(chǎn)生耐藥。

關(guān)鍵詞：海省海北藏族地區(qū);牛;大腸桿菌;分離鑒定;藥敏試驗(yàn)

牛大腸桿菌病是一種急性的傳染病，是由大腸桿菌引起的，臨床上多表現(xiàn)為腹瀉和敗血癥，在犢牛中的發(fā)病率最高，高達(dá)60%，死亡率達(dá)30%[1]。近幾年隨著肉牛和奶牛集約化養(yǎng)殖規(guī)模的迅猛發(fā)展，牛腹瀉的發(fā)生率正在逐年攀升，發(fā)病原因也是越變?cè)綇?fù)雜[2]。青海省的草場(chǎng)面積占地3858萬(wàn)多公頃，是全省的土地面積約53%，所以該地區(qū)屬于天然草場(chǎng)，草質(zhì)優(yōu)良，適合畜牧業(yè)的發(fā)展[3];海北藏族地區(qū)牛業(yè)養(yǎng)殖占了青海省60%以上[4];所以本研究選用青海省海北藏族地區(qū)患有腹瀉的奶牛，對(duì)其進(jìn)行大腸桿菌進(jìn)行分離，然后并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，以期為青海省海北藏族地區(qū)牛業(yè)養(yǎng)殖過(guò)程引起牛腹瀉的大腸桿菌提供治療方案。

1材料與方法

1.1病料

選用青海省海北藏族地區(qū)某奶牛養(yǎng)殖基地的腹瀉病死牛，進(jìn)行解剖，取其心臟、肝臟、脾臟、肺臟，用無(wú)菌自封袋保存，冷藏低溫條件下帶回實(shí)驗(yàn)室。

1.2試驗(yàn)需要的材料

試驗(yàn)需要的材料大腸桿菌培養(yǎng)基購(gòu)于上海生工生物工程有限公司;微量生化鑒定管購(gòu)于杭州天和微生物試劑有限公司，主要有糖類發(fā)酵試驗(yàn)管、吲哚試驗(yàn)管、甲基化試驗(yàn)管、V-P試驗(yàn)管、硫化氫試驗(yàn)管、檸檬酸鹽利用試驗(yàn)管、尿素酶試驗(yàn)管;藥敏片購(gòu)于杭州馳成醫(yī)藥科技有限公司，主要有氨芐青霉素、恩諾沙星、阿米卡星、阿莫西林、左氧氟沙星、四環(huán)素、頭孢曲松鈉、卡那霉素、鏈霉素、阿奇霉素、慶大霉素、氟苯尼考。除需要以上材料外，還需要培養(yǎng)箱和顯微鏡。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1培養(yǎng)基配置

培養(yǎng)基的配置均按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。

1.3.2細(xì)菌分離鑒定

解剖取回來(lái)的病料，取其干凈面利用消毒好的劃線接種棒蘸取上面的血水，劃線接種于配置好的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上面，然后置于37℃恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，24h后取上面的單個(gè)菌落劃線接種于各種培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)24h，同時(shí)置于液體培養(yǎng)基中進(jìn)行純化培養(yǎng);分離到的純菌株接種微量生化鑒定管中進(jìn)行生化試驗(yàn)，利用革蘭氏染色液進(jìn)行革蘭氏染色。

1.3.3藥敏試驗(yàn)

取純化好的細(xì)菌菌液均勻涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，然后在一個(gè)培養(yǎng)基上面貼上藥敏片，一塊平板貼6片藥敏片，然后置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行恒溫培養(yǎng)24h，然后用游標(biāo)卡尺對(duì)抑菌圈大小進(jìn)行測(cè)量。結(jié)果判定根據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)推薦的判定標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

2結(jié)果

2.1大腸桿菌分離鑒定結(jié)果

2.1.1菌落形態(tài)

在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)表面為光滑的灰白色;麥康凱培養(yǎng)基上面的菌落為深紅色，表面光滑、扁平、整齊、光滑;SS瓊脂培養(yǎng)基上的菌落為紅色;伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上菌落帶有紫黑色金屬光澤、圓形、邊緣整齊、表面光滑。

2.1.2革蘭染色結(jié)果

通過(guò)顯微鏡鏡檢可以可看到紅色短小、兩端圓滑的彎曲桿菌。

2.1.3生化鑒定結(jié)果

結(jié)果參見(jiàn)表1。

2.2藥敏試驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)表2可以看出，分離的大腸桿菌對(duì)阿米卡星、左氧氟沙星、頭孢曲松鈉、慶大霉素藥物敏感;對(duì)氨芐青霉素、阿莫西林、卡那霉素、阿奇霉素、氟苯尼考藥物中度敏感;對(duì)恩諾沙星、四環(huán)素、鏈霉素藥物產(chǎn)生耐藥。

3.討論

通過(guò)本試驗(yàn)對(duì)治病菌進(jìn)行分離鑒定，引起青海省海北藏族地區(qū)某奶牛養(yǎng)殖基地的腹瀉牛死亡確定為大腸桿菌所致。本試選取了12種臨床上用于治療牛腹瀉的藥物，發(fā)現(xiàn)分離的大腸桿菌對(duì)阿米卡星、左氧氟沙星、頭孢曲松鈉、慶大霉素藥物敏感，庫(kù)拉西·阿爾斯坦別克[5]對(duì)院阿勒泰地區(qū)某牛場(chǎng)2-6周齡腹瀉犢牛進(jìn)行大腸桿菌分離并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，藥敏試驗(yàn)結(jié)果對(duì)左氧氟沙星、頭孢曲松鈉、慶大霉素高度敏，抑菌圈均在30mm以上，本研究分離的大腸桿菌對(duì)這三種藥的敏感度和該研究的有差別，造成這個(gè)差別的原因可能地區(qū)不同和分離的菌株菌對(duì)這幾種藥物的敏感度不同有關(guān)，而且大腸桿菌血清型眾多，而且不同血清型之間耐藥性也不同[6]。最近因?yàn)榭股氐臑E用嚴(yán)重，導(dǎo)致耐藥性的產(chǎn)生，所以在預(yù)防該病上難度加難，所以對(duì)于基層牛場(chǎng)做好抗生素的使用篩選非常有必要[7]，這就要求對(duì)菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，然后合理用藥。

參考文獻(xiàn)：

[1]尚婷婷，袁張耀相袁林青袁等援犢牛大腸桿菌病病原的分離鑒定[J].援動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，33，6：143-146.

[2]程慧芳，寇亞楠，陳雅君，等.牛源大腸桿菌0157院H7的分離鑒定及其生物學(xué)特性研究[J].中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)，2014，30，10：1002-1008.

[3]郝彥龍，剡根強(qiáng)，王靜梅，等.新疆北疆地區(qū)致?tīng)倥８篂a大腸桿菌的分離鑒定及部分生物學(xué)特性[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，32（6）：848-851.

[4]丁生喜，張宏巖，劉曉平.青海省藏族地區(qū)畜牧業(yè)產(chǎn)業(yè)化發(fā)展[J].統(tǒng)計(jì)觀察，2005，1：74-74.

[5]庫(kù)拉西·阿爾斯坦別克.致?tīng)倥８篂a大腸桿菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].試驗(yàn)研究，2018，33（5）：16-17.

[6]羅甜甜，王仲兵，雷宇平，等.山西省北部地區(qū)舍飼犢牛大腸桿茵病主要病原的分離和耐藥性調(diào)查研究[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2012，29（3）：42-44.

[7]別克木汗.木合木，庫(kù)蘭。巴合達(dá)吾列提，劉建明，等.規(guī)?；?chǎng)犢牛腹瀉的防治措施[J].新疆畜牧業(yè)，2018，33（6）：45.