運(yùn)動經(jīng)FoxO1-脂噬通路緩解ApoE-/-小鼠高脂血癥的研究

花衛(wèi)成,付鵬宇,張纓,王林佳,倪震,龔麗景*

(1.北京體育大學(xué)運(yùn)動與體質(zhì)健康教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100084;2.北京體育大學(xué)運(yùn)動人體科學(xué)學(xué)院,北京 100084;3.西北工業(yè)大學(xué)體育部,西安 710072)

高脂血癥(hyperlipidemia,HL)是一種發(fā)病率逐年升高的全球性慢性疾病,參與動脈粥樣硬化、II型糖尿病和非酒精性脂肪肝等疾病的發(fā)生發(fā)展,臨床特征表現(xiàn)為血液中脂質(zhì)和脂蛋白含量升高[1-2]。富甘油三酯的脂蛋白(TG-rich lipoproteins,TGRLs)負(fù)責(zé)將血液中的甘油三酯和膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到血漿和其他組織,而載脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)是TGRLs的重要組成部分[3]。ApoE與脂質(zhì)形成脂蛋白復(fù)合體來轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì),并且可以作為細(xì)胞表面脂蛋白受體的配體,介導(dǎo)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)至組織細(xì)胞,ApoE缺乏會導(dǎo)致血液中TGRLs轉(zhuǎn)運(yùn)受阻,是誘發(fā)HL的關(guān)鍵因素[4]。ApoE基因缺陷(ApoE-/-)小鼠3月齡左右自發(fā)產(chǎn)生高脂血癥,而高脂飲食會進(jìn)一步加重病情,是構(gòu)建高脂血癥的常用模型[5]。

脂肪組織是調(diào)節(jié)能量代謝和糖脂代謝的中心[6]。發(fā)生在脂肪細(xì)胞中的選擇性自噬——脂噬,是一種新近發(fā)現(xiàn)的可以選擇性識別脂質(zhì)并將其降解的調(diào)節(jié)脂代謝穩(wěn)態(tài)的生理過程。該過程能夠選擇性地動員脂滴中的脂質(zhì),經(jīng)歷啟動和成核、自噬體的形成、自噬體與溶酶體融合和自噬溶酶體降解的步驟調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝[7]。在自噬啟動階段,肌球蛋白樣Bcl-2結(jié)合蛋白(coiled-coil myosin-like BCL2-interacting protein 1,Beclin1)發(fā)揮重要作用[8];選擇性自噬接頭蛋白1(sequestosome 1,SQSTM1/p62)能將微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(microtublue-associated protein 1 light chain 3,LC3)招募到脂滴上,促進(jìn)自噬體形成[9];LC3被自噬相關(guān)蛋白7(autophagy related protein 7,Atg7)脂化,形成LC3Ⅱ,從而閉合自噬體[10];在晚期自噬體的物質(zhì)運(yùn)輸以及溶酶體的生物發(fā)生過程,Ras相關(guān)蛋白7(ras-related GTP-binding protein 7,Rab7)參與其中,并促進(jìn)溶酶體和自噬體相互作用[7]。自噬上游的磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B/叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子O1(phospoinositide 3 kinase/protein kinase B/forkhead box of transcription factors O1,PI3K/Akt/FoxO1)信號通路是其重要調(diào)控通路。在脂肪組織中大量表達(dá)的FoxO1,屬于Fox轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一,是許多自噬基因(如Beclin1和LC3)的重要調(diào)控因子[11],能促進(jìn)自噬相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,形成FoxO1-脂噬通路。經(jīng)磷酸化修飾的FoxO1會與細(xì)胞核中的14-3-3蛋白結(jié)合并移出細(xì)胞核,降低其轉(zhuǎn)錄活性,使自噬水平下調(diào)[12]。PI3K的激活會導(dǎo)致Akt磷酸化,并使下游的FoxO1磷酸化[13]。

規(guī)律的運(yùn)動訓(xùn)練具有降低血脂的功效已得到廣泛證實(shí)[14]。中等強(qiáng)度持續(xù)運(yùn)動(moderate intensity continuous training,MICT)和高強(qiáng)度間歇運(yùn)動(high-intensity intermittent training,HIIT)是目前在大眾體育中廣泛采用的兩種健身方式[15-16]。脂代謝受到脂肪組織自噬水平的影響,FoxO1又是調(diào)控自噬的重要轉(zhuǎn)錄因子。MICT和HIIT發(fā)揮改善高脂血癥的作用是否與FoxO1-脂噬途徑有關(guān),目前尚未見報(bào)道。因此,本研究擬通過對比MICT和HIIT對高脂飲食飼喂的ApoE敲除小鼠脂肪組織FoxO1-脂噬通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,探討運(yùn)動預(yù)防高脂血癥的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物

10只9周齡雄性SPF級C57BL/6J小鼠,體重(25.17±0.35)g;35只9周齡雄性SPF級C57BL/6J ApoE-/-小鼠,體重(25.32±0.85)g;購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司【SCXK(京)2016-0006】。所有ApoE-/-小鼠均飼喂含21%(w/w)脂肪和1.5%(w/w)膽固醇的高脂飼料(北京科澳協(xié)力飼料有限公司,中國);野生型小鼠喂食含4%～5%(w/w)脂肪的標(biāo)準(zhǔn)維持飼料(北京華阜康生物科技有限公司,中國)。所有小鼠飼養(yǎng)于北京體育大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)室【SYXK(京)2016-0033】,溫度22℃,濕度50%～70%,晝夜12 h/12 h,可自由進(jìn)食和飲水,在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)1周后開始正式訓(xùn)練干預(yù)。本研究經(jīng)北京體育大學(xué)運(yùn)動科學(xué)實(shí)驗(yàn)倫理委員會批準(zhǔn)(審批號2019100A)。

1.1.2 主要試劑與儀器

脂肪固定液(G1119,Servicebio,中國),RNA Store樣品保存液(DP408,TianGen,中國),血脂檢測試劑盒(A111-1-1,A110-1-1,A113-1-1,A112-1-1;南 京 建 成,中 國),定 量PCR相 關(guān) 試 劑(MiniBEST Universal RNA Extraction Kit 9767,PrimeScriptTMMaster Mix RR036A,SYBR Premix Ex Taq II RR820A;TaKaRa,日 本),RIPA裂 解 液(P0013B,碧云天,中國),蛋白酶/磷酸酶抑制劑(04693159001,04906837001,Roche,瑞士),BCA試劑盒(PierceTMBCA Protein Assay Kit 23227,Thermo Fisher Scientific,美國),Bolt LDS Sample Buffer(B0007,Novex,美國),Bolt Reducing Agent(B0009,Novex,美 國),MES Running Buffer(B0002,Invitrogen,美 國),4%～12% Bis-Tris梯 度 膠(NW04125,Invitrogen,美國),iBlot 2 NC Regular Stacks(IB23001,Invitrogen,美 國),PI3K抗 體(Proteintech,21890-1-AP),Akt抗體(Abcam,ab8805),Phospho-Akt抗體(Cell Signaling Tech,4060),FoxO1抗體(Abcam,ab52857),Phospho-FoxO1抗 體(Abcam,ab131339),Beclin1抗 體(Abcam,ab207612),Atg7抗體(Abcam,ab133528),LC3抗 體(Proteintech,14600-1-AP),p62抗 體(Abcam,ab109012),Rab7抗體(Abcam,ab137029),α-Tubulin(Proteintech,66031-1-IG),Goat anti-Rabbit抗體(LI-COR,926-68071),Goat anti-Mouse抗體(LI-COR 926-32210)。

動物跑臺(LF8710MAP,Panlab,美國),酶標(biāo)儀(BioTek Synergy H1,Bio Tek,美國),顯微圖象分析系統(tǒng)(DMI4000B,Leica,德國),超微量分光光度計(jì)(Nanodrop 2000c,Thermo Fisher Scientific,美國),實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(ABI 7500,Thermo Fisher Scientific,美國),蛋白轉(zhuǎn)印儀(iBlot 2,Thermo Fisher Scientific,美國),雙色紅外熒光成像系統(tǒng)(Odyssey CLX,LI-COR,美國)。

1.2 方法

1.2.1 動物分組及實(shí)驗(yàn)干預(yù)

10只C57BL/6J小鼠作為野生對照組(WT組)。5只ApoE-/-小鼠用于最大速度測試以制定訓(xùn)練方案,其余30只ApoE-/-小鼠隨機(jī)分為3組:ApoE-/-安靜對照組(CON組)、ApoE-/-中強(qiáng)度持續(xù)運(yùn)動組(MICT組)和ApoE-/-高強(qiáng)度間歇運(yùn)動組(HIIT組)。每組10只。

訓(xùn)練開始前用5只ApoE-/-小鼠進(jìn)行最大速度測試,根據(jù)測試結(jié)果制定訓(xùn)練方案。測試方案為8 cm/s速度熱身10 min,之后每3 min增加跑速2 cm/s,直到力竭,力竭時(shí)的速度為最大速度,力竭判斷標(biāo)準(zhǔn)為連續(xù)在電網(wǎng)上停留3 s或者電擊次數(shù)達(dá)到100次[16]。最大速度的測試結(jié)果為(45±4)cm/s。

HIIT組和MICT組在開始前4 d進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練(每天在跑步機(jī)上跑10 min,速度逐漸增加,分別為10、12、14和16 cm/s。從10周齡開始訓(xùn)練6周,WT組和CON組不運(yùn)動,MICT組和HIIT組每周一、三、五上午10:00訓(xùn)練。如圖1,MICT組在10 min熱身(5 cm/s×5 min+10 cm/s×5 min)后進(jìn)行40 min勻速跑,速度為40%最大跑速(18 cm/s);HIIT組在10 min熱身(8 cm/s×5 min+15 cm/s×5 min)后進(jìn)行四組5×10 s的短跑,間歇20 s,組間休息5 min,速度為100%最大跑速(45 cm/s)[17]。

1.2.2 取材

注:A:MICT組訓(xùn)練方案;B:HIIT組訓(xùn)練方案。圖1 MICT組和HIIT組訓(xùn)練計(jì)劃Note.A.Training program of MICT group.B.Training program of HIIT group.Figure 1 Schematic diagram of training program for MICT group and HIIT group

在訓(xùn)練干預(yù)結(jié)束48 h后取材,稱重,麻醉,心臟穿刺取血,離心取血漿(4℃,3000 rpm,15 min),液氮速凍,-80℃保存。取附睪白色脂肪組織(epididymal WAT,eWAT),分成3份,一份存于固定液中,用于制備石蠟切片;一份存于RNA保存液中,4°C放置1 d后-80°C保存;一份液氮速凍,-80°C保存,用于Western Blot測試。

1.2.3 血液指標(biāo)測試

按照試劑盒說明書檢測血漿甘油三酯、總膽固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白膽固醇(lowdensity lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDLC)含量。

1.2.4 脂肪組織形態(tài)學(xué)測試

脂肪組織經(jīng)固定液固定后,常規(guī)石蠟包埋、切片,HE染色,顯微圖像分析系統(tǒng)觀察,拍照,Imagepro Plus 6.0軟件統(tǒng)計(jì)組織細(xì)胞橫截面積。

1.2.5 脂肪組織mRNA相對含量測試

引物序列由Primerbank(https://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/index.html)網(wǎng)站查詢獲得,見表1,引物由GENEWIZ公司合成。稱取80 mg附睪白色脂肪組織,按照試劑盒說明提取總RNA,超微量分光光度計(jì)檢測總RNA濃度,逆轉(zhuǎn)錄操作獲取cDNA,進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增。以β-actin作為內(nèi)參,采用2-△△CT法計(jì)算目的基因/內(nèi)參基因的相對表達(dá)量。

表1 引物信息Table 1 Information of primers

1.2.6 脂肪組織蛋白相對含量測試

稱取80 mg附睪白色脂肪組織,加入500 μL RIPA裂解液,組織破碎機(jī)破碎細(xì)胞,分離出總蛋白,BCA法測定蛋白濃度后制備蛋白樣品。SDS-PAGE電泳分離蛋白,用蛋白轉(zhuǎn)印儀將蛋白轉(zhuǎn)印到NC膜上,室溫封閉液封閉1 h后孵育一抗(4℃,12 h),TBST洗去未結(jié)合的一抗(3×10 min),室溫孵育二抗1 h,TBST洗去未結(jié)合的二抗(3×10 min),TBS洗滌(2×5 min),濾紙吸干后雙色紅外熒光成像系統(tǒng)曝光,Image Studio軟件進(jìn)行相對定量分析。抗體信息見1.1.2。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 25.0軟件分析,所有數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布,結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差()表示。WT組和CON組間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),CON組、MICT組和HIIT組間采用單因素方差分析,以P＜0.05和P＜0.01表示差異具有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 運(yùn)動降低ApoE-/-小鼠血脂水平

6周干預(yù)結(jié)束后,WT組小鼠體重為(28.55±1.44)g,CON組 為(30.34±1.50)g,MICT組(30.53±0.36)g,HIIT組為(29.63±0.56)g,各組間無顯著性差異。血液指標(biāo)結(jié)果表明,CON組TG、TC和LDL-C均顯著高于WT組(P＜0.01),MICT組和HIIT組TG和TC水平顯著低于CON組(P＜0.01),MICT組HDL-C顯著高于CON組和HIIT組(P＜0.05),見表2。

表2 小鼠血漿TC、TG、HDL-C和LDL-C結(jié)果()Table 2 Results of TC,TG,HDL-C and LDL-C in mice plasma()

表2 小鼠血漿TC、TG、HDL-C和LDL-C結(jié)果()Table 2 Results of TC,TG,HDL-C and LDL-C in mice plasma()

注:與WT組相比,*P＜0.05,**P＜0.01;與CON相比,#P＜0.05,##P＜0.01;與MICT組相比,&P＜0.05,&&P＜0.01。(下圖同)Note.Compared with WT group,*P＜0.05,**P＜0.01.Compared with CON group,#P＜0.05,##P＜0.01.Compared with MICT group,&P＜0.05,&&P＜0.01.(The same in the following figures)

組別Groups甘油三酯(mmol/L)TG(mmol/L)膽固醇(mmol/L)TC(mmol/L)高密度脂蛋白膽固醇(mmol/L)HDL-C(mmol/L)低密度脂蛋白膽固醇(mmol/L)LDL-C(mmol/L)WT組WT group 0.53±0.03 4.95±0.16 2.88±0.28 0.46±0.16 CON組CON group 7.52±1.48** 32.48±4.14** 2.93±1.11# 7.98±1.57**MICT組MICT group 5.32±0.45## 25.00±1.36## 4.76±2.01# 7.30±2.25 HIIT組HIIT group 5.83±0.68## 24.15±3.07## 3.01±0.97& 7.33±1.30

2.2 ApoE-/-小鼠脂肪細(xì)胞橫截面積減小

6周干預(yù)結(jié)束后,各組小鼠eWAT脂肪細(xì)胞HE染色圖片如圖2A所示。野生型小鼠脂肪細(xì)胞橫截面積明顯大于ApoE-/-小鼠。CON組脂肪細(xì)胞橫截面積(1631.08±375.96)μm2與WT組(2847.48±556.59)μm2相比顯著降低(P＜0.05),MICT組(1789.69±451.40)μm2和HIIT組(1872.79±402.86)μm2與CON組相比無顯著性差異,見圖2B。

圖2 MICT和HIIT對小鼠附睪脂肪組織細(xì)胞橫截面積的影響Figure 2 Effects of MICT and HIIT on adipocyte cross-sectional area of eWAT in mice

2.3 運(yùn)動下調(diào)ApoE-/-小鼠脂肪組織FoxO1-自噬相關(guān)基因的mRNA表達(dá)

6周干預(yù)結(jié)束后,各組小鼠eWAT實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果如圖3所示。CON組較WT組FoxO1、Beclin1、LC3、Atg7和Rab7 mRNA相對表達(dá)水平顯著升高(P＜0.01)。MICT組和HIIT組FoxO1、Beclin1、LC3、Atg7和Rab7 mRNA相對表達(dá)水平較CON組顯著下降(P＜0.05)或(P＜0.01)。HIIT組Beclin1 mRNA相對表達(dá)水平較MICT組顯著升高(P＜0.05)。

圖3 MICT和HIIT對小鼠附睪脂肪組織FoxO1-自噬相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響Figure 3 Effects of MICT and HIIT on mRNA relative expression levels of FoxO1-Autophagy-associated proteins from eWAT in mice

2.4 運(yùn)動激活A(yù)poE-/-小鼠脂肪組織PI3K/Akt/FoxO1通路并促進(jìn)自噬

6周干預(yù)結(jié)束后,CON組較WT組PI3K、p-Akt和p-FoxO1蛋白相對表達(dá)水平顯著下降(P＜0.01),p-Akt/Akt和p-FoxO1/FoxO1顯著下降(P＜0.01);MICT組和HIIT組較CON組PI3K、p-Akt水平以及p-Akt/Akt和p-FoxO1/FoxO1顯著上升(P＜0.01),Foxo1水平顯著下降(P＜0.01);HIIT組較CON組Akt水平顯著下降(P＜0.01),較MICT組PI3K、Akt、p-Akt、FoxO1和p-FoxO1蛋白相對表達(dá)水平顯著下降(P＜0.01)或(P＜0.05),p-Akt/Akt比值顯著上升(P＜0.05),見圖4A,4B。

自噬相關(guān)蛋白表達(dá)情況如圖4C,4D所示,CON組較WT組Beclin1、Atg7、LC3Ⅱ/Ⅰ和Rab7顯著上升(P＜0.01),p62水平顯著下降(P＜0.05);MICT組和HIIT組較CON組Beclin1、Atg7、LC3Ⅱ/Ⅰ和Rab7水平顯著下降(P＜0.01),MICT組和HIIT組較CON組p62水平顯著上升(P＜0.01)或(P＜0.05);HIIT組較MICT組Beclin1、Atg7、LC3Ⅱ/Ⅰ和Rab7水平顯著下降(P＜0.01)或(P＜0.05)。

圖4 MICT和HIIT對小鼠附睪脂肪組織蛋白相對表達(dá)水平的影響Figure 4 Effects of MICT and HIIT on protein relative expression levels of eWAT in WT mice and ApoE-/-mice

3 討論

ApoE-/-小鼠會從3～4月齡開始自發(fā)產(chǎn)生高脂血癥和動脈粥樣硬化,高脂肪飲食會進(jìn)一步加劇和加速病情[18]。本研究中10周齡ApoE-/-小鼠在飼喂高脂飼料6周后脂肪細(xì)胞橫截面積變小,同時(shí)血漿TG、TC和LDL-C水平升高,這是由于ApoE-/-小鼠血液中脂蛋白,如乳糜微粒(chylomicrons,CM)和極低密度脂蛋白(very low density lipoproteins,VLDL)轉(zhuǎn)運(yùn)受阻,難以運(yùn)輸?shù)街窘M織積累所致[19]。

此外脂肪組織分解增加也會使ApoE-/-小鼠血脂升高[20-21],而脂噬過程可通過自噬溶酶體途徑對脂肪組織中的脂滴進(jìn)行選擇性降解[22]。ApoE-/-小鼠脂肪組織處于炎癥浸潤狀態(tài),誘發(fā)機(jī)體慢性炎性狀態(tài)[23],白細(xì)胞介素-6(interleukin,IL-6)等炎癥因子的表達(dá)會激活信號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3),進(jìn)而上調(diào)FoxO1的表達(dá)[24],FoxO1是介導(dǎo)自噬的關(guān)鍵核轉(zhuǎn)錄因子[25]。此外ApoE缺失時(shí)PI3K/Akt信號通路受到抑制[26],進(jìn)而降低FoxO1磷酸化水平。本研究ApoE-/-小鼠脂肪組織中p-FoxO1/FoxO1比值下降,說明細(xì)胞核中FoxO1比例增加,發(fā)揮轉(zhuǎn)錄作用,導(dǎo)致下游自噬相關(guān)基因表達(dá)上調(diào),誘導(dǎo)ApoE-/-小鼠脂肪細(xì)胞面積減小,血脂水平顯著上升,形成高脂血癥[27]。

MICT是運(yùn)動強(qiáng)度低、訓(xùn)練時(shí)間長的有氧運(yùn)動,其對有高脂血癥和動脈粥樣硬化傾向的ApoE-/-小鼠有預(yù)防作用。研究發(fā)現(xiàn),規(guī)律的跑臺或游泳訓(xùn)練能夠降低ApoE-/-小鼠血脂[28],減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的內(nèi)皮功能障礙[29],緩解肝細(xì)胞胰島素抵抗和非酒精性脂肪性肝病等癥狀[30]。而HIIT的特點(diǎn)是在短時(shí)間的高強(qiáng)度運(yùn)動中穿插低強(qiáng)度運(yùn)動或休息,以減少訓(xùn)練時(shí)間并提供較大的生理刺激,已被證明有良好的減脂效果[31]。但HIIT運(yùn)動對ApoE-/-小鼠的影響研究不多見。本研究結(jié)果顯示HIIT對ApoE-/-小鼠血脂有改善作用,降低了血漿TG和TC含量,與MICT結(jié)果一致;此外,MICT還提高血漿HDL-C含量。兩種運(yùn)動使小鼠脂肪組織細(xì)胞橫截面積有所增大,提示運(yùn)動可促使血脂進(jìn)入脂肪組織細(xì)胞儲存,并降低ApoE-/-小鼠脂肪組織細(xì)胞脂解作用[21]。

ApoE基因缺失也是引起II型糖尿病的原因之一,II型糖尿病會導(dǎo)致脂肪組織PI3K/Akt信號通路出現(xiàn)損傷,而運(yùn)動可以上調(diào)PI3K/Akt信號通路,改善糖尿病大鼠糖脂代謝[32-33]。雖然運(yùn)動對脂噬的影響報(bào)道較少,但外源刺激如針刺可促進(jìn)PI3K和p-Akt表達(dá),降低海馬自噬水平[34]。Akt磷酸化激活后可進(jìn)一步磷酸化FoxO1的絲氨酸256位點(diǎn)(S256)并降低FoxO1結(jié)合目標(biāo)DNA的能力[35]。本研究中,MICT和HIIT均可上調(diào)ApoE-/-小鼠脂肪組織中PI3K的表達(dá),促進(jìn)Akt磷酸化,增加FoxO1磷酸化水平和p-FoxO1/FoxO1比值,以抑制自噬相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)[35]。Beclin1是Ⅲ類磷脂酰肌醇3-激酶(class III phosphatidylinositol 3-kinase,PI3KⅢ)復(fù)合物的組成部分,在自噬啟動階段調(diào)節(jié)自噬相關(guān)蛋白如LC3的分布,而Beclin1和LC3又受到FoxO1的直接調(diào)控[36]。本研究中,小鼠MICT和HIIT后脂肪組織中Beclin1、Atg7和Rab7 mRNA和蛋白表達(dá)水平下降,LC3 mRNA表達(dá)水平及LC3Ⅱ/Ⅰ比值下降,說明本研究的運(yùn)動方式抑制了脂肪組織自噬。隨著自噬水平下調(diào),包含Atg7、LC3以及其他自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的減少,延緩了自噬體膜的延伸;Rab7隨著自噬體形成附著在自噬體表面,介導(dǎo)自噬體與溶酶體結(jié)合形成成熟的自噬溶酶體,其含量的減少可能影響脂肪組織中自噬溶酶體的成熟[37-38];接頭蛋白p62在脂噬中負(fù)責(zé)將LC3招募到脂滴上,并隨著待降解物質(zhì)進(jìn)入自噬溶酶體,隨著自噬溶酶體的降解而降解[39],本研究兩種運(yùn)動后脂肪組織p62蛋白表達(dá)水平上升,也說明了脂噬水平的下調(diào)[40]。上述結(jié)果提示兩種運(yùn)動方式皆可通過促進(jìn)FoxO1磷酸化以抑制ApoE-/-小鼠脂肪組織自噬,促進(jìn)脂肪細(xì)胞代謝,降低血漿中TG和TC含量,改善高血脂癥狀。

綜上所述,ApoE基因缺失所致的高脂血癥可激活脂噬水平;6周HIIT和MICT均可通過激活A(yù)poE-/-小鼠脂肪組織PI3K/Akt通路,促進(jìn)FoxO1磷酸化,抑制脂噬,降低血脂水平,緩解高脂血癥。